專(zhuān)題九生物科技與技術(shù)實(shí)踐課件(PPT 36頁(yè))

1、考綱要求專(zhuān)題九 生物科技與技術(shù)實(shí)踐 內(nèi)容要求1基因工程基因工程的誕生基因工程的原理及技術(shù)基因工程的應(yīng)用蛋白質(zhì)工程2克隆技術(shù)植物的組織培養(yǎng)動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克隆細(xì)胞融合與單克隆抗體3胚胎工程動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過(guò)程與胚胎工程的理論基礎(chǔ)胚胎干細(xì)胞的移植胚胎工程的應(yīng)用第1頁(yè)，共36頁(yè)。4.生物技術(shù)的安全性和倫理問(wèn)題轉(zhuǎn)基因生物的安全性生物武器對(duì)人類(lèi)的威脅生物技術(shù)中的倫理問(wèn)題5.生態(tài)工程闡述生態(tài)工程的原理生態(tài)工程的實(shí)例6.酶的應(yīng)用酶的存在與簡(jiǎn)單的制作方法酶活力測(cè)定的一般原理和方法酶在食品制造和洗滌等方面的應(yīng)用制備和應(yīng)用固相化酶（1）能獨(dú)立完成“生物知識(shí)內(nèi)容表”所列實(shí)驗(yàn)，包括理解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、方法和?/p>

2、作步驟，掌握相關(guān)的操作技能，并能將這些實(shí)驗(yàn)的方法和技能進(jìn)行綜合運(yùn)用（2）具備驗(yàn)證簡(jiǎn)單生物學(xué)事實(shí)的能力，并能對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象和結(jié)果進(jìn)行解釋、分析和處理（3）能對(duì)一些簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)方案作出恰當(dāng)?shù)脑u(píng)價(jià)和修訂7.生物技術(shù)在食品加工及其他方面的應(yīng)用（1）從生物材料中提取某些特定的成分（2）運(yùn)用發(fā)酵加工食品的基本方法（3）測(cè)定食品加工中可能產(chǎn)生的有害物質(zhì)（4）植物的組織培養(yǎng)（5）蛋白質(zhì)的提取和分離（6）PCR 技術(shù)的基本操作和應(yīng)用第2頁(yè)，共36頁(yè)。合成逆轉(zhuǎn)錄 基因工程目的基因的獲取: 分為直接分離基因、人工合成基因。人工合成法反轉(zhuǎn)錄法mRNA 單鏈DNA 雙鏈DNA 專(zhuān)一性強(qiáng)，目的基因不含內(nèi)含子操作麻煩，mRNA存

3、在的時(shí)間短，技術(shù)要求高根據(jù)已知氨基酸序列合成通過(guò)測(cè)出的核苷酸序列，利用化學(xué)方法合成專(zhuān)一性最強(qiáng)，目的基因不含內(nèi)含子，可以合成自然界中不存在的基因目前，復(fù)雜的、尚不知核苷酸序列的基因不能合成第3頁(yè)，共36頁(yè)?；虮磉_(dá)載體的構(gòu)建方法 重組DNA（環(huán)狀重組質(zhì)粒） 同一種限制酶切割 帶有黏性 帶有相同黏性末端的 末端切口 目的基因片段 載體（質(zhì)粒） DNA分子（含目的基因） DNA連接酶 第4頁(yè)，共36頁(yè)。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法顯微注射技術(shù)感受態(tài)細(xì)胞法(用Ca2+處理)受體細(xì)胞受精卵體細(xì)胞 (需經(jīng)組織 培養(yǎng))受精卵原核細(xì)胞第5頁(yè)，共

4、36頁(yè)。目的基因的檢測(cè)與鑒定 導(dǎo)入檢測(cè):DNA 分子雜交技術(shù) , 即使用放射性同位素標(biāo)記的含目的基因的 DNA 片段作探針檢測(cè)。 轉(zhuǎn)錄檢測(cè) : 分子雜交法 , 即目的基因表達(dá)檢測(cè) 作探針與 mRNA 雜交 翻譯檢測(cè) : 抗原抗體雜交法個(gè)體生物學(xué)水平鑒定: 轉(zhuǎn)基因生物是否具有抗性或轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的功能活性。 第6頁(yè)，共36頁(yè)。細(xì)胞工程細(xì)胞工程包括動(dòng)物細(xì)胞工程和植物細(xì)胞工程。植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)是細(xì)胞的全能性。植物組織培養(yǎng)可培育繁殖速度快而且無(wú)病毒的植株,還可以通過(guò)大規(guī)模的植物、細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)生產(chǎn)藥物、食品添加劑、香料、色素和殺蟲(chóng)劑等,另外，還可用植物組織培養(yǎng)方法形成的胚狀體,包裹上人工種皮

5、,制成人工種子。過(guò)程名稱(chēng)過(guò)程形成體特點(diǎn)條件脫分化 由外植體形成愈傷組織排列疏松、高度液泡化的薄壁細(xì)胞團(tuán)離體提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(有機(jī)物、無(wú)機(jī)物)提供激素(生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素)提供其他適宜條件再分化由愈傷組織成為幼苗或胚狀結(jié)構(gòu)有根、芽或有生根發(fā)芽的能力第7頁(yè)，共36頁(yè)。植物組織培養(yǎng)與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)項(xiàng)目原理培養(yǎng)基結(jié)果培養(yǎng)目的植物組織培養(yǎng)細(xì)胞的全能性固體：營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素培養(yǎng)成植株快速繁殖,培育無(wú)病毒植株等動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞的增殖液體:營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、動(dòng)物血清等培育成細(xì)胞系或細(xì)胞株獲得細(xì)胞的產(chǎn)物或細(xì)胞等第8頁(yè)，共36頁(yè)。植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合項(xiàng)目細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合方法誘導(dǎo)手段用途植物體細(xì)胞雜交細(xì)胞膜的流動(dòng)性去除

6、細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離心、電刺激、聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)克服遠(yuǎn)緣雜交不親和,獲得雜種植株動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞膜的流動(dòng)性使細(xì)胞分散后,誘導(dǎo)細(xì)胞融合離心、電刺激、聚乙二醇、滅活病毒等試劑誘導(dǎo)制備單克隆抗體的技術(shù)第9頁(yè)，共36頁(yè)。單克隆抗體制備過(guò)程中的兩個(gè)核心問(wèn)題 為何制備單克隆抗體要將單個(gè) B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合? 體內(nèi)的 B 淋巴細(xì)胞數(shù)目很多 , 可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體 , 這些抗體主要存在于動(dòng)物體血清中, 也存在于組織液及外分泌液中。如果從動(dòng)物血清中分離出所需要的抗體 , 不僅獲得的抗體產(chǎn)量低 , 而且抗體的特異性差 , 純度低 , 反應(yīng)不靈敏。如果利用單個(gè) B 淋巴細(xì)胞通過(guò)無(wú)性

7、繁殖 , 就可產(chǎn)生大量單一抗體,但 B 淋巴細(xì)胞在體外不能無(wú)限增殖(從動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程可以理解, 單個(gè)細(xì)胞要度過(guò)兩次“危機(jī)”幾乎是不可能的 ), 這就需要利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特點(diǎn), 將單個(gè) B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合, 可以使雜種細(xì)胞具有兩個(gè)親本的遺傳特性 , 也就是既具有無(wú)限增殖的特點(diǎn), 又能產(chǎn)生單一抗體。第10頁(yè)，共36頁(yè)。制備過(guò)程中為何須經(jīng)兩次篩選 ? 第一次篩選是在 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合之后 , 因?yàn)橛腥N融合情況:B 淋巴細(xì)胞與 B 淋巴細(xì)胞融合、骨髓瘤細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合、 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合。而只有 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的細(xì)胞才是需要的雜種細(xì)胞。第

8、二次篩選是在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。第11頁(yè)，共36頁(yè)。胚胎移植胚胎移植的供體和受體必須是同種生物,同一物種的動(dòng)物才有可能具有相同的生理特征。作為受體的雌性動(dòng)物應(yīng)為常見(jiàn)或存量大的品種,供體則為優(yōu)良的品種。胚胎移植的意義: 大大縮短了供體本身的繁殖周期 , 充分發(fā)揮雌性?xún)?yōu)良個(gè)體的繁殖潛力。第12頁(yè)，共36頁(yè)?！吧锛夹g(shù)實(shí)踐”知識(shí)網(wǎng)絡(luò)建構(gòu)微生物的培養(yǎng)生物技術(shù)在食品加工等方面的應(yīng)用生物技術(shù)在食品加工等方面的應(yīng)用生物技術(shù)在食品加工等方面的應(yīng)用成分類(lèi)型消毒滅菌配制培養(yǎng)基倒平板接種培養(yǎng)臨時(shí)保藏永久保藏滅菌培養(yǎng)基無(wú)菌技術(shù)基本技術(shù)菌種保藏固定化酶生物技術(shù)實(shí)踐酶的研究應(yīng)用酶的制備酶活力的測(cè)

9、定果膠酶的應(yīng)用加酶洗衣粉固定化細(xì)胞技術(shù)制作果酒制作果醋制作腐乳制作泡菜測(cè)定亞硝酸鹽的含量 方法方法優(yōu)點(diǎn)應(yīng)用原理反應(yīng)式發(fā)酵條件制作流程配制溶液制備標(biāo)準(zhǔn)顯色液 制備樣品處理液 比色微生物的利用土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)纖維素分解菌的篩選流程菌株篩選統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目設(shè)置對(duì)照土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋涂布平板挑選菌落微生物的培養(yǎng)生物技術(shù)在食品加工等方面的應(yīng)用第13頁(yè)，共36頁(yè)。制作原理果酒和果醋制作腐乳的制作制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量果酒:無(wú)氧呼吸果醋:有氧呼吸多種微生物發(fā)酵泡菜制作:乳酸菌無(wú)氧呼吸亞硝酸鹽檢測(cè)：在鹽酸酸化條件下,亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后,與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形

10、成玫瑰紅色染料實(shí)驗(yàn)流程圖讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉加鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制操作提示材料的選擇與處理;防止發(fā)酵被污染;控制好發(fā)酵條件控制好材料的用量;防止雜菌污染泡菜壇的選擇;腌制的條件;測(cè)定亞硝酸鹽含量的操作切分成條狀或片狀原料加工修整、洗滌、晾曬加鹽、鹽水冷卻、加入調(diào)味料、裝壇發(fā)酵 成品 亞硝酸鹽的含量果醋沖洗榨汁酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵果酒挑選葡萄第14頁(yè)，共36頁(yè)。植物芳香油三種提取方法提取方法實(shí)驗(yàn)原理方法步驟適用范圍水蒸氣蒸餾利用水蒸氣將揮發(fā)性較強(qiáng)的植物芳香油攜帶出來(lái)水蒸氣蒸餾分離油層除水過(guò)濾適用于提取玫瑰油、薄荷油等揮發(fā)性強(qiáng)的芳香油壓榨法通過(guò)機(jī)械加壓,壓榨出果皮中的芳香油石灰水浸泡、漂洗壓榨、過(guò)濾、

11、靜置再次過(guò)濾適用于柑橘、檸檬等易焦糊原料中芳香油的提取有機(jī)溶劑萃取使芳香油溶解在有機(jī)溶劑中,蒸發(fā)溶劑后就可獲得芳香油粉碎、干燥萃取、過(guò)濾濃縮適用范圍廣,要求原料的顆粒要盡可能細(xì)小,能充分溶解在有機(jī)溶劑中第15頁(yè)，共36頁(yè)。直接使用酶與固定化酶類(lèi)型優(yōu)點(diǎn)不足直接使用酶催化效率高,低耗能,低污染對(duì)環(huán)境非常敏感,易失活;難回收,不能再次利用,與產(chǎn)物混在一起,可能影響產(chǎn)品質(zhì)量固定化酶酶與產(chǎn)物分開(kāi),可反復(fù)利用一種酶只能催化一種化學(xué)反應(yīng),生產(chǎn)實(shí)踐中,很多產(chǎn)物的形成是通過(guò)一系列的酶促反應(yīng)得到的第16頁(yè)，共36頁(yè)。例1 制備單克隆抗體所采用的細(xì)胞工程技術(shù)包括（ ）細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞融合 胚胎移植 細(xì)胞核移植 B.

12、C. D. A第17頁(yè)，共36頁(yè)。例2 下列關(guān)于細(xì)胞工程的敘述，錯(cuò)誤的是（ ）A.電刺激可誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合或動(dòng)物細(xì)胞融合B.去除植物細(xì)胞的細(xì)胞壁和將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞均需酶處理C.小鼠骨髓瘤細(xì)胞和經(jīng)抗原免疫小鼠的B淋巴細(xì)胞融合可制備單克隆抗體D.某種植物甲乙兩品種的體細(xì)胞雜種與甲乙兩品種雜交后代的染色體數(shù)目相同D第18頁(yè)，共36頁(yè)。例3 下列有關(guān)植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)的敘述中，錯(cuò)誤的是（ ）A.花藥、胚不能作為組織培養(yǎng)的材料B.植物細(xì)胞具有全能性C.外植體是指用于培養(yǎng)的植物組織或器官D.外植體可誘導(dǎo)出愈傷組織A第19頁(yè)，共36頁(yè)。例4 不同的微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要各不相同。下列有關(guān)一種以C

13、O2為唯一碳源的自養(yǎng)生物營(yíng)養(yǎng)的描述中，不正確的是（ ）A.氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮素B.碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì)C.無(wú)機(jī)鹽是該微生物不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)D.水是該微生物的營(yíng)養(yǎng)要素之一B第20頁(yè)，共36頁(yè)。例5 利用細(xì)胞工程方法，以SARS病毒核衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體。下列相關(guān)敘述正確的是（ ）A.用純化的核衣殼蛋白反復(fù)注射到小鼠體內(nèi)，產(chǎn)生的血清抗體為單克隆抗體B.體外培養(yǎng)單個(gè)效應(yīng)B細(xì)胞可以獲得大量針對(duì)SARS病毒的單克隆抗體C.將等量效應(yīng)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞混合，經(jīng)PEG誘導(dǎo)融合后的細(xì)胞均為雜交瘤細(xì)胞D.利用該單克隆抗體與SARS病毒核衣殼蛋白特異性結(jié)合的方法可診斷出病毒感染者

14、D第21頁(yè)，共36頁(yè)。例6 下列有關(guān)基因工程中限制性?xún)?nèi)切酶的描述，錯(cuò)誤的是（ ）A.一種限制性?xún)?nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的脫氧核苷酸序列B.限制性?xún)?nèi)切酶的活性受溫度影響C.限制性?xún)?nèi)切酶能識(shí)別和切割RNAD.限制性?xún)?nèi)切酶可從原核生物中提取C第22頁(yè)，共36頁(yè)。例7 利用外源基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，可生產(chǎn)人類(lèi)所需要的產(chǎn)品。下列選項(xiàng)中能說(shuō)明目的基因完成了在受體細(xì)胞中表達(dá)的是（ ）A.棉花二倍體細(xì)胞中檢測(cè)到細(xì)菌的抗蟲(chóng)基因B.大腸桿菌中檢測(cè)到人胰島素基因及其mRNAC.山羊乳腺細(xì)胞中檢測(cè)到人生長(zhǎng)激素DNA序列D.酵母菌細(xì)胞中提取到人干擾素蛋白D第23頁(yè)，共36頁(yè)。例8 單克隆抗體技術(shù)在疾病診斷和治療以及生命科

15、學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用。下列關(guān)于單克隆抗體的敘述，錯(cuò)誤的是（ ）A.特異性強(qiáng)，靈敏度高B.與抗癌藥物結(jié)合可制成“生物導(dǎo)彈”C.體外培養(yǎng)B淋巴細(xì)胞可大量分泌單克隆抗體D.由效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合而成的雜交瘤細(xì)胞分泌C第24頁(yè)，共36頁(yè)。例9 下列關(guān)于基因工程應(yīng)用的敘述，正確的是（ ）A.基因治療就是把缺陷基因誘變成正?；駼.基因診斷的基本原理是DNA分子雜交C.一種基因探針能檢測(cè)水體中的各種病毒D.原核基因不能用來(lái)進(jìn)行真核生物的基因改良B第25頁(yè)，共36頁(yè)。例10 在已知某小片段基因堿基序列的情況下，獲得該基因的最佳方法是（ ）A.用mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成DNAB.以4種脫氧核苷酸為原料

16、人工合成C.將供體DNA片段轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞中，再進(jìn)一步篩選D.由蛋白質(zhì)的氨基酸序列推測(cè)mRNAB第26頁(yè)，共36頁(yè)。例11 【現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題】 天然釀酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶類(lèi)，用作發(fā)酵原料的淀粉需經(jīng)一系列復(fù)雜的轉(zhuǎn)化過(guò)程才能被利用。研究者從某絲狀真菌中獲取淀粉酶基因并轉(zhuǎn)入釀酒酵母菌，獲得的釀酒酵母工程菌可直接利用淀粉產(chǎn)生酒精。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：（1）將淀粉酶基因切割下來(lái)所用的工具是_，用_將淀粉酶基因與載體拼接成新的DNA分子，下一步將該DNA分_，以完成工程菌的構(gòu)建。解析：基因工程的步驟是：獲取目的基因、目的基因與運(yùn)載體結(jié)合、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)和鑒定。用限制酶將目的基因切

17、割下來(lái)，再用DNA連接酶連接形成重組DNA分子，將重組DNA分子導(dǎo)入釀酒酵母菌細(xì)胞中。限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶導(dǎo)入釀酒酵母菌第27頁(yè)，共36頁(yè)。（2）若要鑒定淀粉酶基因是否插入釀酒酵母菌，可采用的檢測(cè)方法是_；若要鑒定淀粉酶基因是否翻譯成淀粉酶，可采用_檢測(cè)；將該工程菌接種在含淀粉的固體平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一定時(shí)間后，加入碘液，工程菌周?chē)霈F(xiàn)透明圈，請(qǐng)解釋該現(xiàn)象發(fā)生的原因。 解析：目的基因的檢測(cè)過(guò)程包括三個(gè)步驟：用基因探針檢測(cè)受體細(xì)胞中是否有目的基因、用基因探針檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA、用抗原抗體雜交技術(shù)檢測(cè)是否有相應(yīng)蛋白質(zhì)的合成。該工程菌可分解淀粉，因此，在固體平板培養(yǎng)基上接種細(xì)菌的

18、部位不具有淀粉，滴加碘液后沒(méi)有藍(lán)色反應(yīng)出現(xiàn)，產(chǎn)生透明圈。DNA分子雜交技術(shù)抗原抗體雜交或淀粉酶活性答案：該工程菌產(chǎn)生的淀粉酶可分泌至培養(yǎng)基，水解淀粉后的區(qū)域，遇碘不再變藍(lán)色，產(chǎn)生透明圈。（3）如何進(jìn)一步鑒定不同的轉(zhuǎn)基因工程菌菌株利用淀粉能力的大??？解析：該實(shí)驗(yàn)自變量為不同轉(zhuǎn)基因工程菌，因變量為淀粉酶活性或酒精產(chǎn)量。在相同條件下培養(yǎng)不同工程菌菌株，酒精產(chǎn)量較高的菌株利用淀粉的能力較強(qiáng)。答案：測(cè)定相同培養(yǎng)條件下不同工程菌菌株的淀粉酶活性或酒精產(chǎn)量。第28頁(yè)，共36頁(yè)。（4）微生物在基因工程領(lǐng)域中有哪些重要作用？ 解析：微生物具有繁殖周期短、多為單細(xì)胞、易培養(yǎng)、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少等特點(diǎn)，因此，一般用微

19、生物作為受體細(xì)胞和用于發(fā)酵的工程菌?；蚬こ痰墓ぞ呙赣邢拗泼负虳NA連接酶，其中限制酶主要來(lái)自微生物?；蚬こ痰某Ｓ眠\(yùn)載體有：質(zhì)粒、動(dòng)植物病毒、噬菌體的衍生物，其中質(zhì)粒是微生物細(xì)胞染色體外能夠自主復(fù)制的小型環(huán)狀DNA分子。 答案：工具酶主要來(lái)自微生物；最重要的目的基因供體庫(kù)之一；目的基因的載體之一；作為受體細(xì)胞；提供用于發(fā)酵的工程菌。第29頁(yè)，共36頁(yè)。例12 【生物技術(shù)實(shí)踐】科學(xué)家發(fā)現(xiàn)家蠅體內(nèi)存在一種抗菌活性蛋白。這種蛋白質(zhì)具有極強(qiáng)的抗菌能力，受到研究者重視。（1）分離該抗菌蛋白可用電泳法，其原理是根據(jù)蛋白質(zhì)分子的_、大小及形狀不同，在電場(chǎng)中的_不同而實(shí)現(xiàn)分離。（2）可用金黃色葡萄球菌來(lái)檢驗(yàn)

20、該蛋白的體外抗菌特性?？咕鷮?shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨主要為細(xì)菌生長(zhǎng)提供_和_。（3）分別在加入和未加入該抗菌蛋白的培養(yǎng)基中接種等量菌液。培養(yǎng)一定時(shí)間后，比較兩種培養(yǎng)基中菌落的_，確定該蛋白質(zhì)的抗菌效果。（4）細(xì)菌培養(yǎng)常用的接種方法有_和_。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行_處理。 解析：本題考查生物技術(shù)實(shí)踐中的基礎(chǔ)知識(shí)，知識(shí)點(diǎn)覆蓋面大，答案容易組織。有關(guān)物質(zhì)的分離與提取方法，設(shè)計(jì)分離蛋白質(zhì)的電泳法電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。有關(guān)微生物培養(yǎng)基的成分、種類(lèi)與作用，涉及牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)

21、基中的牛肉膏與蛋白胨分別為微生物提供碳源、氮源和維生素。有關(guān)微生物的接種和培養(yǎng)方法，常采用平板畫(huà)線法和稀釋涂布平板法對(duì)細(xì)菌進(jìn)行接種。為防止細(xì)菌的污染，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要對(duì)用過(guò)的培養(yǎng)基作滅菌處理。電荷（帶電情況）遷移速率碳源氮源數(shù)量平板劃線法稀釋涂布平板法滅菌第30頁(yè)，共36頁(yè)。例13 【現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題】為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開(kāi)發(fā)利用備受關(guān)注。我國(guó)科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因育出了耐鹽水稻新品系。（1）獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組DNA分子所用的限制性?xún)?nèi)切酶作用于圖中的_處，DNA連接酶作用于_。（填“a” 或“b”）（2）將重組DNA分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞的常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和_

22、法。（3）由導(dǎo)入目的基因的水稻細(xì)胞培養(yǎng)成植株需要利用_技術(shù)，該技術(shù)的核心是_和_。（4 ）為了確定耐鹽基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的_作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用_方法從個(gè)體水平鑒定水稻植株的耐鹽性。3553C T G C A G G A C G T C- b b a a第31頁(yè)，共36頁(yè)。 解析：本題以“科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系”為背景，考查了現(xiàn)代生物技術(shù)專(zhuān)題中的有關(guān)基因工程和植物細(xì)胞工程的基本內(nèi)容?；蚬こ讨械墓ぞ呙赶拗泼负虳NA連接酶的作用是斷開(kāi)或連接兩核苷酸間的磷酸二酯鍵。將目的基因?qū)胫参锸荏w細(xì)胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法。目的

23、基因的檢測(cè)和鑒定，常利用DNA分子雜交技術(shù)（探針）等作分子水平的檢測(cè)和個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程是植物在離體狀態(tài)下，進(jìn)行脫分化與再分化。 答案：（1）a a (2)基因槍、花粉管通道 (3)植物組織培養(yǎng) 脫分化（去分化） 再分化 (4)耐鹽基因（目的基因）一定濃度鹽水澆灌（移栽到鹽堿地中）第32頁(yè)，共36頁(yè)。例14 【現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題】回答下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的問(wèn)題：（1）在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到細(xì)胞表面_時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱(chēng)為細(xì)胞的_。此時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是_。要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來(lái)，需要用酶處理，可用的酶是_。（2）隨著細(xì)胞傳

24、代次數(shù)的增多，絕大部分細(xì)胞分裂停止，進(jìn)而出現(xiàn)_的現(xiàn)象；但極少數(shù)細(xì)胞可以連續(xù)增殖，其中有些細(xì)胞會(huì)因遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而變成_細(xì)胞，該種細(xì)胞的黏著性_，細(xì)胞膜表面蛋白質(zhì)（糖蛋白）的量_。（3）現(xiàn)用某種大分子染料，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，觀察到死細(xì)胞被染色，而活細(xì)胞不染色，原因是_。（4 ）檢查某種毒物是否能改變細(xì)胞染色體的數(shù)目，最好選用細(xì)胞分裂到_期的細(xì)胞用顯微鏡進(jìn)行觀察。（5）在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，通常在_條件下保存細(xì)胞。因?yàn)樵谶@種條件下，細(xì)胞中_的活性降低，細(xì)胞_的速率降低。（6）給患者移植經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現(xiàn)象，這是因?yàn)闄C(jī)體把移植的皮膚組織當(dāng)作_進(jìn)行攻擊。第33頁(yè)，共36頁(yè)。 解析：本題考查現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題中的有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)知識(shí)。在動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞因相互接觸而出現(xiàn)接觸抑制并具有貼壁現(xiàn)象，可用胰蛋白酶將貼壁細(xì)胞分離下來(lái)。隨著細(xì)胞培養(yǎng)傳代次數(shù)的增多，大多數(shù)細(xì)胞失去了分裂能力而衰老死亡，只有少數(shù)細(xì)胞仍具有分裂能力，這少數(shù)的細(xì)胞具有癌細(xì)胞的特征，其細(xì)胞膜上的糖蛋白減少，細(xì)胞的黏著性下降。細(xì)胞膜具有選擇透過(guò)性，故染料分子不