蛋白質(zhì)與酶工程復(fù)習(xí)資料

1、酶工程復(fù)習(xí)提綱第1章 緒論1. 酶及酶工程的概念。酶：是生物體內(nèi)一類具有催化活性和特殊空間構(gòu)象的生物大分子物質(zhì)。酶工程：利用酶的催化作用，在一定的生物反應(yīng)器中，將相應(yīng)的原料轉(zhuǎn)化成所需產(chǎn)品的一門工程技術(shù)。(名詞解釋)2. 了解酶學(xué)的發(fā)展歷史，尤其是一些關(guān)鍵事件。1833年，Payen和Persoz發(fā)現(xiàn)了淀粉酶。1878年，Kuhne首次將酵母中進(jìn)行乙醇發(fā)酵的物質(zhì)稱為酶。給酶一個(gè)統(tǒng)一的名詞，叫Enzyme，這個(gè)詞來自希臘文，其意思“在酵母中”。1902年，Henri提出中間產(chǎn)物學(xué)說。1913年，Michaelis and Menton推導(dǎo)出酶催化反應(yīng)的基本動(dòng)力學(xué)方程，米氏方程：V=VmS/（Km+

2、S）。1926年，Summer分離純化得到脲酶結(jié)晶。人們開始接受“酶是具有生物催化功能的蛋白質(zhì)”。Cech and Altman于1982和1983年發(fā)現(xiàn)具有催化活性的RNA即核酸類酶，1989年獲諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)?，F(xiàn)已鑒定出5000多種酶，上千種酶已得到結(jié)晶，而且每年都有新酶被發(fā)現(xiàn)。3. 了解酶在醫(yī)藥、食品、輕工業(yè)方面的應(yīng)用。醫(yī)藥：（1）用酶進(jìn)行疾病的診斷：通過酶活力變化進(jìn)行疾病診斷，谷丙轉(zhuǎn)氨酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶用于診斷肝病、心肌梗塞等，酶活力升高；葡萄糖氧化酶用于測(cè)定血糖含量，診斷糖尿病。（2）用酶進(jìn)行疾病的治療：來源于蛋清、細(xì)菌的溶菌酶用于治療各種細(xì)菌性和病毒性疾??；來源于動(dòng)物、蛇、細(xì)菌、酵母等的

3、凝血酶用于治療各種出血??；來源于蚯蚓、尿液、微生物的纖溶酶用于溶血栓。（3）用酶制造各種藥物：來源于微生物的青霉素?；赣糜谥圃彀牒铣汕嗝顾睾皖^孢菌素；來源于動(dòng)物、植物、微生物的蛋白酶用于生產(chǎn)L-氨基酸。食品：生產(chǎn)低聚果糖，原料為蔗糖，所需酶為果糖基轉(zhuǎn)移酶、蔗糖酶（黑曲霉、擔(dān)子菌）；生產(chǎn)低聚異麥芽糖，原料為淀粉，所需酶為-淀粉酶、-淀粉酶、真菌-淀粉酶（米曲霉）、-葡萄糖苷酶（黑曲霉）、普魯蘭酶、糖化型-淀粉酶（枯草桿菌）。輕工業(yè)：用酶進(jìn)行原料處理；用酶生產(chǎn)各種輕工、化工產(chǎn)品；用酶增強(qiáng)產(chǎn)品的使用效果。第2章 酶學(xué)基礎(chǔ)1. 酶的化學(xué)本質(zhì)？酶與其他無機(jī)或者有機(jī)催化劑相比較，具有哪些催化特性？化學(xué)本

4、質(zhì)：生物催化劑。催化特性：（1）高效率：比非催化高1081020倍；比非酶催化高1071013倍，酶催化反應(yīng)的效率之所以高，是由于酶催化反應(yīng)可以使反應(yīng)所需要的活化能顯著降低。（2）高度專一性：相對(duì)專一性、絕對(duì)專一性。相對(duì)專一性：鍵專一性：作用于具有相同化學(xué)鍵的一類底物；基團(tuán)專一性：酶的作用底物含有某一相同的基因。絕對(duì)專一性：一種酶只能催化一種底物進(jìn)行一種反應(yīng)。（3）反應(yīng)條件溫和：一般在常溫、常壓、pH值近乎中性的條件下進(jìn)行。（4）酶催化是可調(diào)控的。2. 解釋酶作用專一性機(jī)制的學(xué)說有哪些？其核心內(nèi)容？（填空）鎖鑰假說：整個(gè)酶分子的天然構(gòu)象是具有剛性結(jié)構(gòu)的，酶表面具有特定的形狀。酶與底物的結(jié)合如同

5、一把鑰匙對(duì)一把鎖一樣。誘導(dǎo)契合假說：酶表面并沒有一種與底物互補(bǔ)的固定形狀，而只是由于底物的誘導(dǎo)才形成了互補(bǔ)性狀。當(dāng)?shù)孜锱c酶接近時(shí)，底物分子可以誘導(dǎo)酶活性中心構(gòu)象發(fā)生改變，使之成為能與底物分子密切結(jié)合的構(gòu)象。3. 解釋酶作用高效性的機(jī)制有哪些？（1）鄰近效應(yīng)與定向作用（2）電子張力作用：應(yīng)變效應(yīng)，底物分子的敏感鍵產(chǎn)生張力或變形（3）多元催化作用。酸堿催化：指通過向反應(yīng)物提供質(zhì)子或從反應(yīng)物奪取質(zhì)子而穩(wěn)定過渡態(tài)、加速反應(yīng)的一類催化機(jī)制。共價(jià)催化：某些酶分子能作為親核催化劑或親電催化劑分別放出或汲取電子而與底物分子形成不穩(wěn)定的共價(jià)中間絡(luò)合物，反應(yīng)活化能降低而加速反應(yīng)，稱為共價(jià)催化。（4）酶活性中心的低

6、介電區(qū)：表面效應(yīng)，微環(huán)境效應(yīng)。4. 什么是酶的活性中心？活性中心的構(gòu)成？活性中心：是指酶分子中直接與底物結(jié)合并完成酶催化反應(yīng)的結(jié)構(gòu)區(qū)域，該部位化學(xué)基團(tuán)集中，并構(gòu)成一定空間構(gòu)象。活性中心的構(gòu)成：結(jié)合中心：與底物結(jié)合的部位，決定酶的專一性；催化中心：促進(jìn)底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的部分，決定酶所催化反應(yīng)的性質(zhì)。5. 酶的一級(jí)結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)和四級(jí)結(jié)構(gòu)的概念，酶的四級(jí)結(jié)構(gòu)與催化功能的關(guān)系？酶的一級(jí)結(jié)構(gòu)：一級(jí)結(jié)構(gòu)是指構(gòu)成酶蛋白的氨基酸組成的一條長(zhǎng)肽鏈或多肽鏈。酶的一級(jí)結(jié)構(gòu)是酶的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)，是催化功能的基礎(chǔ)。酶的二級(jí)結(jié)構(gòu)：二級(jí)結(jié)構(gòu)是指肽鏈骨架相鄰區(qū)段借助氫鍵等沿軸向方向建立的規(guī)則折疊片與螺旋。是所有的酶

7、必須具備的空間結(jié)構(gòu)，是維持酶活性部位所必需的構(gòu)象。酶的三級(jí)結(jié)構(gòu)：三級(jí)結(jié)構(gòu)指在二級(jí)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上肽鏈進(jìn)一步的折疊片與盤繞成二維空間結(jié)構(gòu)，多肽鏈中原來相距較遠(yuǎn)的序列可以集中到一個(gè)區(qū)域內(nèi)。酶的四級(jí)結(jié)構(gòu)：在三級(jí)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上，由幾個(gè)到十?dāng)?shù)個(gè)亞基(或單體)組成的寡聚酶或生物大分子稱為酶的四級(jí)結(jié)構(gòu)。關(guān)系：1、具有四級(jí)結(jié)構(gòu)的酶，其功能可分為兩類：與催化作用有關(guān),與代謝調(diào)節(jié)有關(guān),酶蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)是酶具有催化功能的決定性部分，而高級(jí)結(jié)構(gòu)為酶催化功能所必需部分6. 什么是同工酶，舉例說明？指能催化相同的化學(xué)反應(yīng)，但酶蛋白本身的分子結(jié)構(gòu)組成及理化性質(zhì)不同的一組酶。如：乳酸脫氫酶LDH，可裝配成H4、H3M、H2M2、HM3

8、、M4五種四聚體。7. 根據(jù)酶催化反應(yīng)類型和機(jī)制不同，酶的分類？填空題（1）、氧化還原酶類：催化氧化還原反應(yīng)（2)、轉(zhuǎn)移酶類：催化分子基團(tuán)從一個(gè)分子轉(zhuǎn)移到另一個(gè)分子的反應(yīng)（3）、水解酶類：催化加水分解的反應(yīng)（4）、裂合酶類：雙鍵上去除或加入一個(gè)基團(tuán)的反應(yīng)（5）、異構(gòu)酶類：催化分子間重排的有關(guān)反應(yīng)（6）、連接酶類：催化將兩個(gè)分子連接在一起，并由ATP提供能量的反應(yīng)8. 酶活力及比活力？國(guó)際酶活力單位IU如何定義的？酶活力：在一定條件下，酶所催化的某一化學(xué)反應(yīng)的速度，可用時(shí)間單位內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的增加量來表示。比活力：指在特定條件下，每毫克酶蛋白所具有的酶的活力單位數(shù)。國(guó)際酶活力單位IU：在最

9、適的反應(yīng)條件（溫度25）下，每分鐘內(nèi)催化一微摩爾底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量定為一個(gè)酶活力單位，1IU=1mol/min第3章 酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)1. 酶促反應(yīng)初速度的概念？在研究酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)中，為準(zhǔn)確的表示酶活力，一般都用初速度表示，即酶反應(yīng)初始階段，即底物轉(zhuǎn)化量5%時(shí)的反應(yīng)速度，也就是進(jìn)程曲線的直線部分。2. 中間產(chǎn)物學(xué)說和過渡態(tài)理論？中間產(chǎn)物學(xué)說：酶的中間產(chǎn)物學(xué)說是由Brown（1902）和Henri（1903）提出的。其學(xué)說主要認(rèn)為酶的高效催化效率是由于酶首先與底物結(jié)合，生成不穩(wěn)定的中間產(chǎn)物（又稱中心復(fù)合物central complex）。然后分解為反應(yīng)產(chǎn)物而釋放出酶。在酶促反應(yīng)中，酶首先和底物

10、結(jié)合成不穩(wěn)定的中間配合物（ES），然后再生成產(chǎn)物（P），并釋放出酶。反應(yīng)式為S+E=ESE+P，這里S代表底物，E代表酶，ES為中間產(chǎn)物，P為反應(yīng)的產(chǎn)物過渡態(tài)理論：過渡態(tài)理論即活化絡(luò)合物理論，（transition-state theory）。過渡態(tài)：以量子力學(xué)對(duì)反應(yīng)過程中的能量變化的研究為依據(jù)，認(rèn)為從反應(yīng)物到生成物之間形成了勢(shì)能較高的活化絡(luò)合物，活化絡(luò)合物所處的狀態(tài)叫過渡態(tài)。過渡態(tài)理論是1935年由A.G.埃文斯和M.波拉尼提出的，研究有機(jī)反應(yīng)中由反應(yīng)物到產(chǎn)物的過程中過渡態(tài)的理論。3. 米氏方程的動(dòng)力學(xué)描述形式，Km,Vmax的動(dòng)力學(xué)參數(shù)意義。（3,4題合成一個(gè)大題）V=VmaxS/（Km+

11、S）意義：（1）當(dāng)v=Vmax/2時(shí)，Km=S。因此，Km等于酶促反應(yīng)速度達(dá)最大值一半時(shí)的底物濃度，它的單位是摩爾/升。（2）Km可以反應(yīng)酶與底物親和力的大小。Km越小，酶與底物親和力越大。（3）可用于判斷反應(yīng)級(jí)數(shù)：當(dāng)S0.01Km時(shí)，反應(yīng)為一級(jí)反應(yīng)；當(dāng)S100Km時(shí)，v=Vmax，反應(yīng)為零級(jí)反應(yīng)；當(dāng)0.01KmS100Km時(shí)，為混合級(jí)反應(yīng)。（4）Km是酶的特征性常數(shù)：在一定條件下，某種酶的Km值是恒定的，因而可以通過測(cè)定不同酶（特別是一組同工酶）的Km值，來判斷是否為不同的酶。（5）Km可用來判斷酶的最適底物：當(dāng)酶有幾種不同的底物存在時(shí)，通過測(cè)定酶在不同底物存在時(shí)的Km值，Km值最小者，即為

12、該酶的最適底物。（6）可用來確定酶活性測(cè)定時(shí)所需的底物濃度：當(dāng)S=10Km時(shí)，v=91%Vmax，認(rèn)為此時(shí)為最合適的測(cè)定酶活性所需的底物濃度。4. 如何測(cè)定Km,Vmax ? Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖法的動(dòng)力學(xué)表述形式。 5. 酶激活劑的概念？激活劑的種類？酶的激活劑：凡能提高酶的活性，加速酶促反應(yīng)進(jìn)行的物質(zhì)都稱為激活劑或活化劑。種類（按分子大小分類）：（1）無機(jī)離子：無機(jī)陽離子金屬離子（如鈉離子、鉀離子、鎂離子等）；無機(jī)陰離子（如氯離子、溴離子等）；氫離子。（2）中等大小的有機(jī)分子：某些還原劑，如半胱氨酸、巰基乙醇、抗壞血酸，作用機(jī)制是使酶中的二硫鍵還原成巰基，從而

13、提高酶活性或與底物、酶或ES復(fù)合；EDTA（乙二胺四乙酸），作用機(jī)制是金屬螯合劑，解除重金屬離子對(duì)酶的抑制作用。（3）具有蛋白質(zhì)性質(zhì)的大分子物質(zhì)（如酶原激活）。第4章 酶反應(yīng)器1. 酶反應(yīng)器的定義？用于酶進(jìn)行催化反應(yīng)的容器及其附屬設(shè)備稱為酶反應(yīng)器。2. 按結(jié)構(gòu)區(qū)分，常見的酶反應(yīng)器類型、定義及其特點(diǎn)？（類型有哪些以及填充式反應(yīng)器的定義）大題定義特點(diǎn)攪拌罐式反應(yīng)器：又稱為批量反應(yīng)器、間歇式攪拌罐。由容器、攪拌器及保溫裝置組成，底物與酶一次性投入反應(yīng)器內(nèi)，產(chǎn)物一次性取出，反應(yīng)完成之后，酶（細(xì)胞）用過濾法或超濾法回收，再轉(zhuǎn)入下一批反應(yīng)的一類反應(yīng)器。反應(yīng)比較完全，反應(yīng)條件比較容易調(diào)節(jié)控制填充床式反應(yīng)器：

14、將固定化酶填充于反應(yīng)器內(nèi)，制成穩(wěn)定的柱床，然后，通入底物溶液，在一定的條件下實(shí)現(xiàn)酶催化反應(yīng)，以一定的流速，收集輸出的轉(zhuǎn)化液（含產(chǎn)物）密度大，可以提高酶催化反應(yīng)的速度。在工業(yè)生產(chǎn)中普遍使用。流化床式反應(yīng)器：將底物溶液以足夠大的流速，從反應(yīng)器底部向上通過固定化酶柱床，使固定化酶顆粒始終處于流化狀態(tài)，使反應(yīng)液的混合程度介于全混型和平推流型之間。即可用于處理黏度較大和含有固體顆粒的底物溶度，同時(shí)亦可用于需要供氣體或排放氣體（即固、液、氣三相反應(yīng)）的酶反應(yīng)器稱為流化床式反應(yīng)器混合均勻，傳質(zhì)和傳熱效果好，溫度和PH值的調(diào)節(jié)控制比較容易，不易堵塞，對(duì)粘度較大反應(yīng)液也可進(jìn)行催化反應(yīng)鼓泡式反應(yīng)器：是利用從反應(yīng)器

15、底部通入的氣體產(chǎn)生的大量氣泡，在上升過程中起到提供反應(yīng)底物和混合兩種作用的一類反應(yīng)器。也是一種無攪拌裝置的反應(yīng)器。結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，操作容易，剪切力小，混合效果好，傳質(zhì)、傳熱效率高，適合于有氣體參與的反應(yīng)。膜反應(yīng)器：是一種將酶催化反應(yīng)與半透膜的分離作用組合在一起而成的反應(yīng)器，可以用于游離酶的催化反應(yīng)，也可以用于固定化酶的催化反應(yīng)。清洗比較困難噴射式反應(yīng)器通入高壓噴射蒸汽，實(shí)現(xiàn)酶與底物的混合，進(jìn)行高溫短時(shí)催化反應(yīng)，適用于某些耐高溫酶的一類反應(yīng)器稱為噴射式反應(yīng)器。通入高壓噴射蒸汽，實(shí)現(xiàn)酶與底物的混合，進(jìn)行高溫短時(shí)催化反應(yīng)適用于某些耐高溫酶的反應(yīng)3. 選擇和使用酶反應(yīng)器時(shí)，要考慮哪些因素？（1） 所用生物催

16、化劑應(yīng)具有較高的比活和酶濃度（或細(xì)胞濃度），才能得到較大的產(chǎn)品轉(zhuǎn)化率。（2） 能用電腦自動(dòng)檢測(cè)和調(diào)控，從而獲得最佳的反應(yīng)條件。（3） 應(yīng)具有良好的傳質(zhì)和混合性能。傳質(zhì)是指底物和產(chǎn)物在反應(yīng)介質(zhì)中的傳遞。傳質(zhì)阻力是反應(yīng)器速度限制的主要因素。（4） 應(yīng)具有最佳的無菌條件，否則，雜菌污染使反應(yīng)器的生產(chǎn)能力下降。第5章 酶的生產(chǎn)1. 酶的生產(chǎn)方法有哪些，各自特點(diǎn)如何？提取分離法：采用各種提取、分離純化技術(shù)從動(dòng)物、植物的組織、器官、細(xì)胞或微生物細(xì)胞中將酶提取出來，再進(jìn)行分離純化的過程。特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便；缺點(diǎn)是易受影響、工藝路線復(fù)雜。生物合成：利用微生物細(xì)胞、植物細(xì)胞或動(dòng)物細(xì)胞的生命活動(dòng)而獲得

17、人們所需酶的技術(shù)過程。特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)是生產(chǎn)周期短、產(chǎn)率高、不受外界條件影響；缺點(diǎn)是設(shè)備及工藝要求高、生產(chǎn)過程需嚴(yán)格控制?；瘜W(xué)合成：特點(diǎn)是原料單體純度要求高、只可合成已知化學(xué)結(jié)構(gòu)的酶。2. 什么是組成型酶和調(diào)節(jié)型酶？組成型酶：生物細(xì)胞中合成的酶的量比較恒定，環(huán)境對(duì)這些酶的合成速率影響不大。如DNA聚合酶、RNA聚合酶、糖酵解途徑的各種酶等。調(diào)節(jié)型酶：生物細(xì)胞中合成的酶的含量變化很大，其合成速率明顯受到環(huán)境因素的影響。如大腸桿菌半乳糖苷酶。3. 什么是酶的誘導(dǎo)？什么是酶的阻遏？什么實(shí)驗(yàn)證明了這兩種現(xiàn)象？酶的誘導(dǎo)：某些代謝物可以誘導(dǎo)某些酶的合成，是通過促進(jìn)為該酶編碼的基因的表達(dá)而進(jìn)行的，這種現(xiàn)象叫做酶合

18、成的誘導(dǎo)。（名詞解釋）證明實(shí)驗(yàn)：分解利用乳糖的酶有：半乳糖苷酶、半乳糖苷透過酶、硫代半乳糖苷轉(zhuǎn)乙酰酶。（1） 大腸桿菌生長(zhǎng)在葡萄糖培養(yǎng)基上時(shí)，細(xì)胞內(nèi)無上述三種酶合成；（2） 大腸桿菌生長(zhǎng)在唯一碳源乳糖培養(yǎng)基上時(shí)，細(xì)胞內(nèi)有上述三種酶合成；當(dāng)換成葡萄糖培養(yǎng)基時(shí)，三種酶基本消失；（3） 表明菌體生物合成的經(jīng)濟(jì)原則：需要時(shí)才合成。酶的阻遏：某些代謝物可以阻止某些酶的合成，是通過阻止為該酶編碼的基因的表達(dá)而進(jìn)行的，這種現(xiàn)象叫做酶合成的阻遏。證明實(shí)驗(yàn)：（1）大腸桿菌生長(zhǎng)在無機(jī)鹽和葡萄糖的培養(yǎng)基上時(shí)，檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)有色氨酸合成酶的存在；（2）在上述培養(yǎng)基中加入色氨酸，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)色氨酸合成酶的活性降低，直至

19、消失；（3）表明色氨酸的存在組織了色氨酸合成酶的合成，體現(xiàn)了菌生長(zhǎng)的經(jīng)濟(jì)原則：不需要就不合成。4. 微生物生產(chǎn)酶的優(yōu)點(diǎn)，產(chǎn)酶微生物的基本要求？?jī)?yōu)點(diǎn)：微生物種類繁多：產(chǎn)酶微生物多；一種微生物產(chǎn)好幾種酶；微生物繁殖快、生產(chǎn)周期短、培養(yǎng)方便；微生物易改造，可通過各種手段培育新種?；疽螅翰皇侵虏【踩煽?，無毒性；發(fā)酵周期短，產(chǎn)酶量高；不易變異退化；最好是產(chǎn)生胞外酶的菌種，利于分離純化。5. 可以通過哪些途徑獲得產(chǎn)酶微生物從自然界中搜尋所需要的產(chǎn)酶微生物；從菌種保藏中心篩選；從基因庫篩選6. 微生物發(fā)酵產(chǎn)酶的培養(yǎng)方式有哪些？固體發(fā)酵的培養(yǎng)：以麩皮、米糠為主要原料，加入其他必要的營(yíng)養(yǎng)成分，制成固體

20、或半固體的麩曲后，進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)酶。液體深層發(fā)酵：采用液體培養(yǎng)基，經(jīng)滅菌、冷卻后接種產(chǎn)酶菌，在一定條件下發(fā)酵產(chǎn)酶。固定化細(xì)胞發(fā)酵：將細(xì)胞固定在水不溶性的載體上，在一定的空間范圍內(nèi)進(jìn)行生命活動(dòng)而產(chǎn)酶。固定化原生質(zhì)體發(fā)酵：利于胞內(nèi)物質(zhì)透過細(xì)胞膜分泌到細(xì)胞外。7. 分析提高微生物產(chǎn)酶量的方法有哪些？（1）針對(duì)性地打破生物細(xì)胞內(nèi)酶蛋白的合成機(jī)制，可從兩方面入手：條件控制：發(fā)酵條件優(yōu)化：控制溫度、PH，優(yōu)化培養(yǎng)基，根據(jù)需求供給無菌空氣，掌控發(fā)酵周期，確定放罐時(shí)間，避免自溶。采用添加誘導(dǎo)物、解除阻遏物、流加等技術(shù)提高產(chǎn)酶量。（2）遺傳控制：包括基因突變和基因重組。8. 什么是基因重組？構(gòu)建基因工程菌的一般流程

21、是什么？根據(jù)人們預(yù)先設(shè)想，利用酶學(xué)的方法，將目的基因重組到一個(gè)適宜的載體上，組成重組子，將重組子轉(zhuǎn)化到適當(dāng)受體細(xì)胞中進(jìn)行擴(kuò)增表達(dá)，以達(dá)到改造生物細(xì)胞目的的技術(shù)。流程：目的基因片段的產(chǎn)生和分離；目的基因片段共價(jià)連接到載體上，即體外重組；體外重組的雜合分子轉(zhuǎn)入合適的宿主；篩選和檢測(cè)。9. 設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案從自然環(huán)境中篩選獲得一株產(chǎn)-淀粉酶的微生物，并獲取其編碼-淀粉酶的基因。簡(jiǎn)述該實(shí)驗(yàn)方案的基本原理，并描述實(shí)驗(yàn)流程。PCR擴(kuò)增后測(cè)序獲得基因序列第6章 酶的分離純化1. 酶提取、分離純化的一般技術(shù)路線。2. 細(xì)胞破碎的方法及其原理。填空機(jī)械破碎通過機(jī)械運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的剪切力，使組織、細(xì)胞破碎。搗碎法、研磨

22、法、勻漿法；物理破碎通過各種物理因素的作用，使組織、細(xì)胞的外層結(jié)構(gòu)破壞，而使細(xì)胞破碎。溫度差破碎法、壓力差破碎法、超聲波破碎法；化學(xué)破碎通過各種化學(xué)試劑對(duì)細(xì)胞膜的作用，而使細(xì)胞破碎。有機(jī)溶劑：甲苯、丙酮、丁醇、氯仿，表面活性劑：Triton、Tween；酶促破碎通過細(xì)胞本身的酶系或外加酶制劑的催化作用，使細(xì)胞外層結(jié)構(gòu)受到破壞，而達(dá)到細(xì)胞破碎。自溶法、外加酶制劑法。3. 什么是鹽溶？什么是鹽析？鹽溶現(xiàn)象：大多數(shù)蛋白類酶都溶于水，而且在低濃度的鹽存在的條件下，酶的溶解度隨鹽濃度的升高而增加，稱為鹽溶現(xiàn)象。鹽析：在鹽濃度達(dá)到某一界限后，酶的溶解度隨鹽濃度升高而降低，這稱為鹽析現(xiàn)象。4. 酶沉淀分離的

23、方法有哪些？鹽析沉淀、等電點(diǎn)沉淀、有機(jī)溶劑沉淀的原理。大題鹽析沉淀法、等電點(diǎn)沉淀法、有機(jī)溶劑沉淀法、復(fù)合沉淀法、選擇性變性沉淀法。鹽析沉淀原理：利用不同蛋白質(zhì)在不同的鹽濃度條件下溶解度不同的特性，通過在酶液中添加一定濃度的中性鹽，使酶或雜質(zhì)從溶液中析出沉淀，從而使酶與雜質(zhì)分離。等電點(diǎn)沉淀法原理：利用兩性電解質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最低，以及不同的兩性電解質(zhì)有不同的等電點(diǎn)這一特性，通過調(diào)節(jié)溶液的pH值，使酶或雜質(zhì)沉淀析出，從而使酶與雜質(zhì)分離。有機(jī)溶劑沉淀原理：利用酶與其他雜質(zhì)在有機(jī)溶劑中的溶解度不同，通過添加一定量的某種有機(jī)溶劑，使酶或雜質(zhì)沉淀析出，從而使酶與雜質(zhì)分離。5. 什么是膜分離？膜分離的基本

24、類型和截留的主要物質(zhì)。膜分離：借助于一定孔徑的高分子薄膜，將不同大小、不同形狀和不同特性的物質(zhì)顆?；蚍肿舆M(jìn)行分離的技術(shù)稱為膜分離技術(shù)。基本類型：（1）加壓膜分離：微濾、超濾、反滲透；微濾截留物質(zhì)為尺寸大于0.1-10m的微生物和微粒子，超濾截留物質(zhì)為分子量在500以上的高分子，反滲透截留物質(zhì)為小分子物質(zhì)。（2）電場(chǎng)膜分離：電滲析、離子交換膜電滲析；陽膜截留陰離子，陰膜截留陽離子。（3）擴(kuò)散膜分離：透析。截留物質(zhì)為大分子溶質(zhì)。6. 什么是吸附層析？分配層析？離子交換層析？凝膠層析？親和層析？層析聚焦？各自的分離依據(jù)？吸附層析：利用吸附劑對(duì)不同物質(zhì)的吸附力不同而使混合物中各組分分離。分配層析：利用

25、各組分在兩相中的分配系數(shù)不同，而使各組分分離的方法。離子交換層析：利用離子交換劑上的可解離基團(tuán)（活性基團(tuán)）對(duì)各種離子的親和力不同而達(dá)到物質(zhì)分離。凝膠層析：以各種多空凝膠為固定相，利用流動(dòng)相中所含各組分的相對(duì)分子質(zhì)量不同而達(dá)到物質(zhì)分離。親和層析：利用生物分子與配基之間所具有的專一而又可逆的親和力，是生物分子分離純化。層析聚焦：將酶等兩性物質(zhì)的等電點(diǎn)特性與離子交換層析的特性結(jié)合在一起，實(shí)現(xiàn)組分分離。7. 對(duì)于某種酶制劑，如-淀粉酶，如何檢查其是否達(dá)到預(yù)期純化的精度要求？計(jì)算酶活力和比活力、回收率、提純倍數(shù)。回收率：提純前與提純后酶的總活力之比，表示提純過程中酶損失程度大小?；厥章试礁邠p失越小提純倍

26、數(shù)：提純前后比活力之比，這是表示提純過程中純度提高的倍數(shù)。提純倍數(shù)越大，表示該方法純化效果越好。第7章 固定化酶和細(xì)胞1. 酶固定化是為了克服游離酶應(yīng)用過程中的哪些缺點(diǎn)？（1） 酶的穩(wěn)定性較差：除了某些耐高溫的酶，以及胃蛋白酶等可以耐受較低的pH條件以外，大多數(shù)的酶在高溫、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和重金屬離子等外界因素影響下，都容易變性失活。（2） 酶的一次性使用：酶一般都是在溶液中與底物反應(yīng)，酶在反應(yīng)系統(tǒng)中與底物和產(chǎn)物混在一起，反應(yīng)結(jié)束后，即使酶仍有很高的活力，也難于回收利用。這種一次性使用酶的方式，不僅使生產(chǎn)成本提高，而且難于連續(xù)化生產(chǎn)。（3） 產(chǎn)物的分離純化較困難：酶反應(yīng)后成為雜質(zhì)與產(chǎn)物混合在一起，無

27、疑給產(chǎn)物的進(jìn)一步分離純化帶來一定的困難。2. 什么是固定化酶？固定化酶的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)？ 固定化酶：在一定空間內(nèi)呈閉鎖狀態(tài)的酶，能連續(xù)的進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)后的酶可以回收重復(fù)利用。優(yōu)點(diǎn)：（1）不溶于水，易于與產(chǎn)物分離；（2）可反復(fù)使用；（3）可連續(xù)化生產(chǎn)；（4）穩(wěn)定性好。缺點(diǎn)：（1）固定化過程中往往會(huì)引起酶的失活；（2）首次制備成本較高；（3）適用于可溶性底物，尤其可溶性小分子底物，對(duì)大分子不適宜。3. 酶固定化有哪些方法，優(yōu)缺點(diǎn)？（1）非化學(xué)結(jié)合法：物理吸附法：利用各種固體吸附劑將酶或含酶菌體吸附在其表面上，而使酶固定化的方法。優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，條件溫和，不會(huì)引起酶變性失活，載體廉價(jià)易得，而且可以反復(fù)使

28、用。缺點(diǎn)是由于靠非化學(xué)吸附作用，結(jié)合力較弱，酶與載體結(jié)合不牢固而容易脫落，所以使用受到一定的限制。離子結(jié)合法：通過離子鍵使酶與載體結(jié)合的固定化方法。優(yōu)點(diǎn)是條件溫和，操作簡(jiǎn)單，制備過程中，活力損失較少。缺點(diǎn)是離子鍵結(jié)合力較弱，結(jié)合力不牢固，在pH和離子強(qiáng)度等條件改變時(shí)，酶容易脫落。（2）化學(xué)結(jié)合法：交聯(lián)法：借助雙功能試劑使酶分子之間發(fā)生交聯(lián)作用，制成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的固定化酶的方法稱為交聯(lián)法。優(yōu)點(diǎn)是結(jié)合牢固，可長(zhǎng)時(shí)間使用。缺點(diǎn)是交聯(lián)反應(yīng)條件較劇烈，酶分子多個(gè)基團(tuán)被交聯(lián)，酶活力損失較大；顆粒較小，使用不便。共價(jià)結(jié)合法：通過共價(jià)鍵將酶蛋白分子上的反應(yīng)集團(tuán)與載體表面反應(yīng)基團(tuán)結(jié)合，從而使酶固定化的方法。優(yōu)點(diǎn)是結(jié)

29、合牢固，固定化酶的穩(wěn)定性好，利于連續(xù)使用，不會(huì)因?yàn)榉磻?yīng)條件等原因輕易脫落。缺點(diǎn)是反應(yīng)條件苛刻，操作復(fù)雜；引起高級(jí)結(jié)構(gòu)變化，破壞活性中心，不易得到比活力高的固定化酶，酶活回收率較低；底物專一性會(huì)發(fā)生變化。（3）包埋法：將酶或含酶菌體包埋在各種多孔載體中，使酶固定化的方法稱為包埋法。優(yōu)點(diǎn)是不與酶蛋白氨基酸殘基結(jié)合，很少改變酶結(jié)構(gòu)，酶活回收率高。缺點(diǎn)是包埋時(shí)化學(xué)聚合反應(yīng)，易導(dǎo)致失活，只適用于小分子底物和產(chǎn)物體系。4. 與游離酶相比較，固定化酶的性質(zhì)有哪些變化？（1） 酶活性的影響：酶活性下降，反應(yīng)速率下降；（2） 酶穩(wěn)定性的影響：操作穩(wěn)定性提高，貯存穩(wěn)定性比游離酶大多數(shù)提高，熱穩(wěn)定性大多數(shù)提高但有些

30、反而降低，對(duì)分解酶的穩(wěn)定性提高，pH穩(wěn)定性提高明顯優(yōu)于游離酶，對(duì)有機(jī)溶劑的穩(wěn)定性提高；（3） pH的變化：改變酶的空間構(gòu)象，影響酶的催化基團(tuán)的解離，影響酶的結(jié)合基團(tuán)的解離，改變底物的解離狀態(tài)（酶與底物不能結(jié)合或結(jié)合后不能生成產(chǎn)物）；（4） 最適溫度變化：隨熱穩(wěn)定性的提高，最適溫度隨之提高，少數(shù)例外最適溫度下降，活性或其他因素會(huì)改善；（5） 底物特異性變化：專一性會(huì)發(fā)生不同程度的變化，作用于小分子底物的酶特異性沒有明顯變化，既可作用于小分子底物又可作用于大分子底物的酶特異性往往會(huì)變化；（6） 米氏常數(shù)Km的變化，Km值隨載體性質(zhì)變化：Km升高，酶與底物的親和力降低，帶電載體與底物之間的靜電作用會(huì)

31、引起底物分子在擴(kuò)散層和整個(gè)溶液之間不均一分布。5. 什么是固定化細(xì)胞？什么是固定化原生質(zhì)體？固定化細(xì)胞：固定在載體上并在一定的空間范圍內(nèi)進(jìn)行生命活動(dòng)的細(xì)胞，該細(xì)胞能進(jìn)行正常的生長(zhǎng)、繁殖和新陳代謝。固定化原生質(zhì)體：細(xì)胞產(chǎn)生的許多代謝物不能分泌到胞外，細(xì)胞壁對(duì)物質(zhì)擴(kuò)散的障礙是其原因之一。除去微生物和植物細(xì)胞的細(xì)胞壁，就可以增加細(xì)胞膜的透過性，從而使較多的胞內(nèi)物質(zhì)分泌到細(xì)胞外，這個(gè)過程稱為固定化原生質(zhì)體。6. 任意選擇一種酶固定化方法，設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案制備固定化-淀粉酶。（最后大題，要求寫兩種方案）第8章 酶的修飾與改造1. 酶分子修飾的概念及其意義？通過各種方法使酶分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變，從而改變

32、酶的某些特性和功能的技術(shù)過程稱為酶分子修飾。意義：提高酶的活力；增強(qiáng)酶的穩(wěn)定性；降低或消除酶的抗原性；研究和了解酶分子中主鏈、側(cè)鏈、組成單位、金屬離子和各種物理因素對(duì)酶分子空間構(gòu)象的影響。2. 酶分子修飾的方法有哪些，原理及優(yōu)缺點(diǎn)？原理優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)金屬離子置換修飾把酶分子中的金屬離子換成另一種金屬離子，使酶的特性和功能發(fā)生改變闡明金屬離子對(duì)酶催化作用的影響；提高酶活力；增強(qiáng)酶穩(wěn)定性；改變酶的動(dòng)力學(xué)性質(zhì)只適用于在分子結(jié)構(gòu)中本來含有金屬離子的酶大分子結(jié)合修飾利用水溶性大分子與酶結(jié)合，使酶的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些精細(xì)的改變，從而改變酶的特性與功能提高酶活力；增強(qiáng)酶穩(wěn)定性；降低或消除酶蛋白抗原性需要選擇適宜的水

33、溶性大分子作為修飾劑，而且須經(jīng)過活化側(cè)鏈基團(tuán)修飾采用一定的方法（一般為化學(xué)法）使酶蛋白的側(cè)鏈基團(tuán)發(fā)生改變，從而改變酶分子的特性與功能可用于研究酶的結(jié)構(gòu)和功能；可提高酶活力，增強(qiáng)酶穩(wěn)定性和降低抗原性；可獲得自然界不存在的新酶種會(huì)引起酶蛋白空間構(gòu)象的改變肽鏈有限水解修飾利用酶分子主鏈的切斷和連接，使酶分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變，從而改變酶的特性與功能探測(cè)酶活性中心位置；使原來不具活力的酶原顯示活性；提高酶活力；某些藥用酶可消除抗原性會(huì)引起酶蛋白空間構(gòu)象的改變，需要專一性較高的修飾劑氨基酸置換修飾將肽鏈上的氨基酸換成另一個(gè)氨基酸，從而改變酶的特性和功能提高酶活力；增強(qiáng)酶穩(wěn)定性；使酶專一性

34、發(fā)生改變難度大，成本高，專一性差，逐個(gè)對(duì)酶分子進(jìn)行修飾操作復(fù)雜，難以工業(yè)化生產(chǎn)酶分子物理修飾在不同物理?xiàng)l件下，不改變酶的組成單位及其基團(tuán)，共價(jià)鍵不發(fā)生改變，只有副鍵發(fā)生某些變化和重排，來觀察了解酶特性和功能的變化情況可以了解不同物理?xiàng)l件下由于酶分子空間構(gòu)象的改變而引起酶的特性和功能改變情況；提高酶的催化活性、增加酶穩(wěn)定性或使酶催化動(dòng)力學(xué)發(fā)生改變共價(jià)鍵不改變3.什么是酶原激活？舉一個(gè)例子說明酶蛋白的主鏈修飾(肽鏈有限水解修飾)？某些酶在細(xì)胞內(nèi)合成或初分泌時(shí)沒有活性，這些沒有活性的酶的前身稱為酶原,使酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚悦傅淖饔梅Q為酶原激活。4.與天然酶比較，酶分子修飾后性質(zhì)發(fā)生了哪些變化.？熱穩(wěn)定性

35、：一般來說，熱穩(wěn)定性有較大的提高?？乖裕罕容^公認(rèn)的是PEG和人血清蛋白在消除酶的抗原性上效果比較明顯。各類失活因子的抵抗力：修飾酶對(duì)蛋白酶、抑制劑均有一定的抵抗能力，從而提高其穩(wěn)定性。半衰期：一般在體內(nèi)的半衰期得到有效延長(zhǎng)。最適PH：大部分酶經(jīng)化學(xué)修飾后，酶的最適PH更接近于生理環(huán)境，在臨床應(yīng)用上有較大意義。Km的變化：大多數(shù)酶經(jīng)修飾后，Vm沒有明顯變化，但有些酶經(jīng)修飾后，Km值變大。5.什么是酶的體外定向進(jìn)化，原理及一般流程。酶的體外定向進(jìn)化，又稱實(shí)驗(yàn)分子進(jìn)化，屬于蛋白質(zhì)的非合理設(shè)計(jì)，它不需事先了解酶的空間結(jié)構(gòu)和催化機(jī)制，通過人為的創(chuàng)造特殊的條件，模擬自然進(jìn)化機(jī)制（隨機(jī)突變、重組和自然選擇

36、），在體外改造酶基因，并定向選擇出所需性質(zhì)的突變酶。原理：在待進(jìn)化酶基因的PCR擴(kuò)增反應(yīng)中，利用TaqDNA聚合酶不具有3->5校對(duì)功能的性質(zhì)，配合適當(dāng)條件，以很低的比率向目的基因中隨機(jī)引入突變，構(gòu)建突變庫，憑借定向的選擇方法，選出所需性質(zhì)的優(yōu)化酶（或蛋白質(zhì)）。從而排除其他突變體。流程：1基因的選擇：選擇編碼所需蛋白質(zhì)的DNA序列 2突變或重組：通過易錯(cuò)PCR引入隨即突變或DNA Shuffling等方法增加基因序列的多樣性。 3突變基因文庫的構(gòu)建：將獲得的突變重組基因插入到表達(dá)載體中的構(gòu)建突變庫。4突變體酶的表達(dá)：將載體轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞表達(dá)變異酶。5目的基因鑒定：利用篩選和選擇方法確定有益

37、的特性克隆。6分離改良基因并重復(fù)上述過程，直至獲得所需性質(zhì)的蛋白質(zhì)。6.酶體外定向進(jìn)化過程中產(chǎn)生隨機(jī)突變的策略有哪些？什么是易錯(cuò)PCR？策略：易錯(cuò)PCR，DNA改組，外顯子改組，雜合酶，PCR體外隨機(jī)引發(fā)重組，交錯(cuò)延伸，隨機(jī)定向突變。易錯(cuò)PCR是在采用Taq酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，通過調(diào)整反應(yīng)條件，如提高M(jìn)g2+濃度，加入Mn2+，改變體系中四種dNTP的濃度等，然后選擇或篩選需要的突變體。第9章 酶的非水相催化1. 酶非水相催化的類型有哪些？有機(jī)介質(zhì)中的酶催化；氣相介質(zhì)中的酶催化；超臨界介質(zhì)中的酶催化；離子液介質(zhì)中的酶催化2. 有機(jī)溶劑介導(dǎo)的非水相生物催化體系的類型？非極性有機(jī)溶劑酶懸浮

38、體系（微水介質(zhì)體系）；與水互溶的有機(jī)溶劑水單相體系；非極性有機(jī)溶劑誰兩相/多相體系3. 什么是必需水？維持酶分子完整的空間構(gòu)象所必須的最低水量稱為必須水。4. 有機(jī)介質(zhì)酶催化反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn)。（大題）1酶在有機(jī)介質(zhì)中由于水分子減少，相對(duì)來說酶分子的構(gòu)象表現(xiàn)出比水溶液中更具有“剛性”特點(diǎn)。因而使通過選擇不同性質(zhì)的溶劑來調(diào)控酶的某些特性成為可能。 2由于引起沒變形的許多因素都與水的存在有關(guān)，因此在有機(jī)介質(zhì)中酶的穩(wěn)定性得到顯著提高。 3由于有機(jī)溶劑的存在，水量減少，大大降低了許多需要水參與的副反應(yīng)，如酸酐的水解，?；D(zhuǎn)移等。 4在有機(jī)介質(zhì)中進(jìn)行的酶促反應(yīng)，可以省略產(chǎn)物的萃取分離過程，提高收率。5. 舉例說

39、明有機(jī)介質(zhì)中酶催化反應(yīng)的具體應(yīng)用。第10章 酶抑制劑1. 什么是酶失活作用？什么是酶抑制作用？什么是酶去激活作用？失活作用是指由于一些物理因素或化學(xué)試劑部分或全部破壞了酶的三維結(jié)構(gòu)，即引起酶蛋白變性，導(dǎo)致部分或全部喪失活性。抑制作用指一些化合物能夠與酶的必需基團(tuán)結(jié)合，改變必需基團(tuán)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，酶未發(fā)生變性，從而引起酶活性的下降，甚至使酶的活性完全喪失。去激活作用：某些酶只有在金屬離子存在下才有活性，去除金屬離子也會(huì)引起這些酶活性的降低或喪失，去激活作用通過去除金屬離子而間接地影響酶的活性。當(dāng)金屬離子去除后，底物與酶的結(jié)合減少，實(shí)際上是降低了底物的有效濃度。2. 什么是不可逆抑制劑？什么是可逆抑

40、制劑？如何區(qū)分這兩種抑制類型？不可逆抑制劑:抑制劑與酶的必需基團(tuán)以共價(jià)形式結(jié)合，引起酶活性喪失。不能用透析、超濾等物理方法解除抑制而使酶恢復(fù)活性?？赡嬉种苿阂种苿┡c酶蛋白以非共價(jià)方式結(jié)合，引起酶活性暫時(shí)性喪失。抑制劑可以通過透析等方法被除去，并且能部分或全部恢復(fù)酶的活性。區(qū)分：1物理方法：用透析、超濾和凝膠過濾等方法是否能除去抑制劑來鑒別可逆抑制作用和不可逆抑制作用。 2動(dòng)力學(xué)方法：在測(cè)定酶活力系統(tǒng)中加入一定量的抑制劑，測(cè)定酶反應(yīng)的初速度，以初速度和酶濃度作圖區(qū)別。3. 什么是競(jìng)爭(zhēng)性抑制、非競(jìng)爭(zhēng)性抑制、反競(jìng)爭(zhēng)性抑制？各自的特點(diǎn)？競(jìng)爭(zhēng)性抑制：某些抑制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)與底物相似，因而能與底物競(jìng)爭(zhēng)與酶

41、活性中心結(jié)合，當(dāng)抑制劑與活性中心結(jié)合后，底物被排斥在反應(yīng)中心之外，其結(jié)果是酶促反應(yīng)被抑制。特點(diǎn)：1競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑多是酶的底物類似物或反應(yīng)產(chǎn)物；2抑制劑與底物競(jìng)爭(zhēng)與酶結(jié)合，多于酶的活性中心同底物結(jié)合的基團(tuán)結(jié)合；3底物濃度增加時(shí)，抑制作用減弱，取決于底物濃度與抑制劑濃度的比例及其與酶的親和力的大小，可通過增加底物濃度的方法消除抑制作用；4動(dòng)力學(xué)參數(shù)：Km值增大，Vm值不變。非競(jìng)爭(zhēng)性抑制：酶可同時(shí)與底物及抑制劑結(jié)合，引起酶分子構(gòu)象變化，并導(dǎo)致酶活性下降。由于這類物質(zhì)并不是與底物競(jìng)爭(zhēng)與活性中心的結(jié)合，所以稱為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。（名詞解釋）特點(diǎn)：1非競(jìng)爭(zhēng)抑制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)不一定與底物分子結(jié)構(gòu)類似；2底物和抑制劑

42、分別獨(dú)立的與酶的不同部位相結(jié)合；抑制劑是與酶的活性中心以外的必需基團(tuán)結(jié)合而起作用的；3抑制劑對(duì)酶和底物的結(jié)合無影響，故底物濃度的改變對(duì)抑制程度無影響；抑制作用只取決于酶濃度、抑制劑濃度和Ki的大??；4動(dòng)力學(xué)參數(shù)：Km值不變。Vm值降低反競(jìng)爭(zhēng)性抑制：酶與底物結(jié)合后抑制劑才能和酶結(jié)合，反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用常見于多底物反應(yīng)。特點(diǎn)：1反競(jìng)爭(zhēng)抑制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)不一定與底物的分子結(jié)構(gòu)類似；2抑制劑與底物可同時(shí)與酶的不同部位結(jié)合；3必須有底物存在，抑制劑才能對(duì)酶產(chǎn)生抑制作用；抑制程度隨底物濃度的增加而增加；4動(dòng)力學(xué)參數(shù)：Km減小，Vm降低4. 微生物來源的酶抑制劑篩選的一般步驟？微生物的分離；篩選模型的建立；發(fā)酵條件的確定；抑制劑的分離、鑒定第11章 現(xiàn)