申文娟生藥1121五項(xiàng)目五ppt課件

1、項(xiàng)目五項(xiàng)目五 酶促轉(zhuǎn)化產(chǎn)物酶促轉(zhuǎn)化產(chǎn)物L(fēng)-L-絲氨酸的分析鑒定絲氨酸的分析鑒定任務(wù)任務(wù)1 1 酶促轉(zhuǎn)化產(chǎn)物酶促轉(zhuǎn)化產(chǎn)物L(fēng)-L-絲氨酸的分析鑒定絲氨酸的分析鑒定 方案的制定方案的制定 任務(wù)任務(wù)2 2 紙層析法分析鑒定紙層析法分析鑒定L-L-絲氨酸絲氨酸班級(jí)：生藥班級(jí)：生藥11211121姓名：申文娟姓名：申文娟學(xué)號(hào)：學(xué)號(hào)：20194232152019423215組別：第五組組別：第五組組員：申文娟組員：申文娟 俞靖俞靖 貢靜貢靜 顧海彬顧海彬 楊恪鑒楊恪鑒一、簡(jiǎn)介一、簡(jiǎn)介蛋白質(zhì)的組成單位蛋白質(zhì)的組成單位- -氨基酸氨基酸氨基酸結(jié)構(gòu)通式氨基酸結(jié)構(gòu)通式 氨基酸氨基酸Amino acidAmino a

2、cid賦予蛋白質(zhì)特定的分子賦予蛋白質(zhì)特定的分子結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu) 形狀，使他的分子具有生化形狀，使他的分子具有生化活性。蛋白質(zhì)是生物體內(nèi)重要的活性分子，活性。蛋白質(zhì)是生物體內(nèi)重要的活性分子，包括催化新陳代謝的酵素和酶。包括催化新陳代謝的酵素和酶。 按按R R基的極性不同來(lái)分類基的極性不同來(lái)分類中文名稱：中文名稱： 絲氨酸絲氨酸 英文名稱：英文名稱： serine;Ser serine;Ser 定義：學(xué)名：定義：學(xué)名：2-2-氨基氨基-3-3羥基丙酸。一種脂肪羥基丙酸。一種脂肪族極性族極性氨基酸。氨基酸。L-L-絲氨酸是組成蛋白質(zhì)的絲氨酸是組成蛋白質(zhì)的常見常見2020種氨基酸中的一種，是哺乳動(dòng)物的非種氨基

3、酸中的一種，是哺乳動(dòng)物的非必需氨基酸，也是生酮氨基酸。在自然界中必需氨基酸，也是生酮氨基酸。在自然界中也有也有D-D-絲氨酸，如絲原蛋白中。在一些抗生絲氨酸，如絲原蛋白中。在一些抗生素中也有素中也有D-D-絲氨酸。符號(hào)：絲氨酸。符號(hào)：S S。絲氨酸是一種非必需氨基酸，它在脂肪和脂絲氨酸是一種非必需氨基酸，它在脂肪和脂肪酸的新陳代謝及肌肉的生長(zhǎng)中發(fā)揮著作用肪酸的新陳代謝及肌肉的生長(zhǎng)中發(fā)揮著作用，因?yàn)樗兄诿庖哐蛩睾涂贵w的產(chǎn)生，因?yàn)樗兄诿庖哐蛩睾涂贵w的產(chǎn)生，維持健康的免疫系統(tǒng)也需要絲氨酸。絲氨酸維持健康的免疫系統(tǒng)也需要絲氨酸。絲氨酸在細(xì)胞膜的制造加工、肌肉組織和包圍神經(jīng)在細(xì)胞膜的制造加工

4、、肌肉組織和包圍神經(jīng)細(xì)胞的鞘的合成中都發(fā)揮著作用。細(xì)胞的鞘的合成中都發(fā)揮著作用。氨基酸、多肽與蛋白質(zhì)氨基酸、多肽與蛋白質(zhì)一、目的：一、目的： 學(xué)習(xí)并掌握紙層析法分離鑒定氨基學(xué)習(xí)并掌握紙層析法分離鑒定氨基酸的原理和方法。酸的原理和方法。二、原理二、原理 紙層析法是用濾紙作為惰性支持物紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法，其中濾紙纖維上吸附的的分配層析法，其中濾紙纖維上吸附的水是固定相，展層用的有機(jī)溶劑是流動(dòng)水是固定相，展層用的有機(jī)溶劑是流動(dòng)相。在層析時(shí)，相。在層析時(shí)，將樣品點(diǎn)在距濾紙一端約將樣品點(diǎn)在距濾紙一端約2 23cm3cm的某一處，的某一處，該點(diǎn)稱為原點(diǎn)；然后在密閉容器中層析溶劑該點(diǎn)

5、稱為原點(diǎn)；然后在密閉容器中層析溶劑沿濾紙的一個(gè)方向進(jìn)行展層，這樣混合氨基沿濾紙的一個(gè)方向進(jìn)行展層，這樣混合氨基酸在兩相中不斷分配。由于分配系數(shù)酸在兩相中不斷分配。由于分配系數(shù)KdKd不同，結(jié)果它們分布在濾紙的不同位置上。不同，結(jié)果它們分布在濾紙的不同位置上。物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置，可用物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置，可用比移值比移值RfRf來(lái)表示。來(lái)表示。所謂所謂RfRf，是指在紙層析中，從原點(diǎn)至氨基酸，是指在紙層析中，從原點(diǎn)至氨基酸停留點(diǎn)又稱為層析點(diǎn)中心的距離停留點(diǎn)又稱為層析點(diǎn)中心的距離X X與與原點(diǎn)至溶劑前沿的距離原點(diǎn)至溶劑前沿的距離Y Y的比值。如圖的比值。如圖Rf 原點(diǎn)到溶

6、劑前沿的距離離距的心中點(diǎn)析層到點(diǎn)原 在一定條件下如溫度、展層劑的組成、在一定條件下如溫度、展層劑的組成、層析紙質(zhì)量等不變），某種物質(zhì)的層析紙質(zhì)量等不變），某種物質(zhì)的Rf 值是常值是常數(shù)，因此可作為定性依據(jù)。數(shù)，因此可作為定性依據(jù)。 由于氨基酸無(wú)色，可利用茚三酮反應(yīng)使由于氨基酸無(wú)色，可利用茚三酮反應(yīng)使氨基酸層析斑點(diǎn)顯色，從而作定性分析。本氨基酸層析斑點(diǎn)顯色，從而作定性分析。本實(shí)驗(yàn)利用紙層析法分離氨基酸。實(shí)驗(yàn)利用紙層析法分離氨基酸。 三、試劑和器材：三、試劑和器材：1. 1. 試劑：試劑：1. 1. 展層劑和平衡液展層劑和平衡液 正丁醇正丁醇: :冰醋酸冰醋酸: :水水=4:1:5=4:1:5，充

7、分搖勻，用分，充分搖勻，用分液漏斗取上層液作展層劑；下層液作平衡液液漏斗取上層液作展層劑；下層液作平衡液( (棄棄去去) )。2. 2. 樣品液樣品液 用水配成每用水配成每mlml含有絲氨酸、亮氨酸、脯氨酸含有絲氨酸、亮氨酸、脯氨酸各各4mg/ml4mg/ml的氨基酸溶液，以及上述四種氨基酸的的氨基酸溶液，以及上述四種氨基酸的混合液混合液( (各各4mg/ml)4mg/ml)。3. 3. 茚三酮茚三酮 按展層劑按展層劑0.25%0.25%的比例將茚三酮加入展層劑的比例將茚三酮加入展層劑中，使其溶解。中，使其溶解。 實(shí)驗(yàn)器材 1. 1.層析缸層析缸 2. 2. 點(diǎn)樣毛細(xì)管點(diǎn)樣毛細(xì)管 3. 3.

8、小燒杯小燒杯 4. 4. 培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿 5. 5. 量筒量筒 6. 6. 噴霧器噴霧器 7. 7. 吹風(fēng)機(jī)或烘箱）吹風(fēng)機(jī)或烘箱） 8. 8. 層析濾紙層析濾紙 9. 9. 直尺及鉛筆直尺及鉛筆四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1.1.準(zhǔn)備濾紙：取寬約準(zhǔn)備濾紙：取寬約16cm16cm、高約、高約16cm16cm的層析的層析濾紙一張。在紙的下端距邊緣濾紙一張。在紙的下端距邊緣2cm2cm處用鉛筆劃處用鉛筆劃一直線一直線A A，在直線上做，在直線上做5 5個(gè)記號(hào)，記號(hào)之間間個(gè)記號(hào)，記號(hào)之間間隔隔2cm2cm，標(biāo)出，標(biāo)出5 5個(gè)點(diǎn)，這就是原點(diǎn)的位置。另個(gè)點(diǎn)，這就是原點(diǎn)的位置。另在距左邊緣在距左邊緣1cm1cm處

9、畫一條平行于左邊緣的直線處畫一條平行于左邊緣的直線B B，在，在B B線上以線上以A A、B B兩線的交點(diǎn)為原點(diǎn)標(biāo)明刻兩線的交點(diǎn)為原點(diǎn)標(biāo)明刻度以厘米為單位）。度以厘米為單位）。2.2.點(diǎn)樣：用毛細(xì)管將各氨基酸樣品點(diǎn)在點(diǎn)樣：用毛細(xì)管將各氨基酸樣品點(diǎn)在5 5個(gè)原點(diǎn)個(gè)原點(diǎn)上，用量上，用量101020l20l，每點(diǎn)在紙上擴(kuò)散的直徑，每點(diǎn)在紙上擴(kuò)散的直徑，最大不超過，最大不超過3 mm3 mm，邊點(diǎn)樣邊用電吹風(fēng)吹干，邊點(diǎn)樣邊用電吹風(fēng)吹干，越小越好。干后再點(diǎn)一次。，越小越好。干后再點(diǎn)一次。3.3.層析：將平衡好的濾紙，放入層析缸底部接層析：將平衡好的濾紙，放入層析缸底部接觸展層劑液面，展層劑不可浸沒樣點(diǎn)，

10、展層觸展層劑液面，展層劑不可浸沒樣點(diǎn)，展層劑到達(dá)濾紙頂部邊緣約劑到達(dá)濾紙頂部邊緣約0.5cm0.5cm處停止層析層處停止層析層析時(shí)間析時(shí)間2h2h左右）。然后取出層析濾紙，標(biāo)好左右）。然后取出層析濾紙，標(biāo)好前沿，放入烘箱中前沿，放入烘箱中4545烘干。烘干。4 4顯色顯色 用噴霧器均勻噴上用噴霧器均勻噴上0 0。1 1茚三酮正丁茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤醇溶液，然后置烘箱中烘烤5 5分鐘分鐘(100)(100)或或用熱風(fēng)吹干即可，濾紙上即顯出紫紅色或黃用熱風(fēng)吹干即可，濾紙上即顯出紫紅色或黃色的氨基酸斑點(diǎn)。色的氨基酸斑點(diǎn)。5 5計(jì)算各種氨基酸的計(jì)算各種氨基酸的RfRf值。值。五、本卷須知

11、五、本卷須知u在操作過程中，手不要摸濾紙。在操作過程中，手不要摸濾紙。u點(diǎn)樣直徑不超過點(diǎn)樣直徑不超過3mm 3mm 。u點(diǎn)樣的一端朝下點(diǎn)樣的一端朝下, , 擴(kuò)展劑的液面需低于點(diǎn)擴(kuò)展劑的液面需低于點(diǎn)樣線樣線1cm1cm。u即時(shí)取出濾紙即時(shí)取出濾紙, , 以免出現(xiàn)氨基酸層析跑到以免出現(xiàn)氨基酸層析跑到濾紙的外面不能檢測(cè)。濾紙的外面不能檢測(cè)。吸樣后的毛細(xì)管要垂直落在層析紙點(diǎn)樣處，樣點(diǎn)大小要基本一致；樣點(diǎn)不要浸在展開劑中；噴顯色劑時(shí)，使層析紙濕潤(rùn)即可，切勿流淌，并迅速吹干；在層析紙制作、點(diǎn)樣、顯色、吹干及 值測(cè)定等操作過程中，手只能拿在最上端，以防被手沾污。六、思考題六、思考題層析紙上的樣品斑點(diǎn)浸在展開劑中是否層析紙上的樣品斑點(diǎn)浸在展開劑中是否可以