微生物學(xué)課件：微生物實(shí)驗(yàn)補(bǔ)充

1、Microbiology Chapter 3, part 2The best magnification on our scopes is achieved with the “oil immersion” objective. Oil is used with the lens because it has “the same refractive index as glass”. We can see objects with clarity at about 1000X magnification. Less light is refracted away from the tiny l

2、ens and objects are “clearer”. No oil = fuzzy poor quality image.第一節(jié)第一節(jié) 微生物純培養(yǎng)微生物純培養(yǎng)二、微生物純培養(yǎng)技術(shù)二、微生物純培養(yǎng)技術(shù)1、稀釋平板分離法、稀釋平板分離法：傾注平板法和涂布平板法。：傾注平板法和涂布平板法。 基本過(guò)程：（基本過(guò)程：（1）梯度稀釋過(guò)程；（）梯度稀釋過(guò)程；（2）分離培養(yǎng)過(guò)程）分離培養(yǎng)過(guò)程涂布涂布傾注傾注梯梯 度度 稀稀 釋釋 過(guò)過(guò) 程程10-110-210-310-410-510-63、接種 接種技術(shù)：是微生物實(shí)驗(yàn)和相關(guān)研究的基本技術(shù)。 無(wú)菌操作：是微生物接種技術(shù)的關(guān)鍵接種前的消毒接種前的消毒

3、實(shí)驗(yàn)室和超凈工作的消毒實(shí)驗(yàn)室和超凈工作的消毒提前提前30min開啟超凈工作臺(tái)，打開紫外燈。開啟超凈工作臺(tái)，打開紫外燈。 操作者衣著和手消毒操作者衣著和手消毒用肥皂將雙手洗用肥皂將雙手洗凈，擦干，再用酒精凈，擦干，再用酒精(體積分?jǐn)?shù)為體積分?jǐn)?shù)為70%)棉球棉球擦拭雙手。當(dāng)手上的酒精揮發(fā)完畢后，點(diǎn)擦拭雙手。當(dāng)手上的酒精揮發(fā)完畢后，點(diǎn)燃酒精燈。注意：一定要等手上的酒精揮燃酒精燈。注意：一定要等手上的酒精揮發(fā)完畢后，再點(diǎn)燃酒精燈，否則，容易將發(fā)完畢后，再點(diǎn)燃酒精燈，否則，容易將手燒傷。手燒傷。常用接種方法常用接種方法 平板劃線法平板劃線法 平板涂布法平板涂布法 點(diǎn)接法點(diǎn)接法 倒平板法倒平板法（1）平板

4、劃線接種操作（1）平板劃線接種操作（1）平板劃線接種操作（2）試管接種操作）試管接種操作（2）試管接種操作）試管接種操作（2）試管接種操作）試管接種操作 對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間操作的空間操作者的操作者的衣著和手衣著和手，進(jìn)，進(jìn)行清潔和消毒。行清潔和消毒。 將用于微生物培養(yǎng)的將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培器皿、接種用具和培養(yǎng)基養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。等進(jìn)行滅菌。 為避免周圍環(huán)境中的微生物的污染，實(shí)驗(yàn)為避免周圍環(huán)境中的微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在操作應(yīng)在酒精燈火焰附近酒精燈火焰附近進(jìn)行。進(jìn)行。 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免避免已經(jīng)滅菌處理的材料用已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相具與周圍的物品相接觸

5、接觸。3、無(wú)菌操作內(nèi)容4、消毒和滅菌的方法及應(yīng)用、消毒和滅菌的方法及應(yīng)用定義定義常用方法常用方法應(yīng)用應(yīng)用消消毒毒使用較為溫使用較為溫和的物理和的物理或化學(xué)方或化學(xué)方法殺死物法殺死物體表面或體表面或內(nèi)部的部?jī)?nèi)部的部分菌體分菌體, ,但不傷及但不傷及活組織活組織巴氏消毒法巴氏消毒法酒、牛奶和果汁酒、牛奶和果汁煮沸煮沸玻璃儀器玻璃儀器間歇煮沸間歇煮沸含葡萄糖、含硫培含葡萄糖、含硫培養(yǎng)基養(yǎng)基紫外線紫外線實(shí)驗(yàn)室、操作臺(tái)、實(shí)驗(yàn)室、操作臺(tái)、衣物衣物酒精溶液酒精溶液手、外植體和接種手、外植體和接種工具工具氯化汞溶液氯化汞溶液等等外植體外植體4、消毒和滅菌的方法及應(yīng)用、消毒和滅菌的方法及應(yīng)用定義定義常用方法常用

6、方法應(yīng)用應(yīng)用滅滅菌菌使用強(qiáng)烈的使用強(qiáng)烈的理化因素理化因素殺死物體殺死物體內(nèi)外所有內(nèi)外所有菌體、芽菌體、芽孢和孢子孢和孢子高壓蒸汽高壓蒸汽培養(yǎng)基、玻璃儀器、培養(yǎng)基、玻璃儀器、棉塞、牛皮紙等棉塞、牛皮紙等灼燒灼燒接種工具、試管口等接種工具、試管口等干熱干熱玻璃儀器玻璃儀器5、接種后注意事項(xiàng) 熄滅酒精燈。熄滅酒精燈。實(shí)驗(yàn)后的帶菌培養(yǎng)基，如實(shí)驗(yàn)后的帶菌培養(yǎng)基，如果用的是致病菌，必須經(jīng)高壓蒸汽滅菌鍋果用的是致病菌，必須經(jīng)高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后方能倒掉；如果是非致病菌，也要滅菌后方能倒掉；如果是非致病菌，也要經(jīng)加熱后再倒掉。經(jīng)加熱后再倒掉。 貼標(biāo)簽。貼標(biāo)簽。 接種完畢，將所接菌種、接接種完畢，將所接菌種、接

7、種日期、接種者姓名填寫在標(biāo)簽上貼在培種日期、接種者姓名填寫在標(biāo)簽上貼在培養(yǎng)皿底部或者試管上。養(yǎng)皿底部或者試管上。 （三）培養(yǎng)和觀察（三）培養(yǎng)和觀察 將接種后的試管放入恒溫箱內(nèi)，在將接種后的試管放入恒溫箱內(nèi)，在25下培養(yǎng)下培養(yǎng)57d，或在，或在37下培養(yǎng)下培養(yǎng)24-48h。 高壓蒸汽滅菌鍋的構(gòu)造高壓蒸汽滅菌鍋的構(gòu)造操作過(guò)程操作過(guò)程 加水加水 裝鍋裝鍋 加蓋加蓋 排氣排氣 滅菌滅菌 起鍋起鍋操作過(guò)程操作過(guò)程分類分類定義定義方法方法滅菌法滅菌法殺滅一切微生殺滅一切微生物物物理法：熱力、輻射、物理法：熱力、輻射、微波、等離子體微波、等離子體化學(xué)法：醛類、烷化化學(xué)法：醛類、烷化劑劑高效消高效消毒法毒法殺

8、滅一切致病殺滅一切致病微生物微生物紫外線、含氯劑、臭紫外線、含氯劑、臭氧、復(fù)配劑等氧、復(fù)配劑等中效消中效消毒法毒法殺滅除芽孢外殺滅除芽孢外的致病微生物的致病微生物超聲波、碘類、醇類、超聲波、碘類、醇類、酚類酚類低效消低效消毒法毒法殺滅細(xì)菌繁殖殺滅細(xì)菌繁殖體、親脂病毒體、親脂病毒單鏈季胺鹽、雙胍類、單鏈季胺鹽、雙胍類、中草藥、金屬離子中草藥、金屬離子消毒的方法：消毒的方法：1 1、100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮1515minmin3 3、用、用75%75%酒精、新潔爾滅等

9、進(jìn)行皮膚消毒酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒4 4、氯氣消毒水源、氯氣消毒水源5 5、紫外線消毒、紫外線消毒滅菌的方法：滅菌的方法：1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌2 2、干熱滅菌：、干熱滅菌：160-170 160-170 下加熱下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121 下維持下維持15-30min. 最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時(shí)可有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時(shí)可以基本保持培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。以基本保持培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。 有些玻璃器皿也可

10、采用高溫干熱滅菌。為了防止雜有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過(guò)，而空氣中的屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過(guò)，而空氣中的其他微生物不能通過(guò)。其他微生物不能通過(guò)。 而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計(jì)的。為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計(jì)的。 1、器具的滅菌2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基

11、的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存 人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。 固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基加富培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌） 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）1 1稱量稱量2 2溶化溶化3 3調(diào)調(diào)pHpH：pH7pH76 64 4過(guò)濾：這一步可以省去。過(guò)濾：這一步可以省去。5 5分裝：分裝：分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過(guò)三角燒瓶容積的一半為宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎8 8滅菌滅菌9 9倒平板倒平板1010無(wú)菌檢查：無(wú)菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37的溫室中培養(yǎng)2448小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。The Streak Plate Method 關(guān)注菌落的形態(tài)、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)關(guān)注菌落的形態(tài)、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細(xì)菌的重要手段。地等等，都是區(qū)分細(xì)菌的重要手段。 關(guān)注菌落的形態(tài)、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)關(guān)注菌落的形態(tài)、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細(xì)菌的重要手段。地等等，都是區(qū)分細(xì)菌的重要手段。 1、如