人乳頭瘤病毒HPV核酸檢測對比分析課件

1、宮 頸 癌婦科第二大癌癥每年約有20余萬婦女死于宮頸癌新發(fā)病: 全球-50萬/年 我國-13.2萬/年姓名：哈拉爾德楚爾豪森國籍：德國民族：日耳曼課題：發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒（HPV）引發(fā)宮頸癌成績：獲得2008年度諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎Harald zur Hausen宮 頸 癌什么是HPV？Human Papilloma virus 人乳頭瘤病毒雙鏈DNA無包膜病毒廣泛分布于高等脊椎動物 定向感染皮膚及粘膜的復(fù)層鱗狀上皮HPV病毒電鏡照片Circular逆轉(zhuǎn)錄區(qū)域包括控制病毒基因組復(fù)制的基因序列E6、E7為兩種致癌蛋白編碼，它們是高危型HPV導(dǎo)致細(xì)胞變性的主要原因E1、E2、E4和E5負(fù)責(zé)病毒復(fù)制

2、L1、L2為兩種病毒外殼蛋白編碼在預(yù)防HPV的疫苗中使用了L1HPV的類型已經(jīng)鑒定的乳頭狀瘤病毒有200多種與人有關(guān)的約125種30-40種感染生殖道低危型：HPV6、11、42、43、44等中間型：HPV31、33、35、39、51、52、58、59、68高危型：HPV16、18、45、56等臨床最重要的型：6、11、16、18、31、33、35、38型8個亞型HPV感染HPV感染的途徑和危險因素性傳播直接皮膚接觸母嬰傳播性行為混亂免疫抑制吸煙其他STD協(xié)同感染口服避孕藥HPV感染率與發(fā)病率HPV感染與宮頸癌發(fā)病率變化圖，Int J Cancer 1993,53:919HPV感染的不同階段宮

3、頸癌的癌前病變(CIN) CIN = Cervical Intraepithelial Neoplasia宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變CIN宮頸不典型增生宮頸原位癌：宮頸上皮細(xì)胞發(fā)生癌變，但癌變未突破基底膜、間質(zhì)無浸潤。輕度（CIN級）：病變局限在上皮層的13內(nèi)中度（CIN級）：病變局限在上皮層的下23重度（CIN級）：病變幾乎累及全部上皮層，僅 剩12 層表面的正常 鱗狀上皮宮頸上皮細(xì)胞部分或大部分被不同程度異型細(xì)胞所替代定義宮頸癌的癌前病變(CIN)專家共識宮頸癌的“元兇”就是高危型HPV感染高危型HPV感染是宮頸癌的必要條件沒有HPV感染，就沒有宮頸癌防治HPV感染，就是防治宮頸癌1995年，國際

4、癌癥研究協(xié)會認(rèn)為高危固定價HPV的持續(xù)性感染是宮頸癌的主要病因?qū)m頸癌感染HPV病毒 CIN早期浸潤癌唯一 知道病因的癌癥唯一 可以通過早期干預(yù)阻斷的癌癥 5-15年內(nèi) 容HPV與宮頸癌宮頸癌檢測方法比較HPV核酸檢測方法學(xué)比較臨床使用分子水平細(xì)胞水平組織水平宮頸癌檢測方法學(xué)發(fā)展過程1982年醋酸、碘液肉眼檢測靈敏度為70.9%特異度為74.3%1996年新柏氏TCT靈敏度為80.8%特異度為 51-60%2000年HPV核酸檢測靈敏度為98.6%特異度為99%巴氏涂片靈敏度為50%以下特異度為？%1941年宮頸癌篩查發(fā)展史組織學(xué)檢測 肉眼觀察 陰道鏡觀察 組織檢查優(yōu)點： 操作簡單，價格低廉，

5、適宜作初步篩查； 缺點： 準(zhǔn)確率低，人員素質(zhì) 要求高，病人痛苦程度大。細(xì)胞學(xué)檢測傳統(tǒng)巴氏涂片液基細(xì)胞學(xué) 傳統(tǒng)巴氏涂片（CV） 液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)(TCT)自動細(xì)胞學(xué)檢測系統(tǒng)（LCT）計算機輔助細(xì)胞檢測系統(tǒng)（CCT）細(xì)胞學(xué)檢測的假陰性液基細(xì)胞學(xué)檢測假陰性結(jié)果高達20%水平差的地方更高原因分析：1、視野局限 2、人為因素 1）取標(biāo)本、片子制備 2）技術(shù)差異 3）耐心、責(zé)任心細(xì)胞學(xué)檢測的假陽性1、 凹空細(xì)胞是HPV 感染的主要形 態(tài)學(xué)改變，但不是特異性改變2、 HPV正在清除階段細(xì)胞學(xué)檢測的性價比低TCT陰性 要求每年做同樣的檢查HPV陰性 可以把篩查時間延長到3-5年 HPV檢測TCT檢查衛(wèi)生部宮

6、頸癌篩查及早診早治指南核酸檢測直接檢查導(dǎo)致宮頸癌的元兇-HPV病毒靈敏度高，特異性好操作簡便，可作為療效評估 和監(jiān)測指標(biāo)宮頸癌篩查三方案最佳方案：HPV核酸檢測+液基細(xì)胞基本方案：醋酸白實驗一般方案：HPV核酸檢測+傳統(tǒng)巴氏涂片中國癌癥研究協(xié)會推薦方法內(nèi) 容HPV與宮頸癌宮頸癌檢測方法比較HPV核酸檢測方法學(xué)比較臨床使用HPV第一代核酸檢測產(chǎn)品產(chǎn)品：HC2、港龍13型原理：雜交捕獲技術(shù)特點：檢測核酸、不分型、不能科學(xué)定量、檢測時間長計算機判讀15 minDNA-RNA雜交60 min抗體捕獲60 min化學(xué)發(fā)光檢測30 minDNA分解45 minHPV核酸第二代檢測產(chǎn)品產(chǎn)品：凱普21型、亞能

7、23型、透景26型、達安19型、港龍29型原理：膜條雜交、液相雜交特點：可以分型，而且高低危都能做需要雜交、時間長。5-10個小時不等。開放式雜交、極易導(dǎo)致實驗室生物污染。結(jié)果需肉眼判讀，增加人為誤差。不能定量HPV核酸第三代檢測方法產(chǎn)品：上海之江13型分型檢測試劑原理：分別采用HPV13種型別的特異性引物及 熒光探針，應(yīng)用PCR+Taqman技術(shù)，對 HPV13種型的特異性核酸片段進行分型 定量檢測。特點： 分型、定量、快捷、安全優(yōu)勢一：分型HPV59IC高危13型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68優(yōu)勢二：快捷 上機檢測 抽提DNA30min60m

8、in 標(biāo)本采集30min2小時！ 加樣加試劑優(yōu)勢三：安全之江： 封閉式實時熒光PCR 無需洗滌 減少污染傳統(tǒng)膜條雜交： 反復(fù)洗滌 操作繁瑣 污染幾率增加優(yōu)勢四：定量（唯一）3、便于文章的發(fā)表。1、宮頸病毒載量和CIN分期呈正相關(guān)。2、用于對病程的觀察和療效的評估。正常 hpv正常HPV正常正常 hpv正常HPV5萬IU1萬 IU傳統(tǒng)方法為什么不能定量？正常 hpv一、標(biāo)本量采集不準(zhǔn)確。二、上皮細(xì)胞過少，也會出現(xiàn)假陰性的結(jié)果5萬IU/10個1萬 IU/2個正常 hpv之江的定量方法科學(xué)1、MNBH是人單拷貝基因-測MNBH基因的數(shù)量相當(dāng)于檢測取了多少個上皮細(xì)胞 2、如果沒有檢測出MNBH基因，或

9、MNBH量太少。可以避免假陰性結(jié)果正常 hpv正常HPV正常正常 hpv正常HPVHPV內(nèi) 容HPV與宮頸癌宮頸癌檢測方法比較HPV核酸檢測方法學(xué)比較臨床使用HPV檢測結(jié)果的用途篩查：與細(xì)胞學(xué)檢測配合確定篩查頻率和周期，確保早期發(fā)現(xiàn)，及時干預(yù)。分流：根據(jù)篩查結(jié)果，將高危人群和患者群進行分流，制定不同的干預(yù)、治療方案。隨診：根據(jù)HPV結(jié)果的變化情況，判斷治療效果和病情轉(zhuǎn)歸。HPV檢測送檢流程病人選擇健康人群、高危人群、診治人群3天內(nèi)無藥物和沖洗、非經(jīng)期24小時無性生活無醋酸碘液涂抹標(biāo)本采集暴露宮頸口清理宮頸口分泌物在宮頸口內(nèi)側(cè)逆時針和順時針搓動宮頸刷各五圈標(biāo)本送檢宮頸刷頭放入細(xì)胞保存液密閉，標(biāo)注

10、日期和編號2-8保存2周內(nèi)通知送檢宮頸刷、保存液及取樣示意圖HPV檢測后處理HPV基因分型檢測常規(guī)篩查液基細(xì)胞學(xué)檢查根據(jù)最后結(jié)果按ASCCP指南處理陽性正常CINCIN、陰性1年后重復(fù)HPV檢測和細(xì)胞學(xué)檢查半年后重復(fù)HPV檢測和細(xì)胞學(xué)檢查或陰道鏡檢查陰道鏡檢查、多點活檢HPV感染的治療通過治療HPV 感染達到防治宮頸病變的目的是近年來研究的熱點，但目前仍缺乏公認(rèn)有效的治療手段。30歲之前的感染者，如果沒有宮頸細(xì)胞學(xué)改變，主要通過消除易感因素、提高機體免疫能力、輔助局部藥物治療，幫助感染者自我清除。30歲以后的感染者，以及無論年齡有細(xì)胞學(xué)改變者，治療包括： 抗HPV治療+宮頸病變治療 其中抗HPV治療包括： 全身抗病毒藥物、免疫增強劑、生物學(xué)治療、中藥治療、局部藥物（抗病毒、改善內(nèi)環(huán)境、促進上皮修復(fù)）治療；現(xiàn)有宮頸病變治療手段也能清除部分HPV病毒。HPV疫苗是最大希望項目一：HPV16、18分型檢測 特點：1、可以分型檢測 2、可