細(xì)胞因子的檢測(cè)與應(yīng)用CBA三

1、細(xì)胞因子的檢測(cè)與應(yīng)用CBA三流式的基本原理流式檢測(cè)細(xì)胞因子CBA技術(shù)的應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry, 簡(jiǎn)稱FCM）是一種可以快速、準(zhǔn)確、客觀，并且能夠同時(shí)檢測(cè)直線流動(dòng)狀態(tài)中的單個(gè)細(xì)胞的多項(xiàng)物理及生物學(xué)特性，加以分析定量的技術(shù)。流式細(xì)胞儀（Flow Cytometer）集激光技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、電子計(jì)算機(jī)技術(shù)、細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體的一種新型高科技儀器。流式細(xì)胞術(shù)定義BD Accuri C6流式細(xì)胞術(shù)原理Multicolor Research Applications樣本收集及處理流式細(xì)胞術(shù)流程免疫熒光染色上機(jī)檢測(cè)數(shù)據(jù)分析制備單細(xì)胞懸液流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)

2、樣本可檢測(cè)的樣本種類多樣 各種細(xì)胞（如外周血，骨髓，細(xì)針穿刺，灌洗液，實(shí)體組織，懸浮或貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞），微生物，人工合成微球等流式細(xì)胞儀的檢測(cè)范圍 細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞顆粒度細(xì)胞表面積核漿比例DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量 細(xì)胞功能細(xì)胞表面/胞漿/核的特異性抗原細(xì)胞活性細(xì)胞內(nèi)/外的細(xì)胞因子激素結(jié)合位點(diǎn)、細(xì)胞受體蛋白磷酸化pH值鈣離子濃度細(xì)胞膜電位、線粒體膜電位 流式的基本原理流式檢測(cè)細(xì)胞因子CBA技術(shù)的應(yīng)用一個(gè)細(xì)胞的全面研究Cell Vol. 132, January 25, 2008什么是CBA?多重分析節(jié)約樣本靈敏度高 CBA是利用一系列熒光強(qiáng)度不同的微球，同時(shí)分析樣本中多種可溶

3、性成分的流式檢測(cè)方法。每個(gè)CBA微球有特定的熒光強(qiáng)度，大小一致，包被有特異性抗體，提供了捕獲表面，有效捕獲待測(cè)蛋白，再加入熒光標(biāo)記（PE）的檢測(cè)抗體，形成“三明治”夾心復(fù)合物進(jìn)行檢測(cè)。+Analyze of InterestFluorescent Detector Ab- PECapture BeadCapture Ab一系列熒光強(qiáng)度不同的微球包被有特異性捕獲抗體，與待測(cè)樣本孵育后，形成“三明治”復(fù)合物。CBA原理CBA原理+ IL-8 IL-6100100101101102102103103104104Bead IntensityFL3 (670LP)Detector Ab Intensit

4、yFL2 (585/42BP)BDTM CBA Kits操作步驟 檢測(cè)物與捕獲微球共孵育 標(biāo)記熒光探測(cè)試劑（FITC或PE標(biāo)記） 洗滌 流式細(xì)胞儀檢測(cè) CBA分析軟件批量數(shù)據(jù)分析Human Th1/Th2 Cytokine CBA 標(biāo)準(zhǔn)曲線5000 pg/ml2500 pg/ml1250 pg/ml625 pg/ml312 pg/ml80 pg/ml20 pg/mlIL-2IL-4IL-5IL-10TNF-IFN-IL-2IL-4IL-5IL-10TNF-IFN-CBA 分析軟件Home ScreenToolbarCalibration entry screen基本原理與CBA kit相似檢測(cè)

5、原理不同： Flex Set微球帶有近紅外和紅色兩種熒光，分別在流式細(xì)胞儀的FL3（近紅外熒光）和FL4（紅色熒光）通道檢測(cè)，通過(guò)這個(gè)二維矩陣（對(duì)應(yīng)于微球上的特定序號(hào)）識(shí)別捕獲微球，從而定性目的蛋白，PE標(biāo)記的檢測(cè)抗體在FL2通道來(lái)對(duì)目的蛋白定量。BD CBA Flex SetBD CBA Flex SetCBA Flex Set的分析軟件 FCAP Array SoftwareCBA Kit與CBA Flex SetCBA Kit同時(shí)檢測(cè)5或者6個(gè)全部試劑CBA Analysis Software檢測(cè)指標(biāo)組合固定CBA Flex Set同時(shí)檢測(cè)30個(gè)需另購(gòu)Buffer kitFCAP Arr

6、ay Software檢測(cè)指標(biāo)可自由組合CBA特點(diǎn)液相中反應(yīng)，同時(shí)檢測(cè)多種蛋白操作簡(jiǎn)單(標(biāo)本制備和上機(jī)檢測(cè)），省時(shí)省力微量樣本(5-50ul)靈敏度2.8pg/ml所有分析只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線避免酶聯(lián)反應(yīng)信號(hào)放大帶來(lái)的假陽(yáng)性更好的線性度和更寬的檢測(cè)范圍(5000pg/ml)流式細(xì)胞儀和CBA軟件自動(dòng)分析傳統(tǒng)的ELISA與CBA相比ELISACBA樣本量體積大多元和同步單一Elisa樣本體積的1/6靈敏度低，穩(wěn)定性差靈敏度高，穩(wěn)定性好芯片式集成測(cè)定，所需樣本濃度低縮短時(shí)間，提高效率每個(gè)蛋白分別檢測(cè)，樣本濃度高，時(shí)間長(zhǎng)，效率低酶聯(lián)放大效應(yīng)，結(jié)果易失真流式熒光定量檢測(cè)，避免假陽(yáng)性現(xiàn)有CBA Kit產(chǎn)品現(xiàn)

7、有CBA Flex Set產(chǎn)品流式的基本原理流式檢測(cè)細(xì)胞因子CBA技術(shù)的應(yīng)用CBA 應(yīng)用檢測(cè)對(duì)象血清、血漿、眼淚、房水、唾液、體腔灌洗液、細(xì)胞培養(yǎng)液上清、細(xì)胞裂解物等應(yīng)用領(lǐng)域腫瘤研究及腫瘤疾病的輔助診斷、療效和預(yù)后監(jiān)測(cè)干細(xì)胞研究和干細(xì)胞治療監(jiān)測(cè)免疫學(xué)研究和免疫疾病的輔助診斷和監(jiān)控感染疾病的研究及輔助診斷和療效評(píng)價(jià)免疫功能監(jiān)測(cè)藥效評(píng)價(jià)，藥物研發(fā)、疫苗研究細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中磷酸化蛋白、凋亡相關(guān)蛋白定量分析一、CBA的免疫學(xué)應(yīng)用-Th1/Th2IFN、IL-2IL-4、5、6、10IL-4、10IFN細(xì)胞免疫體液免疫Th1介導(dǎo)細(xì)胞免疫、細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)生長(zhǎng)和活化、巨噬細(xì)胞(M)活化遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)

8、。Th2B細(xì)胞生長(zhǎng)、活化和分化。Th1/2的平衡關(guān)系著免疫平衡現(xiàn)有CBA Flex Set產(chǎn)品-信號(hào)蛋白二、CBA在腫瘤中的應(yīng)用診斷：惡性腫瘤時(shí)Th2亢進(jìn)，良性腫瘤相反全面快速的免疫功能評(píng)價(jià)治療前治療中：如CIK治療后4天細(xì)胞因子會(huì)發(fā)生變化治療：隨時(shí)調(diào)整治療方案 臨床上主要采用經(jīng)驗(yàn)治療和采用國(guó)內(nèi)外抗感染治療指南的方法治療感染，具有一定的盲目性，且容易受臨床醫(yī)師各自的臨床經(jīng)驗(yàn)和診斷水平的影響。 一旦發(fā)生發(fā)熱感染，常立即加用廣譜抗細(xì)菌+抗真菌+抗病毒等多重覆蓋治療法，不僅造成抗生素的濫用，招致耐藥菌株的出現(xiàn)，而且加重了患兒身體和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。三、CBA在感染中的應(yīng)用四、CBA在藥物疫苗研發(fā)中的應(yīng)用流感模型動(dòng)物的炎性因子表達(dá)譜，用于疫苗評(píng)價(jià)，共檢測(cè)18個(gè)指標(biāo)（BD CBA Flex Set）CBA應(yīng)用相關(guān)中文文獻(xiàn)CBA特點(diǎn)液相中