水產(chǎn)品中天然毒素及檢驗(yàn)方法

1、水產(chǎn)品天然毒素及其檢測(cè)技術(shù)水產(chǎn)品天然毒素分類(lèi)魚(yú)類(lèi)毒素貝類(lèi)毒素河豚毒素河豚毒素 1.1西加毒素西加毒素 1.2其他等其他等麻痹性毒素麻痹性毒素腹瀉性毒素腹瀉性毒素神經(jīng)性毒素神經(jīng)性毒素失憶性毒素失憶性毒素兩類(lèi)重要水產(chǎn)品天然毒素兩類(lèi)重要水產(chǎn)品天然毒素不夠美觀1.1 河豚毒素河豚毒素 毒素來(lái)源毒素來(lái)源 河豚毒素河豚毒素(TTX)主要存在于魚(yú)綱硬骨魚(yú)亞綱豚形目的近百種河豚魚(yú)和其他生物體內(nèi)近百種河豚魚(yú)和其他生物體內(nèi),是一種生物堿類(lèi)是一種生物堿類(lèi)天然毒素天然毒素。 中毒機(jī)理中毒機(jī)理：河豚毒素阻抑神經(jīng)和肌肉的電信號(hào)傳導(dǎo)，阻止肌肉、神經(jīng)細(xì)胞膜的離子通道，使神經(jīng)末梢及神經(jīng)中樞麻痹，使機(jī)體不能運(yùn)動(dòng)。毒素量大時(shí)，迷走

2、神經(jīng)麻痹，呼吸減慢至停止，迅速死亡。河豚毒素的檢驗(yàn)方法河豚毒素的檢驗(yàn)方法生物檢測(cè)法：小鼠生物檢測(cè)法和組織培養(yǎng)分析法小鼠生物檢測(cè)法和組織培養(yǎng)分析法。儀器檢測(cè)法：熒光檢測(cè)法是檢測(cè)方法之一, 主要是利用河豚毒素加堿水解后生成C9 堿, 該物質(zhì)在特定波長(zhǎng)發(fā)熒光, 從而可進(jìn)行檢測(cè)。薄層層析(TLC)用于河豚毒素的定量測(cè)定。高效液相色譜(HPLC)反相色譜, 用硅膠柱作固定相。免疫檢測(cè)法：主要有單克隆抗體法(McAb)應(yīng)用原理是指在特異性抗原刺激機(jī)體后，產(chǎn)生相應(yīng)抗體。抗原與抗體都是蛋白質(zhì)，抗體為免疫球蛋白。它們之間可以相互識(shí)別，并發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，從而確定是否有毒。盡量用圖解方式表達(dá)1.2 西加毒素西加毒素

3、西加魚(yú)毒西加魚(yú)毒(ciguatera)(ciguatera)是指加勒比海地是指加勒比海地區(qū)除河豚中毒之外的所有魚(yú)肉中毒現(xiàn)象，區(qū)除河豚中毒之外的所有魚(yú)肉中毒現(xiàn)象，它包含它包含雪卡毒素雪卡毒素(CTX)(CTX)、刺尾魚(yú)毒素刺尾魚(yú)毒素(MTX) (MTX) 。 西加西加毒素毒素在魚(yú)的內(nèi)臟中濃度比較高。在魚(yú)的內(nèi)臟中濃度比較高。西加毒素( c iguatox in, CTX)是20世紀(jì)60年代從毒爪哇裸胸鱔肝臟中提取發(fā)現(xiàn)的, 它是深海藻類(lèi)分泌的毒素, 被熱帶或亞熱帶食草性魚(yú)類(lèi)蓄積并在魚(yú)體內(nèi)被氧化而成的一類(lèi)強(qiáng)毒性聚醚類(lèi)毒素, 通過(guò)食物鏈逐級(jí)傳遞和積累, 最終傳遞給人類(lèi)。據(jù)報(bào)道全世界每年至少2萬(wàn)人不同程度

4、的遭受CTX的傷害, 食入0. 1 Lg的CTX 可使一個(gè)成年人致病。CTX中毒最顯著的特征是干冰的感覺(jué)和熱感顛倒, 即當(dāng)觸摸熱的東西會(huì)感覺(jué)冷, 把手放入水中會(huì)有觸電或摸干冰的感覺(jué)。盡量用圖解方式表達(dá)CTX的檢測(cè)方法生物毒性試驗(yàn)( 小白鼠法)方法的原理是對(duì)毒素采用適宜的提取方法, 將樣品中的毒素轉(zhuǎn)移到提取液中; 通過(guò)向固定種系和體重的小白鼠腹腔注射樣品提取液, 記錄小白鼠的存活時(shí)間以計(jì)算樣品毒素的量。高效液相色譜分析(HPLC)方法的原理是利用毒素分子結(jié)構(gòu)上的羥基反應(yīng)生成熒光性物質(zhì), 然后在FLD上檢測(cè), 線性較好, 極限濃度可達(dá)3. 5 ng /kg。細(xì)胞毒性試驗(yàn)( cell bioassa

5、y)細(xì)胞毒性試驗(yàn)是CTX 主要作用于神經(jīng)末梢和中樞神經(jīng)節(jié)利用毒素對(duì)細(xì)胞的毒性來(lái)檢測(cè)毒素的一種技術(shù)。免疫學(xué)測(cè)定法( immunoassays)該方法是利用抗原與抗體專(zhuān)一、特異結(jié)合的特點(diǎn), 從而對(duì)毒素進(jìn)行定性定量的檢測(cè)。盡量用圖解方式表達(dá)2 2 貝類(lèi)毒素貝類(lèi)毒素 定義：貝類(lèi)動(dòng)物因攝取有毒藻類(lèi)而在體內(nèi)積累的毒素。 種類(lèi)：麻痹性貝類(lèi)毒素（PSP）、腹瀉性貝類(lèi)毒素（DSP）、神經(jīng)毒性貝類(lèi)毒素（NSP）、失憶性貝類(lèi)毒素（ASP）。 2.1麻痹性貝類(lèi)毒素（麻痹性貝類(lèi)毒素（PSP） 麻痹性貝類(lèi)毒素專(zhuān)指攝食有毒的渦鞭毛藻,蓮狀原膝溝藻,塔馬爾原膝溝藻被毒化的雙殼貝類(lèi)所產(chǎn)生的生物毒素。 按結(jié)構(gòu)可分為氨甲酰基類(lèi)毒素

6、如石房蛤毒素、新石房蛤毒素、膝溝藻毒素及氨甲酰N磺基類(lèi)毒素?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)示意圖？2.2 腹瀉性毒素（腹瀉性毒素（DSP）腹瀉型貝類(lèi)中毒一般分布于生長(zhǎng)環(huán)境中的浮游生物，特別是赤潮生物鰭藻有關(guān)，在赤潮區(qū)生長(zhǎng)的貝類(lèi)很容易積累腹瀉型貝類(lèi)毒素?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)示意圖？2.3 神經(jīng)性貝類(lèi)毒素（神經(jīng)性貝類(lèi)毒素（NSP）引起人產(chǎn)生以神經(jīng)麻痹為主的中毒癥狀，毒性較低，未見(jiàn)有死亡報(bào)道。神經(jīng)性貝毒分布范圍較小，主要分布在美國(guó)佛羅里達(dá)海岸和墨西哥灣沿岸，以及歐洲和新西蘭。化學(xué)結(jié)構(gòu)示意圖？2.4 記憶缺損貝類(lèi)毒素（記憶缺損貝類(lèi)毒素（ASP）ASP 的主要成分是一種具有生理活性的氨基酸類(lèi)物質(zhì)-軟骨藻酸（Domoic acid，DA）

7、是浮游植物代謝的產(chǎn)物，他能提高鈣離子的滲透性，使細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間處于去極化的興奮狀態(tài)而導(dǎo)致死亡8。ASP 能夠?qū)е骂^暈眼花，短時(shí)期內(nèi)失去記憶力，但在人體內(nèi)的降解速度也快。目前許多國(guó)家對(duì)貝類(lèi)中DA 的控制標(biāo)準(zhǔn)為20 g/g?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)示意圖？貝類(lèi)毒素的檢測(cè)方法一、生物測(cè)定法：小鼠生物測(cè)定法(MBA)、家蠅或蝗蟲(chóng)生物檢驗(yàn)法、細(xì)胞毒性測(cè)試法（也稱(chēng)組織培養(yǎng)分析法）二、物理、化學(xué)檢測(cè)法：HPLC-FDL原理是將PSP毒素分子的環(huán)結(jié)構(gòu)在堿性條件下氧化再酸化生成熒光生色團(tuán)，進(jìn)行熒光檢測(cè)。此外還有液一質(zhì)聯(lián)用技術(shù)、薄層色譜（TLC）法三、免疫檢測(cè)法 免疫學(xué)方法檢測(cè)貝毒的技術(shù)已經(jīng)得到了初步的應(yīng)用，但是免疫技術(shù)和貝毒本身存在的一些問(wèn)題,如產(chǎn)生抗體的交叉反應(yīng)、系列標(biāo)準(zhǔn)毒素的缺乏以及像酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、鈉離子通道受體結(jié)