免疫學檢驗第十五章流式細胞儀分析技術及應用

1、第十五章 流式細胞儀分析技術及應用(Chapter 17 Detection of complement and its application)課程承擔：濟寧醫(yī)學院免疫學教研室課件制作：醫(yī)學免疫學省級教學團隊主 講 人：戴 軍授課班級：2010級醫(yī)學檢驗本科授課時間：2013年10月8日臨床免疫學檢驗第十五章 流式細胞儀分析技術及應用第一節(jié) 流式細胞儀的分析及分選原理第二節(jié) 數據的顯示與分析第三節(jié) 流式細胞儀免疫分析的技術要求第四節(jié) 流式細胞術在免疫學檢查中的應用第一節(jié) 流式細胞儀的分析及分選原理流式細胞術（flow cytometry，F(xiàn)CM）是以流式細胞儀為檢測手段的一項能快速、精確的對

2、單個細胞理化特性進行多參數定量分析和分選的技術。通過流式細胞儀我們可以干什么？相對細胞大小相對細胞顆粒密度和內部復雜度細胞表面及內部分子的表達（多參數）分離純化細胞比較形態(tài)學觀察，免疫組化第一節(jié) 流式細胞儀的分析及分選原理一、流式細胞儀分析的工作原理噴嘴熒光信號或側向散射光前向散射光鞘液激光第一節(jié) 流式細胞儀的分析及分選原理基本組成結構液流系統(tǒng)：樣本，鞘液光學系統(tǒng)：激光光源，分色反光鏡，光束成形器，透鏡組，光電倍增管數據處理系統(tǒng)：計算機和軟件一、流式細胞儀分析的工作原理第一節(jié) 流式細胞儀的分析及分選原理基本組成結構基本工作原理一、流式細胞儀分析的工作原理第一節(jié) 流式細胞儀的分析及分選原理分選的

3、基本原理二、分選基本原理第二節(jié) 數據的顯示與分析前向散射光（FS）反映細胞或顆粒的大小側向散射光（SS）反映細胞或顆粒內部結構復雜程度、表面光滑程度熒光（FL）反映細胞或顆粒被染上熒光數量的多少一、參數第二節(jié) 數據的顯示與分析前向散射光（SS）反映細胞或顆粒的大小二、散射光的測定第二節(jié) 數據的顯示與分析前向散射光（SS）反映細胞或顆粒的大小二、散射光的測定第二節(jié) 數據的顯示與分析側向散射光（FS）反映細胞或顆粒內部結構復雜程度、表面光滑程度二、散射光的測定第二節(jié) 數據的顯示與分析側向散射光（FS）反映細胞或顆粒內部結構復雜程度、表面光滑程度二、散射光的測定第二節(jié) 數據的顯示與分析熒光信號檢測與

4、放大器反映細胞或顆粒被染上熒光數量的多少 激發(fā)光：熒光素吸收激光能量 熒光：熒光素將吸收能量釋放，釋放較入射光波長更長的光量子 熒光素抗體：熒光抗體與細胞抗原結合越多，產生的熒光信號越強 三、熒光測量第二節(jié) 數據的顯示與分析熒光信號檢測與放大器反映細胞或顆粒被染上熒光數量的多少三、熒光測量第二節(jié) 數據的顯示與分析熒光信號檢測與放大器反映細胞或顆粒被染上熒光數量的多少放大器 線性放大器 對數放大器三、熒光測量第二節(jié) 數據的顯示與分析單參數直方圖四、數據顯示方式第二節(jié) 數據的顯示與分析單參數直方圖四、數據顯示方式第二節(jié) 數據的顯示與分析單參數直方圖四、數據顯示方式第二節(jié) 數據的顯示與分析單參數直方

5、圖四、數據顯示方式第二節(jié) 數據的顯示與分析雙參數散點圖（點圖）四、數據顯示方式人外周血白細胞第二節(jié) 數據的顯示與分析雙參數散點圖（點圖）四、數據顯示方式人外周血白細胞中的T細胞第二節(jié) 數據的顯示與分析流式細胞儀的多參數分析四、數據顯示方式人外周血白細胞中的T細胞亞群“門”的設置第二節(jié) 數據的顯示與分析流式細胞儀的多參數分析四、數據顯示方式“門”的設置第三節(jié) 流式細胞儀免疫分析的技術要求制備單細胞懸液外周血淋巴細胞樣品的制備培養(yǎng)細胞的樣品制備 懸浮生長貼壁生長新鮮實體組織單細胞懸液的制備單細胞懸液的保存 深低溫保存法 乙醇或甲醇保存法 甲醛或多聚甲醛固定法一、免疫檢測樣品的制備第三節(jié) 流式細胞儀

6、免疫分析的技術要求異硫氰酸熒光素（FITC）激發(fā)光：488nm綠色熒光PE（藻紅蛋白）激發(fā)光：488nm橙色熒光二、免疫分析中常用的熒光染料與標記染色第三節(jié) 流式細胞儀免疫分析的技術要求二、免疫分析中常用的熒光染料與標記染色第三節(jié) 流式細胞儀免疫分析的技術要求二、免疫分析中常用的熒光染料與標記染色第三節(jié) 流式細胞儀免疫分析的技術要求二、免疫分析中常用的熒光染料與標記染色第三節(jié) 流式細胞儀免疫分析的技術要求熒光染料熒光標記直接免疫熒光染色法間接免疫熒光染色法細胞自發(fā)熒光三、免疫分析中常用的熒光染料與標記染色第四節(jié) 流式細胞術在免疫學檢查中的應用T細胞（CD3 CD4 CD8）一、淋巴細胞及其亞群

7、的分析第四節(jié) 流式細胞術在免疫學檢查中的應用T細胞（CD3 CD4 CD8）一、淋巴細胞及其亞群的分析第四節(jié) 流式細胞術在免疫學檢查中的應用T細胞（CD3 CD4 CD8）一、淋巴細胞及其亞群的分析第四節(jié) 流式細胞術在免疫學檢查中的應用B細胞（CD19 CD5）一、淋巴細胞及其亞群的分析第四節(jié) 流式細胞術在免疫學檢查中的應用NK細胞（CD3-CD16+CD56+）一、淋巴細胞及其亞群的分析第四節(jié) 流式細胞術在免疫學檢查中的應用細胞介導細胞毒試驗細胞內細胞因子測定二、淋巴細胞功能分析T細胞內IFN-g的測定第四節(jié) 流式細胞術在免疫學檢查中的應用三、淋巴造血系統(tǒng)分化抗原及白血病免疫分型總結掌握流式細胞儀的分析和分選原理掌握FS、SS、FL參數及其意義熟悉單參數