實驗一 洋蔥根尖Feulgen染色、有絲分裂制片及染色體變異觀察

1、基礎遺傳學實驗基礎遺傳學實驗2012.10-2012.11 授課及輔導教師：授課及輔導教師：薛 挺 3607438劉曉燕 3600453助助 教：教：張 旭 3607438礎遺傳學實驗 有絲分裂制片及染色體變異觀察 臨時制片技術 減數分裂制片及觀察 果蠅幼蟲的唾腺染色體制片 果蠅的伴性遺傳 果蠅的形態(tài)，性狀及生活史觀察 小白鼠骨髓細胞染色體制片技術 *開放性、自主性實驗實驗項目 態(tài)度端正態(tài)度端正 規(guī)范操作規(guī)范操作 愛護儀器設備愛護儀器設備 節(jié)約試劑節(jié)約試劑 注意安全注意安全 保持環(huán)境衛(wèi)生保持環(huán)境衛(wèi)生實驗要求 實驗報告

2、實驗報告 50 實驗記錄、實驗結果真實可靠實驗記錄、實驗結果真實可靠 *總結與分析總結與分析 獨創(chuàng)性獨創(chuàng)性 課外文獻查閱課外文獻查閱 增加知識增加知識 課堂考核課堂考核 40 課前提問課前提問 預習預習 現場評分現場評分 部分實驗的實驗中考核部分實驗的實驗中考核 操作是否規(guī)范操作是否規(guī)范 實驗方法，儀器使用等實驗方法，儀器使用等 其它其它 10 紀律，著裝，公共服務等紀律，著裝，公共服務等成績評判標準洋蔥根尖洋蔥根尖FeulgenFeulgen染色、有絲分染色、有絲分裂制片及染色體變異觀察裂制片及染色體變異觀察實驗目的實驗目的1 1、掌握植物根尖染色體制片技術、掌握植物根尖染色體制片技術2 2

3、、掌握、掌握FeulgenFeulgen染色方法染色方法3 3、熟悉有絲分裂過程中染色體的形態(tài)特征和動態(tài)變、熟悉有絲分裂過程中染色體的形態(tài)特征和動態(tài)變化化實驗原理實驗原理 有絲分裂（有絲分裂（mitosismitosis） 植物細胞分裂的主要方式，細胞分裂過程中，核內染色體準確地復制，并有規(guī)律地、均勻地分配到兩個子細胞中去，保證了植物細胞的遺傳性狀的一致。各種生長旺盛的植物組織中，如根尖組織、莖尖組織、居間分生組織、愈傷組織等，有大量處于分裂高峰期的細胞，此時經預處理，固定、解離、染色和涂抹壓片等方法，在顯微鏡下可以觀察到處于有絲分裂各時期的細胞和染色體。有絲分裂（有絲分裂（mitosismi

4、tosis） 分裂間期分裂間期 （染色質沒有高度螺旋化形成染色體，而是以染色質的形式進行DNA單鏈復制） 分裂期分裂期 前期前期 （prophase） 膜仁失，兩體現； 中期中期 （metaphase）體列中，數清晰； 后期后期 （anaphase） 點裂增，體均分； 末期末期 （telophase） 前期反，中現板（植物）秋水仙素 秋水仙素，一種生物堿，因最初從百合科植物秋水仙中提取出來，故名,也稱秋水仙堿。純秋水仙素呈黃色針狀結晶，熔點157。易溶于水、乙醇和氯仿。味苦，有毒。 秋水仙素能抑制有絲分裂，破壞紡錘體，使染色體停滯在分裂中期。這種由秋水仙素引起的不正常分裂，稱為秋水仙素有絲分裂

5、。在這樣的有絲分裂中，染色體雖然縱裂，但細胞不分裂，不能形成兩個子細胞，因而使染色體加倍。 自1937年美國學者布萊克斯利（A.F.Blakeslee）等用秋水仙素加倍曼陀羅等植物的染色體數獲得成功以后，秋水仙素就被廣泛應用于細胞學、遺傳學的研究和植物育種。孚爾根孚爾根(Feulgen)染色法染色法 細胞內的DNA在1N HCl 60水解時部分地破壞了脫氧核糖與嘌呤堿之間的糖苷鍵而使嘌呤堿脫掉，從而使脫氧核糖的第一個碳原子上潛在的醛基獲得了自由狀態(tài)。 用無色的亞硫酸品紅（schiff試劑）去染經酸解的細胞時，可與染色體DNA上游離的醛基結合，生成呈紅色的醌式結構，從而使DNA分子著色。這一反應

6、是1924年由Feulgen 和Rossonbek 所發(fā)現和確定的，已廣泛用作鑒別DNA的一種特異性檢查方法。實驗用品器具： 解剖針解剖針 載玻片載玻片 蓋玻片蓋玻片 離心管離心管 試管架試管架 吸水紙吸水紙 長滴管長滴管 廢液缸廢液缸 試劑： 漂染液漂染液 蒸餾水蒸餾水 45%45%醋酸醋酸每大組（每張桌子）： 1NHCL1NHCL 帶蓋瓷缸（內有保鮮膜）帶蓋瓷缸（內有保鮮膜）實驗方法和步驟實驗方法和步驟1、材料準備、材料準備 洋蔥根尖：通過休眠的洋蔥鱗莖，經日曬后，置于盛有清水的小燒杯上，根部與水接觸，2025光照條件下培養(yǎng)23天以后，待根長12cm或更長時，于上午9：00-11：00剪下

7、根尖備用。2、預處理、預處理 為獲得較多中期分裂相的細胞，且使染色體縮短和分散，可對根尖進行預處理，方法如下（取其一即可）：（1）0.050.2的秋水仙堿水溶液處理24小時；（2）0.002M的8羥基喹啉溶液處理34小時； (3) 根尖浸在蒸餾水中于在14低溫下處理24小時。3、固定、固定 用蒸餾水洗凈材料，再用卡諾氏固定液室溫下固定至少3060分鐘。固定的材料如暫不制片，可經90酒精80酒精70酒精（各半小時）浸泡進行轉換，最后置于70酒精內放入04冰箱，約可保存半年。如保存時間太長，需重新固定后再用。實驗步驟實驗步驟1、洋蔥(2n=16)根尖(老師預先放入離心管中)，充分吸去試管里的液體。2 2、到水浴鍋加預熱好的、到水浴鍋加預熱好的1N HCl 601N HCl 60，8-108-10分鐘分鐘3、水洗2-3次（加5-10ML水），每次1-2分鐘4、吸凈水分，加入Schiff試劑(老師統(tǒng)一加)，在黑暗條件下染色至少30分鐘，也可過夜（每組一個帶蓋瓷缸，千萬不要灑的到處都是）5、漂染液沖洗三次（5 ML），每次至少1-2分鐘（漂染液每大組一份，放在水池上）6、水沖洗三次（每4-6 ML），每次1-2 MIN, 放于蒸餾水中待用7、取根尖（紫紅色部分）置載玻片上，加一滴45醋酸（或蒸餾水），蓋上蓋玻片，壓片。顯微觀察顯