抗核抗體檢測及臨床意義-張瑾

1、抗核抗體檢測抗核抗體檢測及其臨床意義及其臨床意義寧波市李惠利醫(yī)院寧波市李惠利醫(yī)院 張瑾張瑾 風(fēng)濕免疫性疾病診斷方法風(fēng)濕免疫性疾病診斷方法v癥狀、體征癥狀、體征v自身抗體自身抗體v影像學(xué)檢查影像學(xué)檢查v病理病理風(fēng)濕免疫性疾病相關(guān)自身抗體風(fēng)濕免疫性疾病相關(guān)自身抗體v抗核抗體譜（抗核抗體譜（ANAsANAs）v類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)抗體類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)抗體(RF, (RF, 抗抗CCPCCP等等) )v抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCAANCA）v抗自身免疫性肌炎譜抗自身免疫性肌炎譜v自身免疫性肝病相關(guān)抗體譜自身免疫性肝病相關(guān)抗體譜v抗磷脂抗體譜抗磷脂抗體譜抗核抗體譜檢測的意義抗核抗體譜

2、檢測的意義v有助于彌漫性結(jié)締組織病彌漫性結(jié)締組織病的分類和診斷 抗Sm抗體是SLE的標(biāo)記抗體； 抗Scl-70抗體是SSc的標(biāo)記抗體； 抗Jo-1抗體是PM/DM的標(biāo)記抗體；v觀察疾病活動度和治療反應(yīng) 抗dsDNA抗體v研究發(fā)病機理 抗核小體抗體、抗dsDNA抗體v基本概念基本概念vANA熒光核型熒光核型vANAs中的常見抗體中的常見抗體抗核抗體抗核抗體v自身抗體自身抗體：指抗自身組織、器官、細(xì)胞及其成分的抗體vANAANA：指抗細(xì)胞核成分（DNA，RNA，蛋白質(zhì)和酶）的抗體。ANA存在一個譜。vANAANA新概念新概念：抗核酸(Nucleic acid)和核蛋白(Nucleoprotein)

3、抗體總稱v某些核抗原成分在核仁和 胞漿內(nèi)比核質(zhì)內(nèi)更豐富 (如SSA/RO,Jo-1,rRNP等)ANAANA檢測方法檢測方法-IIF-IIF法法ANAANA滴度滴度ANAANA核型核型ANAANA滴度的意義滴度的意義v結(jié)締組織病的粗篩（1:160）v陽性標(biāo)本還需進一步識別v感染、腫瘤及5%正常人可出現(xiàn)低滴度陽性vANA陰性基本可以除外SLEvANA滴度與疾病活動性無明確相關(guān)性熒光顯微鏡下熒光顯微鏡下ANAANA的染色型別的染色型別v均質(zhì)型（均質(zhì)型（H H）v核膜型（核膜型（M)M)v斑點型（斑點型（S S）v核仁型（核仁型（N N）v著絲點型（著絲點型（ACAACA）v胞漿型（胞漿型（C C）

4、v混合型混合型 均均 質(zhì)質(zhì) 型型 (H)v抗抗組蛋白組蛋白v抗抗ds/ssDNAds/ssDNAv抗抗核小體核小體v主要出現(xiàn)在主要出現(xiàn)在SLESLE中中均均 質(zhì)質(zhì) 型型 (H)核膜核膜 型型 (M)v主要與抗主要與抗dsDNAdsDNA有關(guān)有關(guān)與與抗原底物片固定方法和備制過程抗原底物片固定方法和備制過程有關(guān)有關(guān)出現(xiàn)在出現(xiàn)在SLESLE中中v部分與抗核包膜蛋白有關(guān)部分與抗核包膜蛋白有關(guān)抗板層素抗板層素抗抗gp210gp210 出現(xiàn)在出現(xiàn)在PBCPBC中中核膜核膜 型型 (M)v與抗與抗ENAENA成分有關(guān)成分有關(guān) 抗抗SmSm 抗抗RNPRNP 抗抗SS-ASS-A 抗抗SS-BSS-Bv出現(xiàn)在

5、出現(xiàn)在SLESLE、MCTDMCTD、pSSpSS、SScSSc、PM/DMPM/DM等等 斑斑 點點 型型 (S)斑斑 點點 型型 (S)v與抗與抗核仁蛋白核仁蛋白有關(guān)有關(guān) 抗抗Scl-70Scl-70 抗抗RNARNA多聚酶多聚酶I I 抗抗PM-SclPM-Sclv出現(xiàn)在出現(xiàn)在SScSSc中中核核 仁仁 型型 (N)核核 仁仁 型型 (N)v與抗與抗著絲點著絲點染色質(zhì)有關(guān)染色質(zhì)有關(guān) 存在于有絲分裂期存在于有絲分裂期v出現(xiàn)在出現(xiàn)在SScSSc、CRESTCREST綜合征等綜合征等中中著著 絲絲 點點 型型(ACA)著著 絲絲 點點 型型(ACA)v與抗與抗胞漿成分胞漿成分有關(guān)有關(guān)v抗抗核糖

6、體核糖體P P蛋白（蛋白（rRNPrRNP）：出現(xiàn)在：出現(xiàn)在SLESLE中中v抗抗合成酶合成酶：Jo-1Jo-1、PL-12PL-12、PL-7PL-7、OJOJ、EJEJv抗抗信號識別顆粒（信號識別顆粒（SRP)SRP)v抗抗線粒體線粒體：出現(xiàn)在：出現(xiàn)在PBCPBC中中v抗高爾基體抗高爾基體v抗溶酶體抗溶酶體v等等等等 胞胞 漿漿 型型 (C)見于見于PM/DMPM/DM 胞胞 漿漿 型型 (C)ANAANA熒光核型小結(jié)熒光核型小結(jié)v均質(zhì)型（均質(zhì)型（H H）：）：像大餅，像大餅，SLESLE相關(guān)相關(guān)v核膜型（核膜型（M)M)： 像圈圈，像圈圈，SLESLE相關(guān)相關(guān)v斑點型（斑點型（S S）：

7、）：像藕片，抗像藕片，抗ENAENAv核仁型（核仁型（N N）：）：像紐扣，像紐扣，SDSD相關(guān)相關(guān)v著絲點型（著絲點型（ACAACA）：）：像滿天星，抗像滿天星，抗ACAACAv胞漿型（胞漿型（C C）：）：像空心大餅像空心大餅,SLE PM/DM PBC,SLE PM/DM PBC相關(guān)相關(guān)v混合型：混合型：稀釋后檢測有助于區(qū)分稀釋后檢測有助于區(qū)分抗核抗體譜抗核抗體譜（ANAs）ANAsANAs抗核不溶成分抗核不溶成分抗核可溶成分抗核可溶成分（抗（抗ENA）抗染色體抗染色體DNADNA蛋白蛋白抗核仁抗體抗核仁抗體 抗抗DNADNA抗體抗體 抗核小體抗體抗核小體抗體 抗組蛋白抗組蛋白 H1,H

8、2A, H2B, H3,H4 抗抗Sm,USm,U1 1RNP,SSA,SSBRNP,SSA,SSB抗抗Scl-70,Jo-1Scl-70,Jo-1,PM-1,PM-1抗抗rRNPrRNP,PCNA,PCNA. .dsDNAdsDNAssDNAssDNA抗著絲點抗體抗著絲點抗體（ACA)ACA)抗抗5sRNA5sRNA抗抗dsDNA檢測方法檢測方法v以以短膜蟲短膜蟲或或馬疫錐蟲馬疫錐蟲為底物的間接免疫熒光法為底物的間接免疫熒光法(IIF) ：1:5v短膜蟲或馬疫錐蟲的動基體短膜蟲或馬疫錐蟲的動基體 內(nèi)含有內(nèi)含有天然純天然純dsDNA，未經(jīng)，未經(jīng) 人工處理，不含人工處理，不含組蛋白與組蛋白與 s

9、sDNA，抗原性純一特異?？乖约円惶禺?。v優(yōu)點：優(yōu)點：特異性好特異性好 抗抗dsDNA檢測方法檢測方法v酶聯(lián)免疫吸附法（酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）: 100IU/ml100IU/ml 優(yōu)點優(yōu)點：敏感性最高敏感性最高 缺點：缺點：過于敏感，同時可能檢測到過于敏感，同時可能檢測到ssDNA抗體抗體和和低親和力低親和力dsDNA抗體抗體,而而 這兩種致病力均不強這兩種致病力均不強 v放射免疫法放射免疫法(Farr): 20% 優(yōu)點：優(yōu)點：對對高親和度高親和度DNA抗體抗體的檢測優(yōu)于的檢測優(yōu)于CL-IIF 缺點：缺點：具有放射性，對技術(shù)人員身體造成一定影響具有放射性，對技術(shù)人員身體造成一定影響v蛋

10、白印跡法（蛋白印跡法（WBWB） 缺點：缺點： dsDNAdsDNA抗原在純化包備過程中可變性解鏈，變成抗原在純化包備過程中可變性解鏈，變成ssDNAssDNA, ,導(dǎo)致假陽性結(jié)果導(dǎo)致假陽性結(jié)果v不同方法檢測不同方法檢測SLE患者抗患者抗dsDNA抗體的結(jié)果：抗體的結(jié)果：everything is possible v至少用兩種方法做（報告結(jié)果時注明方法學(xué)）至少用兩種方法做（報告結(jié)果時注明方法學(xué)）,互為補充?；檠a充。如：如：IIF法法+ ELISA法法 抗抗dsDNAdsDNA抗體臨床意義抗體臨床意義vSLE 的血清特異性抗體的血清特異性抗體v多有致病性（多有致病性（IgG型），與親和力（高

11、）有關(guān)型），與親和力（高）有關(guān)v與與LN與與SLE疾病活動性相關(guān)，活動期達(dá)疾病活動性相關(guān)，活動期達(dá)90 可用于可用于SLE 疾病活動期判斷藥物療效觀察疾病活動期判斷藥物療效觀察v與與SLE急性皮疹急性皮疹、血管炎、漿膜腔炎、白細(xì)胞、血管炎、漿膜腔炎、白細(xì)胞減少等有關(guān)減少等有關(guān)抗組蛋白抗體（AHA）（酶聯(lián)免疫吸附法X2SD) )v可出現(xiàn)于多種結(jié)締組織病，可出現(xiàn)于多種結(jié)締組織病，不具有診斷特異性不具有診斷特異性vSLE ：50% 活動期活動期SLE 可達(dá)可達(dá)90.2% 與與LN相關(guān)相關(guān)，與與SLE疾病活動性疾病活動性存在一定意義的存在一定意義的相關(guān)相關(guān)性性v藥物性狼瘡（藥物性狼瘡（DIL）：）：9

12、0% 如：異煙肼、苯妥因鈉、青霉胺、雌激素等如：異煙肼、苯妥因鈉、青霉胺、雌激素等 僅有僅有AHA而無其他而無其他ANA，強烈支持，強烈支持DILv其他結(jié)締組織病：其他結(jié)締組織?。?3-30% 如：如：RA、PBC、SSc等等 核小體是真核細(xì)胞染色質(zhì)的基核小體是真核細(xì)胞染色質(zhì)的基本復(fù)制單位，由組蛋白與本復(fù)制單位，由組蛋白與DNA組成。組成。參與參與SLE發(fā)病機制：發(fā)病機制：多克隆多克隆B細(xì)胞活化劑細(xì)胞活化劑產(chǎn)生產(chǎn)生ANuA，先于其他，先于其他ANA促進抗促進抗dsDNA與與AHA形成形成參與參與LN的發(fā)生的發(fā)生 抗核小體抗體（ANuA） 抗核小體抗體臨床意義vSLE標(biāo)記性標(biāo)記性/高特異性自身抗

13、體高特異性自身抗體 敏感性：敏感性：58%-66% （優(yōu)于抗（優(yōu)于抗dsDNA及抗及抗Sm） 特異性：特異性：98%-100% （與抗（與抗dsDNA相當(dāng)）相當(dāng)）v用于用于SLE的早期診斷的早期診斷 ANuA 的產(chǎn)生早于抗dsDNA、AHA 抗dsDNA陰性者有1/41/2 ANuA陽性v與與LN相關(guān)，用于相關(guān)，用于SLE疾病活動性監(jiān)測疾病活動性監(jiān)測ANuA、抗dsDNA、AHA聯(lián)合檢測意義抗抗ENAENA抗體抗體 extractable nuclear antigen v可提取性核抗原可提取性核抗原v成分：成分：核酸與核蛋白，不含染色質(zhì)成分核酸與核蛋白，不含染色質(zhì)成分v功能：參與細(xì)胞內(nèi)功能：

14、參與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制、復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白翻譯轉(zhuǎn)錄、蛋白翻譯 合成合成v來源：無種屬差異，有組織不均一性來源：無種屬差異，有組織不均一性v理化特性：對理化特性：對溫度溫度和和RNA酶酶敏感敏感（U1RNP、SS-A）v意義：抗意義：抗ENA抗體是抗體是ANAs中中范圍最廣范圍最廣、最為重要最為重要的的 一簇抗體，與一簇抗體，與疾病活動性大多無相關(guān)疾病活動性大多無相關(guān) 抗抗ENAENA抗體檢測方法抗體檢測方法v免疫雙擴散法免疫雙擴散法(ID)v對流免疫電泳法對流免疫電泳法( CIE)v免疫印跡法免疫印跡法(IBT)v酶聯(lián)免疫吸附法酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)v蛋白芯片（蛋白芯片（Protein

15、 chip）38KD29KD28KD16.5KD15KD13.5KD無 風(fēng) 濕 病 相 關(guān) 抗 體SmR id、抗 體 陽 性紅 斑 狼 瘡 病 人 血 清86KD73KD60KD52KD45KD38KD32KD29KD28KD17.5KD16.5KD15KD13.5KD 抗抗SmSm抗體與抗抗體與抗U1RNPU1RNP抗體抗體v靶抗原靶抗原：位于位于細(xì)胞核內(nèi)細(xì)胞核內(nèi)的一組含尿嘧啶豐富的核糖核的一組含尿嘧啶豐富的核糖核蛋白，蛋白， Sm和和U1RNP是同一分子復(fù)合物中的不是同一分子復(fù)合物中的不同位點同位點抗抗SmSm抗體與抗抗體與抗U1RNPU1RNP抗體抗體v抗抗Sm：SLE的的標(biāo)記性抗體標(biāo)

16、記性抗體，是前瞻性及回顧性診斷的指標(biāo)。，是前瞻性及回顧性診斷的指標(biāo)。 陽性率低：陽性率低： SLE （30%）v抗抗U1RNP：多種：多種CTD均可出現(xiàn)，與手指腫脹、雷諾現(xiàn)象、肌均可出現(xiàn)，與手指腫脹、雷諾現(xiàn)象、肌炎、指端硬化等相關(guān)，但腎炎發(fā)生率低。炎、指端硬化等相關(guān)，但腎炎發(fā)生率低。 陽性率：陽性率：40 - 60%，其中，其中SLE(30-40%) , SSc(14%) , pSS (12%) , PM/DM (15%)v高滴度抗高滴度抗U1RNP+抗抗Sm- MCTDv抗抗U1RNP+ 抗抗Sm+ SLEv抗抗U1RNP- 抗抗Sm+ 實驗室誤差實驗室誤差? U1RNP丟失丟失 ? 抗抗r

17、RNPrRNP抗體抗體v靶抗原：靶抗原：胞漿胞漿中中60S核糖體大亞基上的磷酸化蛋白核糖體大亞基上的磷酸化蛋白 抗抗rRNPrRNP抗體抗體vSLE的的高度特異性抗體高度特異性抗體，與，與SLE腦病腦病相關(guān)相關(guān)v常在常在SLE活動期活動期存在存在,但不會隨病情的緩解立但不會隨病情的緩解立即消失即消失,可持續(xù)可持續(xù)1-2年后才轉(zhuǎn)陰。年后才轉(zhuǎn)陰。v陽性率：陽性率：24%v可出現(xiàn)在可出現(xiàn)在SLE 早期早期（ANA及抗及抗dsDNA陰性）陰性） 抗抗SSASSA與抗與抗SSBSSB抗體抗體v靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相鄰結(jié)構(gòu)靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相鄰結(jié)構(gòu) 在不同的細(xì)胞周期，在細(xì)

18、胞內(nèi)的定位不同在不同的細(xì)胞周期，在細(xì)胞內(nèi)的定位不同 （細(xì)胞核內(nèi)和胞漿中細(xì)胞核內(nèi)和胞漿中均可存在）均可存在）vpSS的的SS-A存在于存在于細(xì)胞核細(xì)胞核內(nèi)內(nèi) SLE的的SS-A存在于存在于胞漿胞漿中中 SS-B主要位于主要位于細(xì)胞核細(xì)胞核內(nèi)內(nèi)45KD 47KD48KD抗抗SSASSA與抗與抗SSBSSB抗體抗體v抗抗SS-A ：結(jié)締組織病中出現(xiàn)結(jié)締組織病中出現(xiàn)頻率最高頻率最高的抗體（的抗體（ 60 -75%），見于），見于pSS（75%）SLE（25%） RA（10%） SSc （24%）PBC（20%）等）等v抗抗SSB：常與抗：常與抗SSA相伴出現(xiàn)，診斷相伴出現(xiàn)，診斷pSS更特異更特異，見于

19、，見于 pSS（40%）、）、SLE （10%）v臨床意義：與新生兒狼瘡和臨床意義：與新生兒狼瘡和先天性心臟傳導(dǎo)阻滯先天性心臟傳導(dǎo)阻滯、平平 滑肌受累滑肌受累、光過敏、血管炎、光過敏、血管炎、皮損皮損、紫癜、紫癜、 淋巴結(jié)腫大、淋巴結(jié)腫大、WBC減少有關(guān)減少有關(guān)vANA陰性的陰性的SCLE：常為抗：常為抗SSA 抗體陽性?？贵w陽性?？箍笿o-1Jo-1抗體抗體( (抗抗PL-1PL-1抗體抗體) )v靶抗原：組氨酸t(yī)RNA合成酶 胞漿中的磷酸蛋白抗抗Jo-1Jo-1抗體抗體( (抗抗PL-1PL-1抗體抗體) )vPM/DM的的標(biāo)記抗體標(biāo)記抗體，陽性率，陽性率20-30%v抗體效價與抗體效價與

20、疾病活動性疾病活動性相關(guān)相關(guān)v抗抗Jo-1抗體綜合征抗體綜合征：急性發(fā)熱：急性發(fā)熱,對稱性關(guān)節(jié)炎對稱性關(guān)節(jié)炎,技工手技工手,雷諾現(xiàn)象雷諾現(xiàn)象,肌炎（相對輕）肌炎（相對輕） ,肺間質(zhì)病變肺間質(zhì)病變 v其他抗合成酶抗體：抗其他抗合成酶抗體：抗PL-7PL-7、抗抗PL-12PL-12、抗抗OJOJ、抗抗EJEJ抗抗ScL-70ScL-70抗體抗體v靶抗原：靶抗原：DNA拓樸異構(gòu)酶拓樸異構(gòu)酶I的降解產(chǎn)物的降解產(chǎn)物 主要存在主要存在核仁核仁中中vSSc的的標(biāo)記抗體，標(biāo)記抗體，陽性率陽性率20-30%v多見于多見于dSSc，病情進展快，提示，病情進展快，提示預(yù)后不良預(yù)后不良v與與ILD、彌漫性皮膚硬化彌

21、漫性皮膚硬化有關(guān)，而有關(guān)，而PAH少見少見v主要靶抗原：著絲點蛋白主要靶抗原：著絲點蛋白-Bv多見于多見于ISSc，病程緩慢，提示，病程緩慢，提示預(yù)后較好預(yù)后較好vCREST綜合征綜合征：軟組織鈣化（：軟組織鈣化（C）,雷諾現(xiàn)象（雷諾現(xiàn)象（R）,食道功食道功能障礙（能障礙（E）,指端硬化（指端硬化（S）,毛細(xì)血管擴張（毛細(xì)血管擴張（T），但），但并非并非標(biāo)記抗體標(biāo)記抗體，也見于孤立性雷諾現(xiàn)象，也見于孤立性雷諾現(xiàn)象、SS、PBC、AIH等v國外文獻：與國外文獻：與PAH相關(guān)，而相關(guān)，而ILD少見少見 中國人群：中國人群：未發(fā)現(xiàn)與未發(fā)現(xiàn)與PAH相關(guān)相關(guān)，但但ILD少見少見白伊娜，王遷等.中國系統(tǒng)性

22、硬化癥患者硬皮病相關(guān)自身抗體的檢測及其臨床意義. 中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志.2011（5）:452-455.抗著絲點抗體抗著絲點抗體(ACA)Take Home MassageTake Home MassagevANA熒光核型對抗體性質(zhì)范圍有一定提示作熒光核型對抗體性質(zhì)范圍有一定提示作用，用，尤其尤其在靶抗原陰性時。在靶抗原陰性時。vANA陰性而靶抗原陽性主要見于抗陰性而靶抗原陽性主要見于抗胞漿成分胞漿成分抗體，如：抗體，如：SS-A、Jo-1、rRNP、線粒體等。、線粒體等。v抗抗核仁核仁型抗體常與型抗體常與SSc有關(guān)。有關(guān)。v抗抗均質(zhì)均質(zhì)型或型或核膜核膜型抗體常與型抗體常與SLE有關(guān)。有關(guān)

23、。Take Home MassageTake Home Massagev抗抗dsDNA：SLE特異性抗體特異性抗體，與，與LN及疾病活動度及疾病活動度 有關(guān)，至少有關(guān)，至少兩種方法兩種方法聯(lián)合檢測（如：聯(lián)合檢測（如： IIF法法+ ELISA法）。法）。v抗核小體抗核小體、抗組蛋白抗組蛋白、抗抗dsDNA三抗體陽性者強烈三抗體陽性者強烈 提示增殖性提示增殖性LN。v與疾病活動性相關(guān)的抗體：與疾病活動性相關(guān)的抗體：抗抗dsDNA、抗核小體、抗核小體、 抗組蛋白、抗抗組蛋白、抗Jo-1、抗、抗rRNPv與預(yù)后相關(guān)的抗體：與預(yù)后相關(guān)的抗體：抗抗Scl-70（差）、（差）、ACA（好）（好）案例1v女性，34歲v游走性多關(guān)節(jié)痛，雷諾現(xiàn)象半年vRF 56U/L；抗CCP抗體陰性；vANA 1：320v胸部CT：輕度肺