第十四章維生素類(lèi)藥物的分析

1、維生素：維生素： 是維持人體正常代謝機(jī)能所必需的是維持人體正常代謝機(jī)能所必需的微量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。微量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。 人體不能合成維生素。人體不能合成維生素。發(fā)現(xiàn)簡(jiǎn)史p公元前公元前3500年年-古埃及人發(fā)現(xiàn)能防治夜盲癥的物質(zhì)，古埃及人發(fā)現(xiàn)能防治夜盲癥的物質(zhì)，也就是后來(lái)也就是后來(lái) 的維的維A。 p1600年年-醫(yī)生鼓勵(lì)以多吃動(dòng)物肝臟來(lái)治夜盲癥。醫(yī)生鼓勵(lì)以多吃動(dòng)物肝臟來(lái)治夜盲癥。p1747年年-蘇格蘭醫(yī)生林德發(fā)現(xiàn)檸檬能治壞血病，也就蘇格蘭醫(yī)生林德發(fā)現(xiàn)檸檬能治壞血病，也就是后來(lái)的維是后來(lái)的維C。p1831年年-胡蘿卜素被發(fā)現(xiàn)。胡蘿卜素被發(fā)現(xiàn)。p1905年年-甲狀腺腫大被碘治愈。甲狀腺腫大被碘治愈。p1911年

2、年-波蘭化學(xué)家豐克為維生素命名。波蘭化學(xué)家豐克為維生素命名。p1915年年-科學(xué)家認(rèn)為糙皮病是由于缺乏某種維生素而科學(xué)家認(rèn)為糙皮病是由于缺乏某種維生素而造成的造成的 p1916年年-維生素維生素B被分離出來(lái)。被分離出來(lái)。 p1917年年-英國(guó)醫(yī)生發(fā)現(xiàn)魚(yú)肝油可治愈佝僂病，隨后斷英國(guó)醫(yī)生發(fā)現(xiàn)魚(yú)肝油可治愈佝僂病，隨后斷定這種病是定這種病是 缺乏維缺乏維D引起的。引起的。p1920年年-發(fā)現(xiàn)人體可將胡蘿卜轉(zhuǎn)化為維生素發(fā)現(xiàn)人體可將胡蘿卜轉(zhuǎn)化為維生素A。 p1922年年-維維E被發(fā)現(xiàn)。被發(fā)現(xiàn)。 p1928年年-科學(xué)家發(fā)現(xiàn)維科學(xué)家發(fā)現(xiàn)維B至少有兩種類(lèi)型。至少有兩種類(lèi)型。 p1933年年-維維E首次用于治療。

3、首次用于治療。 p1948年年-大劑量維大劑量維C用于治療炎癥。用于治療炎癥。 p1949年年-維維B3與維與維C用于治療精神分裂癥。用于治療精神分裂癥。 p1954年年-自由基與人體老化的關(guān)系被揭開(kāi)。自由基與人體老化的關(guān)系被揭開(kāi)。 p1957年年-Q10多酶被發(fā)現(xiàn)。多酶被發(fā)現(xiàn)。 p1969年年-體內(nèi)超級(jí)抗氧化酶被發(fā)現(xiàn)。體內(nèi)超級(jí)抗氧化酶被發(fā)現(xiàn)。 p1970年年-維維C被用于治療感冒。被用于治療感冒。 p1993年年-哈佛大學(xué)發(fā)表維生素哈佛大學(xué)發(fā)表維生素E與心臟病關(guān)系的與心臟病關(guān)系的研究結(jié)果研究結(jié)果必需維生素必需維生素 13種種 p維生素維生素A，維生素，維生素B，維生素，維生素C，維生素，維生

4、素D，維生素，維生素E，維生素，維生素K，維生素，維生素H（生（生物素），維生素物素），維生素P，維生素，維生素PP，維生素，維生素M，維生素，維生素T，維生素，維生素U，水溶性維生素。，水溶性維生素。必需維生素？必需維生素？p外源性：人體自身不可合成，需要通過(guò)外源性：人體自身不可合成，需要通過(guò)食物補(bǔ)充；食物補(bǔ)充； p微量性：人體所需量很少，但是可以發(fā)微量性：人體所需量很少，但是可以發(fā)揮巨大作用；揮巨大作用； p調(diào)節(jié)性：維生素必需能夠調(diào)節(jié)人體新陳調(diào)節(jié)性：維生素必需能夠調(diào)節(jié)人體新陳代謝或能量轉(zhuǎn)變；代謝或能量轉(zhuǎn)變； p特異性：缺乏了某種維生素后，人將呈特異性：缺乏了某種維生素后，人將呈現(xiàn)特有的病態(tài)

5、?，F(xiàn)特有的病態(tài)。 VitA、D2、D3、 E、K1 等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB族族(B1、B2、B6、B12) VitC、葉酸、煙酸、煙酰胺、葉酸、煙酸、煙酰胺分類(lèi)：分類(lèi)：VitMVitPP常見(jiàn)維生素的生理活性p維生素維生素A ：有：有VA1-3，其中，其中VA1活性最高，活性最高，又稱(chēng)為視黃醇；維生素又稱(chēng)為視黃醇；維生素A是眼睛中是眼睛中視紫質(zhì)視紫質(zhì)的原料，也是皮膚組織必需的材料，人的原料，也是皮膚組織必需的材料，人缺少它會(huì)得干眼病、夜盲癥等。缺少它會(huì)得干眼病、夜盲癥等。p對(duì)人體的生長(zhǎng)、視覺(jué)和生殖功能都很重對(duì)人體的生長(zhǎng)、視覺(jué)和生殖功能都很重要要 。 p維生素維生素D：又稱(chēng)鈣化醇

6、，：又稱(chēng)鈣化醇， 與鈣、磷代謝及植物與鈣、磷代謝及植物神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌及血管系統(tǒng)有密切關(guān)系，具神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌及血管系統(tǒng)有密切關(guān)系，具有皮質(zhì)類(lèi)固醇激素樣作用?？捎糜谥委煯愇恍杂衅べ|(zhì)類(lèi)固醇激素樣作用?？捎糜谥委煯愇恍云ぱ灼ぱ?、紅斑狼瘡紅斑狼瘡、斑禿、聚合性痤瘡、泛發(fā)性、斑禿、聚合性痤瘡、泛發(fā)性膿皰性銀屑病等膿皰性銀屑病等 ；與曬太陽(yáng)有關(guān)。；與曬太陽(yáng)有關(guān)。p維生素維生素E 可用于治療凍瘡、多形紅斑、結(jié)節(jié)性可用于治療凍瘡、多形紅斑、結(jié)節(jié)性紅斑、單純性紅斑、單純性紫癜紫癜、色素性紫癜性、色素性紫癜性皮膚病皮膚病、肢、肢端紫紺癥、痛經(jīng)以及治療抑郁癥。端紫紺癥、痛經(jīng)以及治療抑郁癥。p維生素維生素K 促進(jìn)肝

7、臟合成凝血酶原及血漿因子，促進(jìn)肝臟合成凝血酶原及血漿因子，與皮質(zhì)類(lèi)固醇激素有協(xié)同作用?？捎糜谥委熥吓c皮質(zhì)類(lèi)固醇激素有協(xié)同作用?？捎糜谥委熥像?、慢性癜、慢性蕁麻疹蕁麻疹、淋巴瘤伴皮膚瘙癢病等。、淋巴瘤伴皮膚瘙癢病等。p維生素維生素B1 可用于治療可用于治療濕疹濕疹、皮炎、膿皮病、皮炎、膿皮病、念珠菌病、光感性皮膚病、帶狀念珠菌病、光感性皮膚病、帶狀皰疹皰疹后遺神經(jīng)后遺神經(jīng)痛、多發(fā)性神經(jīng)炎等。痛、多發(fā)性神經(jīng)炎等。p維生素維生素B2 可用于治療脂溢性皮炎、脂溢可用于治療脂溢性皮炎、脂溢性性脫發(fā)脫發(fā)、尋常痤瘡、酒渣鼻、尋常須瘡、尋常痤瘡、酒渣鼻、尋常須瘡、口周濕疹、日光性皮炎等?？谥軡裾?、日光性皮炎等

8、。p維生素維生素B6 可用于治療脂溢性皮炎、脂溢可用于治療脂溢性皮炎、脂溢性脫發(fā)、尋常痤瘡、酒渣鼻、濕疹、滲性脫發(fā)、尋常痤瘡、酒渣鼻、濕疹、滲出性銀屑病、神經(jīng)性皮炎、妊娠癢疹、出性銀屑病、神經(jīng)性皮炎、妊娠癢疹、斑禿、唇炎等。斑禿、唇炎等。p維生素維生素B12 是體內(nèi)多種代謝過(guò)程中必需的輔是體內(nèi)多種代謝過(guò)程中必需的輔酶，參與核蛋白的合成，甲基的轉(zhuǎn)換以及脂肪酶，參與核蛋白的合成，甲基的轉(zhuǎn)換以及脂肪和糖的代謝，可用于治療慢性蕁麻疹、接觸性和糖的代謝，可用于治療慢性蕁麻疹、接觸性皮炎、早期銀屑病、皮炎、早期銀屑病、扁平疣扁平疣、水痘、帶狀皰疹、水痘、帶狀皰疹、扁平苔癬、脂溢性皮炎、光感性皮膚病等。扁平

9、苔癬、脂溢性皮炎、光感性皮膚病等。p維生素維生素C 主要用于抗炎和抗衰老，可用于治療主要用于抗炎和抗衰老，可用于治療紫癜性皮膚病、濕疹、蕁麻疹、紫癜性皮膚病、濕疹、蕁麻疹、黃褐斑黃褐斑、黑變、黑變病、特發(fā)性斑狀色素沉著、早期銀屑病、砷劑病、特發(fā)性斑狀色素沉著、早期銀屑病、砷劑皮炎等。皮炎等。 CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3-H 維生素維生素A醇醇-COCH3 維生素維生素A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 維生素維生素A棕櫚酸酯棕櫚酸酯R :第一節(jié)第一節(jié) 維生素維生素A的分析的分析全反式全反式（一）為一個(gè)具有共軛多烯側(cè)鏈的環(huán)己烯（一）為一個(gè)具有共軛多烯側(cè)鏈的環(huán)己烯1. 具有具有UV吸收

10、吸收2.2.存在多種立體異構(gòu)化合物存在多種立體異構(gòu)化合物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、一、維生素A 325.5 100% 全反式新維生素Aa 328 75% 2順新維生素Ab 320.5 24% 4順新維生素Ac 310.5 15% 2，4順異維生素Aa 323 21% 6順異維生素Ab 324 24% 2，6順max 相對(duì)生物效價(jià)相對(duì)生物效價(jià)順?lè)串悩?gòu)順?lè)串悩?gòu)C H2O HVitA2C H2VitA33 3.易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應(yīng)易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應(yīng)CH2OHCH2OHCH3鯨醇鯨醇酸酸醛醛環(huán)環(huán)氧氧化化物物、氧氧化化劑劑紫紫外外線線、VitAVitAVitAOO2 v或有金屬離子存在時(shí)氧化

11、或有金屬離子存在時(shí)氧化v臨床使用時(shí)成酯后，溶于植物油中；陰臨床使用時(shí)成酯后，溶于植物油中；陰涼干燥處保存，還需加入涼干燥處保存，還需加入N2或一定抗氧或一定抗氧劑提高穩(wěn)定性。劑提高穩(wěn)定性。共軛多烯側(cè)鏈共軛多烯側(cè)鏈 易被氧化易被氧化（二）（二）環(huán)氧化物環(huán)氧化物OC H2OHVitA醛醛HOCVitA酸酸C OOH（三）（三）與三氯化銻發(fā)生呈色反應(yīng)與三氯化銻發(fā)生呈色反應(yīng)紫紫紅紅藍(lán)藍(lán)色色3SbClVitACHCl3溶解性溶解性（四）（四）不溶于水，微溶于乙醇；不溶于水，微溶于乙醇；易溶于有機(jī)溶劑和植物油等易溶于有機(jī)溶劑和植物油等(五)紫外吸收特征p共軛多烯紫外吸收；共軛多烯紫外吸收；325328nm

12、范圍內(nèi)有最大吸收，可用于鑒范圍內(nèi)有最大吸收，可用于鑒別和定量測(cè)定；別和定量測(cè)定；三氯化銻反應(yīng)三氯化銻反應(yīng)（一）（一）條件：條件： 無(wú)水、無(wú)醇無(wú)水、無(wú)醇紫紫紅紅藍(lán)藍(lán)色色 3SbClVitACHCl3鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)二、二、SbCl3水水SbOCl乙醇可使碳正離子的正電荷消失乙醇可使碳正離子的正電荷消失-RCOOSbCl5+CH2藍(lán)色藍(lán)色紫紅紫紅+CH2-RCOOSbCl5VitAVitAHCl去去水水無(wú)無(wú)水水乙乙醇醇max為為326nm一個(gè)吸收峰一個(gè)吸收峰UV法法（二）（二）max為為350390nm三個(gè)吸收峰三個(gè)吸收峰去水去水VitA（VitA3）CH2CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3

13、VitAUSP 顯色劑顯色劑 磷鉬酸磷鉬酸 規(guī)定斑點(diǎn)顏色和規(guī)定斑點(diǎn)顏色和Rf值值BP 對(duì)照品法對(duì)照品法 顯色劑顯色劑 三氯化銻三氯化銻TLC法法（三）（三）立體異構(gòu)體立體異構(gòu)體氧化產(chǎn)物及光照產(chǎn)物氧化產(chǎn)物及光照產(chǎn)物合成中間體合成中間體去氫維生素去氫維生素A（ VitA2）去水維生素去水維生素A（ VitA3）UV法（三點(diǎn)校正法）法（三點(diǎn)校正法）（一）（一）含量測(cè)定含量測(cè)定三、三、三點(diǎn)校正法三點(diǎn)校正法1. 前提條件：前提條件：（1）雜質(zhì)的吸收在）雜質(zhì)的吸收在310340nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)呈波長(zhǎng)范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長(zhǎng)的增大吸收度減??；一條直線，且隨波長(zhǎng)的增大吸收度減小；（2）物質(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性

14、。）物質(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性。測(cè)定對(duì)象：測(cè)定對(duì)象：VitA醋酸酯醋酸酯328340316328第一法第一法 等波長(zhǎng)差法等波長(zhǎng)差法第二法第二法 等吸收比法等吸收比法(皂化法皂化法)32176AAA測(cè)定對(duì)象：測(cè)定對(duì)象：VitA醇醇2. 波長(zhǎng)的選擇：波長(zhǎng)的選擇：（1） 1 VitA的的 max（如（如VitA酯酯 328nm）（2） 2 3 分別在分別在 1的兩側(cè)各選一點(diǎn)的兩側(cè)各選一點(diǎn)第二步：求第二步：求)(%cm1樣樣 l(%)CA%)(cm1 樣樣3、測(cè)定法、測(cè)定法（1）基本步驟）基本步驟: 第一步：第一步：A選擇，選擇，A328測(cè)定或測(cè)定或A328校正校正第三步第三步 求效價(jià)求效價(jià)換換算算因因

15、數(shù)數(shù)）效效價(jià)價(jià)（樣樣樣樣 %)(cm1)(Eg/IU第四步：求標(biāo)示量第四步：求標(biāo)示量標(biāo)標(biāo)示示量量平平均均丸丸重重100g/IU 標(biāo)標(biāo)示示量量丸丸標(biāo)標(biāo)示示量量100/IU 標(biāo)標(biāo)示示量量平平均均丸丸重重?fù)Q換算算因因數(shù)數(shù)100CA A*D*換算因數(shù)換算因數(shù)*WW*100*標(biāo)示量標(biāo)示量100換算因數(shù)：換算因數(shù)：%)(cm1Eg/IU純純）效效價(jià)價(jià)（換換算算因因數(shù)數(shù)單位單位E1cm數(shù)值所相當(dāng)?shù)男r(jià)數(shù)數(shù)值所相當(dāng)?shù)男r(jià)數(shù)（由純品計(jì)算而得）（由純品計(jì)算而得）醋醋酸酸酯酯維維生生素素 Ag344.0IU1 2907000g344. 0g101g/IU6 ）效效價(jià)價(jià)g/IU%)(cm1

16、純純）效效價(jià)價(jià)（換換算算因因數(shù)數(shù)1900 醇醇維維生生素素 Ag300.0IU1 3330000g300. 0g101g/IU6 ）效效價(jià)價(jià)g/IU%)(cm1 純純）效效價(jià)價(jià)（換換算算因因數(shù)數(shù)1830 方法：方法：（2） 第一法第一法維生素維生素A醋酸酯醋酸酯iAnm360340328316300ml/IU159S處處測(cè)測(cè)、分分別別于于溶溶液液環(huán)環(huán)己己烷烷 判斷判斷 是否在是否在326329nm之間之間max 改用第二法改用第二法是是否否 求算求算 并與規(guī)定值比較并與規(guī)定值比較328/ AAi 299.0AA811.0AA0000.1AA907.0AA555.0AA

17、328360328340328328328316328300 規(guī)定值規(guī)定值 差值差值328iA/A 判斷差值是否超過(guò)判斷差值是否超過(guò)02. 0 03%15%3%第二法第二法 校校正正328A328A第二第二法法 3403163283282523AAA.A 校校正正 計(jì)算計(jì)算 A328（校正）（校正） 用用A328計(jì)算計(jì)算有超過(guò)有超過(guò)0.02無(wú)超過(guò)無(wú)超過(guò)%100AAAf328328)(328 校校正正f VitAD膠丸中VitA的含量測(cè)定 精密稱(chēng)取本品(規(guī)格10000VitAIU/丸)裝量差異項(xiàng)下（平均裝量0.08262g/丸）的內(nèi)容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖

18、勻；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)為328nm，并在下列波長(zhǎng)處測(cè)得吸收度為A300 ：0.354A316 ：0.561A328 ：0.628A340 ：0.523A360 ：0.216A300 /A328 ：0.555A316/A328 ：0.907A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.811A360/A328 ：0.299 求本品中維生素求本品中維生素A的含量？的含量？A300 /A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.833A3

19、60/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.010.01 0 + 0.02 + 0.04 605.0523.0561.0628.0252.3252.3340316328328AAAA校正=%)3%15(%7 .3%100328328)(328AAAf校正 %0 .99%1001000008262. 010020125022399. 01900605. 0%100)ml100/g(C1900A%328 標(biāo)標(biāo)示示量量平平均均丸丸重重標(biāo)標(biāo)示示量量校校正正適用于維生素適用于維生素A醇醇（等吸收比法） 第一法無(wú)法消除雜質(zhì)干擾時(shí)用此法第一法無(wú)法消除雜質(zhì)

20、干擾時(shí)用此法 皂化法、皂化法、6/7A法法 （3）第二法）第二法i/KOHAnm334325310300ml/IU159VitAVitAS處測(cè)處測(cè)、于于稀釋至稀釋至溶解溶解異丙醇異丙醇除去植物油的干擾除去植物油的干擾甘油和脂肪酸鹽甘油和脂肪酸鹽植物油植物油醇醇醋酸酯醋酸酯皂化液皂化液揮干乙醚揮干乙醚乙醚提取乙醚提取乙醇乙醇 水溶性水溶性脂溶性脂溶性 判斷判斷 max是否在是否在323327nm之間之間取未皂化樣品采用取未皂化樣品采用色譜法純化后再測(cè)色譜法純化后再測(cè)定定 計(jì)算計(jì)算325300AA是是否否 判斷判斷 A300 /A325 是否大于是否大于0.73是是否否取未皂化樣品采用色取未皂化樣

21、品采用色譜法純化后再測(cè)定譜法純化后再測(cè)定 計(jì)算計(jì)算A325(校正校正) 334310325325260455528156A.A.A.A 校校正正%100AAAf325325)(325 校校正正03%3% 校正校正325A325A 校正校正325Af三氯化銻比色法三氯化銻比色法（二）藍(lán)藍(lán)色色 3SbClVitA優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 簡(jiǎn)便簡(jiǎn)便 快速快速max 618nm620nm標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 SbOClSbClOH32缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：呈色不穩(wěn)定呈色不穩(wěn)定 （5 10s內(nèi)）內(nèi)）水分干擾水分干擾與標(biāo)準(zhǔn)曲線溫差與標(biāo)準(zhǔn)曲線溫差1專(zhuān)屬性差專(zhuān)屬性差三氯化銻有腐蝕性三氯化銻有腐蝕性（三）高效液相色譜法三）高效液相色

22、譜法流動(dòng)相：正己烷異丙醇（流動(dòng)相：正己烷異丙醇（9973）檢測(cè)波長(zhǎng)：檢測(cè)波長(zhǎng)：325nm第二節(jié)第二節(jié) 維生素維生素B1的分析的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1.溶解性溶解性(1)易溶于水易溶于水(2)水溶液呈酸性水溶液呈酸性3.UV共軛雙鍵共軛雙鍵max = 246nm二、性質(zhì)二、性質(zhì) 藍(lán)色熒光藍(lán)色熒光硫色素硫色素正丁醇正丁醇 OOH2.硫色素?zé)晒夥磻?yīng)硫色素?zé)晒夥磻?yīng)4.與生物堿沉淀試劑反應(yīng)與生物堿沉淀試劑反應(yīng)雜原子的反應(yīng)，能與某些生物堿沉淀試劑雜原子的反應(yīng)，能與某些生物堿沉淀試劑反應(yīng)，生成組成恒定的沉淀，可用于鑒別反應(yīng)，生成組成恒定的沉淀，可用于鑒別和含量測(cè)定。和含量測(cè)定。5.氯化物的特性氯

23、化物的特性6.硫元素反應(yīng)：與硫元素反應(yīng)：與NaOH共熱，形成硫化共熱，形成硫化鈉，硝酸鉛生成黑色沉淀；鈉，硝酸鉛生成黑色沉淀；7.紅外光譜特征紅外光譜特征熒熒光光消消失失藍(lán)藍(lán)色色熒熒光光硫硫色色素素正正丁丁醇醇）（環(huán)環(huán)合合 HCNFeKOHNaOHVitB6321O OH專(zhuān)屬性反應(yīng)專(zhuān)屬性反應(yīng)二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn)（一）（一）硫色素反應(yīng)硫色素反應(yīng)CH2NNH3CNH2CH3NNaSC2H4OHONNH3CNH2HClNSCH3C2H4OHCH2NaOHNNH3CNNNaSCH3C2H4OH-H2O硫色素硫色素SCH3C2H4OHNNH3CNNH環(huán)合NNH3CNNSCH3C2H4OH H22HV

24、itB1 4242HgIHBHgIK 淡淡黃黃H+ 2KIIIHIB2 紅紅色色H+白白色色硅硅鎢鎢酸酸 H+ OH4WO12OHSiOB23222 白色扇形白色扇形苦酮酸苦酮酸 H+（二）（二）沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng) PbSNaSVitBAcPbNaOH OHNHAgNOAgCl白白3HNO3HNO藍(lán)藍(lán)淀淀粉粉試試紙紙 KIMnOClS元素反應(yīng)元素反應(yīng)Cl-反應(yīng)反應(yīng)（三）（三）其他反應(yīng)其他反應(yīng)H+三、含量測(cè)定三、含量測(cè)定 HClOClOBHClOHClClBAcHg）（喹那啶紅亞甲藍(lán)喹那啶紅亞甲藍(lán)(紫紅紫紅天藍(lán)天藍(lán))（一）（一）非水溶液滴定法非水溶液滴定法UV法法（二）（二）片劑、注射劑片劑、注射

25、劑= 421%cmE11（每片）相當(dāng)于標(biāo)示量的（每片）相當(dāng)于標(biāo)示量的%=A = ECLChP11 標(biāo)示量標(biāo)示量% WEA %cm 100D 100平均片重平均片重（每（每ml）相當(dāng)于標(biāo)示量的）相當(dāng)于標(biāo)示量的 標(biāo)示量標(biāo)示量% VEA %cm 100D 100注意p維生素維生素1的紫外吸收峰隨溶液的的紫外吸收峰隨溶液的pH變變化而不同：化而不同：pH2.0時(shí)，最大吸收波長(zhǎng)在時(shí)，最大吸收波長(zhǎng)在246nm處；處；pH7.0時(shí)，時(shí)，2個(gè)吸收峰：個(gè)吸收峰：232233和和266；p可采用差示分光光度法測(cè)定其含量；可采用差示分光光度法測(cè)定其含量；熒熒光光硫硫色色素素異異丁丁醇醇鐵鐵氰氰化化鉀鉀 VitBNa

26、OH（三）（三）硫色素?zé)晒夥ǎ壕S生素硫色素?zé)晒夥ǎ壕S生素B1的專(zhuān)屬性反應(yīng)的專(zhuān)屬性反應(yīng)1、+ NaOH + 鐵氰化鉀鐵氰化鉀 + 異丁醇異丁醇+ NaOH + 異丁醇異丁醇+ NaOH + 鐵氰化鉀鐵氰化鉀 + 異丁醇異丁醇+ NaOH + 異丁醇異丁醇SdAb對(duì)照液對(duì)照液供試液供試液dSbAC樣樣 C標(biāo)標(biāo)3、（1）靈敏度高，線性范圍寬）靈敏度高，線性范圍寬（2）專(zhuān)屬性強(qiáng)，氧化產(chǎn)物及代謝產(chǎn)物不干擾，可用）專(zhuān)屬性強(qiáng)，氧化產(chǎn)物及代謝產(chǎn)物不干擾，可用于制劑分析，體液分析等。于制劑分析，體液分析等。硫色素?zé)晒夥ㄌ攸c(diǎn)p為維生素為維生素B1的專(zhuān)屬性反應(yīng)，可用于維生的專(zhuān)屬性反應(yīng)，可用于維生素素B1及制劑的含量

27、測(cè)定；及制劑的含量測(cè)定；p不受氧化破壞產(chǎn)物的影響，結(jié)果較準(zhǔn)確；不受氧化破壞產(chǎn)物的影響，結(jié)果較準(zhǔn)確；但操作比較復(fù)雜，受干擾因素多；但操作比較復(fù)雜，受干擾因素多；p氧化劑除了鐵氰化鉀外，還可以使用氯氧化劑除了鐵氰化鉀外，還可以使用氯化汞或者溴化氰；化汞或者溴化氰；第三節(jié)第三節(jié) 維生素維生素C的分析的分析654321OOHHOO COHHCH2OHL抗壞血酸抗壞血酸結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、一、（一）結(jié)構(gòu)（一）結(jié)構(gòu)二烯醇二烯醇內(nèi)酯內(nèi)酯兩個(gè)手性碳（兩個(gè)手性碳（C4,C5）OO HH OO CO HHC H2O H123456C3OH的的pKa = 4.17C2OH的的pKa = 11.572.酸性酸性一

28、元酸一元酸（二）性質(zhì)（二）性質(zhì)1.溶解性溶解性1、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性O(shè)OHHOO C OHHCH2OH123456L(+)抗壞血酸抗壞血酸活性最強(qiáng)活性最強(qiáng)手性手性C（C4、C5）3.旋光性旋光性*CH2OHOOOO C OHHCH2OHCHHOCHOHCOCOCOONa HH+OH-有活性有活性有活性有活性無(wú)活性無(wú)活性O(shè)HOO C OHHCH2OHHOO4.還原性還原性二烯醇結(jié)構(gòu)二烯醇結(jié)構(gòu)與堿反應(yīng)與堿反應(yīng)單單鈉鈉鹽鹽32CONa酮酮酸酸鹽鹽水水解解 NaOH5.水解反應(yīng)水解反應(yīng)OHOO C OHHCH2OHHOOHOO C OHHCH2OHNaOCOONaOCOC

29、CHOHHOCHCH2OHNa2CO3NaOH顯色糠醛衍生物糠醛吡咯脫水 H糖類(lèi)的顯色反應(yīng)糖類(lèi)的顯色反應(yīng)藍(lán)藍(lán)色色糠糠醛醛吡吡咯咯脫脫水水 HVitC50結(jié)構(gòu)與糖類(lèi)相似結(jié)構(gòu)與糖類(lèi)相似6.具糖的性質(zhì)具糖的性質(zhì)7.UV特征特征nmnmmaxOHmaxH6565 去去氫氫抗抗壞壞血血酸酸 OVitC利用還原性：與氧化劑的反應(yīng)利用還原性：與氧化劑的反應(yīng)鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)二、二、OHOO C OHHCH2OHHOCH2OHOOOO C OHH O黑AgAgNOVitC3（一）與（一）與AgNO3反應(yīng)反應(yīng)（二）與（二）與2，6 - 二氯靛酚反應(yīng)二氯靛酚反應(yīng)無(wú)無(wú)色色二二氯氯靛靛酚酚， VitC62氧化型氧化型玫

30、瑰紅色玫瑰紅色H還原型還原型藍(lán)色藍(lán)色 OHOHNClHOClONClHOClOHH（玫瑰色）玫瑰色）（無(wú)色）（無(wú)色）紅紅堿堿性性酒酒石石酸酸銅銅 OCuVitC與堿性酒石酸銅反應(yīng)與堿性酒石酸銅反應(yīng)USP與與KMnO4反應(yīng)反應(yīng) MnKMnOVitC（三）與其他氧化劑反應(yīng)（三）與其他氧化劑反應(yīng)（四）糖類(lèi)的反應(yīng)（四）糖類(lèi)的反應(yīng)藍(lán)色糠醛戊糖脫水三氯醋酸 VitC-CO2-H2OOC HN（藍(lán)色）（藍(lán)色）OC H O(糠醛糠醛)OCHOH3CH2OHCH（戊糖）（戊糖）NNH50(吡咯吡咯)OO CO HHC H2O HH OO HC H2O HOO CO HHHH OOH2OC COHO OCHOH3

31、CH2OHBP0.01mol/L HClnmmax243 58554511E%cm （五）（五）UV三、雜質(zhì)檢查三、雜質(zhì)檢查（一）溶液的澄清度與顏色檢查（一）溶液的澄清度與顏色檢查（二）鐵、銅離子的檢查（二）鐵、銅離子的檢查維生素維生素C C原料藥原料藥 片片 劑劑 注射劑注射劑維生素維生素C C原料藥原料藥糠醛縮合呈色糠醛縮合呈色催化催化V Vc c氧氧化分解化分解原子吸收法原子吸收法(三)草酸的檢查p草酸與金屬離子作用形成沉淀；所以對(duì)草酸與金屬離子作用形成沉淀；所以對(duì)Vc的原料，尤其是注射液，要進(jìn)行草酸的原料，尤其是注射液，要進(jìn)行草酸檢查；檢查；p加入加入CaCl2，比濁法；，比濁法；II

32、VitCH去氫抗壞血酸2指示劑指示劑 淀粉指示液淀粉指示液（一）碘量法（一）碘量法四、含量測(cè)定四、含量測(cè)定原理：利用原理：利用V Vc c強(qiáng)的還原性強(qiáng)的還原性O(shè)HOO C OHHCH2OHHO IH+OO C OHHOOCH2OHH I2+ 取本品約取本品約0.2g，精密稱(chēng)定，加新沸過(guò)，精密稱(chēng)定，加新沸過(guò)的冷水的冷水100ml與稀醋酸與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉使溶解，加淀粉指示液指示液1ml，立即用碘滴定液（，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于8.806mg的的

33、C6H8O6。2、方法、方法原料藥原料藥（2）酸性環(huán)境）酸性環(huán)境 稀醋酸稀醋酸 （1）新沸冷）新沸冷H2O減慢減慢VitC被被O2氧化速度氧化速度（3）立即滴定）立即滴定 趕走水中趕走水中O2減少減少O2的干擾的干擾3、討論、討論4.附加劑干擾的排除附加劑干擾的排除片劑片劑 過(guò)濾過(guò)濾注射劑注射劑 抗氧劑抗氧劑 丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 CHHOOaS3a S O+H2N H ON2252HO NH COS3a33COCHCH33CHCHCNaSO3OH33CHCHCNaSO3OH空空樣樣二二氯氯靛靛酚酚液液空空白白樣樣品品VVHAcHPO 3(

34、二二)2，6 - 二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法酚酚亞亞胺胺二二氯氯靛靛酚酚， 6 6 VitC1、原理、原理2、方法、方法自身指示終點(diǎn)法自身指示終點(diǎn)法（2）快速滴定）快速滴定 2min內(nèi)內(nèi) （1）酸性環(huán)境）酸性環(huán)境 HPO3-HAc 穩(wěn)定穩(wěn)定VitC防止其他還原性物質(zhì)干擾防止其他還原性物質(zhì)干擾（3）亦可剩余比色測(cè)定）亦可剩余比色測(cè)定 AVitC測(cè)測(cè)二二氯氯靛靛酚酚（定量過(guò)量）（定量過(guò)量）（測(cè)剩余染料）（測(cè)剩余染料）3、討論、討論（4）缺點(diǎn)）缺點(diǎn) 需經(jīng)常標(biāo)定需經(jīng)常標(biāo)定貯存貯存一周一周不穩(wěn)定不穩(wěn)定專(zhuān)屬性強(qiáng)，多用于含專(zhuān)屬性強(qiáng)，多用于含 Vc的制劑和食品的的制劑和食品的分析分析（5）優(yōu)點(diǎn)）優(yōu)點(diǎn)（三）高

35、效液相色譜法高效液相色譜法血漿中維生素血漿中維生素C的測(cè)定的測(cè)定 標(biāo)準(zhǔn)溶液包括樣品預(yù)處理過(guò)程均需加入標(biāo)準(zhǔn)溶液包括樣品預(yù)處理過(guò)程均需加入偏磷酸，偏磷酸同時(shí)可用于血樣中的蛋偏磷酸，偏磷酸同時(shí)可用于血樣中的蛋白沉淀；當(dāng)天取血當(dāng)天測(cè)定；處理好的白沉淀；當(dāng)天取血當(dāng)天測(cè)定；處理好的樣品亦需冰箱保存樣品亦需冰箱保存第四節(jié)第四節(jié) 維生素維生素D D的分析的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)（一）結(jié)構(gòu)CH2HOCH3HCH3HHHCH3CH3HCH3維生素 D2(麥角骨化醇) CH2HOCH3HCH3HHHCH3CH31212345678910111314151617181920212223242526

36、27維生素D3(膽骨化醇) 1.1.性狀性狀 無(wú)色針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉無(wú)色針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉 末；無(wú)臭，無(wú)味。末；無(wú)臭，無(wú)味。2.2.溶解性溶解性 宜溶于有機(jī)溶劑，在植物油中宜溶于有機(jī)溶劑，在植物油中 略溶，在水中不溶。略溶，在水中不溶。3.3.不穩(wěn)定性不穩(wěn)定性 含有多個(gè)烯鍵，所以極不穩(wěn)含有多個(gè)烯鍵，所以極不穩(wěn) 定，宜氧化變質(zhì)，效價(jià)降低，定，宜氧化變質(zhì)，效價(jià)降低， 毒性增強(qiáng)。毒性增強(qiáng)。（二）性質(zhì)（二）性質(zhì)4 4旋光性旋光性 維生素維生素D2 6D2 6個(gè)手性碳原子個(gè)手性碳原子 維生素維生素D3 5D3 5個(gè)手性碳原子個(gè)手性碳原子5 5顯色反應(yīng)顯色反應(yīng) 甾類(lèi)化合物甾類(lèi)化合物氯仿溶液氯仿溶液

37、 黃色黃色 紅色紅色 紫色紫色 綠色綠色6 6紫外吸收特性紫外吸收特性 無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇 265nm 265nm 維生素維生素D2 D2 為為460460490490 維生素維生素D3 D3 為為465465495495醋酐醋酐硫酸硫酸E1cm1%E1%1cm二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn) （一）顯色反應(yīng)（一）顯色反應(yīng)1 1與醋酐與醋酐- -濃硫酸反應(yīng)濃硫酸反應(yīng) 氯仿溶液氯仿溶液 黃色黃色 紅色紅色 紫色紫色 綠色綠色醋酐醋酐硫酸硫酸2 2與三氯化銻反應(yīng)與三氯化銻反應(yīng) 本品本品1,2-1,2-二氯乙烷二氯乙烷 三氯化銻試液三氯化銻試液 橙紅色橙紅色 粉紅色粉紅色 3 3其它顯色反應(yīng)其它顯色反應(yīng) 維生

38、素維生素D D 三氯化鐵三氯化鐵 橙黃色橙黃色 二氯丙醇二氯丙醇 乙酰氯乙酰氯 綠色綠色 （二）比旋度鑒別（二）比旋度鑒別無(wú)水乙醇溶液無(wú)水乙醇溶液 維生素維生素D D2 2 比旋度為比旋度為102.5102.5至至107.5107.5 維生素維生素D D3 3 比旋度為比旋度為105105至至112112 （三）其它鑒別方法三）其它鑒別方法 薄層色譜法、薄層色譜法、HPLCHPLC法法制備衍生物測(cè)熔點(diǎn)制備衍生物測(cè)熔點(diǎn) 紫外、紅外吸收光譜紫外、紅外吸收光譜 （四）維生素（四）維生素D D2 2、D D3 3的區(qū)別反應(yīng)的區(qū)別反應(yīng)維生素維生素D D2 2 維生素維生素D D3 3 96%96%乙醇乙

39、醇 10ml 取取0.1ml0.1ml 乙醇乙醇1ml1ml和和85%85%硫酸硫酸5ml5ml 紅色紅色max570nm 黃色黃色 max495nm 三、雜質(zhì)檢查三、雜質(zhì)檢查（一）麥角甾醇的檢查（一）麥角甾醇的檢查維生素維生素D D2 290% %乙醇溶液乙醇溶液 洋地黃皂苷溶液洋地黃皂苷溶液 不得發(fā)生渾濁或沉淀不得發(fā)生渾濁或沉淀 （二）前維生素（二）前維生素D D的光照產(chǎn)物的光照產(chǎn)物RHO57hvhv加熱加熱HOCH2R前維生素D前維生素D維生素Dhvhvhvhv異構(gòu)化hv異構(gòu)化RHHO光甾醇（lumisterol）RCH3OH速甾醇（tachysterol）ROHCH2反式維生素D5,7

40、-二烯5,6-ROHCH3四、含量測(cè)定四、含量測(cè)定正相高效液相色譜法正相高效液相色譜法 （一）維生素（一）維生素D D測(cè)定法測(cè)定法 含量以單位表示含量以單位表示每單位相當(dāng)于維生素每單位相當(dāng)于維生素D 0.025D 0.025g g 注意：計(jì)算的是維生素注意：計(jì)算的是維生素D D及前維生素及前維生素D D經(jīng)折經(jīng)折 算成維生素算成維生素D D的總量的總量測(cè)定在半暗室及避免氧化的情況下進(jìn)行測(cè)定在半暗室及避免氧化的情況下進(jìn)行第一法：無(wú)干擾雜質(zhì)第一法：無(wú)干擾雜質(zhì)第二法：有第二法：有VA及其他雜質(zhì)干擾及其他雜質(zhì)干擾第三法：用第二法時(shí)，前第三法：用第二法時(shí)，前 VD峰受雜質(zhì)干擾峰受雜質(zhì)干擾 僅僅VD峰可分離

41、峰可分離 第一法第一法內(nèi)標(biāo)物：鄰苯二甲酸二甲酯內(nèi)標(biāo)物：鄰苯二甲酸二甲酯色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：填充劑：硅膠填充劑：硅膠流動(dòng)相：正己烷流動(dòng)相：正己烷-正戊醇（正戊醇（997：3）檢測(cè)波長(zhǎng)：檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm無(wú)干擾雜質(zhì)無(wú)干擾雜質(zhì)維維生生素素D3光照光照前維生素前維生素D3反式維生素反式維生素D3維生素維生素D3速甾醇速甾醇D3與維生素與維生素D3的比保的比保 留留 時(shí)時(shí) 間間分離度分離度1.01.0溶液組成溶液組成先后進(jìn)樣先后進(jìn)樣5次，維生素次，維生素D3 峰面積的峰面積的 RSD2.0 % 0.50.61.01.1系統(tǒng)適用系統(tǒng)適用性試驗(yàn)性試驗(yàn)校正因子測(cè)定：校正因子測(cè)

42、定：維生素維生素D的校正因子的校正因子: f1=Asmi/Aims前維生素前維生素D折算成維生素折算成維生素D的校正因子的校正因子:f2=（Asmr-f1msAr1）/（Ar2ms）含量測(cè)定：計(jì)算維生素含量測(cè)定：計(jì)算維生素D及前維生素及前維生素D折算成折算成 維生素維生素D的總量的總量mi=（f1Ai1+f2Ai2）ms/As第二法第二法第一步：皂化提取第一步：皂化提取供試品供試品OH-加熱回流加熱回流冷卻冷卻乙醚提取乙醚提取乙醚提取液乙醚提取液揮干乙醚揮干乙醚殘?jiān)鼩堅(jiān)状既芙饧状既芙夤┰嚾芤汗┰嚾芤篈有有VA及其他雜質(zhì)干擾及其他雜質(zhì)干擾第二步：分離收集第二步：分離收集供供試試品品溶溶液液AR

43、P-HPLC維生素維生素D前維生素前維生素D維生素維生素A及及其他雜質(zhì)其他雜質(zhì)疊疊峰峰分分離離收集收集供供試試品品溶溶液液B維生素維生素D及前及前維生素維生素D第三步：按第一法進(jìn)行含量測(cè)定（內(nèi)標(biāo)法）第三步：按第一法進(jìn)行含量測(cè)定（內(nèi)標(biāo)法）揮干揮干內(nèi)標(biāo)的正內(nèi)標(biāo)的正己烷溶液己烷溶液溶解溶解第三法第三法第一步：皂化提取第一步：皂化提取同第二法得供試品溶液同第二法得供試品溶液A第二步：第二步：供供試試品品溶溶液液ARP-HPLC維生素維生素D前維生素前維生素D維生素維生素A及及其他雜質(zhì)其他雜質(zhì)疊疊峰峰分分離離供試品溶液供試品溶液C收集收集揮干揮干異辛烷溶解異辛烷溶解90、1.5h揮干揮干正己烷正己烷溶解

44、溶解前維生素前維生素D維生素維生素D第三步：用第一法色譜條件按外標(biāo)法計(jì)算含量第三步：用第一法色譜條件按外標(biāo)法計(jì)算含量用第二法時(shí)，前用第二法時(shí)，前 VD峰受雜質(zhì)干擾峰受雜質(zhì)干擾苯并二氫吡喃醇苯并二氫吡喃醇第五節(jié)第五節(jié) 維生素維生素E的分析的分析OHO 一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)（一）結(jié)構(gòu)OR1HOR2CH3名名 稱(chēng)稱(chēng)R1R2相對(duì)活性相對(duì)活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*生物效價(jià) 右旋體 ： 消旋體 = 1.4 ：10（天然品）（天然品）（合成品）（合成品）CH3COOCH3CH3CH3CH3CH3CH3H3CH3COdl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯（二）性質(zhì)（二）性質(zhì)1、溶解性：易溶于有機(jī)溶劑，不溶于水、溶解性：易溶于有機(jī)溶劑，不溶于水4、UV：乙醇溶液中：乙醇溶液中UV284nm2、水解性：酯鍵易水解、水解性：酯鍵易水解 OorOHHVitE醌醌型型化化合合物物生生育育酚酚3、氧化性：無(wú)氧條