王雅琳 薄層色譜

1、色譜分離技術(shù)色譜分離技術(shù)王雅琳王雅琳2014.11.06薄層色譜（薄層色譜（TLC） 柱色譜（柱色譜（CC）2 氣相色譜（氣相色譜（GC）3薄層色譜（薄層色譜（TLC） 高效液相色譜（高效液相色譜（HPLC）4薄層色譜薄層色譜 薄層色譜，又稱薄層色譜，又稱薄層層析薄層層析，常用，常用TLCTLC表示。表示。 將固定相在玻璃、金屬或塑料等光潔的表面上均勻的鋪成薄層，試樣點(diǎn)在薄層的一端，流動(dòng)相借毛細(xì)作用流經(jīng)固定相，使被分離的物質(zhì)展開。固定相：固定相：固體吸附劑。流動(dòng)相：流動(dòng)相：液體展開劑。特點(diǎn)：特點(diǎn)：方法簡便易行,價(jià)格低廉；分析快速（展開時(shí)間短）；分離效果高；需要樣品量少；應(yīng)用廣泛；范圍：范圍：適

2、用于揮發(fā)性較小或在較高溫度下易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。一、基本原理一、基本原理（一）吸附色譜分離原理（一）吸附色譜分離原理利用固定相對(duì)各組分吸附力的大小及展開劑解吸附作用的差異進(jìn)行分離。使吸附能力較強(qiáng)或溶解度較大的組分隨展開劑移動(dòng)速度慢，吸附力弱的組分隨展開劑移動(dòng)快。溶劑溶劑前沿前沿起始線起始線ABabc（二）比移值（二）比移值R Rf f：原原點(diǎn)點(diǎn)到到溶溶劑劑前前沿沿的的距距離離原原點(diǎn)點(diǎn)到到斑斑點(diǎn)點(diǎn)中中心心的的距距離離 fRcb RcaR)b(f)a(f Rf是薄層色譜法基本定性參數(shù)，一定條件時(shí)Rf為定值，可用范圍Rf值在0.150.75之間。被分離的物質(zhì)極性越大，越易被吸附，R

3、f越小,反之越大。二、吸附劑與展開劑二、吸附劑與展開劑（一）吸附劑（固定相）的選擇（一）吸附劑（固定相）的選擇常用吸附劑：硅膠、氧化鋁、聚酰胺。吸附劑的選擇要合適，與流動(dòng)相、被分離化合物不反應(yīng)。(1）硅膠：硅膠：a.a.極性吸附劑，應(yīng)用范圍廣；b.b.物理吸附為主，氫鍵吸附為輔;c.c.略帶酸性，不直接用于堿性成分的分離;d.d.吸附容量大，與羥基數(shù)目有關(guān).硅膠商品名稱硅膠商品名稱黏合劑黏合劑熒光添加劑熒光添加劑應(yīng)用應(yīng)用硅膠硅膠H H無無無無薄層色譜，柱色譜薄層色譜，柱色譜硅膠硅膠G G有有無無薄層色譜，柱色譜薄層色譜，柱色譜硅膠硅膠GFGF254254有有有有在在254nm254nm紫外燈下

4、看熒光紫外燈下看熒光(2)氧化鋁：氧化鋁：a.a.極性吸附劑，較硅膠強(qiáng)；b.b.物理吸附為主，氫鍵吸附為輔；c.c.略帶堿性，不直接用于酸類成分的分離。氧化鋁極性比硅膠大，適用于分離極性較小的化合物（烴、醚、酮、醛、鹵代烴等），因?yàn)闃O性化合物被氧化鋁較強(qiáng)烈吸收，分離較差，Rf值較小；相反，硅膠適用于分離極性較大的化合物（羧酸、醇、胺等），而非極性化合物在硅膠板上吸附較弱，分離較差，Rf值較大。（二）展開劑（流動(dòng)相）的選擇（二）展開劑（流動(dòng)相）的選擇選擇原則：選擇原則：展開劑應(yīng)該對(duì)被分離的物質(zhì)有一定的溶解度（相似相溶）。展開劑對(duì)被分離組分有一定的解吸能力，但又不能太大。 待測(cè)組分Rf值在0.15

5、-0.75之間。常見溶劑極性大?。撼Ｒ娙軇O性大小： 石油醚環(huán)已烷四氯化碳苯甲苯 乙醚三氯甲烷（氯 仿）乙酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水冰醋酸三、薄層色譜分類三、薄層色譜分類使用目的：定性薄層色譜：分析和鑒別。制備薄層色譜：分離和提純。二者原理相似，主要區(qū)別在于樣品和吸附劑的用量。 吸附劑厚度鑒別的TLC制備TLC0.25mm至少3mm（一）薄層色譜分離操作（一）薄層色譜分離操作1 1、薄層色譜板的制備、薄層色譜板的制備3 3、點(diǎn)樣、點(diǎn)樣4 4、展開、展開5 5、顯色、顯色2 2、活化、活化1 1、薄層色譜板的制備、薄層色譜板的制備要求：要求：玻璃板需光潔，否則吸附劑易脫落；大小由需求決定。薄層板

6、分類和制法：薄層板分類和制法：軟板的制備硬板的制備 軟板軟板：直接將吸附劑鋪在玻璃板上制成，不加粘合劑。 多用于氧化鋁薄層板的制備。（實(shí)驗(yàn)室：硅膠GF254）優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：方法簡便、隨用隨鋪、展開速度快。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：吸附劑易脫落、只能用與平面約15的近水平展開，效果差。（1 1）軟板制備（干法鋪板）軟板制備（干法鋪板）浸漬法浸漬法：將兩塊大小一致的干凈玻璃板背靠背緊貼，緩慢、均勻地浸入調(diào)制好的吸附劑中，取出后分開晾干。軟板制備不宜過快及停頓，否則厚薄不均勻影響層析效果。用硫酸鈣為粘合劑鋪成的板稱為硅膠G板；用羧甲基纖維素鈉作黏合劑鋪成的板為硅膠-CMC板。(2)(2) 硬板制備（濕法鋪板）硬板制

7、備（濕法鋪板）硬板硬板：吸附劑加粘合劑制成的板?？捎糜诠枘z、氧化鋁、聚酰胺等薄層板的制備，但常用的還是硅膠硬板。常用的粘合劑：煅石膏（ 2CaSO4H2O ） 羧甲基纖維素鈉（CMC-Na） 機(jī)械強(qiáng)度差，易脫落，但不易腐蝕 機(jī)械強(qiáng)度好，不易脫落，但易腐蝕制備：制備：硅膠中逐漸加羧甲基纖維素鈉水溶液（7-8g/1000mL），調(diào)成均勻的糊狀，超聲，用藥勺涂于潔凈玻璃片上，均勻鋪開，注意不要引入小氣泡，將帶漿玻璃片在水平桌面上下輕微震動(dòng)數(shù)次，并不時(shí)旋轉(zhuǎn)方向，顛制成薄厚均勻、表面光滑平整、沒有氣孔的薄層板，室溫條件下晾干。2 2、活化、活化硅膠和氧化鋁含水量越多，吸附活性越弱。硅膠和氧化鋁含水量越多

8、，吸附活性越弱。 只要在110左右加熱，這些“自由水” 就能被可逆性地除去。利用這一原理可以對(duì)吸附劑進(jìn)行活化（去水）和脫活化（加水）處理，以控制吸附劑的活性。 將晾干后的薄層板放入烘箱中，緩慢升溫至110，恒溫30min后取出，冷卻，置于干燥器中備用。注：注：不可將剛鋪好的薄層板立即烘烤活化，否則板子會(huì)裂口。點(diǎn)樣工具：點(diǎn)樣工具：玻璃毛細(xì)管或微量點(diǎn)樣器 點(diǎn)樣位置：點(diǎn)樣位置：距底邊約1cm的起始線上，點(diǎn)與點(diǎn)的距離為1-1.5cm,斑點(diǎn)直徑一般不超過2mm。點(diǎn)樣方式：點(diǎn)樣方式：圓點(diǎn)狀點(diǎn)樣。樣品溶解：樣品溶解：用甲醇、氯仿、乙酸乙酯、石油醚、丙酮等揮發(fā)性有機(jī)溶劑，最好選用與展開劑極性相似的溶劑。注意事

9、項(xiàng)注意事項(xiàng) ：動(dòng)作要輕，毛細(xì)管不能混用；點(diǎn)樣量勿超載，防止拖尾；樣品濃度較稀時(shí)，可多次點(diǎn)樣，每次點(diǎn)樣后要晾干后方可再點(diǎn) ； 3 3、點(diǎn)樣、點(diǎn)樣 4 4、展開、展開展開方式：展開方式：上行展開展開過程：展開過程：按一定比例配好展開劑，將展開劑（一般210mL）倒入層析缸，待層析缸被展開劑飽和后（平衡系統(tǒng)），再迅速將點(diǎn)樣薄層板放入，在密閉環(huán)境下展開。當(dāng)溶劑移動(dòng)到接近薄層上端1cm處，取出薄板，劃出溶劑前沿，將溶劑吹干。注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：a、展開劑不浸沒樣品點(diǎn)。b、薄層板呈傾斜狀。c、展開過程應(yīng)在密閉容器中進(jìn)行。5 5、顯色、顯色顯色也稱定位，即用某種方法使經(jīng)色譜展開后的混合物斑點(diǎn)呈現(xiàn)顏色，以便觀

10、察其位置。常見的定位方法：常見的定位方法： 光學(xué)檢出法：紫外照射法 試劑檢出法：浸漬顯色法（ KMnO4 ），噴霧顯色法（濃H2SO4，F(xiàn)eCl3）(1)蒸氣檢出法：碘蒸氣顯色法1、碘：主要針對(duì)不飽和或者芳香族化合物配制方法 ：在100mL廣口瓶中，放入一張濾紙，少許碘粒?；蛘咴谄恐校尤?0g碘粒，30g硅膠 ；2、高錳酸鉀：主要針對(duì)含還原性基團(tuán)化合物，比如羥基，氨基，醛配制方法 ：1.5g KMnO4+10g K2CO3 +1.25mL10%NaOH +200mL水，使用期3個(gè)月；3、紫外燈：主要針對(duì)含共軛基團(tuán)的化合物，芳香化合物。常用常用顯色劑的顯色目標(biāo)物及其配制方法：顯色劑的顯色目標(biāo)物及其配制方法：（二）制備薄層色譜（二）制備薄層色譜（PTLCPTLC）用作制備的薄層色譜。分離多達(dá)500mg的樣