奧賽輔導(dǎo)---蛋白質(zhì)概述課件

1、奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述生物化學(xué)生物化學(xué)(shn w hu xu)部分知部分知識結(jié)構(gòu)識結(jié)構(gòu)化學(xué)成分：化學(xué)成分：水、無機(jī)鹽、糖類水、無機(jī)鹽、糖類(tn li)、脂類、脂類、蛋白質(zhì)、核酸、蛋白質(zhì)、核酸、 酶酶、維生素和輔酶、維生素和輔酶 細(xì)胞細(xì)胞(xbo)的代謝的代謝異化作用：異化作用：糖的異化糖的異化 、脂肪的異化、蛋白質(zhì)的、脂肪的異化、蛋白質(zhì)的 異化異化、核酸的異化、核酸的異化同化作用：同化作用：光合作用光合作用、多糖合成、脂類的合成等、多糖合成、脂類的合成等分子生物學(xué)：復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、分子生物學(xué)：復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯翻譯、調(diào)控、調(diào)控第一頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)(jig

2、u)與功能與功能第第 一一 章章第二頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述一、什么一、什么(shn me)是蛋白質(zhì)是蛋白質(zhì)?蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)(protein)是由許多是由許多氨基酸氨基酸(amino acids)通過肽通過肽鍵鍵(peptide bond)相連相連(xin lin)形成的高分子含氮化合物。形成的高分子含氮化合物。組成組成(z chn)蛋白質(zhì)的元素蛋白質(zhì)的元素主要有主要有C、H、O、N和和S。 有些蛋白質(zhì)含有少量有些蛋白質(zhì)含有少量磷磷或金屬元素或金屬元素鐵、銅、鋅、錳、鐵、銅、鋅、錳、鈷、鉬鈷、鉬，個(gè)別蛋白質(zhì)還含有，個(gè)別蛋白質(zhì)還含有碘碘 。第三頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述 1

3、1、蛋白質(zhì)的元素組成：、蛋白質(zhì)的元素組成： 氮的含量氮的含量(hnling)(hnling)在多種的蛋白質(zhì)比較接近，平均為在多種的蛋白質(zhì)比較接近，平均為16%16%，因此用，因此用凱氏（凱氏（kjelahlkjelahl）法定）法定N N，受檢物質(zhì)中含蛋白質(zhì)量為，受檢物質(zhì)中含蛋白質(zhì)量為N N含量的含量的6.256.25倍倍 。 蛋白質(zhì)含量的測定：蛋白質(zhì)含量的測定： 凱氏定氮法凱氏定氮法(測定氮的經(jīng)典方法測定氮的經(jīng)典方法) 優(yōu)點(diǎn)：對原料無選擇性，儀器簡單，方法也簡單；優(yōu)點(diǎn)：對原料無選擇性，儀器簡單，方法也簡單； 缺點(diǎn)：易將無機(jī)氮缺點(diǎn)：易將無機(jī)氮,都?xì)w入蛋白質(zhì)中都?xì)w入蛋白質(zhì)中,不精確不精確(jng

4、qu)。 樣品含氮量平均在樣品含氮量平均在16%，取其倒數(shù)，取其倒數(shù)100/16=6.25，即為蛋白，即為蛋白質(zhì)換算系數(shù)，其含義是樣品中每存在質(zhì)換算系數(shù)，其含義是樣品中每存在1g元素氮，就說明含有元素氮，就說明含有6.25g 蛋白質(zhì)）；故：蛋白質(zhì)）；故： 蛋白質(zhì)含量蛋白質(zhì)含量=氮的量氮的量100/16第四頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述一、氨基酸一、氨基酸 組成組成(z chn)(z chn)蛋白質(zhì)的基本單位蛋白質(zhì)的基本單位存在存在(cnzi)自然界中的氨基酸有自然界中的氨基酸有300余種，但組余種，但組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸僅有成人體蛋白質(zhì)的氨基酸僅有20種種.必需必需(bx)氨基酸和非必

5、需氨基酸和非必需(bx)氨基酸氨基酸：必需氨基酸必需氨基酸包括亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、包括亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸（甲硫氨酸）、色氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸等蛋氨酸（甲硫氨酸）、色氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸等8種。精氨酸和組氨酸為半必需氨基酸。種。精氨酸和組氨酸為半必需氨基酸。第五頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述2 2、蛋白質(zhì)的氨基酸組成、蛋白質(zhì)的氨基酸組成(z chn)(z chn)（1 1）氨基酸的結(jié)構(gòu)天然）氨基酸的結(jié)構(gòu)天然(tinrn)(tinrn)蛋白質(zhì)中存在的氨基酸都是蛋白質(zhì)中存在的氨基酸都是L-a-L-a-氨基酸氨基酸 COOH | NH2 C H | R L

6、- a-氨基酸 一種(y zhn)為脯氨酸脯氨酸，它也有類似結(jié)構(gòu)，但側(cè)鏈與氮原子相接形成亞氨基酸。 除甘氨酸甘氨酸外，蛋白質(zhì)中的氨基酸都具有不對稱碳原子，都有L型與D一型之分，為區(qū)別兩種構(gòu)型構(gòu)型，通過與甘油醛的構(gòu)型相比較，人為地規(guī)定一種為L型，另種為D一型。當(dāng)書寫時(shí)NH2寫在左邊為L型，NH2在右為D一型。已知天然蛋白質(zhì)中的氨基酸都屬L型。 第六頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述非極性疏水性氨基酸（非極性疏水性氨基酸（7）甘丙纈亮異苯脯）甘丙纈亮異苯脯極性中性氨基酸（極性中性氨基酸（8）色絲酪半蛋天谷蘇）色絲酪半蛋天谷蘇酸性酸性(sun xn)氨基酸（氨基酸（2）天谷）天谷堿性氨基酸（堿性氨

7、基酸（3）賴精組）賴精組（一）氨基酸的分類（一）氨基酸的分類(fn li)(fn li)第七頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述（二）氨基酸的理化（二）氨基酸的理化(lhu)(lhu)性質(zhì)性質(zhì)1. 兩性兩性(lingxng)解離及等電點(diǎn)解離及等電點(diǎn)氨基酸是兩性電解質(zhì)，其解離程度氨基酸是兩性電解質(zhì)，其解離程度(chngd)(chngd)取決取決于所處溶液的酸堿度。于所處溶液的酸堿度。等電點(diǎn)等電點(diǎn)(isoelectric point, pI) 在某一在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電

8、中性。此時(shí)溶液的呈電中性。此時(shí)溶液的pH值值稱為該氨基酸的稱為該氨基酸的等等電點(diǎn)電點(diǎn)。第八頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨基酸的兼性離子氨基酸的兼性離子 陽離子移陽離子移向陰極向陰極(ynj)陰離子移向陰離子移向陽極陽極(yngj)CH COOHRNH3+CH COOHRNH3+第九頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述2. 紫外吸收紫外吸收(xshu) 色氨酸（色氨酸（Trp W）、）、酪氨酸（酪氨酸（ Try Y ）的最的最大吸收大吸收(xshu)峰在峰在 280 nm 附近。附近。大多數(shù)蛋白質(zhì)含有這兩大多數(shù)蛋白質(zhì)含有這兩種氨基酸殘基

9、，所以測定蛋種氨基酸殘基，所以測定蛋白質(zhì)溶液白質(zhì)溶液280nm的光吸收值的光吸收值是分析溶液中蛋白質(zhì)含量的是分析溶液中蛋白質(zhì)含量的快速簡便快速簡便(jinbin)的方法。的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收芳香族氨基酸的紫外吸收第十頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述3. 茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng)(fnyng) 氨基酸與茚三酮水合物共熱，可生成氨基酸與茚三酮水合物共熱，可生成藍(lán)紫色藍(lán)紫色化合物，其最大吸收峰在化合物，其最大吸收峰在570nm處。由于此處。由于此吸收峰值與氨基酸的含量存在正比關(guān)系，因此吸收峰值與氨基酸的含量存在正比關(guān)系，因此(ync)可作為氨基酸定量分析方法?？勺鳛榘被岫糠治龇椒?。第十

10、一頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述 氨基酸氨基酸 代謝代謝(dixi)庫庫食物蛋白質(zhì)食物蛋白質(zhì)消化吸收消化吸收 組織組織蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)分解分解 體內(nèi)合成氨基酸體內(nèi)合成氨基酸( (非必需氨基酸非必需氨基酸) ) -酮酸酮酸 脫氨基作用脫氨基作用 酮 體氧化供能 糖胺胺 類類脫羧基作用脫羧基作用氨 尿素代謝轉(zhuǎn)變代謝轉(zhuǎn)變其它含氮化合物其它含氮化合物 (嘌呤、嘧啶等嘌呤、嘧啶等)合成合成 氨基酸代謝氨基酸代謝(dixi)(dixi)概況概況第十二頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述一、氨基一、氨基(nj)(nj)酸的脫氨基酸的脫氨基(nj)(nj)作用作用脫氨基脫氨基(nj)(nj)方式：方式： 氧

11、化脫氨基氧化脫氨基 轉(zhuǎn)氨基作用轉(zhuǎn)氨基作用(zuyng)(zuyng) 聯(lián)合脫氨基聯(lián)合脫氨基 非氧化脫氨基非氧化脫氨基 轉(zhuǎn)氨基和氧化脫氨基偶聯(lián)轉(zhuǎn)氨基和氧化脫氨基偶聯(lián)轉(zhuǎn)氨基和嘌呤核苷酸循環(huán)偶聯(lián)轉(zhuǎn)氨基和嘌呤核苷酸循環(huán)偶聯(lián)第十三頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述（一）、氧化（一）、氧化(ynghu)(ynghu)脫氨基作用脫氨基作用 L-谷氨酸脫氫酶谷氨酸脫氫酶H2O NH3*L-谷氨酸脫氫酶：谷氨酸脫氫酶： 活性強(qiáng)，分布于肝、腎及腦組織活性強(qiáng)，分布于肝、腎及腦組織 輔酶輔酶(f mi)(f mi)為為NADNAD+ +或或NADPNADP+ + 專一性強(qiáng)，只作用于谷氨酸專一性強(qiáng)，只作用于谷氨酸第十

12、四頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述（二）、轉(zhuǎn)氨基（二）、轉(zhuǎn)氨基(nj)(nj)作用作用(transamination)(transamination) 特點(diǎn)：特點(diǎn)： * *沒有游離的氨產(chǎn)生沒有游離的氨產(chǎn)生(chnshng)(chnshng)，但改變了氨基酸代謝庫中各種，但改變了氨基酸代謝庫中各種氨基酸的比例。氨基酸的比例。 * *大多數(shù)氨基酸可參與轉(zhuǎn)氨基作用，但大多數(shù)氨基酸可參與轉(zhuǎn)氨基作用，但賴氨酸、脯氨酸、羥脯賴氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸氨酸除外。除外。第十五頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述谷丙轉(zhuǎn)氨酶谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPTGPT）谷草谷草(gco)(gco)轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)氨酶氨酶(GOT)(GOT)谷

13、丙轉(zhuǎn)氨酶（谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPTGPT）和谷草）和谷草(gco)(gco)轉(zhuǎn)氨酶（轉(zhuǎn)氨酶（GOTGOT）第十六頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述氨基酸氨基酸 谷氨酸谷氨酸 -酮酸酮酸 -酮戊二酸酮戊二酸 H2O+NAD+轉(zhuǎn)氨酶轉(zhuǎn)氨酶 NH3+NADH+H+L-谷氨酸脫氫酶谷氨酸脫氫酶 * *此種方式既是氨基酸脫氨基的主要方式，也是體內(nèi)合成此種方式既是氨基酸脫氨基的主要方式，也是體內(nèi)合成(hchng)(hchng)非非必需氨基酸必需氨基酸的主要方式。的主要方式。* *主要在肝、腎組織進(jìn)行。主要在肝、腎組織進(jìn)行。1 1、 轉(zhuǎn)氨基偶聯(lián)氧化轉(zhuǎn)氨基偶聯(lián)氧化(ynghu)(ynghu)脫氨基作用脫氨基作用第

14、十七頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述蘋果酸蘋果酸 腺苷酸腺苷酸代琥珀酸代琥珀酸次黃嘌呤次黃嘌呤 核苷酸核苷酸 (IMP)(IMP)腺苷酸代琥珀酸合成酶-酮戊酮戊 二酸二酸氨氨基基酸酸 谷氨酸谷氨酸-酮酸酮酸 轉(zhuǎn)氨酶 1草酰乙酸草酰乙酸天冬氨酸天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶 2腺苷酸脫氫酶H2ONH3延胡索酸延胡索酸腺嘌呤腺嘌呤核苷酸核苷酸(AMP)(AMP)2 2、轉(zhuǎn)氨基、轉(zhuǎn)氨基(nj)(nj)偶聯(lián)嘌呤核苷酸循環(huán)偶聯(lián)嘌呤核苷酸循環(huán)第十八頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述（二）、血氨的去路（二）、血氨的去路(ql) 在肝內(nèi)合成尿素在肝內(nèi)合成尿素 合成非必需氨基酸及其它含氮化合物合成非必需氨基酸及其它含氮化

15、合物 合成谷氨酰胺合成谷氨酰胺 腎小管泌氨：腎小管泌氨：分泌的分泌的NHNH3 3酸性酸性(sun xn)(sun xn)條件下生成條件下生成NHNH4 4+ +，隨尿排出。，隨尿排出。 谷氨酸谷氨酸 + NH3谷氨酰胺谷氨酰胺 谷氨酰胺合成酶谷氨酰胺合成酶ATPADP+Pi第十九頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述尿素尿素(nio s)的生成的生成1 1、生成部位、生成部位(bwi)(bwi)： 主要在肝細(xì)胞的主要在肝細(xì)胞的線粒體線粒體及及胞液胞液中。中。2 2、生成、生成(shn chn)(shn chn)過程過程 尿素的生成過程由尿素的生成過程由Hans Krebs Hans Krebs

16、 和和Kurt Henseleit Kurt Henseleit 提出，稱為提出，稱為鳥氨酸循環(huán)鳥氨酸循環(huán)(orinithine cycle)(orinithine cycle)，又稱，又稱尿素尿素循環(huán)循環(huán)(urea cycle)(urea cycle)或或Krebs- HenseleitKrebs- Henseleit循環(huán)循環(huán)。第二十頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述鳥氨酸循環(huán)鳥氨酸循環(huán)(xnhun)(xnhun)2ADP+PiCO2 + NH3 + H2O氨基甲酰磷酸氨基甲酰磷酸2ATPN-乙酰谷氨酸乙酰谷氨酸Pi鳥氨酸鳥氨酸瓜氨酸瓜氨酸精氨酸精氨酸延胡索酸延胡索酸氨基酸氨基酸草酰乙酸草

17、酰乙酸蘋果酸蘋果酸-酮戊酮戊 二酸二酸谷氨酸谷氨酸-酮酸酮酸精氨酸代精氨酸代 琥珀酸琥珀酸瓜氨酸瓜氨酸天冬氨酸天冬氨酸ATPAMP + PPiAMP + PPi鳥氨酸鳥氨酸尿素尿素線粒體胞 液* *原料：原料：2 2 分子氨，一個(gè)來自分子氨，一個(gè)來自于游離氨，另一個(gè)來自于游離氨，另一個(gè)來自AspAsp（天冬氨酸天冬氨酸）；）；* *過程：先在線粒體中進(jìn)行過程：先在線粒體中進(jìn)行(jnxng)(jnxng)，再在胞液中進(jìn)行，再在胞液中進(jìn)行(jnxng)(jnxng)；* *耗能：耗能：3 3 個(gè)個(gè)ATPATP，4 4 個(gè)高能磷個(gè)高能磷酸鍵。酸鍵。第二十一頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述蛋白質(zhì)的

18、結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)(jigu) 一級結(jié)構(gòu)一級結(jié)構(gòu) (1)組成蛋白質(zhì)的多肽鏈數(shù)目組成蛋白質(zhì)的多肽鏈數(shù)目. (2)多肽鏈的氨基酸順序多肽鏈的氨基酸順序(shnx)， (3)多肽鏈內(nèi)或鏈間二硫鍵的數(shù)目和位置。多肽鏈內(nèi)或鏈間二硫鍵的數(shù)目和位置。 其中最重要的是多肽鏈的氨基酸順序，它是其中最重要的是多肽鏈的氨基酸順序，它是蛋白質(zhì)生物功能的基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)生物功能的基礎(chǔ)。第二十二頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)(jigu)二級結(jié)構(gòu)二級結(jié)構(gòu)-螺旋：多肽鏈中氨基酸殘基以螺旋：多肽鏈中氨基酸殘基以1000的角度圍繞螺旋軸心盤旋上升，的角度圍繞螺旋軸心盤旋上升，每每3.6個(gè)殘基就旋轉(zhuǎn)一圈，螺

19、距為個(gè)殘基就旋轉(zhuǎn)一圈，螺距為0.54nm；右手旋轉(zhuǎn)；多肽鏈內(nèi)的；右手旋轉(zhuǎn)；多肽鏈內(nèi)的氫鍵由肽鏈中一個(gè)肽鍵的氫鍵由肽鏈中一個(gè)肽鍵的-CO的氧原子與第四個(gè)肽鍵的的氧原子與第四個(gè)肽鍵的-NH的氫原子的氫原子組成，每個(gè)氫鍵所形成的環(huán)內(nèi)共有組成，每個(gè)氫鍵所形成的環(huán)內(nèi)共有13個(gè)原子個(gè)原子(yunz)，這種螺旋稱，這種螺旋稱為為3.613-折疊：平行式、反平行式。鄰近兩鏈以相反或相同方向平行排列成片層折疊：平行式、反平行式。鄰近兩鏈以相反或相同方向平行排列成片層狀。兩個(gè)氨基酸殘基之間的軸心距離為狀。兩個(gè)氨基酸殘基之間的軸心距離為0.35nm，-折疊結(jié)構(gòu)的氫鍵折疊結(jié)構(gòu)的氫鍵是由兩條肽鏈中的一條的是由兩條肽鏈中

20、的一條的-CO基與另一條基與另一條-NH基之間所形成?；g所形成。二級結(jié)構(gòu)還有二級結(jié)構(gòu)還有 - -轉(zhuǎn)角、自由回轉(zhuǎn)（無規(guī)卷曲）轉(zhuǎn)角、自由回轉(zhuǎn)（無規(guī)卷曲）第二十三頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)(jigu)三級結(jié)構(gòu)：三級結(jié)構(gòu)：是指多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)、超二級結(jié)構(gòu)、結(jié)構(gòu)域的基礎(chǔ)是指多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)、超二級結(jié)構(gòu)、結(jié)構(gòu)域的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步盤繞、折疊形成的包括主鏈和側(cè)鏈構(gòu)象在內(nèi)的特征三上，進(jìn)一步盤繞、折疊形成的包括主鏈和側(cè)鏈構(gòu)象在內(nèi)的特征三維結(jié)構(gòu)。維結(jié)構(gòu)。四級結(jié)構(gòu)：四級結(jié)構(gòu)：是指由兩是指由兩 個(gè)或兩個(gè)以上具有三級結(jié)構(gòu)的個(gè)或兩個(gè)以上具有三級結(jié)構(gòu)的亞基亞基按一定方式按一定方式(fngs

21、h)聚合而成的特定構(gòu)象的蛋白質(zhì)分子。聚合而成的特定構(gòu)象的蛋白質(zhì)分子。 通常通常亞基亞基只有一條多肽鏈，但有的只有一條多肽鏈，但有的亞基由兩條或多條多肽鏈組成亞基由兩條或多條多肽鏈組成，這些多肽鏈間多以二硫鍵相連。亞基單獨(dú)存在時(shí)無生物學(xué)活性。這些多肽鏈間多以二硫鍵相連。亞基單獨(dú)存在時(shí)無生物學(xué)活性。 維系蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的作用力：維系蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的作用力：肽鍵、二硫鍵肽鍵、二硫鍵維系蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的作用力：維系蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的作用力：氫鍵氫鍵維系蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)的作用力：維系蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)的作用力：范德華力、鹽鍵、氫鍵、疏水相互作用范德華力、鹽鍵、氫鍵、疏水相互作用維系蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)的作用力：維系蛋

22、白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)的作用力：范德華力、鹽鍵、范德華力、鹽鍵、氫鍵、疏水鍵。其中氫鍵、疏水鍵。其中(qzhng)疏水鍵是最主要的作用力。疏水鍵是最主要的作用力。第二十四頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述（一）蛋白質(zhì)的兩性（一）蛋白質(zhì)的兩性(lingxng)(lingxng)電離電離 一、理化一、理化(lhu)性質(zhì)性質(zhì) 蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些殘基側(cè)鏈中某些(mu xi)(mu xi)基團(tuán)，在一定的溶液基團(tuán)，在一定的溶液pHpH條件下都可條件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán)。解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán)。 * 蛋白質(zhì)的等電

23、點(diǎn)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)( isoelectric point, pI) 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一pH時(shí)，蛋白質(zhì)解離成正、時(shí)，蛋白質(zhì)解離成正、負(fù)離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時(shí)負(fù)離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時(shí)溶液的溶液的pH稱為稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。第二十五頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)的鹽溶鹽溶、鹽析鹽析、變性、變性(binxng)和和復(fù)性復(fù)性鹽溶鹽溶是指蛋白質(zhì)溶液中由于加入低濃度的中性鹽后，使蛋白質(zhì)是指蛋白質(zhì)溶液中由于加入低濃度的中性鹽后，使蛋白質(zhì)溶解度增加的現(xiàn)象稱為鹽溶。溶解度增加的現(xiàn)象稱為鹽溶。鹽析鹽析是指高濃

24、度中性鹽可使蛋白質(zhì)分子脫去水化層并中和其電是指高濃度中性鹽可使蛋白質(zhì)分子脫去水化層并中和其電荷而使蛋白質(zhì)從溶液中凝集出來的現(xiàn)象叫做鹽析。荷而使蛋白質(zhì)從溶液中凝集出來的現(xiàn)象叫做鹽析。蛋白質(zhì)的變性蛋白質(zhì)的變性作用是指天然蛋白質(zhì)分子由于受到物理或化學(xué)因作用是指天然蛋白質(zhì)分子由于受到物理或化學(xué)因素的影響使次級鍵破壞，引起天然構(gòu)象的改變，導(dǎo)致生物活性素的影響使次級鍵破壞，引起天然構(gòu)象的改變，導(dǎo)致生物活性的喪失的喪失(sngsh)(sngsh)及一些理化性質(zhì)的改變，但未引起肽鍵的斷裂，及一些理化性質(zhì)的改變，但未引起肽鍵的斷裂，這種現(xiàn)象叫做蛋白質(zhì)的變性作用。這種現(xiàn)象叫做蛋白質(zhì)的變性作用。蛋白質(zhì)的復(fù)性蛋白質(zhì)的

25、復(fù)性是指當(dāng)變性因素除去后，變性蛋白又可重新回復(fù)是指當(dāng)變性因素除去后，變性蛋白又可重新回復(fù)到天然構(gòu)象，這一現(xiàn)象叫蛋白質(zhì)的復(fù)性。到天然構(gòu)象，這一現(xiàn)象叫蛋白質(zhì)的復(fù)性。第二十六頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述蛋白質(zhì)的紫外吸收蛋白質(zhì)的紫外吸收(xshu)(xshu)由于蛋白質(zhì)分子中含有由于蛋白質(zhì)分子中含有(hn yu)共軛雙鍵的酪氨酸共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在和色氨酸，因此在280nm波長處有特征性吸收峰。蛋波長處有特征性吸收峰。蛋白質(zhì)的白質(zhì)的OD280與其濃度呈正比關(guān)系，因此可作蛋白質(zhì)與其濃度呈正比關(guān)系，因此可作蛋白質(zhì)定量測定。定量測定。第二十七頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述蛋白質(zhì)的呈

26、色反應(yīng)蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng)(fnyng)(ninhydrin reaction) 蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸也可發(fā)生茚三酮反應(yīng)。蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸也可發(fā)生茚三酮反應(yīng)。 雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)(fnyng)(biuret reaction)蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱為銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)，雙縮脲反應(yīng)可用來檢測蛋白質(zhì)水解程度。雙縮脲反應(yīng)可用來檢測蛋白質(zhì)水解程度。第二十八頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述蛋白質(zhì)的分離蛋白質(zhì)的分離(fnl)提純技術(shù)提純技術(shù) 一

27、、根據(jù)分子大小不同進(jìn)行分離純化一、根據(jù)分子大小不同進(jìn)行分離純化 1 1、透析和超過濾、透析和超過濾 透析透析和超過濾都是利用蛋白質(zhì)分子不能和超過濾都是利用蛋白質(zhì)分子不能通過通過(tnggu)(tnggu)半透膜半透膜的性質(zhì)，使蛋白質(zhì)和其它小的性質(zhì)，使蛋白質(zhì)和其它小分子物質(zhì)分開。分子物質(zhì)分開。 超過濾超過濾是利用是利用壓力或離心力壓力或離心力，強(qiáng)使水和，強(qiáng)使水和其它小分子溶液透過半透膜，而蛋白質(zhì)留在其它小分子溶液透過半透膜，而蛋白質(zhì)留在膜上。膜上。第二十九頁，共三十二頁。奧賽輔導(dǎo)-蛋白質(zhì)概述蛋白質(zhì)的分離蛋白質(zhì)的分離(fnl)提純技術(shù)提純技術(shù) 二、根據(jù)溶解度差別的分離方法二、根據(jù)溶解度差別的分離方法1.1.等電點(diǎn)沉淀等電點(diǎn)沉淀(chndin)(chndin)和和PHPH值控制值控制 利用各種蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)，溶解度最小這一性質(zhì)，利用各種蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)，溶解度最小這一性質(zhì)，可以通過調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的可以通過調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的PHPH值，將不同的蛋白質(zhì)分值，將不同的蛋白質(zhì)分開。開。2.2.蛋白質(zhì)鹽溶或鹽析蛋白質(zhì)鹽溶或鹽析 中性鹽在低濃度時(shí)，可以增加蛋白質(zhì)的溶