微生物實驗考試復習題

1、微生物實驗考試復習題 1、使用油鏡觀察細菌染色標本時為何要加香柏油？添加香柏油可增加亮度：空氣的折射率為1.0，玻璃的折射率為1.5，香柏油的為1.52，玻璃和香柏油的折射率相差很小，當在高倍鏡下觀察時加香柏油有聚光作用，從而可增加視野亮度。添加香柏油可增大數(shù)值孔徑：數(shù)值孔徑NA=nsin（/2），香柏油的折射率大于空氣，因此相比于不加香柏油時n值增大，從而數(shù)值孔徑NA增大，便于觀察到清晰的菌體結(jié)構(gòu)。2、簡單染色法有什么用途？簡單染色法是只使用一種染料使菌體一次性著色的方法，可用來觀察細菌的形狀、大小、細胞的排列狀態(tài)。3、在你所作的革蘭氏染色制片中，大腸桿菌和枯草芽孢桿菌各染成何色？它們是革蘭

2、氏陰性菌還是革蘭氏陽性菌？繪出它們的形態(tài)圖。（圖見報告冊P2）大腸桿菌染成紅色革蘭氏陰性菌枯草芽孢桿菌染成紫色革蘭氏陽性菌4、作為革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚？其染色成敗的關(guān)鍵是什么？不能過后的原因有兩點：脫色時間很短，若圖片很厚則脫色不充分。過于濃厚不利于觀察。酒精脫色是染色成敗的關(guān)鍵，若脫色過度，革蘭氏陽性菌也可以被脫色而染成革蘭氏陰性菌，若脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。5、培養(yǎng)基的概念，培養(yǎng)基的類型，3種主要培養(yǎng)基的用途培養(yǎng)基：培養(yǎng)基是用人工的方法將多種營養(yǎng)物質(zhì)按微生物生長代謝的需要配制成的一種營養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基的類型:按照配制培養(yǎng)的營養(yǎng)物質(zhì)來源可將培養(yǎng)基分為天然培

3、養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可將培養(yǎng)基分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。按培養(yǎng)基的功能和用途可將培養(yǎng)基分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。3種主要培養(yǎng)基的用途： = 1 * GB3 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：用于分離、培養(yǎng)細菌以及測定其數(shù)目 = 2 * GB3 高十一號合成培養(yǎng)基：用于分離、培養(yǎng)放線菌 = 3 * GB3 馬丁孟加拉紅培養(yǎng)基：用于分離、培養(yǎng)真菌6、培養(yǎng)基配制好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的？培養(yǎng)基配置好后之所以要立即滅菌是因為其配制過程均沒有在無菌條件下進行操作，因而培養(yǎng)基和盛放培養(yǎng)基的器皿（試管、三角瓶等）均有大

4、量細菌。這些細菌在豐富的培養(yǎng)的營養(yǎng)條件下會大量繁殖，消耗掉培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)。若長時間不滅菌，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分將在2h內(nèi)消耗殆盡，后面即使將其滅菌也不能再用于培養(yǎng)微生物。滅菌后的培養(yǎng)基可采用兩種方法進行無菌操作：在28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h；在37恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。培養(yǎng)后觀察培養(yǎng)基表面是否有菌落形成，若無則無污染，若有則培養(yǎng)基已污染，不能用于培養(yǎng)微生物。7、為什么高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌所需的時間短，溫度低？高壓蒸汽滅菌對細胞成分的破壞作用更強，水分子的存在有助于破壞維持蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的氫鍵和其他相互作用弱鍵，更易使蛋白質(zhì)變性。高壓蒸汽滅菌存在潛熱，當氣體轉(zhuǎn)變成液體時可放出大量熱量，故可迅

5、速殺滅細菌。高壓蒸汽比熱空氣穿透力更強，更能有效殺滅微生物。8、當你對一株未知菌進行革蘭氏染色時，怎樣能確證你的染色技術(shù)操作正確，結(jié)果可靠。將未知菌株培養(yǎng)12-16h，時間不能太長（太長易長芽孢）選用大腸桿菌和枯草芽孢桿菌作對照染色如果對照組中紫色和紅色同時出現(xiàn)，說明染色技術(shù)操作正確9、繪出你所觀察到的霉菌、放線菌菌絲體和孢子形態(tài)圖。各形態(tài)圖的比較，請參照報告冊P4.放線菌，油鏡觀察，放大倍數(shù)10100， 霉菌，放大倍數(shù)104010、將各種細菌對大分子物質(zhì)的水解結(jié)果填入下表。菌名淀粉水解試驗明膠液化試驗枯草芽孢桿菌陽性（無色）陽性大腸桿菌陰性（藍色）陰性普通變性桿菌陰性（藍色）陽性記錄平板菌落

6、計數(shù)結(jié)果，并分析土壤微生物分布狀況（數(shù)量、顏色）采用稀釋平板計數(shù)法分離土壤中的微生物。實驗方法：滅菌及實驗準備A、配置培養(yǎng)基：根據(jù)要實驗預期要分離的微生物種類配置相應(yīng)的培養(yǎng)基，如分離放線菌的高氏一號瓊脂培養(yǎng)基、分離霉菌的馬丁氏培養(yǎng)基等。B、將配置好的培養(yǎng)基及實驗所需的器材在高溫高壓下滅菌（100mL三角瓶、平皿、100mL無菌水、1mL吸管、試管數(shù)支、刮鏟等）樣品稀釋液的制備準確稱取待測樣品5g，放入裝有45mL無菌水并放有小玻璃珠的100mL三角瓶中，用手或搖床上振蕩20min，使微生物細胞分散，靜置2030s，即成10-1稀釋液；再用1mL無菌吸管，吸取10-1稀釋液1mL，已入裝有9mL

7、無菌水的試管中，吸吹3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液；以此類推，連續(xù)稀釋，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7等一系列稀釋菌液。平板接種培養(yǎng)實驗采用平板計數(shù)法的涂抹平板計數(shù)法，用無菌吸管吸取0.1mL不同稀釋濃度的菌液接種在對應(yīng)的瓊脂平板上（每個編號設(shè)三個重復），再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻，更換刮鏟時需在酒精燈上灼燒滅菌，低濃度向高濃度涂抹時，可以不更換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上2030min。培養(yǎng)：將上述接種過土壤懸液的平板倒置，于 2830培養(yǎng)45d。計數(shù)并計算：選取每皿菌落數(shù)為30300的平板進 行計數(shù)，算出每個濃度的平均數(shù)帶入下面公式計算出微生物的數(shù)

8、量： M（億/克）=菌落平均數(shù)稀釋倍數(shù)（濕樣重/干樣重）10-812、血球記數(shù)板的結(jié)構(gòu)特征。圖：9個大方格正中的大方格（計數(shù)區(qū)）球計數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上游4條槽所構(gòu)成的3個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一橫槽分隔成兩半，每個半邊上有一個計數(shù)區(qū)。一個計數(shù)區(qū)分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格，即計數(shù)區(qū)由400個小方格組成。計數(shù)區(qū)邊長為1mm，則計數(shù)區(qū)面積為1mm2；個小方格的邊長為1/20mm，面積為1/400mm2。計數(shù)區(qū)高度為0.1mm，所以計數(shù)區(qū)體積為0.1mm3，小方格體積為1/4000mm3。血球計數(shù)板表示菌體大小時，用（寬長）表示

9、，不能用乘積表示，且小的數(shù)字在后面菌個數(shù)（個/mL）=平均數(shù)稀釋倍數(shù)4000100013、試比較細菌與酵母菌、放線菌與霉菌的菌落形態(tài)差異。A細菌與酵母菌的比較顏色：細菌菌落顏色多樣而酵母菌顏色較單一；氣味：細菌為腐臭味，酵母則為酒香味；菌落大?。航湍妇漭^細菌大而豐厚；菌體形態(tài)：酵母細胞多呈圓形、橢圓形或臘腸形，較單一，有子囊的產(chǎn)生，少數(shù)種有不發(fā)達的假菌絲；而細菌除了球狀、桿狀、螺旋狀外，還有許多形態(tài)。B放線菌與霉菌的比較氣味：放線菌為泥腥味，霉菌為霉臭味；菌落：霉菌菌落較放線菌大，菌絲更長且蓬松。菌體形態(tài)：放線菌的形態(tài)最簡單的為桿狀或原始菌絲，大部分則由分枝發(fā)達的菌絲組成，菌絲無隔膜；霉菌體

10、則由長管狀的菌絲構(gòu)成，有隔或無隔。14、血球記數(shù)板計數(shù)法與稀釋平板計數(shù)法進行區(qū)別。對同一種菌液，用這兩種方法測出的結(jié)果不一致，血球計數(shù)板法較多。這是因為用血球計數(shù)板記錄的為活菌與死菌的總數(shù)目，而平板菌落計數(shù)法則只能記錄活菌的數(shù)目。15、繪出你所觀察到的細菌的菌體和莢膜的形態(tài)。(見圖P3) 鞭毛運動器官；莢膜糖被；芽孢（休眠體）繁殖器官。 重鉻酸鉀抑制細菌； 孟加拉紅抑制放線菌； 鏈霉素抑制細菌。實驗一 顯微鏡的使用及簡單染色1、使用油鏡觀察細菌染色標本片時為何要加香柏油？ 答：增加亮度：香柏油的折光率與玻璃折光率相近似，因此在物鏡與標本載片之間加香柏油可以使光線不致因從一個介質(zhì)進入另一個折光率

11、不同的介質(zhì)即空氣，而引起部分散射，造成光亮度不夠而觀察不清。增加數(shù)值孔徑：可見光的波長平均為0.55m，當使用數(shù)值孔徑為0.65的高倍鏡時，它能分辨兩點之間的距離為0.42m；而使用數(shù)值孔徑為1.25的油鏡時，分辨率可達0.22m。N.A=nsin/2 D=/(2sina/2)，由于入射角變小，數(shù)值孔徑即視野就變廣了。2、簡單染色法有什么用途？ 概念：簡答染色法是只用一種染料使細菌著色以顯示其形態(tài)的方法，一般難于辨別細菌細胞的構(gòu)造。 用途：可觀察細菌細胞的形態(tài)大小、排列、狀態(tài)。實驗二 細菌的革蘭氏染色法革蘭氏染色法 定義：革蘭氏染色是1884年由丹麥病理學家C. Gram所創(chuàng)，細菌先經(jīng)堿性染料

12、結(jié)晶染色，而經(jīng)碘液媒染后，用酒精脫色，在一定條件下有的細菌此色不被脫去，有的可被脫去，再用番紅復染，因此可把細菌分為兩大類，呈紅色的為革蘭氏陰性菌（G-），呈藍色的為革蘭氏陽性菌（G+）。 步驟：涂片干燥固定結(jié)晶紫染色水洗碘液媒染水洗95%酒精脫色立即水洗番紅復染水洗干燥鏡檢2、作革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚？其染色成敗的關(guān)鍵是什么？ 因為脫色時間一般只有17s左右，時間短，若染色濃厚會導致在規(guī)定時間內(nèi)無法較好的脫色，不利于脫色，會分不清紫色和紅色，不易觀察。 關(guān)鍵：酒精（75%）脫色，如果脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染呈陰性菌；如果脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。

13、3、芽孢是細菌的繁殖器官。4、大腸桿菌染色為紅色，是革蘭氏陰性菌；枯草芽孢桿菌染色為紫色，是革蘭氏陽性菌5、當你對一株未知菌進行革蘭氏染色時，怎樣能確定你的染色技術(shù)操作正確，結(jié)果可靠？ 答：先對未知菌培養(yǎng)12-16h，以大腸桿菌和枯草芽孢桿菌作對照，將二者混合涂片，未知菌另外涂片，當對照組中紫色和紅色同時出現(xiàn)，在相同實驗環(huán)境參數(shù)下觀察未知菌的顏色，這樣操作結(jié)果是可靠的。實驗四 放線菌、霉菌形態(tài)的觀察放線菌應(yīng)在100倍鏡下觀察，繁殖器官為分生孢子呈桿狀，分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲。霉菌應(yīng)在40倍鏡下觀察，繁殖器官為孢囊孢子，呈球狀。實驗五 微生物細胞大小測定和計數(shù)1、血球計數(shù)板有9個大方格，每個大方

14、格有25個中方格，每個中方格有16個小格（1/400mm2，50m，1/4000mm3）。接目鏡倍數(shù)目鏡測微尺格數(shù)血球計數(shù)板格數(shù)目鏡測微尺每格代表的長度/m低倍 105110高倍 402012.5油鏡 10050112、同一種菌液用血球計數(shù)板和平板計數(shù)同時計數(shù)，所測得的結(jié)果是否一樣？為什么？答：不一樣。因為平板計數(shù)是活菌級計數(shù)，需要進行無菌操作，而血球計數(shù)板計數(shù)是死、活菌共計數(shù)，計數(shù)量較多于平板菌落計數(shù)，并且也較準確。實驗六 培養(yǎng)基的制備1、培養(yǎng)基概念：是用人工的方法將多種營養(yǎng)物質(zhì)適合微生物生長繁殖，并積累代謝產(chǎn)物營 養(yǎng)基質(zhì)。 類型：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基。（來源） 液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。（物理外觀狀態(tài)） 基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。（功能）2、選擇凝固劑的條件：不被微生物分解，性能穩(wěn)定，不易于與酸堿發(fā)生反應(yīng)，加熱不分解。加入重鉻酸鉀，定向分離放線菌；加鏈霉素和孟加拉紅抑制細菌和放線菌生長，分離霉菌。滅菌 溫度：含乳糖時，113-115 20min；一般情