新版文件培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證

1、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證方案目錄1、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證計劃2、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證小組3、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證方案4、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證培訓5、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證附屬6、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證7、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證合格硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證計劃根據(jù)我公司認證小組的要求及驗證的安排，對硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法進行驗證，具體安排如下：一、年月日年月日，制定驗證方案，由硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證小組組長負責起草。二、年

2、月日年月日，驗證方案、修改、審批和培訓。三、年月日年月日，驗證工作實施。四、年月日年月日，根據(jù)驗證情況與，書寫驗證。五、年月日年月日，驗證審核批準，合格證。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證小組組長： 成員：一、 目的通過驗證驗證所采用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法，適合于我公司硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的，為質(zhì)量控制試驗提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基。并培養(yǎng)基配制和滅菌的操作方法，為培養(yǎng)基配制和滅菌程序化。二、 適用范圍提供正確的操作方法，使培養(yǎng)基配制和滅菌標準化、本方案適用于本公司硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的配制和滅菌方法的驗證。三、 內(nèi)容1. 概述培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗結(jié)果。適宜的培

3、養(yǎng)基貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。方法、使用商品化脫水配制，如質(zhì)量/體積、培養(yǎng)基培養(yǎng)基時，應嚴格按照培養(yǎng)基廠商提供的使用說明、條件、滅菌條件和操作步驟等。培養(yǎng)基若采用不適當?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、降低、的改變。因此，培養(yǎng)基應采用驗證的滅菌程序滅菌，培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應通過適用性檢查試驗進行驗證。此外，對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證，以保證在一定的裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導致培養(yǎng)基的過熱，過度滅菌可能會破壞絕大多數(shù)的細菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質(zhì)量。滅菌器中的培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此，應根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性，

4、進行全面的滅菌程序驗證。根據(jù)培養(yǎng)基的特性，按制定的方法進行配制和滅菌，根據(jù)驗證結(jié)果判斷是否符合驗證標準。若符合，按驗證的方法和條件進行培養(yǎng)基的配制和滅菌，若不符合，重新制定方案，再進行驗證，直至驗證結(jié)果符合設(shè)立的驗證標準。2. 驗證項目及認可標準驗證內(nèi)容驗證項目驗證標準配制滅菌前的7.2-7.4滅菌滅菌溫度121滅菌時間15 分鐘滅菌效果（F0 值）12滅菌后值6.9-7.3滅菌后外觀性狀符合規(guī)定適用性檢查靈敏度檢查符合規(guī)定無菌性檢查符合規(guī)定連續(xù)驗證 3 次配制的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。驗證依據(jù)3.1. SN/T1538.1-2005 培養(yǎng)基制定指南藥品生產(chǎn)驗證指南（2003 版）（國家食品藥品

5、監(jiān)督管理局）藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理指南（2010 版）3.4. 中民藥典（2010 年版二部）3.5. 中國藥品檢驗標準操作規(guī)程（2010 年版）驗證方法與內(nèi)容實驗準備器具：電磁爐（最大功率 2000W）、大燒杯（2000ml）、不銹鋼鍋、玻璃棒、25250ml試管、硅膠塞、細繩、牛皮紙、分析天平、藥匙、量筒（100ml、1000ml）等。設(shè)備4.1.3. 培養(yǎng)基及試劑名稱生產(chǎn)廠家批號純化水硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基氫氧化鈉稀鹽酸名稱生產(chǎn)廠家型號校驗情況生化培養(yǎng)箱電熱恒溫培養(yǎng)箱自動臺式滅菌器電子天平數(shù)字酸度計生物安全柜超凈工作臺有效期驗證保存三周外觀性狀符合規(guī)定靈敏度檢查符合規(guī)

6、定無菌性檢查符合規(guī)定4.1.4. 驗證用菌株來源于省藥品檢驗所驗證內(nèi)容執(zhí)行標準a. 配制容器及配套器具的嚴格按照玻璃器皿操作規(guī)程執(zhí)行。b. 培養(yǎng)基的配制嚴格按照培養(yǎng)基管理規(guī)程執(zhí)行。c. 自動臺式滅菌器嚴格按照TMQ.R-3870 型臺式滅菌器使用保養(yǎng)操作規(guī)程執(zhí)行.d. 取同一批硫乙醇酸鹽流體干粉培養(yǎng)基配制三批進行以下驗證。4.2.2. 配制滅菌過程a. 稱量取硫乙醇酸鹽流體干粉培養(yǎng)基 29.25 克,加純化水 1000ml,加熱煮沸使其完全溶解。每次按照此處方量配制 8547ml。b. 滅菌前的值測定取已配制好的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 100ml，放冷至 25調(diào)節(jié)值至 7.2-7.4 范圍內(nèi)。以

7、此比例來調(diào)節(jié)剩下的培養(yǎng)基的值。c. 分裝將已調(diào)節(jié)好值的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基分裝至 25250ml 試管中，分裝的管數(shù)為 190200 管范圍，用牛皮紙按 40 管/捆的方式包扎結(jié)實。其中一管只裝約20ml，以備滅菌后最終值測定。d. 滅菌器中的培養(yǎng)基的數(shù)量及裝載方式（滿載）將分裝好的 5 捆（40 管/捆）培養(yǎng)基試管置于滅菌器中，按下圖A、B、C、D、 5 點放置。EABC滅菌器柜門驗證菌株菌株代數(shù)培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間（小時）大腸金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌嗜熱脂肪芽胞菌（F012）DE指示菌的放置：將指示劑嗜熱脂肪芽孢菌（菌濃度：1.69106cfu/支）5 支各放入5 捆

8、培養(yǎng)基中間的其中一支試管，同時將已菌培養(yǎng)基試管內(nèi)，開始滅菌。的 5 支校正好的留點溫度計6 支待滅將已裝載好的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基在 121條件下滅菌 15 分鐘。滅菌結(jié)束后記錄各留點溫度計點溫度。同時取出 5滅菌嗜熱脂肪芽孢菌，直接置 5660培養(yǎng) 2448 小時，另取一支滅菌的嗜熱脂肪芽孢菌指示劑一起培養(yǎng)，作為陽性對照。根據(jù)顏色判斷滅菌效果，培養(yǎng)后全部保持紫色滅菌合格。若由紫色變?yōu)辄S色為不合格。對照管應由紫色變?yōu)辄S色為該指示劑有效。e. 滅菌后的值的測定取 20ml 管已滅菌的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，放冷至 25測定值，應在 6.9-7.3 范圍內(nèi)。f. 外觀性狀滅菌后培養(yǎng)基應對其外觀性狀仔

9、細檢查，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應挑出棄去。中培養(yǎng)基發(fā)生顏色變化、渾濁；固體培養(yǎng)基表面產(chǎn)生裂縫或漣漪等異?，F(xiàn)象，不符合使用規(guī)定時，應停止使用，重新進行配制和滅菌程序驗證。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的適用性檢查無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基等應符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時進行。無菌性檢查每批培養(yǎng)基隨機取 5 支（瓶），培養(yǎng) 14 天，應無菌生長。靈敏度檢查菌液接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，接種生孢梭菌的的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，

10、3035培養(yǎng) 1824 小時；上述培養(yǎng)物用 0.9%無菌氯化鈉溶液制成每 1ml含菌數(shù)小于 100cfu（菌落形成） 的菌懸液。菌液內(nèi)使用。后若在室溫下放置，應在 2 小時內(nèi)使用，若保存在 28，可在 24 小時培養(yǎng)基接種取每管裝量為 12ml 的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 9 支，分別接種小于100cfu 的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各 2 支，另 1 支不接種作為空白對照，培養(yǎng)三天，逐日觀察結(jié)果。結(jié)果判斷空白對照管應無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。組織實施驗證機構(gòu)的組成5.2. 公司驗證，負責所有驗證工作的和組織、審批驗證方案和驗證、發(fā)

11、放驗證。5.3. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證工作小組，負責該驗證項目的驗證方案起草、實施、組織與協(xié)調(diào)實施，負責驗證樣品檢測，完成各項果進行評定、完成驗證。，根據(jù)檢驗和驗證結(jié)四、 附件及相關(guān)表格文件部門部門職責責任人工作劃分質(zhì)量部方案起草、實施、書寫操作實施質(zhì)量部取樣、檢驗、出操作實施驗證方案審定、批準、實施、驗證合格證方案審核方案批準硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證文件編碼：項目姓 名簽 名日期起草審核審核批準生效日期年份一、 驗證概述培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。方法、中民和滅菌程序行一次。藥典2

12、010 年版二部規(guī)定：在中，若采用已驗證的配置培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可只進本公司采用的培養(yǎng)基均是三藥科技開發(fā)公司生產(chǎn)的市售脫水培養(yǎng)基。為規(guī)范生測實驗在配制培養(yǎng)基時標準化、程序化并符合中民藥典2010 年版二部規(guī)定，特對培養(yǎng)基的配制程序進行驗證。驗證組織與實施驗證小組成員及職責分工1.2. 本驗證由質(zhì)量部負責并由相關(guān)根據(jù)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證方案所規(guī)定的方法與步驟實施。2. 實施時間為：年月日年月日。二、 各項目驗證結(jié)論1. 滅菌前后值日期：年月日2. 外觀性狀日期年 月日年月日結(jié)果判定配制批號滅菌后保存三周后配制批號滅菌前值滅菌后值結(jié)果判定部門部

13、門職責責任人工作劃分質(zhì)量部方案起草、實施、書寫操作實施質(zhì)量部取樣、檢驗、出操作實施驗證方案審定、批準、實施、驗證合格證方案審核方案批準3. 留點溫度計溫度日期：年月日4. 指示劑培養(yǎng)結(jié)果日期：年月日滅菌后培養(yǎng)基無菌性檢查配制批號：日期：年月日5.2. 配制批號：日期：年月日5.3. 配制批號：日期：年月日天數(shù)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定天數(shù)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定天數(shù)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天

14、第13天第14天結(jié)果判定配制批號滅菌后指示劑顏色結(jié)果判定ABCDEABCDEABCDE陽性對照配制批號滅菌后溫度結(jié)果判定ABCDEABCDEABCDE6. 滅菌后培養(yǎng)基靈敏度檢查6.1. 菌液計數(shù)結(jié)果日期：年月日6.2. 培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果日期：年月日6.3. 培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果日期：年月日6.4. 培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果日期：年月日配制批號檢查項目第一天第二天第三天結(jié)果判定對照管金黃色葡萄球菌管配制批號檢查項目第一天第二天第三天結(jié)果判定對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管配制批號檢查項目第一天第二天第三天結(jié)果判定對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢

15、桿菌管指示菌名稱菌液濃度（cfu/ml）標準濃度平板 1平板 2平均菌落數(shù)金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003100銅綠假單胞菌 CMCC(B) 10 104生孢梭菌 CMCC(B) 64 941枯草芽孢桿菌 CMCC(B) 63 501保存三周后培養(yǎng)基無菌性檢查培養(yǎng)基無菌性檢查結(jié)果配制批號：日期：年月日7.2. 培養(yǎng)基無菌性檢查結(jié)果配制批號：日期：年月日7.3. 培養(yǎng)基無菌性檢查結(jié)果配制批號：日期：年月日8. 保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查8.1. 菌液計數(shù)結(jié)果日期：年月日指示菌名稱菌液濃度（cfu/ml）標準濃度平板 1平板 2平均菌落數(shù)天數(shù)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第

16、8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定天數(shù)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定天數(shù)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管8.2. 保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果日期：年月日8.3. 保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果日期：年月日8.4. 保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果日期：年月日三、 建議、結(jié)果分析和驗證總結(jié)1. 建議1.1. 加強生測室檢驗的操作技能培訓，使培養(yǎng)基配制和滅菌過程標準化，程序化。1.2. 當硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基在日常無菌檢測時，應對其外觀性狀進行檢查，不符配制批號檢查項目第一天第二天第三天結(jié)果判定對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管配制批號檢查項目第一天第二天第三天結(jié)果判定對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管配制批號檢查項目第一天第二天第三天結(jié)果判定對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003100銅綠假單胞菌 CMCC(B) 10 104生孢梭菌 CMCC