甾體激素類藥物的分析(4)

1、藥物分析Xiangnan University第十五章: 甾體激素類藥物的分析精選ppt基 本 要 求1掌握本類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、特征官能團與分析方法的關(guān)系。2掌握高效液相色譜法、紫外分光光度法、四氮唑比色法、異煙肼比色法、Kober反應(yīng)比色法等含量測定方法。3熟悉本類藥物常用的鑒別試驗和特殊雜質(zhì)的檢查方法。甾體激素類藥物的分析甾體激素類藥物環(huán)戊烷并多氫菲母核的激素類藥物Steriod Hormones甾體激素類藥物的分析1.甾體激素是在研究哺乳動物內(nèi)分泌系統(tǒng)時發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性物質(zhì)發(fā)現(xiàn)史2.1932年至1939年間，從腺體中獲得雌酮(1932)、雌二醇(1932)、睪酮(1935年)及皮質(zhì)酮(193

2、9)等的純品結(jié)晶。 3.隨后，發(fā)明用薯蕷皂甙(Diosgenin)為原料進行半合成生產(chǎn)甾體藥物，使生產(chǎn)規(guī)模擴大，成本降低 4.發(fā)現(xiàn)腎上腺皮質(zhì)激素治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及其在免疫調(diào)節(jié)上的重要價值，使甾體藥物成為醫(yī)院中不可缺少的藥物 5.甾體口服避孕藥的研究成功，使人類生育控制達到了新水平 Contents結(jié)構(gòu)與分類1鑒 別2檢 查3含量測定4第一節(jié) 基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)母體結(jié)構(gòu)第一節(jié) 基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)母體衍生結(jié)構(gòu)甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素分類藥理作用第一節(jié) 基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、腎上腺皮質(zhì)激素311172021氫化可的松(hydrocortisone)醋酸地塞米松(dexame

3、thasone acetate)16-甲基21-酯化17-羥基9-氟3-酮1,2-雙鍵11-羥基20-酮本類藥物結(jié)構(gòu)特征A環(huán)4-3-酮基,為共軛體系,在波長240nm附近有紫外吸收,部分藥物在C1-C2之間有雙鍵,也有紫外吸收本類藥物結(jié)構(gòu)特征C17位上為-醇酮基,具有還原性.多數(shù)藥物有C17-羥基,部分藥物-醇羥基與酸成酯.本類藥物結(jié)構(gòu)特征部分藥物的C6或C9位由鹵素取代,呈相應(yīng)的鹵化物反應(yīng)本類藥物結(jié)構(gòu)特征部分藥物C11位上有羥基或酮基取代二、雄性激素及蛋白同化激素第一節(jié) 基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)甲睪酮(methyltestosterone)丙酸睪酮(testosterone propionate)苯丙

4、酸諾龍(nandrolone phenylpropionate)17-羥基作用更強吸收減緩甲睪酮(methyltestosterone)A環(huán)4-3-酮基C17位上為羥基,部分藥物的羥基被酯化雄性激素上的母核為19個碳原子,蛋白同化激素在C10位上一般無角甲基,母核只有18個碳原子二、雄性激素及蛋白同化激素本類藥物結(jié)構(gòu)特征第一節(jié) 基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)三、孕激素黃體酮(progesterone)醋酸甲地孕酮(megestrol acetate )乙酰氧基，具口服活性C17位-羥孕酮類第一節(jié) 基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)炔諾酮(norethisterone)左炔諾孕酮三、孕激素C19位去甲睪丸酮類第一節(jié) 基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

5、三、孕激素黃體酮(progesterone)A環(huán)4-3-酮基C17位上有甲酮基或乙炔基.多數(shù)在C17位上有羥基,部分藥物的羥基被酯化第一節(jié) 基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)四、雌性激素第一節(jié) 基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)四、雌性激素有些藥物在C17位上有乙炔基,構(gòu)成19-去甲孕甾烷母核A環(huán)為苯環(huán),C3位上有酚羥基,有的藥物C3位上的酚羥基成酯C17位上有羥基有些藥物C17位羥基成酯.第一節(jié) 基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)總結(jié)如下第二節(jié) Identification 物理常數(shù)的測定 化學(xué)鑒別法 制備衍生物測定熔點 UV IR TLC HPLC理化性質(zhì)與鑒別試驗第二節(jié) Identification一、物理常數(shù)的測定1.熔點炔雌醇m.p.201黃

6、體酮雙肟m.p.238苯丙酸諾龍縮氨基脲m.p.178185分解丙酸睪丸素m.p.150156第二節(jié) Identification第二節(jié) Identification二、化學(xué)鑒別法2.比旋度3.吸收系數(shù)與強酸的呈色反應(yīng)官能團的反應(yīng)1.與強酸的呈色反應(yīng)甾體激素類藥物硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸呈色與硫酸顯色反應(yīng) 顯 色 熒光 加水稀釋潑尼松龍 深紅 絮狀灰潑尼松 橙 黃藍綠炔雌醚 橙紅 黃綠 紅色 炔雌醇 橙紅 黃綠 絮狀玫紅醋酸可的松 黃或微 褪色并澄 帶橙 清精選ppt第二節(jié) Identification2.官能團的反應(yīng) C17-醇酮基還原性A. 呈色反應(yīng)C17-醇酮基四氮唑鹽OH-呈色B. 沉

7、淀反應(yīng)C17-醇酮基氨制硝酸銀銀鏡反應(yīng)C17-醇酮基堿性酒石酸銅Cu2O第二節(jié) Identification C3酮基和C20酮基甾酮類2,4-二硝基苯肼呈色異煙肼、硫酸苯肼異煙腙（黃色）睪酮異煙雙腙（黃色）黃體酮 甲酮基或活潑亞甲基第二節(jié) Identification亞硝基鐵氰化鈉間二硝基酚/芳香醛呈色藍紫色黃體酮專屬鑒別反應(yīng)黃體酮藍紫色亞硝基鐵 氰化鈉其他甾體淡橙色或不顯色第二節(jié) Identification有機氟F有機破壞有機氯Cl有機鹵素茜素氟藍 硝酸亞鈰硝酸硝酸銀AgCl 呈藍紫色 第二節(jié) Identification 乙炔基第二節(jié) Identification炔雌醇白 酯基 酚羥基

8、雌激素類重氮苯磺酸紅色偶氮染料-3-酮、苯環(huán)、其他共軛結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)依據(jù)240nm左右280nm左右三、UV第二節(jié) Identification結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17 OH C17 乙炔基炔雌醇四、IR第二節(jié) Identification1505cm-13505cm-13300cm-11590cm-13610cm-1酚羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨架振動黃體酮結(jié)構(gòu)特征：-3-酮、C17-酮基四、IR第二節(jié) Identification1700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H雙鍵五、TLC法 主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別 方法：對照品法 要

9、求供試品溶液所顯主斑點的顏色和位置與對照品溶液的主斑點相同。第二節(jié) Identification 主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏） 方法：對照品法 要求在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對照品峰的tR一致。六、HPLC法第二節(jié) Identification一、有關(guān)物質(zhì)的檢查 檢查意義：其他甾體與甾體激素藥物結(jié) 構(gòu)相似，也有一定的藥理作 用而又互不相同.檢查方法（具有一定分離能力） TLC法（高低濃度對比法） HPLC法（類似高低濃度對比法）第三節(jié) Purity Test第三節(jié) Purity Test氫化可的松中其他甾體檢查對照品60g/ml供

10、試品3.0mg/mlCHCl3-MeOH(9:1) 溶劑硅膠GF254二氯甲烷-乙醚-甲醇-水 385 :60 : 15 : 2展開后晾干105干燥10min堿性四氮唑藍顯色（一）TLC判定方法： 規(guī)定雜質(zhì)斑點數(shù)目 規(guī)定雜質(zhì)斑點顏色對照溶液0.02mg/ml供試液1 mg/ml（二）HPLC第三節(jié) Purity Test黃體酮中有關(guān)物質(zhì)檢查供試品溶液的雜質(zhì)峰數(shù)不得超過1個，其面積不得大于對照液的主峰面積的3/4第三節(jié) Purity Test二、硒的檢查來源 合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫三、溶劑殘留甲醇和丙酮(GC)0.3%0.5%第三節(jié) Purity Test四、游離磷酸鹽檢查鉬酸銨磷鉬酸

11、740nm，UV-Vis第四節(jié) Assay HPLC UV 比色法 非水溶液滴定法四氮唑比色法異煙肼比色法柯柏反應(yīng)比色法第四節(jié) Assay一、HPLC對照液供試液己烯雌酚黃體酮第四節(jié) Assay二、UV-Vis醋酸地塞米松苯環(huán)第四節(jié) Assay三、比色法 腎上腺皮質(zhì)激素類OH -還原2,3,5-Triphenyltatrazolium chloride TTC(Red tatrazoline RT)氯化三苯四氮唑三苯甲(Formazan)深紅色 max 480490nm（一）四氮唑比色法 第四節(jié) Assay藍四氮唑Blue tetrazoline BTBT-單甲BT-雙甲藍色 max 525n

12、m氫化可的松軟膏的含量測定 第四節(jié) Assay精密量取對照品溶液及供試品溶液各1ml，分別置干燥具塞試管中，各精密加無水乙醇9ml與氯化三苯四氮唑試液1ml，搖勻，各再精密加氫氧化四甲基銨試液1ml，搖勻，在25的暗處放置40min45min，在485nm的波長處分別測定吸收度，計算，即得 影響因素基團溶劑與水分堿空氣中氧與光線溫度與時間第四節(jié) Assay（1）基團對反應(yīng)速度的影響C11= O C17OHC21OH C21-酯（2） 溶劑、水分的影響含水量5%含水10%A10%含水30%幾無反應(yīng) 無水乙醇(無醛)（一）四氮唑比色法第四節(jié) Assay（3） O2與光線的影響 反應(yīng)及其產(chǎn)物對光敏感

13、，避光，隔絕空氣（4）堿的種類及加入順序反應(yīng)應(yīng)在強堿性（pH13.75）條件下進行以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳（5） 溫度與時間t甲分解%（一）四氮唑比色法室溫（25）反應(yīng)4045 min(二)異煙肼法(Isonicotinic acid hydrazide)第四節(jié) AssayINH4-3-酮Isonicotinic acid Hydrazide腎上腺皮質(zhì)激素、 雄性激素和蛋白同化激素、孕激素第四節(jié) Assay討論（1）反應(yīng)速度C3= O C17= O 、 C20= O ； C11= O 不反應(yīng)專屬性強（2）溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽甲醇、乙醇無水（3）水分、O2與光線的影響含水量腙水解A%具塞容器

14、，不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時 O2與光線無影響4-3-酮甲醇對試劑的穩(wěn)定性好、呈色強度較無水乙醇中高、但對植物油的溶解度小第四節(jié) Assay(4)酸、異煙肼的量鹽酸 : 異煙肼 = 2 : 1酸度 異煙肼酸度 A(5)溫度t 第四節(jié) Assay(三) Kober反應(yīng)比色法第二步反應(yīng)515465450 500 550 nmAKober 反應(yīng)吸收光譜第一步反應(yīng)第四節(jié) Assay采用本法測定炔雌醇片及復(fù)方炔諾酮片、復(fù)方炔諾孕酮滴丸、復(fù)方左炔諾孕酮片中的炔雌醇的含量加入鐵酚試劑(NH4)2Fe(SO4)2 + H2SO4 + H2O2 + 苯酚* 鐵鹽的作用 加快黃色產(chǎn)物的形成、轉(zhuǎn)化 加強紅色產(chǎn)物的穩(wěn)定

15、性* 酚的作用 加快紅色產(chǎn)物的形成 消除反應(yīng)產(chǎn)生的熒光Iron-phenol Reagent第五節(jié) 生物樣本中甾體激素的分析GC-MS:尿樣SPE萃取衍生化GC/MS分析HPLC-MS:血清 HPLC/MS分析練習(xí)與思考A型題1. 黃體酮的專屬反應(yīng)是A.與硫酸的反應(yīng) B. 斐林反應(yīng) C. 與亞硝基鐵氰化鈉的反應(yīng) D.異煙肼反應(yīng) E. 硝酸銀反應(yīng) 練習(xí)與思考A型題2. 與堿性酒石酸銅試液反應(yīng)生成磚紅色沉淀的藥物是A.黃體酮 B. 醋酸地塞米松 C. 炔雌醇 D.甲睪酮 E. 苯丙酸諾龍 B型題 A.四氮唑比色法 B. 硫酸呈色反應(yīng) C. 氣相色譜法 D. 硝酸銀-氫氧化鈉滴定法 E.異煙肼比色法 3. 利用分子中的乙炔基所建立的分析方法為 4. 利用4-3-酮基所建立的分析方法為 5. 利用C17