臨床微生物標(biāo)本采集以及病原菌耐藥檢測(cè)

1、關(guān)于臨床微生物標(biāo)本的采集及病原菌耐藥檢測(cè)第一張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1.標(biāo)本留取以及運(yùn)送應(yīng)該注意什么呢?2.病原菌耐藥檢測(cè)該注意什么呢?第二張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月內(nèi) 容微生物標(biāo)本采集的基本原則1各種臨床標(biāo)本的正確采集23檢測(cè)結(jié)果的解釋4病原菌耐藥檢測(cè)及監(jiān)測(cè)第三張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月微生物標(biāo)本采集的基本原則1.及時(shí)采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查2.在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本3.采樣時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作4.采樣后立即送檢5.棉拭子標(biāo)本宜用運(yùn)送培養(yǎng)基6.混有正常菌群標(biāo)本，不可置肉湯培養(yǎng)7.標(biāo)本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑。8.送檢標(biāo)本應(yīng)注明來(lái)源和

2、檢驗(yàn)?zāi)康牡谒膹?，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月如何提高細(xì)菌陽(yáng)性檢出率？標(biāo)本采集時(shí)機(jī)標(biāo)本采集方法標(biāo)本的質(zhì)與量標(biāo)本的運(yùn)送與保存鏡檢篩選合格標(biāo)本（退檢制度）高質(zhì)量、多種分離培養(yǎng)基培養(yǎng)環(huán)境第五張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月各種臨床標(biāo)本的正確采集血培養(yǎng)標(biāo)本第六張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 對(duì)懷疑菌血癥、真菌血癥的患者，在考慮使用抗菌藥物之前，應(yīng)立即采集血培養(yǎng)標(biāo)本。 必須同時(shí)或間隔短時(shí)間內(nèi)采集套以上血培養(yǎng)標(biāo)本。各種臨床標(biāo)本的正確采集血培養(yǎng)的采集時(shí)間第七張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月成年患者：推薦同時(shí)采集套（不同部位）血培養(yǎng)標(biāo)本（即雙瓶雙臂同時(shí)采集血培養(yǎng)標(biāo)本）。

3、嬰幼兒患者：推薦同時(shí)采集次（不同部位）血培養(yǎng)標(biāo)本。血培養(yǎng)的采集次數(shù)各種臨床標(biāo)本的正確采集第八張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月血培養(yǎng)做1套的檢出率為65%。做2套和3套檢出率的檢出率分別為80%和90%。單瓶的血培養(yǎng)檢出率不高，而且結(jié)果很難臨床解釋。 在采取血培養(yǎng)后的2至5天內(nèi)，無(wú)需重復(fù)采取血培養(yǎng)。兩個(gè)例外：細(xì)菌性心內(nèi)膜炎和金黃色葡萄球菌菌血癥。各種臨床標(biāo)本的正確采集第九張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月各種臨床標(biāo)本的正確采集血培養(yǎng)的采血量成年患者：推薦采血量每瓶不少于5ml。嬰幼兒患者：推薦采血量每瓶不少于2ml。（少于病人總血容量的1%）第十張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于20

4、22年6月 血標(biāo)本采集的量是影響檢出率的最重要的因素。檢出率與采血量成比例增長(zhǎng)，每增加1ml的血液，病原菌的檢出率就會(huì)相應(yīng)增加。兒童患者因?yàn)檠褐胁≡鷿舛容^高，血培養(yǎng)量無(wú)需等同于成人。 采用一對(duì)（需氧瓶+厭氧瓶）組合，比采用二個(gè)需氧瓶的組合可檢出更多的葡萄球菌、腸桿菌科細(xì)菌和厭氧菌。 采血量不能滿足推薦的采血量時(shí)，應(yīng)首先滿足需氧瓶的需要。各種臨床標(biāo)本的正確采集第十一張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月推薦使用碘町、洗必泰或碘伏作為皮膚消毒劑。碘町作用1min碘伏作用1.5-2min洗必泰作用時(shí)間與碘町一樣（但不能用于少于2個(gè)月嬰兒皮膚消毒）各種臨床標(biāo)本的正確采集血標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)皮膚

5、消毒第十二張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月推薦從外周靜脈采集血液標(biāo)本。不推薦動(dòng)脈血，因其診斷價(jià)值沒(méi)有比靜脈血更大。不推薦靜脈留置導(dǎo)管，因其常伴有高污染率。如果必須從留置導(dǎo)管內(nèi)采血，也應(yīng)同時(shí)從外周靜脈采集另外一個(gè)血培養(yǎng)標(biāo)本以幫助陽(yáng)性結(jié)果的判讀提供解釋。血標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)采集部位各種臨床標(biāo)本的正確采集第十三張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 在采血之前，血培養(yǎng)瓶的橡皮塞需使用70%酒精消毒并干燥。然后再進(jìn)行穿刺部位的皮膚消毒。 嚴(yán)格按照“酒精、含碘消毒劑、酒精”的消毒步驟操作，并等待足夠的消毒時(shí)間。 嚴(yán)格無(wú)菌操作，不允許在皮膚消毒后用手接觸靜脈，除非帶有無(wú)菌手套。 不推薦采血和

6、接種血培養(yǎng)瓶更換注射器針頭。血標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)采集方法各種臨床標(biāo)本的正確采集第十四張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月采集后的血培養(yǎng)瓶應(yīng)在1小時(shí)之內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室。血培養(yǎng)瓶在采血接種后在室溫不超過(guò)數(shù)小時(shí)。血培養(yǎng)瓶在接種前和接種后均不得冷藏或冷凍。血標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)標(biāo)本的運(yùn)送各種臨床標(biāo)本的正確采集第十五張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月痰培養(yǎng)標(biāo)本采集與運(yùn)送各種臨床標(biāo)本的正確采集第十六張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月病原體種類繁多而復(fù)雜使下呼吸道感染病原診斷成為難題細(xì)菌（包括放線菌與奴卡菌，厭氧菌與分枝桿菌）真菌（包括肺孢子菌）病毒支原體、衣原體與立克次體原蟲(chóng)寄生蟲(chóng)第十七張

7、，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月咳痰途經(jīng)口咽部唾液中口咽部定植菌的濃度可達(dá)108-109/ml。研究顯示，國(guó)內(nèi)常規(guī)痰標(biāo)本中約半數(shù)存在唾液嚴(yán)重污染現(xiàn)象。不可避免地受到污染第十八張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月咳痰標(biāo)本的采集標(biāo)本采集方法 醫(yī)師或護(hù)士直視下采集標(biāo)本。 病人先漱口，去除表面的菌群。 教育病人深咳，收集從下呼吸道咳出的痰液。第十九張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月關(guān)于咳痰標(biāo)本在抗生素應(yīng)用前采集痰標(biāo)本;標(biāo)本采集后12h內(nèi)必須立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室處理；咳痰標(biāo)本應(yīng)用最早且廣泛，但也是最受爭(zhēng)議的標(biāo)本 ;取標(biāo)本前應(yīng)摘去牙托，清潔口腔如刷牙和漱口;深咳，采集標(biāo)本過(guò)程中要有專業(yè)的醫(yī)

8、務(wù)人員指導(dǎo);無(wú)痰可用35NaCl 5ml霧吸約5min導(dǎo)痰；也可用物理療法、體位引流、鼻導(dǎo)管抽吸等法取痰；第二十張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月咳痰標(biāo)本不合格，退檢嗎？如果低倍視野下鱗狀上皮細(xì)胞大于25個(gè)，白細(xì)胞小于10個(gè)，應(yīng)不做或僅在特殊要求時(shí)做培養(yǎng)。如做培養(yǎng)，報(bào)告中注明“鏡檢結(jié)果表明標(biāo)本口咽分泌物污染明顯”。第二十一張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月痰培養(yǎng)的送檢次數(shù)對(duì)于普通細(xì)菌性肺炎，痰標(biāo)本送檢每天1次，連續(xù)23天。不建議24h內(nèi)多次采集，除非痰液外觀性狀出現(xiàn)改變；懷疑分枝桿菌感染者，應(yīng)連續(xù)收集3天清晨痰液送檢；第二十二張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月痰培養(yǎng)方法

9、的局限性：多數(shù)引起肺炎的病原菌不能培養(yǎng)，如病毒，軍團(tuán)菌，衣原體等 影響因素很多：如黏液包裹、定植菌污染建議：細(xì)菌培養(yǎng)同時(shí)做血培養(yǎng)和痰涂片鏡檢第二十三張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月痰培養(yǎng)的運(yùn)送和保存盡快（2h）送至實(shí)驗(yàn)室。如不能及時(shí)送達(dá)，應(yīng)將標(biāo)本暫存于4，但放置時(shí)間不可超過(guò)24h。厭氧培養(yǎng)標(biāo)本的最佳運(yùn)送時(shí)間取決于標(biāo)本量。被口咽部菌群污染的標(biāo)本如咳痰等不可用于厭氧菌培養(yǎng)。第二十四張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月尿培養(yǎng)標(biāo)本采集與運(yùn)送第二十五張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月尿培養(yǎng) 診斷癥狀明顯的病人（如尿急、尿頻、尿痛），一份標(biāo)本就已足夠，治療48-72小時(shí)后再采集第二

10、份標(biāo)本。對(duì)于癥狀不明顯的病人，需采集2-3份標(biāo)本。懷疑腎結(jié)核時(shí)，應(yīng)連續(xù)3天采集晨尿。多次收集或24小時(shí)尿不能用作培養(yǎng)。申請(qǐng)單上必須注明病人癥狀是否明顯，這對(duì)于定量培養(yǎng)分析非常重要。室溫都有利于病原菌和污染菌會(huì)生長(zhǎng)繁殖，因此若30min內(nèi)不能及時(shí)培養(yǎng)尿液則必須冷藏，但也不能超過(guò)24小時(shí)。第二十六張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月清潔中段尿液盡量取早晨第一次尿液棄去開(kāi)始流出的尿液，以沖刷尿道口的細(xì)菌，取能代表膀胱部位病原菌的中段尿詳細(xì)告知病人以下操作步驟女性病人收集標(biāo)本前用清洗液沖洗干凈，從前向后仔細(xì)擦洗尿道區(qū)域分開(kāi)陰唇，開(kāi)始排尿排出幾毫升后，不停止尿流，采集中段尿男性病人回縮包皮并清洗龜

11、頭排出幾毫升后，不停止尿流，采集中段尿第二十七張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月導(dǎo)尿管尿液集尿袋內(nèi)的尿液不能用作培養(yǎng)。導(dǎo)尿管末端的尿液也不能用于培養(yǎng)，因?yàn)楹茈y避免沒(méi)有尿道菌群污染。留置導(dǎo)管尿液標(biāo)本常通過(guò)專門的采樣端口采集，不能把導(dǎo)尿管與尿袋拔開(kāi)后收集尿液。采樣端口用酒精消毒；必要時(shí)，可先夾住導(dǎo)尿管但不能超過(guò)30分鐘；將注射器針頭插入采樣端口，抽吸出尿液；注入無(wú)菌杯或試管中。第二十八張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月腦脊液標(biāo)本采集與運(yùn)送第二十九張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月腦脊液標(biāo)本的運(yùn)送常溫立即送檢，實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后應(yīng)立即接種。腦脊液標(biāo)本送檢的理想時(shí)間為15分鐘內(nèi)，

12、半小時(shí)送檢是可接受的，如果送檢時(shí)間超過(guò)1小時(shí)，則會(huì)影響結(jié)果，在結(jié)果報(bào)告時(shí)，在備注處注明此情況。如不能及時(shí)送檢，可使用血培養(yǎng)瓶（懷疑腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染時(shí)，請(qǐng)勿使用血培養(yǎng)瓶） 。第三十張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月手術(shù)切口與軟組織感染標(biāo)本采集與運(yùn)送第三十一張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月皮膚組織標(biāo)本對(duì)大多數(shù)開(kāi)放膿腫、傷口，采集前應(yīng)先去除表面菌群。干燥、結(jié)痂傷口一般不做培養(yǎng)。閉合膿腫應(yīng)取滲出物和膿腫壁標(biāo)本。 代表性的標(biāo)本應(yīng)采自病灶活動(dòng)區(qū)域或基底部,而不僅僅是膿液。第三十二張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月病原菌耐藥檢測(cè)及監(jiān)測(cè)第三十三張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于

13、2022年6月葡萄球菌的耐藥問(wèn)題及檢測(cè) 青霉素耐藥、誘導(dǎo)性 -內(nèi)酰胺酶檢測(cè) MRSA/MRCoNS的問(wèn)題第三十四張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月葡萄球菌誘導(dǎo)性 -內(nèi)酰胺酶檢測(cè)第三十五張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月MRSA/MRCoNS檢測(cè)第三十六張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 ESBL AmpC KPC NDM-1腸桿菌科的耐藥問(wèn)題及檢測(cè)第三十七張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月ESBLs 檢測(cè)方法頭孢他啶/棒酸頭孢他啶頭孢噻肟頭孢噻肟/棒酸ESBLs陽(yáng)性 ：酶的抑制劑復(fù)合藥物比單藥抑菌圈5mm注意 ESBLs和Ampc酶同時(shí)產(chǎn)生時(shí)，CLSI的無(wú)法對(duì)E

14、SBLs判讀第三十八張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月質(zhì)粒介導(dǎo)的AmpC酶 部分大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌初篩試驗(yàn)疑似 產(chǎn)ESBL，但確認(rèn)試驗(yàn)陰性（酶抑制劑不能抑制）。對(duì)頭霉素耐藥，頭孢吡肟敏感。對(duì)碳青霉烯敏感。第三十九張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月KPC碳青霉烯酶檢測(cè)方法（改良Hodge試驗(yàn)）陰性陽(yáng)性陽(yáng)性：測(cè)試菌株劃線與抑菌圈邊緣交叉部分出現(xiàn)擴(kuò)大的長(zhǎng)菌區(qū)陰性：測(cè)試菌株劃線與抑菌圈邊緣交叉部分無(wú)擴(kuò)大的長(zhǎng)菌區(qū)第四十張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月金屬酶NDM-1的檢測(cè)第四十一張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月檢測(cè)結(jié)果的解釋第四十二張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2

15、022年6月第四十三張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月不可能的藥敏結(jié)果金葡菌青霉素S，苯唑西林R，頭孢西丁R腸球菌萬(wàn)古S，替考拉寧R腸桿菌屬頭孢噻吩SG球菌多數(shù)氨基甙類S，慶大R李斯特菌 青霉素R，頭孢菌素S腸桿菌科菌 對(duì)一、二代頭孢菌素S，對(duì)三、四代頭孢 菌素R 第四十四張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月血培養(yǎng)為金黃色葡萄球菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果正確么？ 敏感頭孢唑啉，萬(wàn)古霉素，利奈唑烷，紅霉素耐藥苯唑西林，林可霉素，青霉素，慶大霉素第四十五張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月藥敏試驗(yàn)預(yù)測(cè)表MRSA/MRCoNS對(duì)所有-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥ESBL菌株對(duì)所有青霉素和頭孢菌素耐藥高

16、水平耐慶大霉素的腸球菌對(duì)阿米卡星、妥布霉素耐藥非-內(nèi)酰胺酶介導(dǎo)的耐氨芐西林的腸球菌對(duì)所有青霉素類耐藥 第四十六張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月耐藥性的特殊分布耐萬(wàn)古霉素的葡萄球菌耐亞胺培南的腸桿菌科細(xì)菌耐青霉素的A/B群鏈球菌耐青霉素的肺炎鏈球菌（腦脊液分離出的標(biāo)本）耐萬(wàn)古霉素的腸球菌 第四十七張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月藥敏試驗(yàn)敏感的藥物，為什么臨床治療無(wú)效？病例報(bào)道-豬霍亂沙門氏菌引起的敗血癥患者，男，23歲，因發(fā)熱3d，于2010年1月入院治療。體格檢查：體溫38.8，脈搏96/min，呼吸20次/ min，血壓110/70 mmHg，神智清，精神差，全身皮膚粘膜

17、黃染，雙腎后扣痛?；颊咦允鲱^痛，自覺(jué)尿少，食欲下降，伴有惡心、嘔吐；無(wú)咳嗽、無(wú)腹痛、腹瀉。B超顯示 脾下有約10.18.5cm的囊性包塊。血常規(guī)：白細(xì)胞4.42109/L，分類 中性粒細(xì)胞0.93，淋巴細(xì)胞0.05，單核細(xì)胞0.02，血小板59109/L。血生化：谷草轉(zhuǎn)氨酶125U/L，血清尿素10.32mmol/L，肌酐133 mmol/L，總膽紅素131.6，直接膽紅素86.8。尿常規(guī)檢查：尿蛋白陽(yáng)性（3+）。臨床初步診斷：敗血癥，中毒性肝炎。(來(lái)自不同部位沙門氏菌如血液和腸道的藥敏結(jié)果的報(bào)告）第四十八張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月臨床治療為有效控制感染，臨床醫(yī)師依據(jù)經(jīng)驗(yàn)首先選

18、用奧硝唑和氟羅沙星治療2d效果不佳，后根據(jù)藥敏用頭孢哌酮/舒巴坦治療，同時(shí)采用腹腔膿腫穿刺引流術(shù)引流膿液，患者體溫恢復(fù)正常范圍。 15d后患者各項(xiàng)檢查均恢復(fù)正常，感染得到有效控制。注：體外沙門氏菌感染，必須檢測(cè)奈啶酸的藥敏結(jié)果第四十九張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月導(dǎo)管相關(guān)性的血流感染診斷方法若兩套陽(yáng)性血培養(yǎng)是同一菌（依細(xì)菌鑒定和藥敏譜確認(rèn)）又沒(méi)有任何其它部位感染的證據(jù)，提示為CRBSI。2. 若兩套陽(yáng)性血培養(yǎng)是同一菌從導(dǎo)管采血血培養(yǎng)報(bào)陽(yáng)性的時(shí)間比上一套早120分鐘若沒(méi)有任何其它部位感染的證據(jù)，提示為CRBSI第五十張，PPT共五十七頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月導(dǎo)管相關(guān)性的血流感染診斷方法若兩套陽(yáng)性血培