2020與2015版藥典通則修訂對比 9101分析方法驗證指導(dǎo)原則

1、注釋：紅色帶中間橫線的文字表示在2020版藥典刪除了的2015版內(nèi)容；藍色字表示2020版藥典新增加的。9101藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則藥品質(zhì)量標準分析方法驗證（analyticalmethodvalidation）的目的是證明采用建立的方法適合于相應(yīng)檢測要求在建立藥品質(zhì)量標準時,分析方法需經(jīng)驗證;在藥品生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂時，則質(zhì)量標準分析方法也需進行驗證。在建立藥品質(zhì)量標準、變更藥品生產(chǎn)工藝或制劑組分、修訂原分析方法時，需對分析方法進行驗證。方法驗證的理由、過程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品質(zhì)量標準起草說明或修訂說明中。生物制品質(zhì)量控制中采用的方法包括理化分析方法

2、和生物學(xué)測定方法，其中理化分析方法的驗證原則與化學(xué)藥品基本相同，所以可參照本指導(dǎo)原則進行，但在進行具體驗證時還需要結(jié)合生物制品的特點考慮；相對于理化分析方法而言，生物學(xué)測定方法存在更多的影響因素，因此本指導(dǎo)原則不涉及生物學(xué)測定方法驗證的內(nèi)容。驗證的分析項目有：鑒別試驗、限量或定量檢查、原料藥或制劑中有效成分含量測定，以及制劑中其他成分（如防腐劑等，中藥中其他殘留物、添加劑等）的測定。藥品溶出度、釋放度等檢查中，其溶出量等的測定方法也應(yīng)進行必要驗證。鑒別試驗、雜質(zhì)測定（限度或定量分析）、含量測定（包括特性參數(shù)和含量/效價測定，其中特性參數(shù)如：藥物溶出度、釋放度等）。驗證的指標有：專屬性、準確度、

3、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。在分析方法驗證中，須采用標準物質(zhì)進行試驗。由于分析方法具有各自的特點，并隨分析對象而變化，因此需要視具體方法情況擬訂驗證的指標。表1中列出的分析項目和相應(yīng)的驗證指標可供參考。表1校驗項目和驗證指標、一、項目內(nèi)容、鑒別雜質(zhì)測定含量測定及溶出量測定-特性參數(shù)-含量或效價測定校正因子定量限度專屬性+準確度-+-+精密度重復(fù)性-+-+中間精密度-+-+專屬性+檢測限-+-定量限-+-+線性-+-+范圍-+-+耐用性+ 已有重現(xiàn)性驗證，不需驗證中間精密度。 如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補充 視具體情況予以驗

4、證。方法驗證內(nèi)容如下。三、專屬性專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的分析方法能正確測定出被測物的能力。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢査和含量測定方法，均應(yīng)考察其專屬性。如方法專屬性不強，應(yīng)采用種或多種不同原理的方法予以補充。1.鑒別反應(yīng)應(yīng)能區(qū)分可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似的化合物。不含被測成分的供試品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，應(yīng)均呈陰性反應(yīng)。2. 含量測定和雜質(zhì)測定采用的色譜法和其他分離方法，應(yīng)附代表性圖譜，以說明方法的專屬性，并應(yīng)標明各諸成分在圖中的位置，色譜法中的分離度應(yīng)符合要求。在雜質(zhì)對照品可獲得的情況下，對于含量測定，試樣中可加入雜質(zhì)或輔料，考察測定結(jié)果是否受干擾

5、，并可與未加雜質(zhì)或輔料的試樣比較測定結(jié)果。對于雜質(zhì)檢查，也可向試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察各成分包括雜質(zhì)之間能否得到分離。在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可將含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣進行測定，與另一個經(jīng)驗證了的方法或藥典方法比較結(jié)果。也可用強光照射、高溫、高濕、酸（堿）水解或氧化的方法進行加速強制破壞，以研究可能存在的降解產(chǎn)物和降解途徑對含量測定和雜質(zhì)測定的影響。含量測定方法應(yīng)比對兩種方法的結(jié)果，雜質(zhì)檢査應(yīng)比對檢出的雜質(zhì)個數(shù)，必要時可采用光電二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進行峰純度檢查。一二、準確度準確度系指采用該所建立方法測定的結(jié)果與真實值或參考比值接近的程度，一般用回收率（）表示。準確度應(yīng)在

6、規(guī)定的線性范圍內(nèi)測定試驗。準確度也可由所測定的精密度、線性和專屬性推算出來。在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（相當于100%濃度水平）的供試品，用至少測定6份樣品的測定結(jié)果進行評價；或設(shè)計至少3種不同濃度，每種濃度分別制備至少3份供試品溶液進行測定，用至少9份樣品的測定結(jié)果進行評價，且濃度的設(shè)定應(yīng)考慮樣品的濃度范圍。兩種方法的選定應(yīng)考慮分析的目的和樣品的濃度范圍（注釋：本段內(nèi)容從2015版5.數(shù)據(jù)要求移到該位置）1. 化學(xué)藥含量測定方法的準確度原料藥采用對照品可用已知純度的對照品或供試品進行測定，或用木法所得所測定結(jié)果與已知準確度的另一個方法測定的結(jié)果進行比較。制劑可在處方量空白輔料中，加入已知量被測

7、物對照品進行測定。如不能得到制劑輔料的全部組分，可向待測制劑中加入已知量的被測物對照品進行測定，或用所建立方法的測定結(jié)果與已知準確度的另一種個方法測定結(jié)果進行比較。準確度也可由所測定的精密度、線性和專屬性推算出來。2. 化學(xué)藥雜質(zhì)定量測定的準確度可向原料藥或制劑處方量空白輔料中加入已知量雜質(zhì)對照品進行測定。如不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物對照品,可用所建立的方法測定的結(jié)果與另一成熟的方法（如藥典標準方法或經(jīng)過驗證的方法）的測定結(jié)果進行比較，如藥典標準方法或經(jīng)過驗證的方法。在不能測得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的校正因子或不能測得對主成分的相對校正因子的情況下，可用不加校正因子的主成分自身對照法主成分的校正因子計算雜

8、質(zhì)含量。并應(yīng)明確表明單個雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當于主成分的重量比（）或面積比（）。3. 中藥化學(xué)成分測定方法的準確度可用已知純度的對照品進行加樣回收率測定，即向已知被測成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知純度的被測成分對照品，依法測定。用實測值與供試品中含有量之差，除以加入對照品量計算回收率。在加樣回收試驗中須注意對照品的加入量與供試品中被測成分含有量之和必須在標準曲線線性范圍之內(nèi)；加入的對照品的量要適當，過小則引起較大的相對誤差，過大則干擾成分相對減少，真實性差?；厥章剩–A）BX100%式中A為供試品所含被測成分量；B為加入對照品量；C為實測值。仆校正因子的準確度對色譜方法而言，絕對（或定量

9、）校正因子是指單位面積的色譜峰代表的待測物質(zhì)的量.待測定物質(zhì)與所選定的參照物質(zhì)的絕對校正因子之比，即為相對校正因子。相對校正因子計算法常應(yīng)用于化學(xué)藥有關(guān)物質(zhì)的測定、中藥材及其復(fù)方制劑中多指標成分的測定。校正因子的表示方法很多，木指導(dǎo)原則中的校正因子是指氣相色譜法和髙效液相色譜法中的相對重量校正因子。相對校正因子可采用替代物（對照品）和被替代物（待測物）標準曲線斜率比值進行比較獲得；采用紫外吸收檢測器時，可將替代物（對照品）和被替代物（待測物）在規(guī)定波長和溶劑條件下的吸收系數(shù)比值進行比較，計算獲得。54.數(shù)據(jù)要求在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（相當于100%濃度水平）的供試品，用至少6份樣品的測定結(jié)果

10、進行評價；或設(shè)計3種不同濃度，每種濃度分別制備3份供試品溶液進行測定，用至少9份樣品的測定結(jié)果進行評價。兩種方法的選定應(yīng)考慮分析的目的和樣品的濃度范圍。（注釋：本段內(nèi)容移到前面“1.化學(xué)藥含量測定方法的準確度”前）對于化學(xué)藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1:1左右，建議高、中、低濃度對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.2:1,1:1,0.8:1左右，應(yīng)報告已知加入量的回收率（）,或測定結(jié)果平均值與真實值之差及其相對標準偏差或置信區(qū)間（置信度一般為95%）；對于中藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1:1左右，建議高、中、氐濃度對照

11、品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.5:1，1:1，0.5:1左右，應(yīng)報告供試品取樣量、供試品中含有量、對照品加入量、測定結(jié)果和回收率（）計算值，以及回收率（）的相對標準偏差（RSD%）或置信區(qū)間。對于校正因子，應(yīng)報告測定方法、測定結(jié)果和RSD%。樣品中待測定成分含量和回收率限度關(guān)系可參考表2。在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，回收率限度可適當放寬。表2樣品中待測定成分含量和回收率限度待測定成分含量待測定成分質(zhì)量分數(shù)回收率限度（）(%)(ppm或ppb)(mg/g或pg/g)(g/g)100%-1000mg/g1.09810110%100000ppm100mg/g

12、0.195T021%10000ppm10mg/g0.0192T050.1%1000ppm1mg/g0.001901080.01%100ppm100pg/g0.00018511010yg/g(PPm)0.00110ppm10pg/g0.00001801151#g/g0.00011ppm1pg/g0.0000017512010#g/kg(ppb)10ppb0.01pg/g0.0000000170125*此表源自AOACGuidelinesforSingleLaboratoryValidationofChemicalMethodsforDietarySupplementsandBotanicals二

13、三、精密度精密度系指在規(guī)定的測定條件下，同一份均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性；在同一個實驗室內(nèi)的條件改變，如不同時間、由不同分析人員、用不同設(shè)備等測定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度；在不同實驗室由不同分析人員測定結(jié)果之間的精密度，稱為重現(xiàn)性。含量測定和雜質(zhì)的定量測定應(yīng)考察方法的精密度。1.重復(fù)性在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（分析方法擬定的樣品測定濃度，相當于100%濃度水平）的供試品，用至少測定6份的測定結(jié)果進行評價；或設(shè)計至少3種不同濃度，每種濃度分別制備至少3份供試品

14、溶液進行測定，用至少9份樣品的測定結(jié)果進行評價。采用至少9份測定結(jié)果進行評價時，濃度的設(shè)定應(yīng)考慮樣品的濃度范圍。對于化學(xué)藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在11左右，建議高、中、低濃度對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.2:1,1:1,0.8:1左右，對于中藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1:1左右，建議高、中、低濃度對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.5:1，1:1，0.5:1左右。2. 中間精密度考察隨機變動因素如不同日期、不同分析人員、不同儀器對精密度的影響，應(yīng)設(shè)計方案進行中間精密度試驗。3. 重現(xiàn)性國家藥品

15、質(zhì)量標準采用的分析方法，應(yīng)進行重現(xiàn)性試驗，如通過不同實驗室協(xié)同檢驗獲得重現(xiàn)性結(jié)果。協(xié)同檢驗的目的、過程和重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗所用樣品質(zhì)量的一致性及貯存運輸中的環(huán)境對該一致性的影響，以免影響重現(xiàn)性試驗結(jié)果。4.數(shù)據(jù)要求均應(yīng)報告偏差、標準偏差、相對標準偏差或置信區(qū)間。樣品中待測定成分含量和精密度RSD可接受范圍參考表3（可接受范圍可在給出數(shù)值0.52倍區(qū)間，計算公式，重復(fù)性：RSDr=C-o.15；重現(xiàn)性：RSDr=2C-0.15，其中C為待測定成分含量）。在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，精密度接受范圍限度可適當放寬。表3樣品中待測定成分的含量和與精

16、密度RSD可接受范圍*待測定成分含量待測定成分質(zhì)量分數(shù)重復(fù)性(RSDr%)重現(xiàn)性(RSDr%)(%)(ppm或ppb)(mg/g或pg/g)(g/g)100%-1000mg/g1.01210%100000ppm100mg/g0.11.531%10000ppm10mg/g0.01240.1%1000ppm1mg/g0.001360.01%100ppm100pg/g0.00014810#g/g(PPm)0.00110ppm10pg/g0.000016111#g/g0.00011ppm1pg/g0.00000181610pg/kg(ppb)10ppb0.01pg/g0.000000011532*此表

17、源自AOACGuidelinesforSingleLaboratoryValidationofChemicalMethodsforDietarySupplementsandBotanicals四、檢測限檢測限系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。藥品的鑒別試驗和雜質(zhì)檢査方法，均應(yīng)通過測試確定方法的檢測限。險測限僅作為限度試驗指標和定性鑒別的依據(jù)，沒有定量意義。常用的方法如下。1. 直觀法用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。2. 信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠地檢測出的被測物質(zhì)最低濃度或量。一般以

18、信噪比為3:1或21時相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。3. 基于響應(yīng)值標準偏差和標準曲線斜率法按照LOD=3.36/S公式計算。式中LOD:檢測限；：響應(yīng)值的偏差；S：標準曲線的斜率?？梢酝ㄟ^下列方法測得：測定空白值的標準偏差；標準曲線的剩余標準偏差或是截距的標準偏差來代替。4. 數(shù)據(jù)要求上述計算方法獲得的檢測限數(shù)據(jù)須用含量相近的樣品進行驗證。應(yīng)附測定圖譜，說明試驗過程和檢測限結(jié)果。五、定量限定量限系指試樣中被測物能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)符合準確度和精密度要求。對微量或痕量藥物分析、定量測定藥物雜質(zhì)和降解產(chǎn)物時，應(yīng)確定方法的定量限。常用的方法如下。1. 直觀法用已知濃度的被測物，試

19、驗出能被可靠地定量測定的最低濃度或量。2. 信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法，即把將已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠地定量的被測物質(zhì)的最低濃度或量。一般以信噪比為10:1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限。3. 基于響應(yīng)值標準偏差和標準曲線斜率法按照LOQ=106/公式計算。式中LOQ:定量限；：響應(yīng)值的偏差；S：標準曲線的斜率?？梢酝ㄟ^下列方法測得：測定空白值的標準偏差；采用標準曲線的剩余標準偏差或是截距的標準偏差來代替。4. 數(shù)據(jù)要求上述計算方法獲得的定量限數(shù)據(jù)須用含量相近的樣品進行驗證。應(yīng)附測定試圖譜，說明測試過程和定量限結(jié)果，包括準確度和精密度驗

20、證數(shù)據(jù)。六、線性線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測定響應(yīng)值線性試驗結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈比例關(guān)系的程度能力。應(yīng)在規(guī)定設(shè)計的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系?？捎猛粚φ掌焚A備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱取對照品，制備一系列對照品溶液的方法進行測定，至少制備5份個不同濃度的對照品溶液水平。以測得的響應(yīng)信號對作為被測物的濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進行線性回歸。必要時，響應(yīng)信號可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進行線性回歸計算?；蛘呖刹捎妹枋鰸舛?響應(yīng)關(guān)系的非線性模型。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)、殘差平方和、和線性圖（或其他數(shù)學(xué)模型）。七、范圍范圍系指分析方法能達到一定精密度、準確度和線性要求時的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用及其線性、準確度、精密度結(jié)果和要求確定。原料藥和制劑含量測定，范圍一般為測定濃度的80%120%；制劑含量均勻度檢査，范圍一般為測定濃度的70%130%,特殊劑