藥品質量標準分析方法驗證指導原則

1、藥品質量標準分析方法驗證指導原則中國藥典2015年版藥品質量標準分析方法驗證的目的是證明采用的方法適合于相應檢測要求。在建立藥品質量標準時，分析方法需經驗證；在藥品生產工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂時，則質量標準分析方法也需進行驗證。方法驗證理由、過程和結果均應記載在藥品質量標準起草說明或修訂說明中。生物制品質量控制中采用的方法包括理化分析方法和生物學測定方法其中理化分析方法的驗證原則與化學藥品基本相同，所以可參照本指導原則進行，但在進行具體驗證時還需要結合生物制品的特點考慮；相對于理化分析方法而言，生物學測定方法存在更多的影響因素，因此本指導原則不涉及生物學測定方法驗證的內容。

2、驗證的分析項目有：鑒別試驗、限量或定量檢查、原料藥或制劑中有效成分含量測定，以及制劑中其他成分（如防腐劑等，中藥中其他殘留物、添加劑等）的測定。藥品溶出度、釋放度等檢查中，其溶出量等的測定方法也應進行必要驗證。驗證指標有：準確度、精密度（包括重復性、中間精密度和重現性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。在分析方法驗證中，須采用標準物質進行試驗。由于分析方法具有各自的特點，并隨分析對象而變化，因此需要視具體方法擬訂驗證的指標。表1中列出的分析項目和相應的驗證指標可供參考。表1檢驗項目和驗GE指標項目內容鑒捌雜質測定1含st測定及溶岀量測定校正國于限度十精密痰重規(guī)性一十+十中間精密度十

3、f專屬性+檢測限1比；11十線性十+丄十+十耐用性十 巳有重現性驗證，不需驗證中間精密度 如一種方法不骸專屬，可用其他分析方法予以補充. 視具體情況予以驗證.一、準確度準確度系指采用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度一般用回收率（）表示。準確度應在規(guī)定的范圍內測定。1. 化學藥含量測定方法的準確度原料藥采用對照品進行測定，或用本法所得結果與已知準確度的另一個方法測定的結果進行比較。制劑可在處方量空白輔料中，加入已知量被測物對照品進行測定。如不能得到制劑輔料的全部組分，可向待測制劑中加入已知量的被測物對照品進行測定或用所建立方法的測定結果與已知準確度的另一種方法測定結果進行比較。準確度也

4、可由所測定的精密度、線性和專屬性推算出來。2. 化學藥雜質定量測定的準確度可向原料藥或制劑處方量空白輔料中加入已知量雜質進行測定。如不能得到雜質或降解產物對照品，可用所建立方法測定的結果與另一成熟的方法進行比較，如藥典標準方法或經過驗證的方法。在不能測得雜質或降解產物的校正因子或不能測得對主成分的相對校正因子的情況下，可用不加校正因子的主成分自身對照法計算雜質含量。應明確表明單個雜質和雜質總量相當于主成分的重量比（%）或面積比（）。3中藥化學成分測定方法的準確度可用對照品進行加樣回收率測定即向已知被測成分含量的供試品中再精密加入一定量的被測成分對照品，依法測定。用實測值與供試品中含有量之差，除

5、以加入對照品量計算回收率，在加樣回收試驗中須注意對照品的加入量與供試品中被測成分含有量之和必須在標準曲線線性范圍之內；加入對照品的量要適當，過小則引起較大的相對誤差，過大則干擾成分相對減少，真實性差?；厥章?=（C-A）/BX100%式中A為供試品所含被測成分量；B為加入對照品量；C為實測值。4.校正因子的準確度對色譜方法而言，絕對（或定量）校正因子是指單位面積的色譜峰代表的待測物質的量。待測定物質與所選定的參照物質的絕對校正因子之比，即為相對校正因子。相對校正因子計算法常應用于化學藥有關物質的測定、中藥材及其復方制劑中多指標成分的測定。校正因子的表示方法很多，本指導原則中的校正因子是指氣相色

6、譜法和高效液相色譜法中的相對重量校正因子。相對校正因子可采用替代物（對照品）和被替代物（待測物）標準曲線斜率比值進行比較獲得；采用紫外吸收檢測器時，可將替代物（對照品）和被替代物（待測物）在規(guī)定波長和溶劑條件下的吸收系數比值進行比較，計算獲得。5.數據要求在規(guī)定范圍內，取同一濃度（相當于100%濃度水平）的供試品，用至少測定6份樣品的結果進行評價；或設計3種不同濃度，每種濃度分別制備3份供試品溶液進行測定，用9份樣品的測定結果進行評價。對于化學藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1：1左右，建議高、中、低濃度對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.2:1，1:

7、1，0.8:1左右，應報告已知加入量的回收率（），或測定結果平均值與真實值之差及其相對標準偏差或置信區(qū)間（置信度一般為95%）；對于中藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1:1左右，建議高、中、低濃度對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.5：1,1:1，0.5:1左右，應報告供試品取樣量、供試品中含有量、對照品加入量、測定結果和回收率（）計算值，以及回收率（）的相對標準偏差（RSD%）或置信區(qū)間。對于校正因子，應報告測定方法、測定結果和RSD%。樣品中待測定成分含量和回收率限度關系可參考表2。在基質復雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，回收率限度可適

8、當放寬。衰2枠品申椿測定戰(zhàn)分含量和回收率PR度特測定成分含雄回收率隈度S100%9810?10%93102眈】050.%90-1080.01%(ppm)80-1157512010p.g/k£(ppb)北125二、精密度精密度系指在規(guī)定的條件下，同一份均勻供試品，經多次取樣測定所得結果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結果的精密度稱為重復性；在同一個實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備測定結果之間的精密度，稱為中間精密度在不同實驗室由不同分析人員測定結果之間的精密度稱為重現性。含量測定和雜質的定量測定應考察方法的精密

9、度。1. 重復性在規(guī)定范圍內，取同一濃度（相當于100%濃度水平）的供試品，用至少測定6份的結果進行評價；或設計3種不同濃度，每種濃度分別制備3份供試品溶液進行測定，用9份樣品的測定結果進行評價。采用9份測定結果進行評價時，對于化學藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1:1左右，建議高、中、低濃度對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.2:1，1:1，0.8:1左右，對于中藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1：1左右，建議高、中、低濃度對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.5:1，1:1，0.5:1左右。2中間精密度考察隨

10、機變動因素如不同日期、不同分析人員、不同儀器對精密度的影響，應設計方案進行中間精密度試驗。3. 重現性國家藥品質量標準采用的分析方法，應進行重現性試驗，如通過不同實驗室檢驗獲得重現性結果。協(xié)同檢驗的目的、過程和重現性結果均應記載在起草說明中。應注意重現性試驗用樣品質量的一致性及貯存運輸中的環(huán)境對該一致性的影響，以免影響重現性結果。數據要求均應報告偏差、標準偏差、相對標準偏差或置信區(qū)間。樣品中待測定成分含量和精密度可接受范圍參考表3。在基質復雜、含量低于0.01%及多成分等分析中，精密度接受范圍可適當放寬。*3樣品中特測定成分含和精密度可接亜范圍待測魁咸分含址重宣性（RSD%）重現性CRSD）1

11、EXJ騎1210%1.531%2斗50.01%4g(ppm)11ifie/g81610p.g/kg(ppb)15三、專屬性專屬性系指在其他成分（如雜質、降解產物、輔料等）存在下，采用的分析方法能正確測定被測物的能力。鑒別反應、雜質檢查和含量測定方法，均應考察其專屬性。如方法專屬性不強，應采用多種不同原理的方法予以補充。1. 鑒別反應應能區(qū)分可能共存的物質或結構相似化合物。不含被測成分的供試品，以及結構相似或組分中的有關化合物，應均呈陰性反應。2. 含量測定和雜質測定采用色譜法和其他分離方法，應附代表性圖譜，以說明方法的專屬性，并應標明各成分在圖中的位置，色譜法中的分離度應符合要求。在雜質對照品

12、可獲得的情況下，對于含量測定，試樣中可加入雜質或輔料，考察測定結果是否受干擾，并可與未加雜質或輔料的試樣比較測定結果。對于雜質檢查，也可向試樣中加入一定量的雜質，考察各成分包括雜質之間能否得到分離。在雜質或降解產物不能獲得的情況下，可將含有雜質或降解產物的試樣進行測定，與另一個經驗證了的方法或藥典方法比較結果。也可用強光照射、高溫、高濕、酸（堿）水解或氧化等方法進行加速破壞，以研究可能存在的降解產物和降解途徑對含量測定和雜質測定的影響。含量測定方法應比對兩種方法的結果，雜質檢查應比對檢出的雜質個數，必要時可采用光二極管陣列檢測和質譜檢測，進行峰純度檢查。四、檢測限檢測限系指試樣中被測物能被檢測

13、出的最低量。藥品的鑒別試驗和雜質檢查方法，均應通過測試確定方法的檢測限。檢測限僅作為限度試驗指標和定性鑒別的依據，沒有定量意義。常用的方法如下。1. 直觀法用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。2. 信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠地檢測出的被測物質最低濃度或量。一般以信噪比為3:1或2:1時相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。3. 基于響應值標準偏差和標準曲線斜率法按照LOQ=3.36/S公式計算。式中LOQ：檢測限；6：響應值的偏差；S：標準曲線的斜率。6可以通過下列方法測得：測定空白值的標準偏差

14、；標準曲線的剩余標準偏差或截距的標準偏差來代替。數據要求上述計算方法獲得的檢測限數據須用含量相近的樣品進行驗證。應附測定圖譜，說明試驗過程和檢測限結果。五、定量限定量限系指試樣中被測物能被定量測定的最低量其測定結果應符合準確度和精密度要求。對微量或痕量藥物分析、定量測定藥物雜質和降解產物時，應確定方法的定量限。常用的方法如下。1. 直觀法用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地定量測定的最低濃度或量。2. 信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠地定量的被測物質的最低濃度或量。一般以信噪比為10:1時相應濃度或注入儀器的量確定定量

15、限。3. 基于響應值標準偏差和標準曲線斜率法按照LOQ=106/S公式計算。式中LOQ：定量限；6：響應值的偏差；S：標準曲線的斜率。6在可以通過下列方法測得：測定空白值的標準偏差；采用標準曲線的剩余標準偏差或是截距的標準偏差來代替。r.r-t-a卜、數據要求上述計算方法獲得的定量限數據須用含量相近的樣品進行驗證。應附測定圖譜，說明測試過程和定量限結果，包括準確度和精密度驗證數據。六、線性線性系指在設計的范圍內，測定響應值與試樣中被測物濃度呈比例關系的程度。應在規(guī)定的范圍內測定線性關系。可用同一對照品貯備液經精密稀釋，或分別精密稱取對照品，制備一系列對照品溶液的方法進行測定，至少制備5份不同濃

16、度的對照品溶液。以測得的響應信號對被測物的濃度作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進行線性回歸。必要時，響應信號可經數學轉換，再進行線性回歸計算?；蛘呖刹捎妹枋鰸舛?響應關系的非線性模型。數據要求：應列出回歸方程、相關系數和線性圖（或其他數學模型）。七、范圍范圍系指分析方法能達到一定精密度、準確度和線性要求時的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應根據分析方法的具體應用及其線性、準確度、精密度結果和要求確定。原料藥和制劑含量測定，范圍一般為測定濃度的80%120%；制劑含量均勻度檢查，范圍一般為測定濃度的70%130%，特殊劑型，如氣霧劑和噴霧劑，范圍可適當放寬；溶出度或釋放度中的溶出量測定，范圍一般為限度的土30%，如規(guī)定了限度范圍，則應為下限的-20%至上限的+20%；雜質測定，范圍應根據初步實際測定數據，擬訂為規(guī)定限度的土20%。如果含量測定與雜質檢查同時進行，用峰面積歸一化法進行計算，則線性范圍應為雜質規(guī)定限度的-20%至含量限度（或上限）的+20%。在中藥分析中，范圍應根據分析方法的具體應用和線性、準確度、精密度結果及要求確定。對于有毒的、具特殊功效或藥理作用的成分，其驗證范圍應大于被限定含量的區(qū)間。校正因子測定時，范圍一般應根據其應用對象的測定范圍確定。八、耐用性耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度，為所建立的方法用