國家自然科學基金標書－《通脈口服液》配伍規(guī)律及作用機制的研究

1、工程類別申報學科代碼1科學部編號AC030503國家自然科學基金申 請 書 工程名稱： ?xx口服液?配伍規(guī)律及作用機制的研究申 請 者： 所在單位： 中醫(yī)藥大學 郵政編碼： 通訊地址： 電 話： 傳 真： 申請日期： 2002年3月10日國 家 自 然 科 學 基 金 委 員 會一九九七年制填 報 說 明 一、填寫申請書前，請先查閱國家自然科學基金有關(guān)工程申請方法及規(guī)定。申請書各項內(nèi)容，要實事求是，逐條認真填寫。表達要明確、嚴謹，字跡要清晰易辨。外來語要同時用原文和中文表達。第一次出現(xiàn)的縮寫詞，須注出全稱。 二、申請書為十六開本，復印時用B5復印紙，于左側(cè)裝訂成冊。第三頁起各欄空格不夠時，請

2、自行加頁。一式六份至少一份為原件，由所在單位審查簽署意見后，按申報學科投送國家自然科學基金委員會對口科學部。地區(qū)科學基金工程，申請書另報送省自治區(qū)科委一份原件。 三、封面右上角“科學部編號由對口科學部填寫，工程類別和申報學科代碼1由申請者填寫。 四、以下人員不得作為申請工程的負責人提出申請，但可作為工程組成員參加研究： 在讀含在職研究生 已離退休的科研人員 申請單位的兼職科研人員 五、申請者和工程組中具有高級專業(yè)技術(shù)職務的主要成員申請含參加的工程數(shù)，連同在研的國家自然科學基金工程數(shù)不含重點工程、重大工程，不得超過兩項。 六、同一工程組研究內(nèi)容相近的工程，只允許報送一個學科。 七、申請者可因同類

3、工程競爭等原因，提出不宜評議本工程的專家名單姓名與單位，3人以內(nèi)，密封于信封中，釘在申請書原件封面，或另專函相關(guān)學科，供科學部選擇同行評議人時參考?？茖W部將對此信息保密。 八、國家自然科學基金委員會通訊地址：北京市海淀區(qū)花園北路35號東門 郵政編碼：100083 一、簡表研究項目名稱中文?服液?配伍規(guī)律及作用機制的研究英文Study on the combining regulation and effecting mechanism of TONGMAI oral liquid類別 A.自由申請 B.高技術(shù)探索 C.青年 D.地區(qū)高技術(shù)探索工程主題號 E.重大 F.重點 H.專項A申報學科名

4、稱1中醫(yī)臨床根底名稱2中藥藥理學 A. 根底研究 B. 應用根底 代碼1C030503代碼2C03050205B申請金額20.00萬元起止年月 2003 年 1 月至2005 年12 月所用實驗室A. 國家重點 B. 部門開放實驗室編號B申請者姓名中文楊霓芝性別A. 男出生年月48年10月民族名稱漢拼音YANG NI ZHIB. 女B身份證號代碼01專業(yè)技術(shù)職務名稱教授學位 A. 博士 B. 碩士 C. 學士 C博士學位授予國別或 地 區(qū)國(地區(qū))名中國A. 院士B. 博士生導師C. 博士后代碼011代 碼156B所在單位名 稱廣州中醫(yī)藥大學系所臨床醫(yī)學院單位代碼51040701性 質(zhì)A. 高

5、等院校B. 科研機構(gòu)C. 其它郵政編碼510405隸屬關(guān)系名稱廣東省教育廳A申請者 (020)86591233-2267代碼944所在地廣東省 (自治區(qū)、直轄市) 廣州 市(縣) 白云 區(qū) 機場 街(路) 12 號項目組總?cè)藬?shù)高級中級初級博士后博士生碩士生參加單位數(shù)85311姓 名 身份證號專業(yè)技術(shù)職 務所在單位名稱及代碼工程中的分工簽字藥效學主要成員(不含申請者)藥效學機制研究植化、分析細胞培養(yǎng)統(tǒng)計分析生化檢查1研究內(nèi)容和意義摘要在既往對?通脈口服液?臨床和實驗有效的基礎(chǔ)上,進一步系統(tǒng)研究其配伍規(guī)律,闡明該制劑治療慢性腎炎的有效物質(zhì)基礎(chǔ)及其形成規(guī)律;并從細胞因 子(致炎細胞因子IL-1、抗炎

6、細胞因子IL- 10)的角度探討其作用機理，為開發(fā)出具有自主知識產(chǎn)權(quán)的治療慢性腎炎、防治腎小球硬化的中藥新藥提供堅實的理論基礎(chǔ)和科學依據(jù)。主題詞中文中藥復方慢性腎炎組方機理英文Compound prescription of Chinese herbs; Chronic nephritis; Mechanism of composing and effects簡 表 填 寫 要 求一、簡表內(nèi)容將輸入計算機，必須逐項認真填寫，采用國家公布的標準簡化漢字。簡表中所有代碼以最新發(fā)布的?國家自然科學基金申請工程分類目錄及代碼?為準填寫。高技術(shù)探索課題主題號按?高技術(shù)新概念新構(gòu)思探索課題工程指南?中主題

7、號填寫，申請其重點工程時工程類別也填寫B(tài)，并在申請書封面右上角加注“高技術(shù)探索課題重點工程。二、凡選擇性欄目，將相應提示符A、B等之一填入該欄的右下角。三、局部欄目填寫要求：工程名稱應確切反映研究內(nèi)容和范圍，最多不超過25個漢字 (包括標點符號。根底研究指以認識自然現(xiàn)象、探索自然規(guī)律為目的，不直接考慮應用目標的研究活動。應用根底研究指有廣泛應用前景，但以獲取新原理、新技術(shù)、新方法為主要目的的研究。申報學科申請工程所屬的最根底學科。如涉及多學科可填寫兩個，先填為主學科。申請金額以萬元為單位，用阿拉伯數(shù)字表示，注意小數(shù)點。起止年月起始時間從申請的次年1月算起。終止時間為完成年度的 12月。所用實驗

8、室系指研究工程將利用的實驗室，僅填寫國家計委批準的國家重點實驗室或部門批準的開放實驗室。所在單位名稱及代碼按單位公章填寫全稱。例如“中國科學院西安光學精密機械研究所不得填“中科院西安光機所或“西安光機所。全稱中的數(shù)字，一律寫中文，例如：中國航天工業(yè)總公司第七一所。首次申請國家自然科學基金的單位，尚未編入單位代碼，其代碼暫不填寫。參加單位數(shù)指研究工程組主要成員所在單位數(shù)，包括主持單位和合作單位(合作者所在單位)，以阿拉伯數(shù)字表示。工程組主要成員指在工程組內(nèi)對學術(shù)思想、技術(shù)路線的制訂與理論分析及對工程的完成起重要作用的人員，本人應在申請書上親自簽名。本欄雙線右側(cè)內(nèi)容不輸入計算機。 研究內(nèi)容和意義摘

9、要與主題詞均錄入軟盤。2二、立論依據(jù) 包括工程的研究意義、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析，并附主要參考文獻及出處 對根底研究，著重結(jié)合國際科學開展趨勢，論述工程的科學意義；對應用根底研究，著重結(jié)合學科前沿、圍繞國民經(jīng)濟和社會開展中的重要科技問題，論述其應用前景。慢性腎炎是一種常見病，其病程長，遷延不愈，是目前我國引起慢性腎功能衰竭的主要原因1。現(xiàn)代醫(yī)學多采用降壓、抗凝、利尿等對癥治療及激素和細胞毒藥物的應用，尚缺少針對發(fā)病機理進行治療的藥物，與之相比，祖國醫(yī)學在治療慢性腎炎方面有著長足的優(yōu)勢。目前對慢性腎炎的中醫(yī)藥治療主要可分為二大類,即辨病施治和辨證施治：辨病施治主要是針對慢性腎炎的臨床表現(xiàn)如蛋白尿、血

10、尿的治療。對蛋白尿的治療，多采用健脾固腎、活血化瘀、清熱解毒等法2；針對血尿的治療那么主要以清熱涼血法、健脾固腎法、活血化瘀法為主3-4。辨證施治方面目前尚沒有統(tǒng)一的分型標準,各家仍各執(zhí)一說：如余綺明以臟腑結(jié)合陰陽辨證為主，將慢性腎炎分為脾腎陽虛、腎陰虛火旺、腎虛濕毒三型，分別用參苓白術(shù)散合真武湯、知柏地黃丸、濟生腎氣丸合溫膽湯加減治療5；郭連川將慢性腎炎分為濕熱內(nèi)蘊、濕熱犯中、水熱內(nèi)停、瘀血內(nèi)阻四個證型論治6等。但綜觀目前的文獻報道，或是集中在某方治療某病上，未能充分表達中醫(yī)辨證施治原那么；或是組方過于繁雜,不利于有效成分的分析提??；另外辨證分型標準不統(tǒng)一，也不利于臨床療效的判定。這樣都不可

11、防止地會影響治療效果和藥物的進一步開發(fā)。我們在長期的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，慢性腎炎開展過程中，氣虛血瘀型占很大比例，約占56.3%7。其由氣虛而發(fā)病，因血瘀而致疾病遷延難愈；與現(xiàn)代醫(yī)學之慢性腎炎主要由免疫失調(diào)而發(fā)病，因凝血障礙而致疾病開展惡化的病機極其相似8。因此，我們根據(jù)多年的臨床經(jīng)驗，摸索出有效驗方，制成通脈口服液。方中黃芪為益氣要藥，有補氣升陽、益衛(wèi)固表、利水消腫之功，藥材中主要含皂甙9-12、異黃酮14-15、多糖16等水溶性成分，黃芪水提液及其中的黃芪多糖、黃芪皂甙對多種動物免疫系統(tǒng)、體液免疫及細胞免疫均有顯著的調(diào)節(jié)作用17-22，而且能顯著降低大鼠血小板粘附率23及減少腎小球疾病尿蛋白的

12、排出量24。三七和營止血、通脈行瘀，藥材主要含皂甙、黃酮、多糖25等水溶性成分，其中三七總皂甙及總黃酮均有擴張冠狀動脈26、抗心肌缺血27作用，總皂甙還有顯著的抗炎28、免疫增強29及延緩腎小球硬化發(fā)生作用30。經(jīng)過1997.82000.8廣東省科委重點攻關(guān)工程?通脈口服液防治慢性腎炎氣虛血瘀證的臨床與實驗研究?三年多嚴格的臨床與實驗研究，充分證明該藥是治療慢性腎炎氣虛血瘀證患者的有效藥物，且未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用31-34。經(jīng)省級鑒定，成果水平達國內(nèi)領(lǐng)先。因此本工程擬進一步對其配伍規(guī)律及更深入的作用機制進行研究：. 配伍規(guī)律的研究：中藥復方配伍規(guī)律的研究，是一個復雜的系統(tǒng)工程。臨床療效是中藥復方

13、研究的依據(jù)，復方的主要成效和配伍理論是中藥復方研究的前提。從物質(zhì)根底角度探討方劑的組成原理和配伍規(guī)律，已逐漸在學術(shù)界引起重視，并進行3了有益的嘗試。如用薄層掃描法對四逆湯的三種烏頭堿類成分的測定說明，甘草及干姜均能顯著降低附子的毒性成分，四逆湯的不同配伍對化學及藥效均產(chǎn)生影響35。生脈散配伍化學研究中發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生了新物質(zhì)，經(jīng)UV，IR，MS及NMR譜鑒定為5-羥甲基-2-糠醛，研究說明，復方獨特療效有其獨特的物質(zhì)根底，與單味藥及其簡單加和在化學成分上有本質(zhì)區(qū)別36。對不同配伍的白頭翁湯中黃連素和秦皮素的測定說明，復方中被檢物質(zhì)的含量不符合各單味藥成分含量的加和37。 運用現(xiàn)代別離方法提取有效局部，

14、通過指紋圖譜定性、指標成分定量等方法，可使含有幾百種化合物的中藥復方分成十多類，每類含可定量的幾十種化合物。同時，將單味藥中一種或幾種有效成分作為定性定量指標，對復方中藥采取提取別離分析技術(shù)，與選定的有效成分指標進行比擬，從而說明復方的配伍。在復方藥理研究及分析復方中各藥味化學成分藥理作用的根底上，進行藥效和作用機理研究，這些研究可在整體、離體、細胞、分子生物學等水平上進行，從而確定君臣佐使藥的有效部位、有效成分，說明復方藥物配伍規(guī)律。這樣一來，不僅可以確定各有效局部的藥效作用，而且可發(fā)現(xiàn)有無更有效的新的化學物質(zhì)出現(xiàn)。 由于中藥復方用藥本身的復雜性，以上研究所取得的成果還很有限，仍未能在更深層

15、次說明方劑組成原理，未能更深入揭示方劑中各組成藥物在方中的作用、地位及相互關(guān)系，也難以有效地指導臨床制方和中藥新產(chǎn)品的研創(chuàng)。其中既有技術(shù)手段方面的缺乏，也有思路與方法上的缺陷，突出表現(xiàn)在：1、對方劑產(chǎn)生療效的物質(zhì)根底研究明顯滯后：對多數(shù)方劑而言，在為數(shù)眾多化學成分中，究竟那些是有效成分，哪些是無效成分，哪些是起主要作用的成分等尚未可知；2、方劑物質(zhì)根底的運動、變化關(guān)系研究相對薄弱：方劑君臣佐使配伍以后，在制劑過程及體內(nèi)過程中，各藥的化學成分特別是效應成分在數(shù)、量、分布及作用趨向發(fā)生了怎樣的變化多未能充分說明；3、方劑組成原理研究綜合性不夠：沒能從藥效、作用機理及藥效物質(zhì)根底的運動變化等多方面、

16、多層次采用多學科手段進行綜合研究，來揭示君臣佐使的科學內(nèi)涵；4、“證的客觀化研究有待加強：既往多為對較為單一的藥效學指標進行方劑君臣佐使藥物地位與作用分析，與“證的結(jié)合不多，主要是缺乏客觀、標準、符合中醫(yī)藥理論的“證的動物模型，難以反映配伍效應與主治“證之間的內(nèi)在聯(lián)系，與臨床實際有較大差距。因此本課題擬通過能從宏觀上反映中藥物質(zhì)群的指紋圖譜法與顯示中藥微觀作用的腎小球系膜細胞篩選法二者的結(jié)合，建立有效物質(zhì)群評價法，系統(tǒng)研究黃芪與三七組方配伍前后有效物質(zhì)群的變化規(guī)律，科學地說明通脈口服液配伍規(guī)律及有效物質(zhì)根底。對通脈口服液配伍規(guī)律進行系統(tǒng)研究目前針對黃芪與三七的配伍研究尚未見報道，說明該制劑治療

17、慢性腎炎的有效物質(zhì)根底及形成規(guī)律，對于該中藥制劑的進一步開發(fā)有著重要意義。首先，有利于科學地制定該制劑質(zhì)量標準，并顯著提高該制劑工藝研究的水平，從而開發(fā)出易與國際接軌的高檔次的中藥復方藥物；其次，該組方有效物質(zhì)根底的說明，3a3b也將為治療慢性腎炎的中藥新藥的開發(fā)奠定堅實的根底。因此，開展本工程研究，有利于一系列具有自主知識產(chǎn)權(quán)的中藥新藥的開發(fā)，對于其他中藥新藥研究和開發(fā)也有重要的指導意義。同時，開展本工程研究，可揭示黃芪與三七配伍后各類成分結(jié)合衍化的重要途徑，將為祖國醫(yī)藥學方藥配伍規(guī)律的科學闡述提供可靠的理論依據(jù)。.作用機制的研究：目前對中藥治療慢性腎炎作用機制的研究多數(shù)還局限于腎臟的功能與

18、形態(tài)、腎血流動力學等方面的研究，而細胞生物學與分子生物學水平研究較少，已有研究證實黃芪與三七對細胞因子網(wǎng)絡有影響，如黃芪可以降低慢性腎炎患者血中sIL-2R和IL-6水平38,可以使慢腎衰患者外周血中升高的IGF1、TGF-1、TNF和IL-6下調(diào)39，三七總皂甙可以降低背部滑膜炎模型大鼠血中TNF水平40及有機磷農(nóng)藥中毒患者血清IL-6 、IL-8等水平41。但兩藥相互配伍后對細胞因子網(wǎng)絡的影響目前還沒有研究報道。細胞因子具有多種生物學效應，目前已證實，幾乎所有腎臟固有細胞，均具有產(chǎn)生細胞因子的能力，同時又是細胞因子生物學作用的靶細胞。腎臟疾病時細胞因子至少通過兩種途徑參與病變過程：一是作為

19、“攻擊性炎癥介質(zhì)，啟動或促進腎組織的炎癥和損傷，如IL-1、TNF-等；二是作為抗炎癥因子，參與腎臟的自身防御，促進炎癥消散和組織修復，如IL-4、IL-10等。腎小球疾病進展的最終結(jié)果取決于促增殖與抑制性因子相互作用的綜合結(jié)果42。腎小球系膜細胞是腎小球內(nèi)最活潑的固有細胞，已有報道系膜細胞可以自分泌IL-6、IL-1、TNF-等炎癥反響細胞因子并可表達這些細胞因子的受體，而這些細胞因子可趨化單核細胞、淋巴細胞并促使它們釋放炎性介質(zhì)進一步激活系膜細胞，使局部炎癥不斷擴大并形成惡性循環(huán)，加速腎小球硬化43。因此本研究擬通過觀察慢性腎炎時系膜細胞對細胞因子IL-1及IL-10的表達及通脈口服液對其

20、表達的影響，從促炎癥因子及抗炎癥因子兩方面入手，研究中藥通脈口服液的作用機制。為以益氣活血為主的通脈口服液治療慢性腎炎提供堅實的理論根底和更充分的科學依據(jù)。 3c參考文獻1. 王海燕主編.腎臟病學(第二版).北京:人民衛(wèi)生出版社.1996:13852. 洪欽國.慢性腎炎的中醫(yī)治療.廣州醫(yī)藥,1998,(3):4-53. 王伯岳,王育仁.中醫(yī)兒科學.北京:人民衛(wèi)生出版社,1984.473-4744. 許方榮.中醫(yī)治療急慢性腎小球腎炎血尿29例臨床觀察.江西中醫(yī)藥,1998,29(1):225. 余綺明.通補兼施治療慢性腎炎28例臨床觀察.湖北中醫(yī)雜志,1995,17(4):226. 郭連川.分型

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28、臟病雜志，2001，174：242-245三、研究方案41.研究目標、研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題 .研究假說. 通脈口服液中的有效物質(zhì)群是通過影響腎臟的細胞因子網(wǎng)絡，抑制促炎癥細胞因子的表達及/或促進抗炎癥細胞因子的表達而起到治療慢性腎炎、防治腎小球硬化的作用。 .研究目標：通過系統(tǒng)研究，說明通脈口服液的配伍規(guī)律及治療慢性腎炎的有效物質(zhì)根底。 并從細胞生物學和分子生物學水平探討通脈口服液治療慢性腎炎、防治腎小球硬化的作用機制。為通脈口服液治療慢性腎炎提供堅實的理論根底和更充分的科學依據(jù)。(3) .研究內(nèi)容.黃芪、三七單味藥材的質(zhì)控研究。.配伍前黃芪、三七單味藥材的成分類別、含量及指紋圖譜研究。

29、.不同比例(黃芪與三七劑量比分別為4:1、3:1、2:1)配伍后組方的成分類別、含量及指紋圖譜研究。.配伍后各組方主要部位及其匹配的藥效學篩選研究。.配伍后組方有效物質(zhì)群的藥效學評價。.配伍后組方有效物質(zhì)群對腎小球系膜細胞(MsC)的增殖及促炎癥細胞因子IL-1和抗炎癥細胞因子IL-10蛋白及基因表達的影響。.擬解決的關(guān)鍵問題.說明配伍前后組方各類化學成分的變化規(guī)律。.說明配伍后組方治療慢性腎炎的有效物質(zhì)群及其作用機理。2.擬采取的研究方法、技術(shù)路線、實驗方案及可行性分析研究方法及實驗方案配伍規(guī)律及藥效學研究局部: .單味藥材的質(zhì)控研究：對黃芪供試藥材(黑龍江產(chǎn))以HPLC法測定其黃芪甲甙含量

30、，以硫酸-苯酚法測定其多糖含量，；對三七供試藥材(云南產(chǎn))以HPLC法測定三七皂甙R1含量，以分光光度法測定總皂甙含量；并制定兩供試藥材上述成分及部位的限量標準，確保所用各批藥材的質(zhì)量均衡可控。 .配伍前各藥材成分類別、含量及指紋圖譜研究：在參考前人資料的根底上分別以TLC法配合顏色反響等對兩藥材水提液不同萃取局部的成分類別進行研究，再以分光光度法等測定總皂甙、總黃酮、及多糖等主要化學部位的含量；并分別以HPLC法或HPCE法制定各藥材不同萃取局部或部位指紋圖譜，配合HPLC-MS法等對所含主要成分定性，并確定相對含量。 不同比例配伍后組方成分類別、含量及指紋圖譜研究：以TLC法配合顏色反響等

31、對組方水提液不同萃取局部的成分類別進行研究，再以分光光度法等測定主要化學部位的含量；并分別以HPLC法或HPCE法制定其各萃取局部或主要部位的指紋圖譜，配合HPLC-MS法等對所含主要成分定性，并確定相對含量。不同比例配伍后組方及各萃取局部、主要部位及其匹配的藥效學篩選研究： 腎小球系膜細胞培養(yǎng)方法的建立：取水囊引產(chǎn)胎兒之腎臟，在無菌條件下別離提取腎皮質(zhì)腎小球組織塊，照?當代腎臟病學?林善錟法進行腎小球MsC培養(yǎng)和鑒定。4a 組方各萃取局部、主要部位匹配設(shè)計：照正交設(shè)計法，對組方各萃取局部進行匹配，并對總皂甙、總黃酮、多糖等主要部位進行匹配。 組方及各萃取局部、主要部位及其匹配抗慢性腎炎作用的

32、篩選研究 ：以金水寶為陽性對照,通過組方水提液及各萃取局部、主要部位及其匹配對體外培養(yǎng)的MsC增殖影響的研究，確定配伍后最隹組方及各組方的最正確匹配。(5)各組方配伍前后及不同匹配有效物質(zhì)群指紋圖譜比照研究：應用HPLC-MS法對配伍前后各萃取局部、主要部位及其匹配進行指紋圖譜研究，確定并比擬其主要成分種類及相對含量，結(jié)合藥效學篩選，確定組方有效物質(zhì)群及其配伍前后的變化規(guī)律。6配伍后組方有效物質(zhì)群的藥效學評價:.大鼠慢性腎炎模型的制備：采用抗Thy-1抗體制備大鼠系膜增生性腎炎MsPGN模型，參照文獻1方法，將A、B、C、D組大鼠由尾靜脈注射ATS 1ml/100gbw體重，每周1次，連續(xù)4周

33、。.大鼠“氣虛血瘀證模型的建立：參照文獻2方法，在實驗第2周時，予A、B、C、D組大鼠行游泳疲勞試驗，連續(xù)兩周。 .動物處理：全部大鼠于造模第2周末及四周末用代謝籠收集24小時尿液，并于第四周末行眼球摘除采血，后處死取腎組織。 .觀察指標：尿蛋白定量：尿纖維蛋白降解產(chǎn)物FDP測定；血尿素氮、血肌酐測定；血液流變學測定；T淋巴細胞亞群測定及腎組織學檢查。免疫熒光學檢查：光學顯微鏡觀察：電子顯微鏡觀察。機理研究局部:.人腎小球系膜細胞的培養(yǎng)和鑒定：(方法同前).實驗血清制備： 腎炎模型血清制備：造模方法同前。 含藥血清制備.細胞增殖測定：采用MTT比色法.ELISA法測定IL-1和IL-10蛋白水

34、平.系膜細胞IL-1mRNA和IL-10mRNA表達檢測 細胞總RNA提取 cDNA第一鏈合成 PCR反響，PCR產(chǎn)物分析參考文獻：1陳廣平，郭慕依，張月娥，等.大鼠Thy-1抗血清制備及系膜增生性腎炎模型的建立.臨床與實驗病理學雜志，1996，3：2412432李儀奎主編. 中藥藥理實驗方法學.上海：上?？茖W技術(shù)出版社，1991.146.5技術(shù)路線： 標準化的黃芪、三七藥材 建立腎小球系膜細胞培養(yǎng)方法 確定不同配伍比例 提取別離各組方及單味藥各物質(zhì)群 各組方物質(zhì)群藥效篩選HPLC-MS 確定各組方物質(zhì)群組成 及其配伍前后的變化規(guī)律 確定組方有效物質(zhì)群 有效物質(zhì)群作用機制研究 說明組方有效物質(zhì)

35、群及配伍前后的變化規(guī)律 說明組方作用機制 說明通脈口服液配伍規(guī)律及作用機制 可行性分析.通脈口服液組方簡單、藥源豐富、制劑穩(wěn)定，為本工程的順利開展提供了保障。.通脈口服液有良好的前期工作根底，現(xiàn)已證實黃芪、三七配伍后組成的通脈口服液對慢性腎炎有確切的療效，顯著優(yōu)于配伍前的單味藥；對配伍前后水提液酯萃取等局部的預試驗顯示，其指紋圖譜已產(chǎn)生顯著變化，為本工程提供了初步的科學依據(jù)。.申請人及工程組主要成員長期從事通脈口服液相關(guān)研究，已完成廣東省科技廳相關(guān)工程研究，并通過省級鑒定。已建立開展本申報工程所需的腎小球系膜細胞培養(yǎng)技術(shù)和指紋圖譜技術(shù)，所需儀器根本齊備，有能力如期完本錢申報工程的研究工作。.本

36、工程組成員均為本校人員及研究生組成，科研經(jīng)驗豐富，主要成員經(jīng)長期合作，配合默契,能確保本工程順利進行。3. 工程特色與創(chuàng)新之處.首次將在“宏觀上反映中藥物質(zhì)群的指紋圖譜法與“顯示中藥微觀作用的腎小球系膜細胞篩選法相結(jié)合，建立有效物質(zhì)群評價法，系統(tǒng)研究黃芪與三七組方配伍前后有效物質(zhì)群的變化規(guī)律，科學地說明通脈口服液配伍規(guī)律及有效物質(zhì)根底。.首次從促炎性細胞因子及抑炎性細胞因子兩方面探討中藥對慢性腎炎的作用機制。4. 年度研究方案及預測進展 全部工作將在三年內(nèi)完成：.2003.12003.3 試驗前期準備工作 .2003.32004.3 組方配伍前后物質(zhì)群的變化規(guī)律研究.2004.1-2004.1

37、2 藥效學及配伍規(guī)律研究.2005.12005.10 組方作用機理研究.2005.102005.12 工程總結(jié)及結(jié)題報告的撰寫：對所研工程完成情況及取得的進展進行工作總結(jié)和技術(shù)總結(jié)，整理研究資料并寫出結(jié)題報告。 5. 預期研究成果 (1).首次科學地說明通脈口服液治療慢性腎炎的有效物質(zhì)根底，為該制劑的深入開發(fā)奠定堅實的根底，在此根底上將開發(fā)出多層次的具有自主知識產(chǎn)權(quán)的中藥新藥，從而產(chǎn)生巨大的社會效益和經(jīng)濟效益。(2).建立能科學地說明中藥復方配伍規(guī)律的有效物質(zhì)群評價法。(3). 說明通過影響腎臟的細胞因子網(wǎng)絡，抑制致炎細胞因子的表達及/或促進抗炎細胞因子的表達是通脈口服液治療慢性腎炎的機制。(

38、4).在國家或國外核心期刊發(fā)表58篇研究論文。(5).培養(yǎng)博士后及博士研究生各一名。 6三、研究根底與本工程有關(guān)的研究工作積累和已取得的研究工作成績.經(jīng)過1997.82000.8廣東省科委重點攻關(guān)工程?通脈口服液防治慢性腎炎氣虛血瘀證的臨床與實驗研究?三年多嚴格的臨床與實驗研究，充分證明通脈口服液是治療慢性腎炎氣虛血瘀型患者的有效藥物，療效確切，臨床總有效率達93.75%，優(yōu)于對照組P0.01；動物實驗提示該藥可顯著減輕腎臟病理損害，突出表現(xiàn)在減輕了系膜區(qū)IgG的沉積，抑制了系膜細胞與系膜基質(zhì)的增生，到達防治腎小球硬化的目的；且未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用。課題按期結(jié)題，經(jīng)鑒定，成果水平達國內(nèi)領(lǐng)先。20

39、00年“通脈口服液及其配制研究已申報中國創(chuàng)造專利，專利申請?zhí)?1129938.X。.已在國家核心刊物上發(fā)表通脈口服液相關(guān)論文多篇.通過多年的持續(xù)研究，已建立了與本工程相關(guān)的植化、藥理學、化學分析含指紋圖譜、細胞培養(yǎng)等研究技術(shù)及方法,所需儀器設(shè)備根本齊備。 4主要研究人員曾承當廣東產(chǎn)化橘紅指紋圖譜的研究課題,其相關(guān)技術(shù)可應用于本工程研究。 5經(jīng)過初步的臨床研究、藥效學研究、急性毒性試驗、藥物工藝、劑型及質(zhì)量標準的研究，通脈口服液現(xiàn)已被制成院內(nèi)制劑，臨床上應用于防治慢性腎炎及其他各種腎病，收到了滿意的療效,創(chuàng)造了良好的經(jīng)濟效益和社會效益 附已發(fā)表的與該課題有關(guān)的論文: 1.包崑,楊霓芝.慢性腎小球

40、腎炎氣虛證及其兼夾標證分析.江蘇中醫(yī),2000,5:10112.楊霓芝,包崑,王立新,等. 通脈口服液對慢性腎炎氣虛血瘀證大鼠模型的藥效學研究.廣州中醫(yī)藥大學學報,2000,17(4):332-336楊霓芝,包崑,王立新,等. 通脈口服液對大鼠慢性腎炎“氣虛血瘀證模型的組織形態(tài)學影響.中國中醫(yī)藥信息雜志,2001,15(3):31-33 王立新,楊霓芝,包崑,等.通脈口服液對系膜增生性腎炎大鼠血液流變學的影響.中醫(yī)藥研究,2001,17(1):42-43 5.王立新,楊霓芝,包崑,等. 通脈口服液對慢性腎炎氣虛血瘀證免疫功能的影響,中醫(yī)藥研究,2000,16(5):16-181. 已具備的實驗

41、條件，尚缺少的實驗條件和擬解決的途徑包括利用國家重點實驗室和部門開放實驗室的方案與落實情況已落實設(shè)于本校的國家中藥現(xiàn)代化技術(shù)工程研究中心的質(zhì)量標準及藥理室、中心實驗室等實驗室，可供本工程優(yōu)先使用。有關(guān)預試驗已在本校植化室、儀器分析室、中心實驗室進行。經(jīng)長期的相關(guān)研究積累，目前工程所需儀器設(shè)備根本齊備。 需購置實驗相關(guān)的動物、試劑等783. 申請者和工程組主要成員的學歷和研究工作簡歷，近期已發(fā)表與本工程有關(guān)的主要論著目錄*和獲得學術(shù)獎勵情況及在本工程中承當?shù)娜蝿眨磺嗄昕茖W基金申請者還應注明學位論文名稱及導師姓名與工作單位 楊霓芝，女，52歲，教授、博士生導師。畢業(yè)于廣州中醫(yī)藥大學，在廣州中醫(yī)藥大

42、學二附院從事臨床、教學與科研工作20多年，先后承當、參與多項科研課題如： 廣東省科委課題?通脈口服液治療慢性腎炎的臨床和實驗研究?課題負責人，廣東省科委、廣東省中醫(yī)藥管理局課題?中藥綜合療法延緩慢性腎功能不全的臨床與實驗研究?課題負責人，廣東省科委課題?尿毒康延緩慢性腎功能衰竭進展的臨床與實驗研究?已結(jié)題并獲獎課題負責人之一，國家中醫(yī)藥管理局課題?加味陽和湯治療難治性腎綜的臨床與實驗研究?已結(jié)題并獲獎主要研究人員，國家中醫(yī)藥管理局課題?皮膚透析治療慢性腎功能衰竭的臨床研究?主要研究人員。主編、參編?心腎疾病臨床證治?、?中西醫(yī)結(jié)合治療內(nèi)科常見病?、?泌尿系統(tǒng)專病中醫(yī)臨床診治?等專著三部。獲省、

43、校級科技進步三等獎三項。在省級以上刊物及全國性學術(shù)會議上發(fā)表論文20余篇。如：楊霓芝,包崑,王立新,等. 通脈口服液對大鼠慢性腎炎“氣虛血瘀證模型的組織形態(tài)學影響.中國中醫(yī)藥信息雜志,2001,15(3):31-33王立新,楊霓芝,包崑,等.通脈口服液對系膜增生性腎炎大鼠血液流變學的影響.中醫(yī)藥研究,2001,17(1):42楊霓芝,包崑,王立新,等. 通脈口服液對慢性腎炎氣虛血瘀證大鼠模型的藥效學研究.廣州中醫(yī)藥大學學報,2000,17(4):332-336王立新,楊霓芝,包崑,等.通脈口服液對慢性腎炎氣虛血瘀證免疫功能的影響.中醫(yī)藥研究，2000，1010：16-18楊霓芝，徐大基，王立新

44、，等.中醫(yī)綜合療法對延緩慢性腎功能衰竭的療效觀察.新中醫(yī)1998；3012：22專著：?心腎疾病臨床證治?.廣東人民出版社，2000，3 主編 ??？茖２≈嗅t(yī)臨床診治叢書. 泌尿科專病中醫(yī)臨床診治? 北京:人民衛(wèi)生出版社,2000,9.主編 黃兆勝，教授，博士生導師，1984年廣州中醫(yī)藥大學中藥專業(yè)碩士研究生畢業(yè)，1987年3月至1989年12月由衛(wèi)生部公費赴日本富山醫(yī)科藥科大學留學，學成回國后返廣州中醫(yī)藥大學中藥研究所工作。近年來主持并完成“生命力口服液、“腦力寶丸“田參膠囊等中藥新藥的開發(fā)工程，并主持和承當多項國家和省部級科研課題的研究。其中主持廣東省科委重點課題“補腎中藥治療藥源性性功能

45、障礙的實驗研究，1994年獲廣東省科委科技進步二等獎；目前承當兩項國家中醫(yī)藥管理局課題：“虎金丸抗肝纖維化作用機理研究和“養(yǎng)壽丹對老年癡呆-淀粉樣蛋白的影響，并承當廣東省中醫(yī)藥管理局課題“養(yǎng)壽丹延緩腦衰老的作用機理研究及廣州中醫(yī)藥研究院科學基金工程“養(yǎng)壽丹拆方神經(jīng)生長因子活性的研究，先后在國內(nèi)外醫(yī)藥學術(shù)刊物發(fā)表學術(shù)論文30多篇，多篇被IM、CA和SCI等國際學術(shù)刊物所收載。 近年發(fā)表的主要論著： 黃兆勝,等.虎杖甙對CCl4損傷原代培養(yǎng)大鼠肝細胞的保護作用.中國藥理學通報，1998，146：543Huang Zhao-Sheng,et al.The protective effect of p

46、olydatin on rat hepatocytes injury induced by CCl4. World Journal of Gastroenterology,1999, 5(1)：41 3. Huang Zhao-Sheng, et al. Study on emodin in plant resource and pharmacology. International Journal of Oriental Medicine,1998,23(4):177黃兆勝,等.養(yǎng)壽丹抗應激及免疫調(diào)節(jié)作用 ?中藥藥理與臨床?1996;(6):1黃兆勝,等.養(yǎng)壽丹延緩衰老作用的實驗研究 ?中藥

47、新藥與臨床藥理?1993;4(4):32 黃兆勝,等.抗衰老中藥的臨床藥理學研究 ?中藥藥理與臨床?1997;(2):46 劉旭生, 男，37歲，副教授、碩士生導師， 1987年畢業(yè)于廣州中醫(yī)藥大學，獲學士學位，畢業(yè)后一直在廣州中醫(yī)藥大學二附院從事臨床、教學與科研工作。其間曾在中山醫(yī)科大學腎病研究所進修八個月，1997年成為全國第二批名老中醫(yī)學術(shù)繼承人, 2001年3月出師。曾主持和參與國家級課題1項、省部級課題5項、廳局級課題1項、校級課題2項，如?川芎嗪提高腹膜透析效能的實驗研究?廣州中醫(yī)藥大學課題：1998，12000，1；已結(jié)題 ，課題負責人、?通脈口服液治療慢性腎炎的臨床與實驗研究?

48、省中醫(yī)藥管理局課題：1997，1-1999，12；已結(jié)題 ，第5名、?加味陽和湯治療難治性腎病綜合征的臨床及實驗研究?國家中醫(yī)管理局課題， 第三完成者。獲省級、校級科技成果三等獎各1項，獲醫(yī)院醫(yī)療技術(shù)成果獎三等獎4項。論文論著：發(fā)表論文30篇其中第一作者12篇，參與編寫專著4部其中二部為副主編。近期已發(fā)表與本工程有關(guān)的主要論著1中藥對提高尿毒癥患者血液透析效果的作用 廣州中醫(yī)藥大學學報1998. 2 :91-93 2中藥配合血液透析治療尿毒癥的臨床研究 中國中西醫(yī)結(jié)合雜志 1998.12:712-7143?心腎疾病臨床證治?.廣東人民出版社，2000，3 副主編4?泌尿科專病中醫(yī)臨床診治? 第

49、一版. 北京:人民衛(wèi)生出版社,2000,9.副主編 林勵 1982年畢業(yè)于江西中藥學院中藥專業(yè)，獲理學士學位，先后在江西省醫(yī)學科學研究所和海南大學熱帶生物工程研究中心從事植化、藥理及資源等研究工作。1987年到廣州中醫(yī)藥大學從事中藥資源化學研究至今，其間曾赴日本旭川醫(yī)科大學進行中藥資源的合作研究?，F(xiàn)任廣州中醫(yī)藥大學副研究員，碩士生導師，博士生副導師，享受國務院頒發(fā)的政府特殊津貼。主持完成芬達寧搽劑的研制，獲新藥證書及96年度廣東省醫(yī)藥科技進步二等獎，省優(yōu)秀新產(chǎn)品獎和省科技進步三等獎。先后承當并完成國家自然科學基金“引種栽培進口南藥藥材質(zhì)量評價、國家八五攻關(guān)工程“常用中藥材品種整理及質(zhì)量評價訶子

50、、降香及部、省級工程多項，其中兩工程分獲廣東省97、98年度中醫(yī)藥科技進步二等獎均排名2，八五攻關(guān)工程98年度獲國家科技進步三等獎分課題排名2。出版專著3部，發(fā)表研究論文60余篇。近期發(fā)表的相關(guān)論著目錄如下：林勵,等.木豆黃酮類成分的研究.中國藥科大學學報.1999;20(1):21林勵,等.不同引種地大風子仁質(zhì)量研究.中國中藥雜志.1996;21(1):81林勵,等.不同品種及采收期訶子質(zhì)量研究.中國中藥雜志.1997;22(3):86林勵,等.木豆牡荊甙和異牡荊甙的別離與鑒定.廣州中醫(yī)藥大學學報.1999;16(1):63林勵,等.芳香揮發(fā)性漢方中藥的開發(fā)與藥效研究.東洋醫(yī)學雜志(日).1

51、998;48(6):145* 論文：作者題目刊名年份卷期頁碼 專著：作者書名出版者年份8a五、經(jīng)費預算支 出 科 目金 額萬元計 算 根 據(jù) 及 理 由 合 計201.科研業(yè)務費合計3.5 (1) 調(diào)研費1.5含產(chǎn)地調(diào)研及學術(shù)會議費用。 (2) 業(yè)務資料費2.0含論文發(fā)表費、資料整理、打印及鑒定等費用。 2. 實驗材料費(合計)11.7(1)試劑、藥品費7.0含提取別離、測試試劑及藥效用藥盒、藥品等費用。(2)實驗動物費3.5含實驗動物購置、飼養(yǎng)所需費用(3)低耗材料費1.2HPLC、HPLC-MS分析用相關(guān)軟件的購置、升級等費用。3. 儀器設(shè)備費(小計)1.0(1)儀器保養(yǎng)費1.0含HPLC-MS、HPCE、HPLC等儀器保養(yǎng)、維修費用。4.實驗室改裝費0.5植化實驗室的改裝費用。5.協(xié)作費2.3協(xié)作費用。 (1)測試分析費