立式壓力蒸汽滅菌器驗(yàn)證

1、1主題內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了立式壓力蒸汽滅菌器的確認(rèn)方案。2適用范圍本方案適用于立式壓力蒸汽滅菌器。3職責(zé)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：負(fù)責(zé)檢驗(yàn)設(shè)備及檢驗(yàn)方法確認(rèn)方案的起草，并組織相關(guān)人員負(fù)責(zé)各確認(rèn)過(guò)程中的檢驗(yàn)工作。質(zhì)量部長(zhǎng)：負(fù)責(zé)檢驗(yàn)設(shè)備及檢驗(yàn)方法確認(rèn)方案及報(bào)告的審核評(píng)價(jià)工作，并監(jiān)督相關(guān)確作的實(shí)施。質(zhì)量受權(quán)人：負(fù)責(zé)檢驗(yàn)方法及檢驗(yàn)設(shè)備確認(rèn)方案及確認(rèn)報(bào)告的審批。驗(yàn)證管理員：負(fù)責(zé)確認(rèn)工作的組織及協(xié)調(diào)工作。4概述立式壓力蒸汽滅菌消毒器是完全符合GMP規(guī)范要求的高檔次的滅菌儀器，該產(chǎn)品是利用高壓高溫濕熱蒸汽殺死細(xì)菌，用于衛(wèi)生學(xué)檢查的培養(yǎng)基及各種不能干熱滅菌器具的滅菌。驗(yàn)證依據(jù)*5 驗(yàn)證對(duì)象儀器名稱：立式壓力蒸汽滅菌器儀器型號(hào)：

2、規(guī)格：生產(chǎn)廠家：6 確認(rèn)目的通過(guò)對(duì)該儀器進(jìn)行驗(yàn)證確認(rèn)該設(shè)備的設(shè)計(jì)符合GMP的要求，所采用的滅菌方法準(zhǔn)確、可靠，能夠達(dá)到滅菌目的，確保檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。7 確認(rèn)內(nèi)容7.1運(yùn)行確認(rèn)接受范圍：設(shè)備在公用工程系統(tǒng)正常供給條件下連續(xù)三次空載及滿載及試驗(yàn)運(yùn)轉(zhuǎn)正常，各部件動(dòng)作狀態(tài)良好，腔室內(nèi)各點(diǎn)滅菌溫度均能滿足滅菌要求。7.1.1運(yùn)行前確認(rèn)檢查檢測(cè)內(nèi)容接受標(biāo)準(zhǔn)實(shí)際檢測(cè)結(jié)論閥泵系統(tǒng)閥組開關(guān)靈活、機(jī)泵試車良好控制系統(tǒng)能正常顯示設(shè)備狀態(tài)門密封密封材料無(wú)裂痕、損傷和污物大慶華科藥業(yè)分公司技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)文件能源供給檢杳能源供給是否正常結(jié)論：檢查人：日期：復(fù)核人：日期：7.1.2測(cè)試用的儀器儀表測(cè)試用的儀器儀表等用品和設(shè)備的主要

3、儀器儀表均應(yīng)確認(rèn)合格，以保證設(shè)備能夠正常運(yùn)行，同時(shí)保證設(shè)備測(cè)試結(jié)果的真實(shí)性。測(cè)溫元件采用熱電偶，精度應(yīng)達(dá)到±0.5工，并在實(shí)際測(cè)試過(guò)程中考慮精度負(fù)值對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。測(cè)溫元件在驗(yàn)證前后在0°C和125工兩個(gè)點(diǎn)分別進(jìn)行校正。驗(yàn)證中使用的標(biāo)準(zhǔn)溫度計(jì)必須經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量管理部門校驗(yàn)認(rèn)可。溫度記錄儀以能記錄數(shù)字并配多點(diǎn)打印為宜，打印和儲(chǔ)存參數(shù)有各種溫度、壓力、F0值、日期、滅菌時(shí)間等。儀器儀表用品名稱生產(chǎn)廠家編號(hào)測(cè)量范圍有效期至結(jié)果溫度記錄儀測(cè)溫兀件1測(cè)溫兀件2測(cè)溫兀件3測(cè)溫兀件4測(cè)溫兀件5測(cè)溫兀件6測(cè)溫兀件7測(cè)溫兀件8測(cè)溫兀件9測(cè)溫兀件10測(cè)溫兀件11測(cè)溫兀件12壓力表1留點(diǎn)溫度計(jì)嗜

4、熱脂肪芽抱桿菌結(jié)論：檢查人：日期:復(fù)核人:日期：7.1.3運(yùn)行時(shí)間的確認(rèn)測(cè)試過(guò)程：各項(xiàng)操作準(zhǔn)備工作就緒后，按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行操作，設(shè)備運(yùn)行后，溫度達(dá)到12FC的時(shí)間應(yīng)60分鐘。在12FC保溫20分鐘，控溫功能應(yīng)良好，無(wú)明顯的偏差。結(jié)論：檢查人：日期：復(fù)核人：日期：7.1.4熱分布測(cè)試7.1.4.1空載熱分布的測(cè)試選用12個(gè)熱電偶做溫度探頭，分別編號(hào)，將其中1支的探頭置于滅菌器的蒸汽進(jìn)氣口處，1支探頭置于滅菌器排氣口處，1支探頭置于滅菌器的溫度控制和記錄的探頭旁邊，其余探頭的分布在腔內(nèi)的各處，如下圖，將探頭置于上層長(zhǎng)方形的四角和下層長(zhǎng)方形的四角及中心點(diǎn)。檢測(cè)溫度分布均勻性，同時(shí)找出冷點(diǎn)位置，檢

5、測(cè)腔室內(nèi)溫差是否符合要求。溫度探頭分布圖：設(shè)備空載運(yùn)行3次，按設(shè)備滅菌操作程序啟動(dòng)設(shè)備，記錄設(shè)備運(yùn)行過(guò)程中的各點(diǎn)溫度，最大溫差應(yīng)在恒溫平均溫度的±2C以內(nèi)，以檢查其重現(xiàn)性。運(yùn)行檢測(cè)結(jié)果：剛到121C時(shí)，各探頭溫度:編號(hào)123456789101112編號(hào)123456789101112第一次第二次第二次12FC穩(wěn)定20分鐘時(shí)各探頭溫度:經(jīng)過(guò)三次空載熱分布試驗(yàn)，滅菌器內(nèi)冷點(diǎn)能夠達(dá)到滅菌溫度，腔內(nèi)溫差符合要求，可以進(jìn)行裝載熱分布試驗(yàn)。經(jīng)過(guò)三次空載熱分布試驗(yàn)，滅菌器內(nèi)冷點(diǎn)不能夠達(dá)到滅菌溫度，腔內(nèi)溫差不符合要求，不能進(jìn)行裝載熱分布試驗(yàn)，需進(jìn)一步檢測(cè)調(diào)試。檢查人：日期：復(fù)核人：日期：7.142滿載

6、熱分布的測(cè)試測(cè)試過(guò)程：將滅菌器內(nèi)裝滿含有培養(yǎng)基的錐形瓶（250ml的錐形空瓶，裝玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基200ml），自下而上擺放。取12支探頭，將其中1支的探頭置于進(jìn)氣口處，1支探頭置于排氣口處，1支置于溫度控制和記錄的溫度計(jì)旁邊，其余的探頭均勻分布在腔內(nèi)裝載的各處（同空載的分布）。開啟滅菌鍋，按照121C,20分鐘運(yùn)行，分別記錄15、20分鐘時(shí)各個(gè)點(diǎn)的溫度。連續(xù)運(yùn)行3次，以檢查其重現(xiàn)性。121C穩(wěn)定15分鐘時(shí)各探頭溫度:編號(hào)123456789101112第一次經(jīng)過(guò)滿載熱分布試驗(yàn)，滅菌器內(nèi)冷點(diǎn)能夠達(dá)到滅菌效果，腔內(nèi)溫差符合要求，可以進(jìn)行性能測(cè)試。經(jīng)過(guò)滿載熱分布試驗(yàn)，滅菌器內(nèi)冷點(diǎn)不能夠達(dá)到滅菌效果，

7、腔內(nèi)溫差不符合要求，不能進(jìn)行性能測(cè)試，需進(jìn)一步檢測(cè)調(diào)試。檢查人：日期：復(fù)核人：日期：7.2性能確認(rèn)接受范圍：按照設(shè)備操作說(shuō)明書操作均運(yùn)行正常，在熱分布試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，確定裝載中的最冷點(diǎn)，并肯定該點(diǎn)在滅菌過(guò)程中獲得的無(wú)菌保證值，在121°C,F0>8分鐘。7.2.1運(yùn)行確認(rèn)的檢查檢測(cè)內(nèi)容接受標(biāo)準(zhǔn)查看結(jié)果結(jié)論運(yùn)行確認(rèn)確認(rèn)已進(jìn)行并簽發(fā)合格結(jié)論：檢查人：日期：復(fù)核人：日期：7.2.2滿載熱穿透試驗(yàn)7.2.2.1裝載熱穿透的測(cè)試選用10個(gè)熱電偶做溫度探頭，分別編號(hào)，置于待滅菌含培養(yǎng)基的錐型瓶中。溫度探頭擺放位置應(yīng)選擇滅菌柜內(nèi)的冷點(diǎn)、高溫點(diǎn)、其余探頭均勻分布。7.2.2.2器皿選擇：250m

8、l錐型瓶，100ml錐型瓶7.2.2.3培養(yǎng)基的選擇：每次可以選擇幾種培養(yǎng)基，三次可以選擇不同的培養(yǎng)基。7.2.2.4滅菌程序：121±2C,20分鐘。7.2.2.5連續(xù)運(yùn)行3次，以檢查其重現(xiàn)性。121C穩(wěn)定15分鐘時(shí)各探頭溫度：編號(hào)12345678910第一次第二次第二次12FC穩(wěn)定20分鐘時(shí)各探頭溫度:編號(hào)12345678910第一次第二次第二次7.2.2.6熱穿透試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)論：經(jīng)過(guò)三次裝載熱穿透試驗(yàn)，滅菌柜內(nèi)冷點(diǎn)能夠達(dá)到滅菌效果，腔內(nèi)溫差符合要求，熱穿透驗(yàn)證試驗(yàn)合格。經(jīng)過(guò)三次裝載熱穿透試驗(yàn)，滅菌柜內(nèi)冷點(diǎn)不能夠達(dá)到滅菌效果，腔內(nèi)溫差不符合要求，熱穿透驗(yàn)證試驗(yàn)不合格。檢查人：日期：

9、復(fù)核人：日期：7.2.3留點(diǎn)溫度計(jì)與細(xì)菌生物指示劑驗(yàn)證7.2.3.1 首先將滅菌器滿載，然后通過(guò)物理與生物的方法來(lái)驗(yàn)證滅菌鍋內(nèi)是否達(dá)到設(shè)定溫度和熱分布的情況能否達(dá)到滅菌效果。7.2.3.2 物理方法在滅菌前將留點(diǎn)溫度計(jì)放入滅菌器，置于滅菌器溫度最低點(diǎn)處，從留點(diǎn)的最高溫度可以知道其溫度是否都達(dá)到了設(shè)定的條件。7.2.3.3 生物方法在滅菌器開始滅菌前將生物指示劑和被滅菌物品一起放置在滅菌器內(nèi)，121C下30分鐘，滅好菌后將生物示劑56-60C培養(yǎng)24-48小時(shí)；同時(shí)做空白對(duì)照，就是將沒(méi)滅菌的生物指示劑直接同滅好菌的生物指示劑相同條件培養(yǎng)，培養(yǎng)到時(shí)間后根據(jù)顏色判斷滅菌效果。連續(xù)試驗(yàn)三次，9、10號(hào)

10、設(shè)為空白對(duì)照。生物指示劑的使用可以用作壓力蒸汽滅菌設(shè)備滅菌效果的依據(jù)。生物指示劑：即為非致病性嗜熱脂肪桿菌芽胞(ATCC7953)制成的藍(lán)紫色液體。含菌量為5x105-6/支。布點(diǎn)：根據(jù)滅菌鍋的層數(shù)而定,對(duì)二層裝滅菌器設(shè)4個(gè)點(diǎn)，上層中央部位1個(gè)點(diǎn)，下層前后部位各1個(gè)點(diǎn)，熱穿透試驗(yàn)最低溫度點(diǎn)1個(gè)點(diǎn)，每點(diǎn)置生物指示劑2支。7.2.3.4 結(jié)果判定物理方法：留點(diǎn)溫度計(jì)達(dá)到設(shè)定溫度為合格；生物方法：(無(wú)菌生長(zhǎng)“-”、有菌生長(zhǎng)“+”)次數(shù)試管號(hào)12345678910第次試驗(yàn)結(jié)果第二次試驗(yàn)結(jié)果第二次試驗(yàn)結(jié)果結(jié)論：檢查人：日期：復(fù)核人：日期：724滅菌后培養(yǎng)基適用性檢查7.2.4.1菌種試驗(yàn)用的菌株傳代次數(shù)

11、不得超過(guò)5代(從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代)，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。大腸埃希菌(Escherichiacoli)金黃色葡萄球菌(Staphylococcus枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)白色念珠菌(Candidaalbicans)黑曲霉(Aspergillusniger)7.2.4.2菌液制備CMCC(B)*aureus)CMCC(B)*CMCC(B)*CMCC(F)*CMCC(F)*接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)18-24小時(shí)；接種白色念株菌的新鮮培養(yǎng)物至

12、改良馬丁培養(yǎng)基中或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24-48小時(shí)。上述培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為50-100cfu的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)5-7天，加入3-5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將抱子洗脫。然后採(cǎi)用適宜的方法吸出抱子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含抱子數(shù)50-100cfu的抱子懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在2-8°C,可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉抱子懸液可保存在2-8°C,在驗(yàn)證過(guò)

13、的貯存期內(nèi)使用。7.2.4.3適用性檢查取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌各50-100cfu,分別注入無(wú)菌平皿中，立即傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置30-35C培養(yǎng)48小時(shí)，計(jì)數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉各50-100cfu，分別注入無(wú)菌平皿中，立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置23-28工培養(yǎng)72小時(shí)，計(jì)數(shù)。同時(shí)，用相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。7.2.4.4結(jié)果判定若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)大小與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致，判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。第一次試驗(yàn)結(jié)果：金黃色葡萄球菌枯早芽抱桿困大腸埃希菌白色念珠菌黑曲霉試驗(yàn)組平均值對(duì)照組平均值比率第二次試驗(yàn)結(jié)果：金黃色葡萄球菌枯早芽抱桿困大腸埃