專題一 基因工程

1、第二節(jié) 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序 提取目的基因 基因表達載體的構建 將目的基因導入受體細胞 目的基因的檢測和表達一、目的基因的獲取哪些可以作為目的基因？主要是編碼蛋白質的，也可以是編碼一些具有調(diào)控作用的因子目的基因的獲取方法 1、從基因文庫中獲取從基因文庫中獲取 2、利用、利用PCR技術擴增技術擴增 3、利用化學方法人工合成、利用化學方法人工合成1、從基因文庫中獲取目的基因基因文庫的定義：見課本見課本基因文庫的種類：基因組文庫基因組文庫部分基因文庫（如部分基因文庫（如cDNA文庫）文庫）獲取的依據(jù)：基因的核苷酸序列、基因的核苷酸序列、基因的功能、基因的功能、基因在染色體上的

2、位置、基因在染色體上的位置、基因的轉錄產(chǎn)物基因的轉錄產(chǎn)物mRNA、基因的表達產(chǎn)物蛋白質等?；虻谋磉_產(chǎn)物蛋白質等。2、利用PCR技術擴增目的基因PCR含義：生物體外復制特定生物體外復制特定DNA片段的核酸合片段的核酸合成技術，全稱是多聚酶鏈式反應。成技術，全稱是多聚酶鏈式反應。PCR原理：DNA雙鏈復制雙鏈復制變性變性:DNA高溫完全解開雙鏈高溫完全解開雙鏈復性復性:引物與單鏈引物與單鏈DNA堿基互補配堿基互補配延伸延伸:在熱穩(wěn)定在熱穩(wěn)定DNA聚合酶作用下，聚合酶作用下， 隨著引物向后延伸子鏈隨著引物向后延伸子鏈模板：模板：含目的基因的含目的基因的DNA片段片段原料：原料：dNTP酶：酶：熱穩(wěn)

3、定熱穩(wěn)定DNA聚合酶聚合酶引物：引物：單鏈單鏈DNAMg2+(激活劑激活劑)：激活酶活性激活酶活性緩沖液：緩沖液：維持維持PH值值PCR擴增過程：擴增過程：PCR反應原理示意圖反應原理示意圖前提前提:要有一要有一段已知段已知目的基目的基因的脫因的脫氧核苷氧核苷酸序列，酸序列，以便合以便合成引物。成引物。3、人工合成法化學合成法化學合成法 適用范圍：基因小且核苷酸序列已知基因小且核苷酸序列已知的目的基因 工具：DNA合成儀合成儀逆轉錄法逆轉錄法 適用范圍：已知mRNA 過程：mRNARNA-DNA雜交鏈雜交鏈單鏈單鏈DNA雙鏈雙鏈DNA逆轉錄酶逆轉錄酶核酸酶核酸酶H降解降解RNADNA聚合酶聚合

4、酶二、基因表達載體的構建限制酶限制酶DNA連接酶連接酶目的基因目的基因啟動子啟動子終止子終止子標記基因標記基因復制原點復制原點三、將目的基因導入受體細胞 導入植物細胞方法：農(nóng)桿菌轉化法農(nóng)桿菌轉化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法 導入動物細胞方法：顯微注射法顯微注射法 導入微生物的方法：Ca2+處理法處理法1、導入植物細胞的方法農(nóng)桿菌轉化法農(nóng)桿菌轉化法2、導入動物細胞的方法 顯微注射法顯微注射法3、導入微生物的方法細菌細菌Ca2+處理法處理法感受態(tài)細胞感受態(tài)細胞原核生物作為受原核生物作為受體細胞的優(yōu)點：體細胞的優(yōu)點：繁殖快、多為單繁殖快、多為單細胞、遺傳物質細胞、遺傳物質相對較少等相對較少等四、目的基因的檢測與鑒