2019屆高考生物二輪習(xí)題：專題(27)基因工程與dna的粗提取(有答案)AqwPPK

1、第十一單元現(xiàn)代生物科技專題專題27基因工程與DNA勺粗提取挖命題【考情探究】考點(diǎn)考向要求5年考情預(yù)測(cè)熱度考題不例素養(yǎng)要素難度1基因工程的原理與技術(shù)基因工程的原理及技術(shù)n2018課標(biāo)全國(guó)1,38,15分科學(xué)思維、生命觀念易 2基因工程的應(yīng)用與發(fā)展基因工程的應(yīng)用n2018課標(biāo)全國(guó)口 ,38,15分科學(xué)思維、社會(huì)責(zé)任中 蛋白質(zhì)工程i 3DNA的粗提取與鑒定DNA勺粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)與探究 分析解讀基因工程”在現(xiàn)代生物科技專題模塊中占有舉足輕重的地位，是教材知識(shí)的重點(diǎn)，也屬于高考命題的熱點(diǎn)之一?？疾閮?nèi)容集中在基因工程特殊工具的作用和特點(diǎn)、基因工程操作步驟以及基因工程在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和實(shí)踐方面的應(yīng)用 ，其中限

2、制酶的種類和作用是該考點(diǎn)的難點(diǎn)；考查方式上，多以最新科技信息材料的形式，且常常結(jié)合細(xì)胞工程和胚胎工程進(jìn)行考查，預(yù)計(jì)2020年高考中這種命題趨勢(shì)還將繼續(xù)存在，復(fù)習(xí)時(shí)應(yīng)注意加強(qiáng)與細(xì)胞工程、胚胎工程的橫向聯(lián)系。【真題典例】（2口佰課標(biāo)全國(guó)| , 38, 15分|同香卜列同虺e里加111博耶！ H.即爐】和科恩門/山皿）煢非洲JR據(jù)核摘體索白莖因與質(zhì)粒重組后外人大國(guó) 桿菌細(xì)則中近行了表達(dá).該研究除證明了質(zhì)檢訶以作為載體外.隹希麗了答出眄點(diǎn)即可）?方法棄入大腸桿葭細(xì)胞:ft體外重組的2 體外垂蛆的質(zhì)粒可通過Ca14套£的窿黃體n、4通常需呵邛裝成宜勃琬團(tuán)體后.才徙出過我率的方注空而用的麻面體f

3、t也上DNA導(dǎo)入宿主期施.在褪菌.心肌凰胞、葉肉細(xì)胞中.可作為重組噬菌體宿主細(xì)胞的是（31真核文物弭n 1目的可因）在大&桿菌加思內(nèi)表達(dá)時(shí).表達(dá)出的雷白質(zhì)可能會(huì)被降解為防止泥門班被得蝌,在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用 的大廝桿陣作M型體細(xì)胞,花旗A質(zhì)純化的過程H 應(yīng)添加 的抑制劑.命題技巧解題關(guān)簿（I ）率36以基因工程為大背景.遹過提供斯材料.考查學(xué)生岫I、分析問題的僮力和 #即識(shí)應(yīng)用的能力2）試題設(shè)計(jì)就有知刈值.的獐含.也有知識(shí) 學(xué)的憶伸和訐苴（）隹第蟠瑜附信息提示，排3則山II菊造案（2）加稅時(shí)注智通用生物學(xué)術(shù)語(yǔ)答典植心素養(yǎng)（I）生命史您:在特定的同題情境中.瞿以 生曲觀念為指導(dǎo)，分析生命現(xiàn)象，

4、探i寸生命活動(dòng)的規(guī)律12）樣學(xué)加絳 計(jì)對(duì)轆的基閑工整時(shí). I能聯(lián)系基因_LP上的UN.運(yùn)川底括、推理雪卜思堆加/開搽H，審視或他這試題答案和精折餐稀（案和詳解專!am的破考點(diǎn)考點(diǎn)一基因工程的原理與技術(shù)【考點(diǎn)集訓(xùn)I】考向基因工程的原理及技術(shù)1.（2019屆黑龍江哈爾濱六中第二次月考，54,15分）綠色熒光是由綠色熒光蛋白發(fā)出的，為培育能發(fā)出綠色熒光的小鼠，人們?cè)O(shè)計(jì)了如下的流程：綠色熒黑櫻P盜工微鬢熊（1）獲取綠色熒光蛋白基因的常用方法有從基因文庫(kù)中獲取和 等。（2）綠色熒光基因通?？梢詮幕蛭膸?kù)中獲取,含有一種生物一部分基因的文庫(kù)稱為 。（3）A過程是基因工程的核心，常用到的工具酶有限制性核酸內(nèi)

5、切酶和 ，它們作用的化學(xué)鍵 是。一個(gè)基因表達(dá)載體的組成,除目的基因和復(fù)制原點(diǎn)外,還必須有、以 及標(biāo)記基因。（4）B過程常用的是 技術(shù)。（5）通常采用 技術(shù)檢測(cè)外源基因是否插入了小鼠的基因組。答案 （1）人工合成（2分）（2）cDNA文庫(kù)（部分基因文庫(kù)）（2分）（3）DNA連接酶磷酸二酯鍵啟動(dòng)子（2分）終止子（2分）（4）顯微注射（2分）（5）DNA分子雜交（3分）2.（2019屆江蘇徐州一中升級(jí)考試，41,8分）PCR技術(shù)（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的一種常規(guī)手段，其與DNA內(nèi)復(fù)制的比較如表所示，PCR反應(yīng)過程如圖所示，請(qǐng)回答下列問題照4電每DN.A游周核什觸濟(jì)障極訐酸2個(gè)或勒 件n

6、rr甑 川物與Db*姓接到口網(wǎng)上U、A分r原料ATPDNA本內(nèi)復(fù)制四種脫氧核甘酸需要PC版應(yīng)脫氧胞甘三磷酸、脫氧腺甘三磷酸脫氧胸甘三磷酸、脫氧鳥甘三磷酸不需要件較幫成配單鏈上對(duì)母構(gòu)（1）加熱使 DNA雙鏈才T開，這一步是打開 鍵，稱為,在細(xì)胞中是在 酶的作用下進(jìn) 行的。（2）當(dāng)溫度降低時(shí)，引物與模板末端結(jié)合，在 酶的作用下，引物沿模板延伸，最終合成2條DNA分子，此過程中原料是。 PCR反應(yīng)合成DNA子鏈時(shí)能量來源（3）通過PCR術(shù)使DN冊(cè)子大量復(fù)制，若將一個(gè)用15N標(biāo)記的DNA分子放入試管中，以14N標(biāo)記的脫氧核甘酸 為原料，連續(xù)復(fù)制4次以后，則15N標(biāo)記的DN后子占全部DNA總數(shù)的比例為

7、。（4）現(xiàn)有一段 DNA列：5'caaggatCC33'GTTCCTAGG5'如果它白引物 1為5'GGA OH,則引物2為。答案 （8分）（1）氫 解旋 解旋 （2）熱穩(wěn)定 DNA聚合（Taq）脫氧核甘三磷酸原料水解產(chǎn)生的能量(3)1/8(4)5'CAA OH考點(diǎn)二 基因工程的應(yīng)用與發(fā)展【考點(diǎn)集訓(xùn)】考向1基因工程的應(yīng)用1.（2019屆云南曲靖一中第一次月考 ,38,15分）“干擾素是由人的白細(xì)胞產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)，是抗病毒的一類特效藥，人類利用基因工程技術(shù)已經(jīng)大批量生產(chǎn)a干擾素。請(qǐng)分析回答下列問題利用逆轉(zhuǎn)錄的方法合成干擾素基因，不能從上皮細(xì)胞中提取mRN

8、A,原因是；這種方法合成的基因與細(xì)胞內(nèi)的基因相比,一般沒有 、啟動(dòng)子、終止子等結(jié)構(gòu)。（2）根據(jù)a干擾素基因的脫氧核甘酸序列設(shè)計(jì)并合成引物,利用 技術(shù)可得到大量的a干擾素基因。 基因工程中利用的工具酶有 ，最常用的載體是 。（4）將重組DNA導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞時(shí),需用 處理細(xì)胞使其成為 細(xì)胞。答案（除特殊標(biāo)注外，每空2分，共15分）（1）上皮細(xì)胞中a干擾素基因不轉(zhuǎn)錄內(nèi)含子 （2）PCR （3）限制酶、DNA1接酶（3分）質(zhì)粒 （4）Ca2+感受態(tài)2.（2019屆福建三明一中高三開學(xué)考 ,52,14分）如圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人胰島素的操作過程示意圖， 請(qǐng)據(jù)圖作答： AAJv-AffilrfA人誦

9、腹品床 A MA/刖W(wǎng)細(xì)胞 mRNA- L i改白公再疊L盥圍.整片加入胰島梟 人物桿曲“" d 丁能否利用人的皮膚細(xì)胞來完成過程？為什么？ 。（2）過程必需的酶是 酶，過程在體外需要的條件是 ,過程在體外必需的酶是酶，題圖用 （方法）來獲得目的基因。 在利用 A、B獲彳導(dǎo)C的過程中，必須用 切割A(yù)和B,使它們產(chǎn)生 ，再加入，才可形成Co（4）C的組成除必須含有 、復(fù)制原點(diǎn)外，還必須有 和。（5）圖中的D是基因工程中的受體細(xì)胞，為了使過程更易進(jìn)行，可 處理D答案（共14分，每空1分）（1）不能由于基因選擇性表達(dá)，人的皮膚細(xì)胞中胰島素基因不能表達(dá)，得不到胰島素（2）反轉(zhuǎn)錄 加熱熱穩(wěn)定的

10、DN咪合（Taq）反轉(zhuǎn)錄法（3）同一種限制酶 相同的黏性（或平）末端DNA連接酶（4）目的基因標(biāo)記基因啟動(dòng)子終止子 （5）Ca2+考向2蛋白質(zhì)工程3 .（2015. .那母全用.n ,40,15分,0.4173）已知生物體內(nèi)有一種蛋白質(zhì)（P）,該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，由305個(gè)氨基酸組成。如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸，改變后的蛋白質(zhì)（P1）不但彳留P的功能，而且具有了酶的催化活性。回答下列問題：（1）從上述資料可知，若要改變蛋白質(zhì)的功能，可以考慮對(duì)蛋白質(zhì)的 進(jìn)行改造。（2）以P基因序列為基礎(chǔ)，獲彳導(dǎo)R基因的途徑有修飾 _基因或合成 基因。所獲得的基因

11、表達(dá)日是遵循中心法則的，中心法則的全部?jī)?nèi)容包括 的復(fù)制；以及遺傳信息在不同分子之間的流動(dòng) ，即：。蛋白質(zhì)工程也被稱為第二代基因工程，其基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)功能出發(fā)，通過 和,進(jìn)而確定相對(duì)應(yīng)的月氧核甘酸序列 ，據(jù)此獲得基因，再經(jīng)表達(dá)、純化獲得蛋白質(zhì) ，之后還需要對(duì)蛋白質(zhì)的生物 進(jìn)行鑒定。答案（1）氨基酸序列（或結(jié)構(gòu)）（1分，其他合理答案也給分）（2）P Pi（每空2分，共4分） DN用口 RNA段遺傳物質(zhì)）（2 分） DN/VRNA RNA>DNA RN/V蛋白質(zhì)（或轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、翻譯）（3分） 設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)推測(cè)氨基酸序列（每空2分，共4分）功能（1分）考點(diǎn)三 DNA的粗提取與鑒定【

12、考點(diǎn)集訓(xùn)I】考向DNA勺粗提取與鑒定（2019屆江西五市八校一模，30,15分）DNA提取過程中可以選用雞血或者菜花作為實(shí)驗(yàn)材料。請(qǐng)回答下列關(guān)于DNA粗提取和鑒定的問題：（1）使用雞血提取 DNA時(shí)，需在雞血中加入檸檬酸鈉，目的是；在雞血細(xì)胞液中加入蒸儲(chǔ) 水，目的是。（2）使用菜花提取 DNA時(shí)，需要研磨，研磨時(shí)可加入一定的洗滌劑和食鹽，其作用分別是 和。（3）DNA在濃度為 mol/L的氯化鈉溶液中溶解度最低。使用體積分?jǐn)?shù)為95%勺冷卻酒精可使DNA（填析出"或溶解”）。（4）使用二苯胺鑒定 DNAt需要在 條件下進(jìn)行，DNA與二苯胺反應(yīng)呈現(xiàn) 色。答案 （除標(biāo)注外，每空2分，共15

13、分）（1）防止血液凝固使雞血細(xì)胞破裂（2）瓦解細(xì)胞膜溶解DNA0.14析出（4）沸水浴藍(lán)（1分）過專題【五年高考】統(tǒng)一命題課標(biāo)卷題組1.（2018課標(biāo)全國(guó)1,38,15分）回答下列問題：（1）博耶（H. Boyer）和科恩（S. Cohen）將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中進(jìn)行了 表達(dá)。該研究除證明了質(zhì)?？梢宰鳛檩d體外，還證明了 _（答出兩點(diǎn)即可）。（2）體外重組的質(zhì)粒可通過Ca2+參與的 方法導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞；而體外重組的噬菌體 DNA通常需與_組裝成完整噬菌體后,才能通過侵染的方法將重組的噬菌體DNAI入宿主細(xì)胞。在細(xì)菌、心肌細(xì)胞、葉肉細(xì)胞中，可作為重組噬菌體宿主細(xì)胞

14、的是 。 真核生物基因（目的基因）在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，表達(dá)出的蛋白質(zhì)可能會(huì)被降解。為防止蛋白質(zhì)被降 解，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用 的大腸桿菌作為受體細(xì)胞,在蛋白質(zhì)純化的過程中應(yīng)添加 的抑 制劑。答案（1）體外重組的質(zhì)粒可以進(jìn)入受體細(xì)胞；真核生物基因可在原核細(xì)胞中表達(dá)（2）轉(zhuǎn)化外殼蛋白（或答噬菌體蛋白）細(xì)菌（3）蛋白酶缺陷型蛋白酶2.（2018課標(biāo)全國(guó)II ,38,15分）某種熒光蛋白（GFP）在紫外光或藍(lán)光激發(fā)下會(huì)發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測(cè)細(xì)胞中目的基因的表達(dá)。某科研團(tuán)隊(duì)將某種病毒的外殼蛋白（L1）基因連接在GFP基因的5'末端，獲得了L1-GFP融合基因（簡(jiǎn)稱為甲）,并將其插入質(zhì)粒

15、P0,構(gòu)建了真核表達(dá)載體P1,其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點(diǎn)的示意圖如下，圖中E1E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同。啟動(dòng)子L1基因GFP基因終止子T E1 T E2 T E3 T E4回答下列問題：（1）據(jù)圖推斷，該團(tuán)隊(duì)在將甲插入質(zhì)粒P0時(shí)，使用了兩種限制酶，這兩種酶是 。使用這兩種酶進(jìn)行酶切是為了保證，也是為了保證。（2）將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細(xì)胞后，若在該細(xì)胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了和過程。（3）為了獲得含有甲的牛，該團(tuán)隊(duì)需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的 移入牛的 中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。（4）為了檢測(cè)甲是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，某同學(xué)用P

16、CRT法進(jìn)彳T鑒定，在鑒定時(shí)應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的 （填mRNA總RNA或核DNA）作為PCR模板。答案（1）E1和E4甲的完整甲與載體正確連接（2）轉(zhuǎn)錄翻譯 （3）細(xì)胞核去核卵母細(xì)胞（4）核DNA3.（2017課標(biāo)全國(guó)1,38,15分）真核生物基因中通常有內(nèi)含子，而原核生物基因中沒有，原核生物沒有真核生物所具有的切除內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA列的機(jī)制。已知在人體中基因 A（有內(nèi)含子）可以表達(dá)出某種特定蛋白（簡(jiǎn)稱蛋白A）。回答下列問題： 某同學(xué) 從人 的基 因組文庫(kù)中獲得了基因 A,以大腸桿 菌作為受體細(xì) 胞卻未得到蛋白 A,其原因 是O（2）若用家蠶作為表達(dá)基因A的受體，在噬菌體和昆蟲病毒兩種

17、載體中，不選用 作為載體，其原因若要高效地獲得蛋白A,可選用大腸桿菌作為受體。因?yàn)榕c家蠶相比，大腸桿菌具有(答出兩點(diǎn)即可)等優(yōu)點(diǎn)。(4)若要檢測(cè)基因A是否翻譯出蛋白 A,可用的檢測(cè)物質(zhì)是 (填 蛋白A的基因”或 蛋白 A的抗體”)。(5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)為證明DN蝠遺傳物質(zhì)做出了重要貢獻(xiàn)，也可以說是基因工程的先導(dǎo)，如果說他們的工作為基因工程理論的建立提供了啟示，那么，這一啟示 是。答案(1)基因A有內(nèi)含子，在大腸卞f菌中，其初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中與內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA序列不能被切除，無法表達(dá)出蛋白A(2)噬菌體噬菌體的宿主是細(xì)菌，而不是家蠶(3)繁殖快、容易培養(yǎng)(4)蛋白A的抗體(5)DN

18、A可以從一種生物個(gè)體轉(zhuǎn)移到另一種生物個(gè)體4 .(2017課標(biāo)全國(guó)n,38,15 分)幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴} ：(1)在進(jìn)行基因工程操作時(shí)，若要從植物體中提取幾丁質(zhì)酶的 mRNA常選用嫩葉而不選用老葉作為實(shí)驗(yàn)材料 ， 原因是。提取RNA提取液中需添加 RNAB抑制劑，其目的是。5 2) 以 mRNA 為 材 料 可 以 獲 得 cDNA, 其 原 理(3)若要使目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，需要通過質(zhì)粒載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，原因是_(答出兩點(diǎn)即可)。(4)當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和

19、質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是 。(5)若獲得的轉(zhuǎn)基因植株(幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。答案 (1)嫩葉組織細(xì)胞易破碎防止RNA降解 (2)在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以mRNM模板按照堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則可以合成cDNA (3)目的基因無復(fù)制原點(diǎn)；目的基因無表達(dá)所需啟動(dòng)子(4)磷酸二酯鍵(5)目的基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯異常5.(2017課標(biāo)全國(guó)m ,38,15分)編碼蛋白甲的 DNA序列(序列甲)由A、B、C H E五個(gè)片段組成，編碼蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段組成，如圖1所示?！芭囵B(yǎng)時(shí)同mi蛆之4回答下列問題： 現(xiàn)要

20、通過基因工程的方法獲得蛋白乙，若在啟動(dòng)子的下游直接接上編碼蛋白乙的DNA序列(TTCGCTTCTCAGGAAGGA則所構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后不能翻譯出 蛋白乙，原因(2)某同學(xué)在用PC破術(shù)獲取DNA片段B或D的過程中，在PCR反應(yīng)體系中加入了 DN咪合酶、引物等，還加 入了序列甲作為 ，加入了 作為合成 DNA勺原料。(3)現(xiàn)通過基因工程方法獲得了甲、乙、丙三種蛋白，要鑒定這三種蛋白是否具有刺激T淋巴細(xì)胞增殖的作用，某同學(xué)做了如下實(shí)驗(yàn)：將一定量的含 T淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)液平均分成四組，其中三組分別加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一組作為對(duì)照，培養(yǎng)并定期檢測(cè)T淋巴細(xì)胞濃度，結(jié)果如圖2。由圖2可知：

21、當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到a時(shí)，添加蛋白乙的培養(yǎng)液中 T淋巴細(xì)胞濃度不再增加，此時(shí)若要使T淋巴細(xì) 胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是 。細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)箱中通常要維持一定的 CO濃 度,CO2的作用是。僅根據(jù)圖1、圖2可知，上述甲、乙、丙三種蛋白中，若缺少(填A(yù) B" C CT或E”)片段所編碼的 肽段，則會(huì)降低其刺激T淋巴細(xì)胞增殖的效果。答案 (1)編碼乙的DNA歹U起始端無 ATG,轉(zhuǎn)錄出的mRNAB起始密碼子(2)模板 dNTP (3)進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng) 維持培養(yǎng)液的pHC6.(2016課標(biāo)全國(guó)1,40,15分,0.587)某一質(zhì)粒載體如圖所示，外源DNA看入到Amp或Tetr中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因

22、失活(Ampr表示氨茉青霉素抗性基因,Tet r表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此質(zhì)粒載體用BamH酶切后，與用BamH酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌。結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌。回答下列問題 ：(1)質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有 (答出兩點(diǎn)即可，而作為基因表達(dá)載體，除滿足上述基本條件外，還需具有啟動(dòng)子和終止子。(2)如果用含有氨茉青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中，未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞是

23、不能區(qū)分的，其原因是 ；并且 和的細(xì)胞也是不能區(qū)分的，其原因是 。在上述篩選白基礎(chǔ)上 ，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落，還需使用含有的固體培養(yǎng)基。(3)基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體，其DNAM制所需的原料來自 答案(1)能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因(2)二者均不含有氨茉青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng)含有質(zhì)粒載體含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒(或答含有重組質(zhì)粒)二者均含有氨茉青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)四環(huán)素(3)受體細(xì)胞7.(2016 課標(biāo)全國(guó)m ,40,15 分,0.442)圖中的三個(gè) DNA片段上依次表示出了EcoRI、BamH和 Sau3Al三

24、種限制性內(nèi)切酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)，圖(b)為某種表達(dá)載體的示意圖(載體上的EcoRI、Sau3Al的切 點(diǎn)是唯一的)。GA ATTC CGAT CC G.TC C f T A A G CT AGG-CT AG 制制原點(diǎn)圖(b)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問題：經(jīng)BamH酶切后得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被酶切后的產(chǎn)物連接，理由(2)若某人利用圖(b)所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子,如圖(c)所示。這三種重組子中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有,不能表達(dá)的原因和(3)DNA連接酶是將兩個(gè) DNA片段連接起來的酶，常見的有,其中既能連接黏性末端又能連接平末端

25、的是答案(1)Sau3A I兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端(每空2分，共4分)(2)甲和丙(2分)甲中目的基因插入在啟動(dòng)子的上游 ，丙中目的基因插入在終止子的下游，二者的目的基因 均不能被轉(zhuǎn)錄(3分，其他合理答案可酌情給分) (3)E coliDNA連接酶 T4DNA!接酶 TDNA1接酶(每空2分，共6分，其他合理答案可酌情給分) 8.(2014課標(biāo)全國(guó)II ,40,15分,0.5599)植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性，其耐旱性與某個(gè)基因有關(guān)。若從該植物中 獲得該耐旱基因，并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。 回答下列問題：(1)理論上，基因組文庫(kù)含有生物的 基因；而c

26、DNA文庫(kù)中含有生物的 基因。(2)若要從植物甲中獲得耐旱基因，可首先建立該植物的基因組文庫(kù)，再?gòu)闹?出所需的耐旱基因。(3)將耐旱基因?qū)朕r(nóng)桿菌，并通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入植物 的體細(xì)胞中，經(jīng)過一系列的過程得 到再生植株。要確認(rèn)該耐旱基因是否在再生植株中正確表達(dá)，應(yīng)檢測(cè)此再生植株中該基因的 ，如果檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，再在田間試驗(yàn)中檢測(cè)植株的 是否得到提高。（4）假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交，子代中耐旱與不耐旱I1株的數(shù)量比為3 ： 1時(shí)，則可推測(cè)該耐旱基因整合到了 （填 向源染色體的一條上”或 同源染色體的兩條上”）。答案 （15分）（1）全部（2分）部分（2分,其他合理答案也給分）（2

27、）篩選（2分，其他合理答案也給分）乙（2分）表達(dá)產(chǎn)物（2分，其他合理答案也給分）耐旱性（2分）（4）同源染色體的一條上（3分）教師用書專用（9 10）9.（2013課標(biāo)1,40,15分,0.653）閱讀如下資料：資料甲：科學(xué)家將牛生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈笫芫阎校玫搅梭w型巨大的 超級(jí)小鼠：科學(xué)家采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出轉(zhuǎn)基因煙草。資料乙:T 4溶菌酶在溫度較高時(shí)易失去活性?？茖W(xué)家對(duì)編碼T4溶菌酶的基因進(jìn)行了改造，使其表達(dá)的T4溶菌酶第3位的異亮氨酸變?yōu)榘腚装彼?，在該半胱氨酸與第 97位的半胱氨酸之間形成了一個(gè)二硫鍵，提高了T4溶菌酶的耐熱性。資料丙：兔甲和兔乙是同一物種的兩個(gè)雌性個(gè)體，科學(xué)家將兔

28、甲受精卵發(fā)育成的胚胎移植到兔乙體內(nèi)，成功產(chǎn)出兔甲的后代，證實(shí)了同一物種的胚胎可在不同個(gè)體的體內(nèi)發(fā)育?；卮鹣铝袉栴}：（1）資料甲屬于基因工程的范疇。將基因表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠的受精卵中常用 法。構(gòu)建基因表達(dá)載 體常用的工具酶是 和。在培育有些轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，農(nóng)桿菌的作用是。（2）資料乙中的技術(shù)屬于 工程的范疇。該工程是指以分子生物學(xué)相關(guān)理論為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì) 進(jìn)行改造，或制造一種 的技術(shù)。在該實(shí)例中，引起T4溶菌酶空間結(jié)構(gòu)改變的原因是組成該酶肽鏈的 序列發(fā)生了改變。（3）資料丙屬于胚胎工程的范疇。胚胎移植是指將獲得的早期胚胎移植到 種的、生理狀態(tài)相同的另 一個(gè)雌性動(dòng)物

29、體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育成新個(gè)體的技術(shù)。在資料丙的實(shí)例中，兔甲稱為 體，兔乙稱為體。答案（1）顯微注射限制性內(nèi)切酶DNA連接酶農(nóng)桿菌可感染植物，將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中（2）蛋白質(zhì)現(xiàn)有的蛋白質(zhì)新蛋白質(zhì)氨基酸同供受10.（2012課標(biāo),40,15分）根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問題：（1）限制性內(nèi)切酶切割 DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有 和。（2）質(zhì)粒運(yùn)載體用EcoRI切割后產(chǎn)生的片段如下：AATT（C- - - GGi- CTTAA為使運(yùn)載體與目的基因相連 ,含有目的基因的 DNA除可用EcoRI切害U外，還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割,該酶必須具有的特點(diǎn)是 。(3)按其來源不同,基因工程

30、中所使用的 DNA1接酶有兩類,即 DNA連接酶和 DNA!接酶。(4)反轉(zhuǎn)錄作用的模板是 ,產(chǎn)物是。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,常采用 技術(shù)。(5)基因工程中除質(zhì)粒外,和 也可作為運(yùn)載體。(6)若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因答案 (1)黏性末端平末端(2)切割產(chǎn)生的DNA段末端與EcoRI切割產(chǎn)生的相同(其他合理答案也可)大腸桿菌T4(4)mRNA(或 RNA) cDNA陵 DNA) PCR(5)噬菌體動(dòng)植物病毒(其他合理答案也可)(6)未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒 (外源DNA)的能力極弱(其他合理答案也可)B組自主命題省(區(qū)、市)卷題組1

31、.(2018江蘇單科，32,8分)為生產(chǎn)具有特定性能的a -淀粉酶，研究人員從某種海洋細(xì)菌中克隆了a-淀粉酶基因(1 656個(gè)堿基對(duì)),利用基因工程大量制備a -淀粉酶，實(shí)驗(yàn)流程見圖。請(qǐng)回答下列問題 ：(1)利用PCR術(shù)擴(kuò)增a-淀粉酶基因前，需先獲得細(xì)菌的 。(2)為了便于擴(kuò)增的 DNM段與表達(dá)載體連接，需在引物的 端加上限制性酶切位點(diǎn)，且常在兩條引物 上設(shè)計(jì)加入不同的限制性酶切位點(diǎn)，主要目的是 。(3)進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，反應(yīng)的溫度和時(shí)間需根據(jù)具體情況進(jìn)行設(shè)定，下列選項(xiàng)中 的設(shè)定與引物有關(guān)的設(shè)定與擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度有關(guān)。(填序號(hào))變性溫度退火溫度延伸溫度變性時(shí)間退火時(shí)間延伸時(shí)間(4)下圖表示篩選獲得的工

32、程菌中編碼a-淀粉酶的mRNA勺部分堿基序列：5'-AugccaucaacaaauacuaaCa CUU圖中虛線框內(nèi) mRN的段包含 個(gè)密碼子,如虛線框后的序列未知,預(yù)測(cè)虛線框后的第一個(gè)密碼子最 多有 種。(5)獲得工程菌表達(dá)的 a -淀粉酶后，為探究影響酶活性的因素，以濃度為1%勺可溶性淀粉為底物測(cè)定酶活性 結(jié)果如下：緩沖液50 mmol/LNaPQ -KH 2PQ50 mmol/LTris-HCl50 mmol/LGly-NaQHPH6.06.57.07.57.58.08.59.09.09.510.010. 5酶相對(duì)活性25.440.249.863.270.195.599.585.

33、368.163.741.520.8根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，初步判斷該 a -淀粉酶活性最高的條件 為。答案(8分)基因組DNA (2)5' 使DNA段能定向插入表達(dá)載體，減少自連(3)(4)813(5)pH 為 8.5,緩沖全夜為 50 mmol/L Tirs-HCl2.(2018天津理綜，10,14分)甲型流感病毒為 RNAW毒，易引起流感大規(guī)模流行。我國(guó)科學(xué)家在2017年發(fā)明了一種制備該病毒活疫苗的新方法，主要環(huán)節(jié)如下。(1)改造病毒的部分基因，使其失去在正常宿主細(xì)胞內(nèi)的增殖能力。以病毒RNW模板，逆轉(zhuǎn)錄成對(duì)應(yīng) DNA舌,利用 技術(shù)擴(kuò)增，并將其中某些基因(不包括表面抗原基因)內(nèi)個(gè)別編碼氨

34、基酸的序列替換成編碼終止密碼子的序列。與改造前的基因相比，改造后的基因表達(dá)時(shí)不能合成完整長(zhǎng)度的 ,因此不能產(chǎn)生子代病毒。將該改造基因、表面抗原等其他基因分別構(gòu)建重組質(zhì)粒，并保存。(2)構(gòu)建適合改造病毒增殖的轉(zhuǎn)基因宿主細(xì)胞。設(shè)計(jì)合成一種特殊tRNA的基因，其產(chǎn)物的反密碼子能與(1)中的終止密碼子配對(duì)結(jié)合，并可攜帶一個(gè)非天然氨基酸(Uaa)。將該基因與 連接后導(dǎo)入宿主細(xì)胞。提取宿主細(xì)胞的 進(jìn)行分子雜交鑒定，篩選獲得成功表達(dá)上述 tRNA的轉(zhuǎn)基因宿主細(xì)胞。 利用轉(zhuǎn)基因宿主細(xì)胞制備疫苗。將(1)中的重組質(zhì)粒導(dǎo)入(2)中的轉(zhuǎn)基因宿主細(xì)胞，并在補(bǔ)加 的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，則該宿主細(xì)胞能利用上述特殊tRNA,

35、翻譯出改造病毒基因的完整蛋白，產(chǎn)生大量子代病毒，用于制備疫苗。特殊tRNA基因轉(zhuǎn)錄時(shí)，識(shí)別其啟動(dòng)子的酶是 (單選)。A.病毒的DN咪合酶B.宿主的DNAm合酶C.病毒的RN咪合酶D.宿主的RNAm合酶(4)上述子代病毒不能在正常宿主細(xì)胞中增殖，沒有致病性，因此不經(jīng)滅活或減毒即可制成疫苗。與不具侵染性的流感病毒滅活疫苗相比，該病毒活疫苗的優(yōu)勢(shì)之一是可引起 免疫，增強(qiáng)免疫保護(hù)效果。答案(共14分)(1)PCR 多肽(或蛋白質(zhì))(2)載體總RNA 非天然氨基酸(Uaa) D(4)細(xì)胞教師用書專用(34)3.(2017天津理綜，9 I ,12分)玉米自交系(遺傳穩(wěn)定的育種材料)B具有高產(chǎn)、抗病等優(yōu)良性

36、狀，但難以直接培育成轉(zhuǎn)基因植株，為使其獲得抗除草劑性狀，需依次進(jìn)行步驟I、n試驗(yàn)。I .獲得抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米自交系A(chǔ),技術(shù)路線如下圖。*利叵悴丑因G(1)為防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，構(gòu)建表達(dá)載體需用2種限制酶，選擇的原則是 (單選)。Ti質(zhì)粒內(nèi)，每種限制酶只有一個(gè)切割位點(diǎn)G基因編碼蛋白質(zhì)的序列中，每種限制酶只有一個(gè)切割位點(diǎn)酶切后，G基因形成的兩個(gè)黏性末端序列不相同酶切后,Ti質(zhì)粒形成的兩個(gè)黏性末端序列相同A. B. C. D.(2)下表是4種玉米自交系幼胚組織培養(yǎng)不同階段的結(jié)果。據(jù)表可知，細(xì)胞脫分化時(shí)使用的激素是 ,自交系 的幼胚最適合培養(yǎng)成愈傷組織作為轉(zhuǎn)化受體。2,4-D(2.0 mg/L)6

37、-BA(0.5 mg/L)IBA(2.0 mg/L)激素結(jié)果自交系愈傷組織芽的根的形成率(%)分化率(%)誘導(dǎo)率(%)甲991390乙858087丙888312丁168583(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化愈傷組織時(shí)，T-DNA攜帶插入其內(nèi)的片段轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞。篩選轉(zhuǎn)化的愈傷組織，需使用含的選擇培養(yǎng)基。(4)轉(zhuǎn)化過程中，愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌，導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化愈傷組織也可能在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。含有內(nèi)含子 的報(bào)告基因只能在真核生物中正確表達(dá)，其產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。用 K分別處理以下愈傷組織出現(xiàn)藍(lán)色的是(多選)。A.無農(nóng)桿菌附著的未轉(zhuǎn)化愈傷組織B.無農(nóng)桿菌附著的轉(zhuǎn)化愈傷組織C.農(nóng)桿菌附著的未轉(zhuǎn)化愈傷組織D.

38、農(nóng)桿菌附著的轉(zhuǎn)化愈傷組織（5）組織培養(yǎng)獲得的轉(zhuǎn)基因植株（核DNA中僅插入一個(gè)G基因）進(jìn)行自交，在子彳弋含G基因的植株中，純合子占。繼續(xù)篩選，最終選育出抗除草劑純合自交系A(chǔ)一，、_ 一 _11答案 （共 12 分）（1）A（2）2,4-D 乙（3）除草劑 （4）BD （5）-i J4.（2017江蘇單科，33,8分）金屬硫蛋白（MT）是一類廣泛存在的金屬結(jié)合蛋白，某研究小組計(jì)劃通過多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增獲得目的基因，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因工程菌，用于重金屬?gòu)U水的凈化處理。PCRT增過程示意圖如下請(qǐng)回答下列問題I與星生IfriS h原毒案野后活化的土希制制|的 （晶體好白#性物質(zhì)暨陪Ail S5S腳胞轉(zhuǎn)

39、麻因抗蟲棉響蟲長(zhǎng)送B生（1）從高表達(dá)MT蛋白的生物組織中提取 mRNA通過 獲得 用于PCR擴(kuò)增。（2）設(shè)計(jì)一對(duì)與MT基因兩端序列互補(bǔ)配對(duì)的引物 （引物1和引物2）,為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒，在引物中需要增加適當(dāng)?shù)?位點(diǎn)。設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避免引物之間形成 ,而造成引物自連。（3）圖中步驟1代表,步驟2代表退火，步驟3代表延伸，這三個(gè)步驟組成一輪循環(huán)。（4）PCR擴(kuò)增時(shí)，退火溫度的設(shè)定是成敗的關(guān)鍵。退火溫度過高會(huì)破壞 的堿基配對(duì)。退火溫度的設(shè)定與引物長(zhǎng)度、堿基組成有關(guān)，長(zhǎng)度相同但 的引物需要設(shè)定更高的退火溫度。（5）如果PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物，則可以采取的改進(jìn)措施有 （填序號(hào)：升高退火溫度降低退火

40、溫度重新設(shè)計(jì)引物）。答案（8分）（1）逆轉(zhuǎn)錄cDNA （2）限制性核酸內(nèi)切酶堿基互補(bǔ)配對(duì) （3）變性（4）引物與模板GC含 量高（5）【三年模擬】非選擇題（共65分）1.（2019屆福建三明一中高三開學(xué)考,51）如圖表示從蘇云金芽抱桿菌分離出來的殺蟲晶體蛋白質(zhì)基因（簡(jiǎn)稱：（8 分）Bt基因）及形成轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的圖解。請(qǐng)據(jù)圖回答下面的問題（1）圖中a過程要用到的酶是（2）在進(jìn)行圖中b過程時(shí),由我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的十分簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)的方法是 ，此外,也經(jīng)常采用 法。若要培育車t基因綿羊，則此過程要用 的方法。（3）為確定抗蟲棉是否培育成功,既要用放射性同位素標(biāo)記的 作探針進(jìn)行分子 雜交測(cè)試，又要在個(gè)體水平上

41、鑒定，后者具體過程（4）活化的毒性物質(zhì)應(yīng)是一種 分子，可以全部或部分嵌合于昆蟲的細(xì)胞膜上，使細(xì)胞膜產(chǎn)生孔道，導(dǎo)致細(xì)胞由于滲透平衡的破壞而破裂。答案（8分，除標(biāo)注外每空1分）（1）限制性核酸內(nèi)切酶 （2）花粉管通道法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化 顯微注射 （3） 殺蟲晶體蛋白質(zhì)基因（或Bt基因、目的基因）讓害蟲吞食抗蟲棉葉子，觀察害蟲的存活狀態(tài)（或其他合理答 案）（2分）（4）多肽2.（2019屆四川外國(guó)語(yǔ)大學(xué)附校第二次月考，38）雜交水稻之父”袁隆平領(lǐng)導(dǎo)的海水稻團(tuán)隊(duì)于今年5月在迪拜熱帶沙漠種植的海水稻測(cè)產(chǎn)成功，最高畝產(chǎn)超過500公斤。引起全世界廣泛關(guān)注。回答下列問題：（15分）（1）若培育轉(zhuǎn)基因海水稻，可將耐

42、鹽基因?qū)敫弋a(chǎn)水稻細(xì)胞內(nèi)培育。要大量獲得耐鹽基因可采用 技 術(shù)。構(gòu)建的 中通常含有標(biāo)記基因，標(biāo)記基因的作用 （2）將耐鹽基因?qū)胨炯?xì)胞常用的方法是 ；檢測(cè)耐鹽基因是否在水稻細(xì)胞內(nèi)中轉(zhuǎn)錄成功，通常采用 技術(shù)檢測(cè)。（3）目前，以袁隆平院士為首的科研團(tuán)隊(duì)利用雜種優(yōu)勢(shì)提高產(chǎn)量。基因工程技術(shù)相對(duì)于雜交育種的突出優(yōu)點(diǎn)是。通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，耐鹽基因能在水稻細(xì)胞或其他細(xì)胞中成功表達(dá)的原因是答案（除標(biāo)注外，每空2分,15分）（1）PCR 基因表達(dá)載體鑒定并篩選目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法分子雜交（3）克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙，定向改變生物性狀密碼子具有通用性（或不同生物共用一套密碼子）（3分）3.（

43、2019屆湖北華中師大第一附中學(xué)期中，38）油菜籽中蛋白質(zhì)和油脂的相對(duì)含量，與酶1和酶2對(duì)共同底物丙酮酸的競(jìng)爭(zhēng)有關(guān)。酶 1促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，酶2促進(jìn)油脂的合成。通過生物工程技術(shù)對(duì)油菜進(jìn)行改造，以 得到含有基因A的油菜，流程圖如下。請(qǐng)據(jù)圖作答：（15分）潮或真 抗性 城內(nèi)啟動(dòng)盾也“瓶生康粒油菜的培養(yǎng)基 汕榮 申m質(zhì)粒的農(nóng)肝菌卜觸觸率基因A塾止于（1）上述過程中運(yùn)用的生物工程技術(shù)有 （2）通過從基因文庫(kù)中獲取、或人工化學(xué)合成等方法，都可獲取目的基因 A （3）過程中要防止雜菌污染的原因是 。通過過程得到的 油菜植株中，所有細(xì)胞 （填,定"不一定"或'定不”）含有基因A,

44、原因是（4）已知轉(zhuǎn)錄時(shí)基因 A的模板鏈與酶1基因的模板鏈互補(bǔ)。相對(duì)普通油菜，含基因A的油菜籽粒油脂含量顯 著提高,其機(jī)理可能是基因 A轉(zhuǎn)錄的mRNAf酶1基因轉(zhuǎn)錄的mRNAi補(bǔ),阻礙了酶1基因的 過程,降低了酶1含量，酶2對(duì)丙酮酸的競(jìng)爭(zhēng)增強(qiáng)，促進(jìn)了油脂合成。答案（1）轉(zhuǎn)基因技術(shù)和植物組織培養(yǎng)技術(shù)（3分）（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增（3）雜菌會(huì)競(jìng)爭(zhēng)培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還可能產(chǎn)生有毒有害物質(zhì) （3分）不一定農(nóng)桿菌不一定感染外植體的每個(gè)細(xì)胞，從而使每個(gè)細(xì)胞的染色體不一定都整合了目的基因（3分）（4）翻譯4.（2019屆福建三明一中第一次月考，51）科學(xué)家成功制備出嫁接”了人胰島素基因的工程菌，它能大量合成 人胰島素，用來治療糖尿病，使胰島素的生產(chǎn)成本大大降低。回答相關(guān)問題 ：（10分）目的基因土A”-”H IHqR|e hmnDy5r（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA需要在反應(yīng)體系中添加的有機(jī)物質(zhì)有 、熱穩(wěn)定