試驗(yàn)室常用試劑、緩沖液的配置方法

1、實(shí)驗(yàn)室常用試劑、緩沖液的配制方法1MTris-HCl(pH7.4,7,6,8,0)組份濃度：1MTris-HCl配制量：1L配制方法：1 .稱量121.1gTris置于1L燒杯中。2 .加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值4.將溶液定容至1L5.局溫圖壓火菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1C,溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。10XTEBuffer(pH7.4,7,6,8,0)組份濃度：100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量：1L配制方法：1 .量取下列溶

2、7置于1L燒杯中。1 MTris-HClBuffer(pH7.4,7.6,8,0)100ml500mMEDTA(pH&O)20ml2 .向燒杯中加入約800ml的去離子水，均勻混合。3 .將溶液定容至1L后，高溫高壓滅菌。4 .室溫保存。1.5MTris-HCl(pH8.8)組份濃度：1.5MTris-HCl配制量：1L配制方法：1 .稱量181.7gTris置于1L燒杯中。2 .加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻? .用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8。4 .將溶液定容至1Lo5 .iWj溫iWj壓火菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫

3、度的變化差異很大，溫度每升高1C,溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。3M醋酸鈉（pH5.2）組份濃度：3M醋酸鈉配制量：100ml配制方法：1 .稱量40.8gNaAc-3HO置于100-200ml燒杯中，加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙? .加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.23 .加去離子水將溶液定容至100ml4高溫高壓滅菌后，室溫保存。PBSBuffer組份濃度：137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量：1L配制方法：1 .稱量下列試劑，置于1L燒杯中。NaCt8gKCl02gN3HPOu1.42gKH2Pd0.27g2 .向燒杯中加入約800m

4、l的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻? .滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1Lo4 .iWj溫iWj壓火菌后，室溫保存。注意：上述PBSBuffer中無二價(jià)陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1mMCaCl2和0.5mMMgCl210M醋酸鏤組份濃度：10M醋酸鏤配制量：100ml配制方法：1 .稱量77.1g醋酸鏤置于100200ml燒杯中，加入約30ml的去離子水?dāng)嚢枞芙? .加去離子水將溶液定容至100ml。3 .使用0.22Mm濾膜過濾除菌。4 .密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸鏤受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。Tris-HCl平衡苯酚配制方法：1 .使用原料：大多數(shù)市售

5、液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸播便可用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時(shí)也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160c對(duì)其進(jìn)行重蒸鐳除去諸如醍等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對(duì)DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。2 .操作注意：苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。3 .苯酚平衡：因?yàn)樵谒嵝詐H條件下DNA分配于有機(jī)相，因此使用苯酚前必須對(duì)苯酚進(jìn)行平衡使其

6、pH值達(dá)到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：液化苯酚應(yīng)貯存于-20C,此時(shí)的苯酚呈結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫，然后在68C水浴中使苯酚充分融解。 加入羥基唾咻(8-Quinolinol)至終濃度0.1%。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時(shí)因其呈黃色，有助于方便識(shí)別有機(jī)相。 加入等體積的1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相重復(fù)操作步驟 加入等體積的0.1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。 重復(fù)操作步驟，稍微殘留

7、部分上層水相。使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于7.8o 將苯酚置于棕色玻璃瓶中4c避光保存。苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)配制方法：1 .說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。2 .配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24:1)混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4c保存。10%(W/V)SDS組份濃度：10%(W/V)SDS配制量：100ml配制方法：1 .稱量10g高純度的SDSS于100-200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68c加

8、入溶解2 .滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.23 .將溶液定容至100ml后，室溫保存。4 NNaOH組份濃度：2NNaOH配制量：100ml配制方法：1 .量取80ml去離子水置于100200ml塑料燒杯中(NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。2 .稱取8gNaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3 .待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100ml。4 .將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。2.5NHCl組份濃度：2.5NHCl配制量：100ml配制方法：1 .在78.4ml的去離子水中加入21.6ml的濃鹽酸(11.6N),均勻混合。2 .室溫保存。5MNaCl組

9、份濃度：5MNaCl配制量：1L配制方法：1 .稱取292.2gNaCl置于1L燒杯中，加入約800ml的去離子水后攪拌溶解。2 .加去離子水將溶液定容至1L后，適量分成小份。3 .局溫圖壓火菌后，4C保存。20%(W/V)Glucose組份濃度：20%(W/V)Glucose配制量：100ml配制方法：1 .稱取20gGlucose置于100200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水后，攪拌溶解2 .加去離子水將溶液定容至100ml。3 .iWj溫iWj壓火菌后，4C保存。SolutionI(質(zhì)粒提取用)組份濃度：25mMTris-HCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucos

10、e配制量：1L配制方法：1.量取下列溶7置于1L燒杯中。1MTrts-HCI(pH8.0)25ml0.5MEDTA(pH8.0)20ml20oGlucose(111M)45mldH2O910ml2.iWj溫iWj壓火菌后，4C保存。3,使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA(20mg/ml)SolutionII(質(zhì)粒提取用)組份濃度：200mMNaQH1%(W/V)SDS配制量：500ml配制方法：1,量取下列溶液，置于500ml燒杯中10%SDS50ml2NNaOH50ml2,加滅菌水定容至500ml,充分混勻3,室溫保存，此溶液保存時(shí)間最好不要超過一個(gè)月注意：SDS

11、易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢鑃olutionIII(質(zhì)粒提取用)組份濃度：3MKOAc,5MCH3COOH配制量：500ml配制方法：1.稱量下列試劑，置于500ml燒杯中。KOAc1479CHaC8H"5ml2,加入300ml去離子水后攪拌溶解。3,加去離子水將溶液定容至500ml。0.5MEDTA(pH8.0)組份濃度：0.5MEDTA配制量：1L配制方法：1 .稱取186.1gNa2EDTA-2H2O,置于1L燒杯中。2 .加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢琛? .用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0(約20gNaOH)。注意：pH值至8.0時(shí)，EDTA才能完全溶解。4 .加去離子水將溶液定容至1Lo5 .適量分成小份后，局溫圖壓火菌。6 .室溫保存。1 MDTT組份濃度：1MDTT配制量：20ml配制方法：1 .稱取3.09gDTT,加入