水中總大腸菌群計數(shù)

1、動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定 能力目標：能力目標： 掌握生活飲用水總大腸菌群的測定方法掌握生活飲用水總大腸菌群的測定方法 掌握水源水總大腸菌群的測定方法掌握水源水總大腸菌群的測定方法 判定水被大腸菌群污染的程度和水的衛(wèi)生質量判定水被大腸菌群污染的程度和水的衛(wèi)生質量動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群的測定 檢驗依據(jù)：GB/T5750.12-2006 方法：多管發(fā)酵法動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定實驗內(nèi)容1 1乳糖發(fā)酵試驗乳糖發(fā)酵試驗4 4證實試驗證實試驗5 5結果分析與報告結果

2、分析與報告1 1培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基制備2 2乳糖發(fā)酵試驗乳糖發(fā)酵試驗3 3分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定實驗器材 水樣水樣 生活飲用水、水源水 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、伊紅美蘭培養(yǎng)基 試劑試劑 革蘭氏染色液、稀釋劑等動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定實驗器材 其他 無菌工作臺、酒精燈、稀釋液、滅菌吸管、滅菌試管、小倒管、試管架、接種環(huán)、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器、載玻片、香柏油、平皿、天平、電爐等動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定培養(yǎng)基制備 乳糖發(fā)酵管乳糖發(fā)酵管 雙料管 單

3、料管 伊紅美蘭平板伊紅美蘭平板放置放置小倒小倒管并管并排氣排氣動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定一、乳糖發(fā)酵（初發(fā)酵）試驗 自來水自來水 直接接種10mL水樣于雙料培養(yǎng)基，每個水樣共接種5管 水源水水源水 加大稀釋度，每個稀釋度接種5管，每個水樣共接種15管 動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定各10ml1ml各1ml水樣水樣1:10稀釋水各1ml乳糖發(fā)酵試驗動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定一、乳糖發(fā)酵（初發(fā)酵）試驗 培養(yǎng)培養(yǎng) 36士l 24h士2h 觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況 不產(chǎn)酸產(chǎn)氣 產(chǎn)

4、酸產(chǎn)氣動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定第二天第二天動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定二、分離培養(yǎng) 產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉種別轉種EMBEMB平板平板（分（分區(qū)劃線）區(qū)劃線） 36士l 24h士2h動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定第三天第三天動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定三、證實試驗（復發(fā)酵試驗） 觀察觀察EMBEMB平板菌落形態(tài)平板菌落形態(tài) 深紫黑色、具有金屬光澤的菌落 紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落 淡紫紅色、中心較深的菌落動物檢疫檢驗技

5、術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定一半進行涂片、染色、鏡檢另一半進行接種（證實試驗用）動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定三、證實試驗（復發(fā)酵試驗） 只有染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌才接種只有染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌才接種乳糖蛋白胨管乳糖蛋白胨管 36士l 24h士2h動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定第四天第四天動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定四、結果報告 觀察乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣情況觀察乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣情況 產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實有總大腸菌群存在 查查MPN MPN 檢索表檢索表

6、根據(jù)證實為總大腸菌群陽性的管數(shù) 報告每報告每100ml100ml水樣中的總大腸菌群最可能數(shù)水樣中的總大腸菌群最可能數(shù)（MPNMPN）動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定四、結果報告 5管法結果見表1，15管法結果見表2動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定表表1 1 用用5 5份份10mL10mL水樣時各種陽性和陰性結果組合時的最可能數(shù)（水樣時各種陽性和陰性結果組合時的最可能數(shù)（MPN )MPN )5個10mL管中陽性管數(shù) 最可能數(shù)（MPN） 016.0動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定表表2 2 總大腸

7、菌群總大腸菌群MPNMPN檢索表檢索表( (部分）部分）（總接種量（總接種量55.5mL55.5mL，其中，其中5 5份份10mL10mL水樣，水樣，5 5份份1mL1mL水樣，水樣，5 5份份0.1mL0.1mL水樣）水樣）接種量接種量/ mL/ mL總大腸總大腸菌群菌群/(MPN/(MPN/100mL) 100mL) 接種量接種量/ mL/ mL總大腸總大腸菌群菌群/(MPN/(MPN/100mL)100mL)10ml10ml管管1ml1ml管管0.1ml0.1ml管管10ml10ml管管1ml1ml管管0.1ml0.1ml管管00021002001210140024102600351038動物檢疫檢驗技術專業(yè)教學資源庫水中總大腸菌群測定水中總大腸菌群測定四、結果報告四、結果報告 稀釋樣品查表后所得結果應乘稀釋倍數(shù)稀釋樣品查表后所得結果應乘稀釋倍數(shù) 表表2 2采用采用3 3個稀釋度（個稀釋度（10mL10mL、1mL 1mL 和和0.1mL),0.1mL),每每個稀釋度個稀釋度5 5管管 表表2 2內(nèi)所列接種量如改用內(nèi)所列接種量如改用100mL100mL、10mL10mL和和1mL1mL時，時，表內(nèi)數(shù)字應相應降低表內(nèi)數(shù)字應相應降低1010倍；如改為倍；如改為1mL1mL、0.1mL0.1mL和和 0.01mL0.01mL時時, ,則