細(xì)胞基本培養(yǎng)技術(shù)學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1細(xì)胞基本培養(yǎng)細(xì)胞基本培養(yǎng)(piyng)技術(shù)技術(shù)第一頁，共96頁。n需要清洗的培養(yǎng)用品需要清洗的培養(yǎng)用品n玻璃器皿、膠塞、塑料制品玻璃器皿、膠塞、塑料制品第2頁/共96頁第二頁，共96頁。第3頁/共96頁第三頁，共96頁。第4頁/共96頁第四頁，共96頁。第5頁/共96頁第五頁，共96頁。第6頁/共96頁第六頁，共96頁。第7頁/共96頁第七頁，共96頁。第8頁/共96頁第八頁，共96頁。第9頁/共96頁第九頁，共96頁。第10頁/共96頁第十頁，共96頁。第11頁/共96頁第十一頁，共96頁。第12頁/共96頁第十二頁，共96頁。第13頁/共96頁第十三頁，共96頁。第14頁/共96頁

2、第十四頁，共96頁。第15頁/共96頁第十五頁，共96頁。第16頁/共96頁第十六頁，共96頁。第17頁/共96頁第十七頁，共96頁。干熱消毒：一般在烤箱中進(jìn)行，需加溫到 160，保持90120 min方能殺死芽孢。注意！消毒完畢(wnb)后不可馬上將烤箱門打開，以免冷空氣突然進(jìn)人，影響消毒效果和損壞玻璃器皿或發(fā)生意外事故。第18頁/共96頁第十八頁，共96頁。到到(d do)所需要的壓力時(shí)，開所需要的壓力時(shí)，開始記錄時(shí)間，并控制壓力恒定。始記錄時(shí)間，并控制壓力恒定。第19頁/共96頁第十九頁，共96頁。第20頁/共96頁第二十頁，共96頁。第21頁/共96頁第二十一頁，共96頁。n培養(yǎng)板：紫

3、外線照射培養(yǎng)板：紫外線照射12小時(shí)以小時(shí)以上。上。n培養(yǎng)基：過濾除菌培養(yǎng)基：過濾除菌、 第22頁/共96頁第二十二頁，共96頁。第23頁/共96頁第二十三頁，共96頁。野用品過多或重疊放置，物品野用品過多或重疊放置，物品相互遮擋射線，會(huì)降低消毒效相互遮擋射線，會(huì)降低消毒效果果第24頁/共96頁第二十四頁，共96頁。般工作服即可。在無菌室內(nèi)工般工作服即可。在無菌室內(nèi)工作需著消毒衣帽。作需著消毒衣帽。第25頁/共96頁第二十五頁，共96頁。第26頁/共96頁第二十六頁，共96頁。部，如不便消毒時(shí)，應(yīng)取備品更部，如不便消毒時(shí)，應(yīng)取備品更換。換。3、布局：、布局：原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在原則上應(yīng)

4、是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于中央置于中央(圖圖4-1)。工作由始至終。工作由始至終要保持一定順序性。要保持一定順序性。第27頁/共96頁第二十七頁，共96頁。第28頁/共96頁第二十八頁，共96頁。第29頁/共96頁第二十九頁，共96頁。第30頁/共96頁第三十頁，共96頁。第31頁/共96頁第三十一頁，共96頁。第32頁/共96頁第三十二頁，共96頁。貼壁細(xì)胞第33頁/共96頁第三十三頁，共96頁。貼附生長(shngzhng)型細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)常用(chn yn)的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、6孔板、96孔板第34頁/共96頁第三十四頁，共96頁。+ +

5、 + + + + + + + + +細(xì)胞(xbo)的貼附過程貼附物質(zhì)(wzh)帶正電荷細(xì)胞(xbo)帶負(fù)電荷第35頁/共96頁第三十五頁，共96頁。成纖維細(xì)胞：梭形、三角形、2-3個(gè)突起(tq)上皮細(xì)胞：扁平、多角形、園核可連成單層第36頁/共96頁第三十六頁，共96頁。第37頁/共96頁第三十七頁，共96頁。圖5-6 消化(xiohu)法傳代培養(yǎng)步驟第38頁/共96頁第三十八頁，共96頁。第39頁/共96頁第三十九頁，共96頁。置溫箱中培養(yǎng)。置溫箱中培養(yǎng)。第40頁/共96頁第四十頁，共96頁。第41頁/共96頁第四十一頁，共96頁。懸浮生長(shngzhng)型細(xì)胞第42頁/共96頁第四十二

6、頁，共96頁。第43頁/共96頁第四十三頁，共96頁。第44頁/共96頁第四十四頁，共96頁。第45頁/共96頁第四十五頁，共96頁。第46頁/共96頁第四十六頁，共96頁。（一）取材(qci)第47頁/共96頁第四十七頁，共96頁。第48頁/共96頁第四十八頁，共96頁。1、鼠組織(zzh)取材各種( zhn)組織取材第49頁/共96頁第四十九頁，共96頁。第50頁/共96頁第五十頁，共96頁。第51頁/共96頁第五十一頁，共96頁。械法和化學(xué)法三種；械法和化學(xué)法三種；第52頁/共96頁第五十二頁，共96頁。第53頁/共96頁第五十三頁，共96頁。第54頁/共96頁第五十四頁，共96頁。第5

7、5頁/共96頁第五十五頁，共96頁。培養(yǎng)。剪刀剪切法可能對(duì)組織培養(yǎng)。剪刀剪切法可能對(duì)組織有一定損傷，但操作比較方便。有一定損傷，但操作比較方便。第56頁/共96頁第五十六頁，共96頁。壓擠法第57頁/共96頁第五十七頁，共96頁。第58頁/共96頁第五十八頁，共96頁。第59頁/共96頁第五十九頁，共96頁。(三)原代細(xì)胞培養(yǎng)類型(lixng)第60頁/共96頁第六十頁，共96頁。中中3060 分鐘；分鐘；(3)剪切：用眼科剪把組織塊切成剪切：用眼科剪把組織塊切成23 毫米大小的塊毫米大小的塊(用手術(shù)刀切用手術(shù)刀切割亦可割亦可)，以便于消化；，以便于消化；第61頁/共96頁第六十一頁，共96頁

8、。第62頁/共96頁第六十二頁，共96頁。第63頁/共96頁第六十三頁，共96頁。第64頁/共96頁第六十四頁，共96頁。第65頁/共96頁第六十五頁，共96頁。第66頁/共96頁第六十六頁，共96頁。第67頁/共96頁第六十七頁，共96頁。第68頁/共96頁第六十八頁，共96頁。第69頁/共96頁第六十九頁，共96頁。第70頁/共96頁第七十頁，共96頁。第71頁/共96頁第七十一頁，共96頁。第72頁/共96頁第七十二頁，共96頁。第73頁/共96頁第七十三頁，共96頁。第74頁/共96頁第七十四頁，共96頁。第75頁/共96頁第七十五頁，共96頁。第76頁/共96頁第七十六頁，共96頁。

9、第77頁/共96頁第七十七頁，共96頁。第78頁/共96頁第七十八頁，共96頁。第79頁/共96頁第七十九頁，共96頁。各種細(xì)胞對(duì)凍存速度的要求也不一樣；上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞耐受性可能大些，另外用什么防護(hù)劑合適和用量多大，要依細(xì)胞而定，初代培養(yǎng)細(xì)胞用DMSO 較好，一般細(xì)胞可用甘油；用量以較小為好。有人認(rèn)為人皮膚(p f)上皮細(xì)胞貯存在20 30甘油中很好。原則上細(xì)胞在液氮中可貯存多年，但為妥善起見，凍存一年后，應(yīng)再復(fù)蘇培養(yǎng)一次，然后再繼續(xù)凍存。第80頁/共96頁第八十頁，共96頁。第81頁/共96頁第八十一頁，共96頁。第82頁/共96頁第八十二頁，共96頁。第83頁/共96頁第八十三頁，共

10、96頁。第84頁/共96頁第八十四頁，共96頁。懸液，裝入離心管中，再補(bǔ)加懸液，裝入離心管中，再補(bǔ)加(b ji)10ml 培養(yǎng)液，吹打使細(xì)培養(yǎng)液，吹打使細(xì)胞懸??；胞懸?。坏?5頁/共96頁第八十五頁，共96頁。達(dá)到達(dá)到107ml，在稀釋，在稀釋20 倍時(shí)，倍時(shí)，仍能保持仍能保持5105ml 數(shù)量。數(shù)量。第86頁/共96頁第八十六頁，共96頁。第87頁/共96頁第八十七頁，共96頁。(3) 到達(dá)后，倒出大部分培養(yǎng)液，到達(dá)后，倒出大部分培養(yǎng)液，保留正常量，置保留正常量，置37培養(yǎng)，次日培養(yǎng)，次日傳代。傳代。第88頁/共96頁第八十八頁，共96頁。第89頁/共96頁第八十九頁，共96頁。勻，放入勻，放入 37 ，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。培養(yǎng)箱培養(yǎng)。第90頁/共96頁第九十頁，共96頁。第91頁/共96頁第九十一頁，共96頁。第92頁/共96頁第九十二頁，共96頁。第93頁/共96頁第九十三頁，共96頁。1支持物制備特制有機(jī)玻璃、特氟隆薄膜、玻璃等：其中以玻璃片和特氟隆薄膜最為多用。前者(qin zh)便于做各種固定、染色處理和觀察；后者最適做電鏡技術(shù)，允許做包埋和切片。加支持物培養(yǎng)法程