第二節(jié)基因工程的原理和技術(shù)正式

1、第二節(jié)基因工程的原理和技術(shù)正式第1頁，共43頁。要想將某個(gè)特定基因與質(zhì)粒相連，要想將某個(gè)特定基因與質(zhì)粒相連，需要用幾種限制性核酸內(nèi)切酶？需要用幾種限制性核酸內(nèi)切酶？思考題：思考題：第2頁，共43頁。第3頁，共43頁。重組質(zhì)?；蛑亟M重組質(zhì)?；蛑亟MDNA第4頁，共43頁。傳統(tǒng)的生產(chǎn)胰島素的方法只能從豬和羊的胰傳統(tǒng)的生產(chǎn)胰島素的方法只能從豬和羊的胰腺中提取腺中提取,獲得獲得1g胰島素大約需要胰島素大約需要100Kg的的豬胰臟豬胰臟糖尿病治療糖尿病治療1978年年,科學(xué)家在大腸桿菌中成功表達(dá)了人胰島科學(xué)家在大腸桿菌中成功表達(dá)了人胰島素素,并于并于1982年被美國批準(zhǔn)上市年被美國批準(zhǔn)上市基因工程的基本原

2、理基因工程的基本原理 讓人們讓人們感興趣的基因感興趣的基因（目的基因）在宿主（目的基因）在宿主細(xì)胞中細(xì)胞中穩(wěn)定穩(wěn)定和和高效高效表達(dá)。表達(dá)。第5頁，共43頁。第6頁，共43頁?；蚬こ痰幕静僮鞒绦蚧蚬こ痰幕静僮鞒绦? 1、獲得目的基因、獲得目的基因2 2、形成重組、形成重組DNADNA分子分子3 3、將重組、將重組DNADNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞分子導(dǎo)入受體細(xì)胞4 4、篩選含有目的基因的受體細(xì)胞、篩選含有目的基因的受體細(xì)胞5 5、目的基因的表達(dá)、目的基因的表達(dá)剪切剪切拼接拼接導(dǎo)入導(dǎo)入篩選篩選表達(dá)表達(dá)第7頁，共43頁。目前被較廣泛提取使目前被較廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金用的目的基因有：蘇云

3、金桿菌抗蟲基因、人胰島素桿菌抗蟲基因、人胰島素基因、人干擾素基因、種基因、人干擾素基因、種子貯藏蛋白基因、植物抗子貯藏蛋白基因、植物抗病基因等。病基因等?；虿僮鞯幕静襟E基因操作的基本步驟一、提取目的基因一、提取目的基因?qū)⑿枰幕驈墓w生物將需要的基因從供體生物的細(xì)胞內(nèi)提取出來。的細(xì)胞內(nèi)提取出來。供體生物細(xì)胞供體生物細(xì)胞取出取出DNADNA用限制酶剪用限制酶剪去多余部分去多余部分目的基因目的基因限制酶限制酶第8頁，共43頁。目的基因的序列未知目的基因的序列未知1、從基因文庫中獲取、從基因文庫中獲取目的基因的序列已知目的基因的序列已知2、利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)擴(kuò)

4、增技術(shù)擴(kuò)增3、人工合成、人工合成獲取目的基因的常用方法：獲取目的基因的常用方法：第9頁，共43頁。 1、基因文庫的構(gòu)建基因文庫的構(gòu)建直接分離法（或鳥槍法）直接分離法（或鳥槍法）第10頁，共43頁。2、利用、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，在生物體外復(fù)制特定聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，在生物體外復(fù)制特定DNADNA片片段的核酸合成技術(shù)。可以獲得大量的目的基因。段的核酸合成技術(shù)。可以獲得大量的目的基因。PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增儀第11頁，共43頁。氫鍵斷裂，形成單鏈氫鍵斷裂，形成單鏈DNADNA。引物與引物與DNADNA模板結(jié)合，形模板結(jié)合，形成局部雙鏈。成局部雙鏈。 在酶的作用下，不斷延

5、伸，在酶的作用下，不斷延伸，合成雙鏈合成雙鏈DNADNA。多次循環(huán)，獲得大量多次循環(huán)，獲得大量雙鏈雙鏈DNADNA分子。分子。uPCRPCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增第12頁，共43頁。目的基目的基因的因的mRNAmRNA逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄單鏈單鏈DNADNA合成合成雙鏈雙鏈DNADNA（目的基因）（目的基因）蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)氨基酸氨基酸序列序列推測(cè)推測(cè)mRNAmRNA的的核苷酸核苷酸序列序列推測(cè)推測(cè)結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)基因的核苷酸的核苷酸序列序列化學(xué)化學(xué)合成合成目目的的基基因因逆轉(zhuǎn)錄法逆轉(zhuǎn)錄法根據(jù)已知氨基酸序列直接合成根據(jù)已知氨基酸序列直接合成DNA第13頁，共43頁。二、二、形成重組形成重組DNA分子分子 核心核心質(zhì)

6、粒質(zhì)粒DNADNA分子分子限制酶處理限制酶處理兩個(gè)切口兩個(gè)切口獲得目的基因獲得目的基因DNADNA連接酶連接酶重組重組DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）同一種同一種一個(gè)切口一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端兩個(gè)黏性末端第14頁，共43頁。目的基因與質(zhì)粒的連接第15頁，共43頁。三、將重組三、將重組DNADNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞分子導(dǎo)入受體細(xì)胞（1 1）常用的受體細(xì)胞：）常用的受體細(xì)胞：有大腸桿菌、枯草桿菌、有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。探究：轉(zhuǎn)基因過程中，怎樣選擇受體細(xì)胞？探究：轉(zhuǎn)基因過程中，怎樣選擇受體細(xì)胞？ 轉(zhuǎn)基因植物轉(zhuǎn)基因植物 轉(zhuǎn)基因

7、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 轉(zhuǎn)基因微生物轉(zhuǎn)基因微生物植物體細(xì)胞或受精卵植物體細(xì)胞或受精卵受精卵受精卵大腸桿菌、枯草桿菌、酵大腸桿菌、枯草桿菌、酵母菌等母菌等第16頁，共43頁。探究：為什么常用微生物作為受體細(xì)胞？探究：為什么常用微生物作為受體細(xì)胞？ 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，就可以隨著目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，就可以隨著受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制，由于細(xì)菌繁殖的速度受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制，由于細(xì)菌繁殖的速度非?？?，在很短的時(shí)間內(nèi)就能夠獲得大量的目非?？?，在很短的時(shí)間內(nèi)就能夠獲得大量的目的基因。的基因。 微生物可通過微生物可通過發(fā)酵發(fā)酵大量繁殖。大量繁殖。第17頁，共43頁。（2 2）將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞）將目的基

8、因?qū)胛⑸锛?xì)胞受體細(xì)胞：受體細(xì)胞： 細(xì)菌細(xì)菌氯化鈣氯化鈣 細(xì)胞壁的通透性增大細(xì)胞壁的通透性增大重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞目的基因隨受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制目的基因隨受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制第18頁，共43頁。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法第19頁，共43頁。 基因槍法又稱微彈轟擊法，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，將包裹基因槍法又稱微彈轟擊法，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體在金屬顆粒表面的表達(dá)載體DNA打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。合并表達(dá)

9、的方法。第20頁，共43頁。第21頁，共43頁。將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù)提純基因表達(dá)載體提純基因表達(dá)載體體外顯微注射入受精卵體外顯微注射入受精卵受精卵移植受精卵移植第22頁，共43頁。1.1.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法2.2.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù)（最多、最有效）（最多、最有效）3.3.將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞Ca2+處理，處理，以增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性。以增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性。第23頁，共43頁。探究：如何把導(dǎo)入了目的基

10、因的受體細(xì)胞篩選出探究：如何把導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞篩選出來？來？1）原理：）原理：2）方法：）方法：3）舉例）舉例所有受所有受體細(xì)胞體細(xì)胞接種接種含有四環(huán)素含有四環(huán)素的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基篩選篩選生活的受生活的受體細(xì)胞體細(xì)胞導(dǎo)入導(dǎo)入重組重組DNADNA分子分子（抗四環(huán)素基因）（抗四環(huán)素基因）培養(yǎng)培養(yǎng)含重組含重組DNADNA分子分子的受體細(xì)胞的受體細(xì)胞四、篩選有目的基因的受體細(xì)胞四、篩選有目的基因的受體細(xì)胞質(zhì)粒上有抗生素的抗性基因質(zhì)粒上有抗生素的抗性基因利用選擇培養(yǎng)基篩選利用選擇培養(yǎng)基篩選第24頁，共43頁。篩選含有目的基因的受體細(xì)胞篩選含有目的基因的受體細(xì)胞前三步的處理十分繁鎖，為保證目的基因得

11、到有效利用，前三步的處理十分繁鎖，為保證目的基因得到有效利用，通常用大量的受體細(xì)胞來接受不多的目的基因。這樣，處理通常用大量的受體細(xì)胞來接受不多的目的基因。這樣，處理的受體細(xì)胞中真正攝入了目的基因的很少，必須將它從中檢的受體細(xì)胞中真正攝入了目的基因的很少，必須將它從中檢測(cè)出來。測(cè)出來。無表達(dá)產(chǎn)物無表達(dá)產(chǎn)物無表達(dá)產(chǎn)物無表達(dá)產(chǎn)物有表達(dá)產(chǎn)物有表達(dá)產(chǎn)物無表達(dá)產(chǎn)物無表達(dá)產(chǎn)物細(xì)菌的檢測(cè)，將每個(gè)受體細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)形成菌落，檢細(xì)菌的檢測(cè)，將每個(gè)受體細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)形成菌落，檢測(cè)菌落中是否有目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。淘汰無表達(dá)產(chǎn)物的測(cè)菌落中是否有目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。淘汰無表達(dá)產(chǎn)物的菌落，保留有表達(dá)產(chǎn)物的進(jìn)一步培養(yǎng)、研究。菌

12、落，保留有表達(dá)產(chǎn)物的進(jìn)一步培養(yǎng)、研究。第25頁，共43頁。多細(xì)胞生物的檢測(cè)，將每個(gè)受體細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)并誘導(dǎo)發(fā)育成多細(xì)胞生物的檢測(cè)，將每個(gè)受體細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)并誘導(dǎo)發(fā)育成完整個(gè)體，檢測(cè)這些個(gè)體是否攝入目的基因，攝入的基因是否表完整個(gè)體，檢測(cè)這些個(gè)體是否攝入目的基因，攝入的基因是否表達(dá)（是否表現(xiàn)出相應(yīng)的性狀）。淘汰無變化的個(gè)體，保留有相應(yīng)達(dá)（是否表現(xiàn)出相應(yīng)的性狀）。淘汰無變化的個(gè)體，保留有相應(yīng)變化的個(gè)體進(jìn)一步培養(yǎng)、研究。變化的個(gè)體進(jìn)一步培養(yǎng)、研究。例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲，例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲，如蟲吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，如蟲吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說明未攝入目的基因或攝入說明未攝入目的基因或攝入目的基因未表達(dá)。如

13、蟲吃后目的基因未表達(dá)。如蟲吃后中毒死亡，則說明攝入了抗中毒死亡，則說明攝入了抗蟲基因并得到表達(dá)。蟲基因并得到表達(dá)。第26頁，共43頁。 外源基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的理論基礎(chǔ)外源基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的理論基礎(chǔ)基因是控制生物性狀的基本單位基因是控制生物性狀的基本單位生物界共用一套遺傳密碼生物界共用一套遺傳密碼遺傳信息的傳遞都遵循中心法則的信息流動(dòng)方遺傳信息的傳遞都遵循中心法則的信息流動(dòng)方向向第27頁，共43頁。人胰島素原基因在大腸桿菌中只能表達(dá)和人人胰島素原基因在大腸桿菌中只能表達(dá)和人胰島素原胰島素原，要經(jīng)進(jìn)一步的加工后才能獲得，要經(jīng)進(jìn)一步的加工后才能獲得具生物活性具生物活性的胰島素。的胰島素。第2

14、8頁，共43頁。甲生物甲生物乙生物乙生物取出優(yōu)取出優(yōu)秀基因秀基因“剪切剪切”“拼接拼接”新類型新類型表達(dá)表達(dá)新的生物產(chǎn)品新的生物產(chǎn)品基基因因敲敲除除技技術(shù)術(shù)轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)基基因因技技術(shù)術(shù)生物生物新類型新類型敲敲除除不不利利基基因因新的生物產(chǎn)品新的生物產(chǎn)品第29頁，共43頁。能力提升：能力提升：人的糖蛋白必須經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)人的糖蛋白必須經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體進(jìn)一步加工合成，通過轉(zhuǎn)基因和高爾基體進(jìn)一步加工合成，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，可以使人的糖蛋白基因得以表達(dá)的技術(shù)，可以使人的糖蛋白基因得以表達(dá)的受體細(xì)胞是（受體細(xì)胞是（ ）A A 大腸桿菌大腸桿菌 B B 酵母菌酵母菌 C T4C T4噬菌體噬菌體 D D 質(zhì)粒質(zhì)粒D

15、NADNAB B第30頁，共43頁。知識(shí)延伸知識(shí)延伸DNADNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù) 該方法是根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，把互補(bǔ)的雙鏈該方法是根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，把互補(bǔ)的雙鏈DNA解開，把單股的解開，把單股的DNA小片段用同位素、熒光分子或化學(xué)發(fā)光小片段用同位素、熒光分子或化學(xué)發(fā)光催化劑等進(jìn)行標(biāo)記，之后同被檢測(cè)的催化劑等進(jìn)行標(biāo)記，之后同被檢測(cè)的DNA中的同源互補(bǔ)序列中的同源互補(bǔ)序列雜交，從而檢出所要查明的雜交，從而檢出所要查明的DNA或基因?；蚧?。第31頁，共43頁?；蛱结槪ɑ蛱结槪―NA探針）與目的基因雜交，有無雜探針）與目的基因雜交，有無雜交帶交帶第32頁，共43頁?；蚬こ痰幕静?/p>

16、作程序目的基因的獲取目的基因的獲取形成重組形成重組DNA分子；分子；將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞篩選含有目的基因的受體細(xì)胞和目的基因表達(dá)篩選含有目的基因的受體細(xì)胞和目的基因表達(dá)1、從基因文庫中獲取目的基因、從基因文庫中獲取目的基因2、利用、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因3、化學(xué)方法人工合成、化學(xué)方法人工合成農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、顯微注射法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、顯微注射法、CaCa2+2+處理法處理法DNADNA分子雜交技術(shù)、抗原分子雜交技術(shù)、抗原抗體雜交技術(shù)抗體雜交技術(shù)分子檢測(cè)外的個(gè)體水平鑒定分子檢測(cè)外的個(gè)體水平鑒定四、本節(jié)小結(jié)：第33頁，共43頁。例如：例如

17、：將每個(gè)受體細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)形成菌落，檢測(cè)菌將每個(gè)受體細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)形成菌落，檢測(cè)菌落中是否有目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。淘汰無落中是否有目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。淘汰無表達(dá)產(chǎn)物的菌落，保留有表達(dá)產(chǎn)物的進(jìn)一表達(dá)產(chǎn)物的菌落，保留有表達(dá)產(chǎn)物的進(jìn)一步培養(yǎng)、研究。步培養(yǎng)、研究。無表達(dá)產(chǎn)物無表達(dá)產(chǎn)物無表達(dá)產(chǎn)物無表達(dá)產(chǎn)物有表達(dá)產(chǎn)物有表達(dá)產(chǎn)物無表達(dá)產(chǎn)物無表達(dá)產(chǎn)物第34頁，共43頁。1 1、用基因工程技術(shù)可使大腸桿菌合成人的蛋白質(zhì)。下列、用基因工程技術(shù)可使大腸桿菌合成人的蛋白質(zhì)。下列敘述不正確的是敘述不正確的是 A A常用相同的限制性內(nèi)切酶處理的基因和質(zhì)粒常用相同的限制性內(nèi)切酶處理的基因和質(zhì)粒 B BDNADNA連接酶和連接酶和

18、RNARNA聚合酶是構(gòu)建重組質(zhì)粒必需的工具酶聚合酶是構(gòu)建重組質(zhì)粒必需的工具酶 C C可用含抗生素的培養(yǎng)基檢測(cè)大腸桿菌中是否導(dǎo)入了可用含抗生素的培養(yǎng)基檢測(cè)大腸桿菌中是否導(dǎo)入了重組質(zhì)粒重組質(zhì)粒 D D導(dǎo)入大腸桿菌的目的基因不一定能成功表達(dá)導(dǎo)入大腸桿菌的目的基因不一定能成功表達(dá) B鞏固練習(xí)鞏固練習(xí)第35頁，共43頁。2下列屬于獲取目的基因的方法的是下列屬于獲取目的基因的方法的是( )利用利用mRNA反轉(zhuǎn)錄形成反轉(zhuǎn)錄形成 從基因組文庫中提取從基因組文庫中提取從受體細(xì)胞中提取從受體細(xì)胞中提取 利用利用PCR技術(shù)技術(shù) 利用利用DNA轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄 人工合成人工合成A B CDD第36頁，共43頁。3基因工程又叫

19、基因拼接技術(shù)?；蚬こ逃纸谢蚱唇蛹夹g(shù)。 (1)在該技術(shù)中，用人工合成方法獲得目的基因的途徑之一是：以目在該技術(shù)中，用人工合成方法獲得目的基因的途徑之一是：以目的基因轉(zhuǎn)錄的的基因轉(zhuǎn)錄的 為模板，為模板， 成互補(bǔ)的單鏈成互補(bǔ)的單鏈DNA，然，然后在酶的作用下合成后在酶的作用下合成 。 (2)基因工程中常用的受體細(xì)胞有細(xì)菌、真菌、基因工程中常用的受體細(xì)胞有細(xì)菌、真菌、 。 (3)假設(shè)以大腸桿菌質(zhì)粒作為運(yùn)載體，并以同一種限制性內(nèi)切假設(shè)以大腸桿菌質(zhì)粒作為運(yùn)載體，并以同一種限制性內(nèi)切酶切割運(yùn)載體與目的基因，將切割后的運(yùn)載體與目的基因酶切割運(yùn)載體與目的基因，將切割后的運(yùn)載體與目的基因片段混合，并加入片段混

20、合，并加入DNA連接酶。連接產(chǎn)物至少有連接酶。連接產(chǎn)物至少有 種環(huán)種環(huán)狀狀DNA分子，它們分別分子，它們分別 是是 。信使信使RNA 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄 雙鏈雙鏈DNA(目的基因目的基因)動(dòng)植物細(xì)胞動(dòng)植物細(xì)胞 3 運(yùn)載體自連的、目的基因片段自連的、運(yùn)載體自連的、目的基因片段自連的、運(yùn)載體與目的基因片段相連的環(huán)狀運(yùn)載體與目的基因片段相連的環(huán)狀DNA分子分子 第37頁，共43頁。4如何利用目的基因，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得抗寒能力提如何利用目的基因，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得抗寒能力提高的香蕉植株？在運(yùn)用轉(zhuǎn)基因香蕉的過程中，在生態(tài)高的香蕉植株？在運(yùn)用轉(zhuǎn)基因香蕉的過程中，在生態(tài)安全方面可能會(huì)出現(xiàn)什么問題？（列舉兩點(diǎn)）安

21、全方面可能會(huì)出現(xiàn)什么問題？（列舉兩點(diǎn)）將目的基因插人土壤農(nóng)桿菌的質(zhì)粒，構(gòu)建表達(dá)載體，通將目的基因插人土壤農(nóng)桿菌的質(zhì)粒，構(gòu)建表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化導(dǎo)人香蕉受體細(xì)胞，成功轉(zhuǎn)化的香蕉過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化導(dǎo)人香蕉受體細(xì)胞，成功轉(zhuǎn)化的香蕉細(xì)胞通過組織培養(yǎng)形成植株。細(xì)胞通過組織培養(yǎng)形成植株。生態(tài)安全問題包括：生態(tài)安全問題包括： 外源基因擴(kuò)散到其他物種（外源基因漂移）；外源基因擴(kuò)散到其他物種（外源基因漂移）；轉(zhuǎn)基因植株擴(kuò)散影響生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能；轉(zhuǎn)基因植株擴(kuò)散影響生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能；轉(zhuǎn)基因植株擴(kuò)散對(duì)生物多樣性的影響；轉(zhuǎn)基因植株擴(kuò)散對(duì)生物多樣性的影響；轉(zhuǎn)基因植物殘?bào)w或分泌物對(duì)環(huán)境的影響。轉(zhuǎn)基因植物殘?bào)w或分泌物對(duì)環(huán)境的影響。第38頁，共43頁。剪切剪切拼接拼接導(dǎo)入導(dǎo)入表達(dá)表達(dá)( (四