血紅蛋白與核黃素的凝膠層析分離電液 黎振威ppt課件

1、 4、亞鐵血紅素：原卟啉、鐵。 2 .特點(diǎn) ：1正常情況下，99%Hb為復(fù)原HbHbA，1%為高鐵HbHbF。2只需Fe2+形狀的Hb才干與氧結(jié)合，稱為氧和血紅蛋白。3在人體生長(zhǎng)不同時(shí)期，Hb的種類與比例不同。出生后3個(gè)月，HbA95%，而HbF降至1%以下。4血紅蛋白合成受激素紅細(xì)胞生成素、雄激素調(diào)理。5相對(duì)分子質(zhì)量為64458。6降解產(chǎn)物為珠蛋白、血紅素。溶于水，可溶于氯化鈉溶液，易溶于稀的氫氧化鈉溶液。維生素B2是機(jī)體中許多酶系統(tǒng)的重要輔基的組成成分，參與物質(zhì)和能量代謝。分子式： C17H20N4O6分子量： 376.37 熔點(diǎn)： 290水溶性： 0.07 g/L (20) 比旋光度：

2、-并測(cè)出洗脫曲線。實(shí)驗(yàn)操作1凝膠處置 將sephadex g-25凝膠干粉放入過(guò)量水中浸泡24h或沸水水浴2h。浸泡后，攪動(dòng)凝膠再靜置，待凝膠堆積后，傾去上層細(xì)粒懸液，如此反復(fù)多次。2層析柱的預(yù)備 用清洗劑將層析柱仔細(xì)清洗干凈。清洗過(guò)程中不能運(yùn)用毛刷，以免擦傷層析柱子內(nèi)壁，影響層析分別效果。固定好層析柱各處的接口，用水檢查層析柱各處的接口密封性。將清洗后的層析柱垂直固定在鐵架臺(tái)上。自柱底端出口的聚乙烯管內(nèi)注入溶液以除去柱管內(nèi)和尼龍網(wǎng)底部的氣泡，待氣泡排出后，使溶液在底部留至35cm高既可封鎖出水口。 柱層析表示圖3裝柱 將處置好的凝膠在燒杯內(nèi)用1倍提及的洗脫液攪拌成懸浮液，自柱頂部沿管內(nèi)壁漸漸

3、參與柱中。待底部凝膠堆積至5cm左右時(shí)，漸漸翻開低端出口管，隨之繼續(xù)緩慢添加凝膠懸浮液直至凝膠體積堆積至25cm高度為止。操作中留意防止氣泡與節(jié)痕產(chǎn)生。 v5加樣與洗脫。 翻開平衡好的層析柱低端出口，使柱內(nèi)溶液流向與床外表相切時(shí)封鎖出口。將吸有0.5ml樣品的加樣滴灌在床外表上1mm處沿管內(nèi)壁悄然轉(zhuǎn)動(dòng)加樣，加完后，翻開底端出口使樣品流至床外表，封鎖出口，用少量洗脫液同樣小心清洗管內(nèi)壁12次，使樣品流至床外表，然后加洗脫液加至距床外表23cm高，接上高位貯液瓶并調(diào)好流速即開場(chǎng)洗脫。留意在加樣和洗脫過(guò)程中應(yīng)緩慢參與液體，防止沖壞床外表，影響分辨率。v6搜集與測(cè)定。 搜集時(shí)可運(yùn)用自動(dòng)部分搜集器或手工操作，每管接洗脫液3ml.直至第二個(gè)洗脫峰降至基線附近。搜集后用721E型分光光度計(jì)在451nm波優(yōu)點(diǎn)以