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文檔簡介
1、基因測序技術(shù)簡介主講人:徐德陽目錄一、測序技術(shù)發(fā)展與比較二、illumina測序原理三、Pacbio測序原理全基因組測序的英文是Whole Genome Sequencing,簡稱WGS,目前默認(rèn)指的是人類的全基因組測序。所謂全(Whole),指的就是把物種細胞里面完整的基因組序列從第1個DNA開始一直到最后一個DNA,完完整整地檢測出來,并排列好,因此這個技術(shù)幾乎能夠鑒定出基因組上任何類型的突變。第一代DNA測序技術(shù)用的是1975年由桑格(Sanger)和考爾森(Coulson)開創(chuàng)的鏈終止法,以及1976-1977年由馬克西姆(Maxam)和吉爾伯特(Gilbert)發(fā)明的化學(xué)法(鏈降解)
2、。在1977年,由桑格老人家測定了第一個基因組序列噬菌體phiX-174。http:/smcg.cifn.unam.mx/enp-unam/03-EstructuraDelGenoma/animaciones/secuencia.swf目錄一、測序技術(shù)發(fā)展與比較二、illumina測序原理三、Pacbio測序原理測序流程Illumina測序原理上機測序的文庫Illumina測序原理測序流程Illumina測序原理cBotIllumina測序原理測序芯片F(xiàn)lowcellLane:八條相對獨立通道兩端小孔:進液孔與出液孔Oligo:DNA小片段,通過化 學(xué)鍵連接在Flowcell上, 能與文庫兩端
3、堿基互補配對oligoIllumina測序原理Index變性:雙鏈DNA變 為單鏈DNA, 雜交在Flowcell上結(jié)合方式:堿基互補配對原則雜交Illumina測序原理延伸RCR擴增模版:雜交結(jié)合鏈引物:OligoIllumina測序原理變性O(shè)riginal template: 與Flowcell 氫鍵連接, 不穩(wěn)定Newly synthesized strand: 與Flowcell 磷酸二酯鍵 連接,穩(wěn)定Illumina測序原理成簇二代測序核心技術(shù)之一:橋式擴增Illumina測序原理橋式擴增搭“橋”: DNA鏈與周圍Oligo 通 過堿基互補配對結(jié)合 PCR擴增: 以DNA鏈為模版 以新結(jié)合的Oligo為引物Illumina測序原理變性結(jié)果:一條DNA鏈變成兩條Illumina測序原理繼續(xù)橋式擴增Illumina測序原理線性化Illumina測序原理切割I(lǐng)llumina測序原理阻斷ddNTPs 阻斷阻止繼續(xù)擴增一簇完全相同的DNA鏈增強檢測信號ead1 Illumina測序原理Read1 測序引物雜交目錄一、測序技術(shù)發(fā)展與比較二、illumina測序原理三、 Pacbio測序原理Pacbio測序原理Pacbio測序原理Pacbio測序原理Pacbio測序原理Oxford NanoporeMinION它是基于電信號而不是光
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