生物制藥工藝學(xué)：第四章 固相析出分離法

1、1第四章第四章 固相析出分離固相析出分離第一節(jié)第一節(jié) 鹽析法鹽析法第二節(jié)第二節(jié) 有機(jī)溶劑沉淀法有機(jī)溶劑沉淀法第三節(jié)第三節(jié) 其他沉淀法其他沉淀法第四節(jié)第四節(jié) 結(jié)結(jié) 晶晶 法法2生物分離過程的一般流程生物分離過程的一般流程原料液原料液細(xì)胞分離細(xì)胞分離( (離心，過濾離心，過濾) )細(xì)胞胞內(nèi)產(chǎn)物細(xì)胞胞內(nèi)產(chǎn)物路線一路線一路線二路線二細(xì)胞破碎細(xì)胞破碎碎片分離碎片分離路線一路線一A A路線一路線一B B清液胞外產(chǎn)物清液胞外產(chǎn)物粗分離粗分離( (沉淀沉淀/ /超過濾超過濾/ /萃取萃取) )純化純化( (層析、離子交換、吸附層析、離子交換、吸附) )脫鹽脫鹽( (凝膠過濾、超濾凝膠過濾、超濾) )濃縮濃縮(

2、 (超濾超濾) )精制精制( (結(jié)晶、干燥結(jié)晶、干燥) )包含體包含體溶解溶解( (加鹽酸胍、脲加鹽酸胍、脲) )復(fù)性復(fù)性3 濃縮； 初步純化 ； 由液態(tài)變成固態(tài)。固相析出分離法概固相析出分離法概述述 改變?nèi)芤簵l件，使溶質(zhì)以固體形式從溶液中析出的操作技術(shù)稱為固相析出分離法固相析出分離法。 固相析出分離法固相析出分離法： 析出物為晶體時(shí)稱為結(jié)晶法； 析出物為無定形固體稱為沉淀法。固相析出的目的：固相析出的目的：4固相固相析出法析出法結(jié)晶法結(jié)晶法其他其他沉淀法沉淀法鹽析法鹽析法有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 沉淀法沉淀法固相析出分離法的分類固相析出分離法的分類5第一節(jié)第一節(jié) 鹽析法鹽析法 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：經(jīng)濟(jì)、安全、

3、操作簡(jiǎn)便、應(yīng)用范圍廣：經(jīng)濟(jì)、安全、操作簡(jiǎn)便、應(yīng)用范圍廣 缺點(diǎn)缺點(diǎn)：鹽析法分辨率不高：鹽析法分辨率不高6表面形成水膜（水化層）表面形成水膜（水化層） ；帶相同電荷。帶相同電荷。p蛋白質(zhì)（酶）溶液穩(wěn)定的原因：蛋白質(zhì)（酶）溶液穩(wěn)定的原因： 有水化層有水化層.pH Pi帶負(fù)電荷帶負(fù)電荷.穩(wěn)定的膠體穩(wěn)定的膠體+ 有水化層有水化層pHPi.帶正電荷帶正電荷.穩(wěn)定的膠體穩(wěn)定的膠體水化膜水化膜7 中性鹽的親水性大于蛋白質(zhì)（酶）的分子的親水性，中性鹽的親水性大于蛋白質(zhì)（酶）的分子的親水性，加入大量中性鹽后，加入大量中性鹽后，奪走了水分子，破壞了水化膜，暴奪走了水分子，破壞了水化膜，暴露出疏水區(qū)域露出疏水區(qū)域，同

4、時(shí)又，同時(shí)又中和了電荷，破壞了親水膠體中和了電荷，破壞了親水膠體，蛋白質(zhì)分子即形成沉淀。蛋白質(zhì)分子即形成沉淀。+去水膜的蛋白質(zhì)去水膜的蛋白質(zhì)去水膜的蛋白質(zhì)去水膜的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)分子形成沉淀蛋白質(zhì)分子形成沉淀p鹽析的原理鹽析的原理酸酸堿堿8+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶正電荷的蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)酸酸堿堿酸酸堿堿中性鹽破壞水膜中性鹽破壞水膜中性鹽破壞水膜+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒溶液中蛋白質(zhì)聚沉溶液中蛋白質(zhì)聚沉酸酸堿堿水化膜水化膜9p鹽析過程鹽析過程10p鹽溶作用鹽溶作用 分子在等電

5、點(diǎn)時(shí)，相互吸引，聚合沉淀，加入分子在等電點(diǎn)時(shí)，相互吸引，聚合沉淀，加入少量鹽離少量鹽離子子后破壞了這種吸引力，使分子分散，溶于水中后破壞了這種吸引力，使分子分散，溶于水中鹽溶11p鹽析作用鹽析作用蛋白質(zhì)分子表面的疏水區(qū)域，聚集了許多水分子，鹽濃度高時(shí)，這些水分子被鹽抽出，暴露出的疏水區(qū)域相互結(jié)合疏水區(qū)域相互結(jié)合，沉淀。12圖1 碳氧血紅蛋白的溶解度與硫酸銨離子強(qiáng)度的關(guān)系圖13 第一類叫第一類叫KsKs分段鹽析法，分段鹽析法，在一定在一定PHPH和溫度下通過改變離和溫度下通過改變離子強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)，（固定子強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)，（固定pH, pH, 溫度，溫度，改變鹽濃度改變鹽濃度），），由于蛋由于蛋白質(zhì)對(duì)離子強(qiáng)

6、度的變化非常敏感，易產(chǎn)生共沉淀現(xiàn)象，白質(zhì)對(duì)離子強(qiáng)度的變化非常敏感，易產(chǎn)生共沉淀現(xiàn)象，用于早期的粗提液；用于早期的粗提液； 第二種叫第二種叫分段鹽析法，分段鹽析法，在一定離子強(qiáng)度下通過改變?cè)谝欢x子強(qiáng)度下通過改變PHPH和溫度來實(shí)現(xiàn)，（固定離子強(qiáng)度，和溫度來實(shí)現(xiàn)，（固定離子強(qiáng)度，改變改變pHpH及溫度及溫度），），由由于溶質(zhì)溶解度變化緩慢，且變化幅度小，因此分辨率更于溶質(zhì)溶解度變化緩慢，且變化幅度小，因此分辨率更高，高，用于后期進(jìn)一步分離純化和結(jié)晶。用于后期進(jìn)一步分離純化和結(jié)晶。p 鹽析方法的類型（分級(jí)沉淀）鹽析方法的類型（分級(jí)沉淀）14蛋白質(zhì)濃度對(duì)鹽析的影響蛋白質(zhì)濃度對(duì)鹽析的影響高濃度蛋白溶液

7、可以節(jié)約鹽的用量；高濃度蛋白溶液可以節(jié)約鹽的用量；蛋白濃度過高，會(huì)發(fā)生嚴(yán)重共沉淀作用，影響分離效果；蛋白濃度過高，會(huì)發(fā)生嚴(yán)重共沉淀作用，影響分離效果；在低濃度蛋白質(zhì)溶液中鹽析，所用的鹽量較多，共沉淀作用比較在低濃度蛋白質(zhì)溶液中鹽析，所用的鹽量較多，共沉淀作用比較少，但回收率會(huì)降低；少，但回收率會(huì)降低；分步分離提純時(shí)，寧可選擇稀一些的蛋白質(zhì)溶液，多加一點(diǎn)中性分步分離提純時(shí)，寧可選擇稀一些的蛋白質(zhì)溶液，多加一點(diǎn)中性鹽，使共沉淀作用減至最低限度；鹽，使共沉淀作用減至最低限度；一般認(rèn)為一般認(rèn)為2.5%-3.0%2.5%-3.0%的蛋白質(zhì)濃度比較適中。相當(dāng)于的蛋白質(zhì)濃度比較適中。相當(dāng)于25 mg/mL2

8、5 mg/mL30mg/mL30mg/mL。p影響鹽析的因素影響鹽析的因素15對(duì)起始濃度為對(duì)起始濃度為 30g/L30g/L的的COMbCOMb溶液，溶液，大部分蛋白質(zhì)在硫酸銨飽和度為大部分蛋白質(zhì)在硫酸銨飽和度為 58-6558-65之間沉淀出來；之間沉淀出來；對(duì)稀釋對(duì)稀釋1010倍的倍的 COMbCOMb溶液，飽和度達(dá)到溶液，飽和度達(dá)到66%66%時(shí)才開始沉淀，而相應(yīng)的沉淀范圍時(shí)才開始沉淀，而相應(yīng)的沉淀范圍為為66-73%66-73%飽和度。飽和度。16l可用于蛋白質(zhì)二次鹽析可用于蛋白質(zhì)二次鹽析17pHpH和鹽濃度對(duì)鹽析的影響和鹽濃度對(duì)鹽析的影響 調(diào)節(jié)溶液的調(diào)節(jié)溶液的pHpH值，蛋白質(zhì)值，蛋

9、白質(zhì)的溶解度會(huì)隨的溶解度會(huì)隨pHpH的變化而的變化而變化；變化；調(diào)節(jié)溶液的鹽濃度，蛋白調(diào)節(jié)溶液的鹽濃度，蛋白質(zhì)的溶解度會(huì)隨鹽濃度的質(zhì)的溶解度會(huì)隨鹽濃度的變化而變化。變化而變化。18鹽析溫度的影響鹽析溫度的影響在低離子強(qiáng)度或純水中，蛋白質(zhì)溶解度在低離子強(qiáng)度或純水中，蛋白質(zhì)溶解度在一定范圍內(nèi)隨溫度增加而增加。在一定范圍內(nèi)隨溫度增加而增加。在高濃度下，蛋白質(zhì)的溶解度隨溫度上在高濃度下，蛋白質(zhì)的溶解度隨溫度上升而下降。升而下降。在一般情況下，蛋白質(zhì)鹽析可在室溫下在一般情況下，蛋白質(zhì)鹽析可在室溫下進(jìn)行，對(duì)溫度比較敏感的酶要求在進(jìn)行，對(duì)溫度比較敏感的酶要求在0-40-4進(jìn)行。進(jìn)行。19鹽析用鹽的選擇鹽析用

10、鹽的選擇鹽析中常用的鹽：硫酸銨、硫酸鈉、磷酸鉀、磷酸鈉鹽析中常用的鹽：硫酸銨、硫酸鈉、磷酸鉀、磷酸鈉硫酸銨是最常用的蛋白質(zhì)鹽析沉淀劑硫酸銨是最常用的蛋白質(zhì)鹽析沉淀劑20在相同離子強(qiáng)度下，鹽的種類對(duì)蛋白質(zhì)溶解度的影響有一定差異；在相同離子強(qiáng)度下，鹽的種類對(duì)蛋白質(zhì)溶解度的影響有一定差異；一般的規(guī)律為：半徑小的高價(jià)離子的鹽析作用較強(qiáng)，半徑大的低價(jià)離子作一般的規(guī)律為：半徑小的高價(jià)離子的鹽析作用較強(qiáng)，半徑大的低價(jià)離子作用較弱；用較弱；陰離子鹽析效果陰離子鹽析效果 ：檸檬酸檸檬酸POPO4 43- 3- SOSO4 42-2- CHCH3 3COOCOO- - ClCl- - NONO3 3- -SCNS

11、CN- -；陽離子鹽析效果：陽離子鹽析效果： NHNH4 4+ + K K+ +NaNa+ + 高價(jià)陽離子；高價(jià)陽離子；陰離子的影響大于陽離子；陰離子的影響大于陽離子；鹽析中常用的鹽：硫酸銨、硫酸鈉、磷酸鉀、磷酸鈉；鹽析中常用的鹽：硫酸銨、硫酸鈉、磷酸鉀、磷酸鈉；鹽的種類對(duì)蛋白質(zhì)溶解度的影響鹽的種類對(duì)蛋白質(zhì)溶解度的影響21 常用的中性鹽中最重要的是常用的中性鹽中最重要的是(NH4)2SO4 ，因?yàn)樗c其他常用鹽類，因?yàn)樗c其他常用鹽類相比有十分突出的優(yōu)點(diǎn)：相比有十分突出的優(yōu)點(diǎn)： 1) 1) 溶解度大：溶解度大：在低溫時(shí)仍有相當(dāng)高的溶解度，由于酶和各種蛋白質(zhì)通常是在低溫下穩(wěn)定，因而鹽析操作也要求

12、在低溫下（0-4）進(jìn)行。 2)2)分離效果好：分離效果好：有的提取液加入適量硫酸銨鹽析，一步就可以除去75的雜蛋白，純度提高了四倍。 3) 3) 不易引起變性。不易引起變性。有穩(wěn)定酶與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的作用。有的酶或蛋白質(zhì)用2-3mol/L濃度(NH4)2SO4保存可達(dá)數(shù)年之久。 4) 4) 價(jià)格便宜；價(jià)格便宜； 5)5)廢液不污染環(huán)境。廢液不污染環(huán)境。硫酸銨是最常用的蛋白質(zhì)鹽析沉淀劑硫酸銨是最常用的蛋白質(zhì)鹽析沉淀劑22硫酸銨的加入方法：硫酸銨的加入方法：1 1）加入固體鹽法）加入固體鹽法 用于要求飽和度較高而不增大溶液體積的情況；用于要求飽和度較高而不增大溶液體積的情況；加入速度不能太快，應(yīng)分批加

13、入，并充分?jǐn)嚢?，使其完全溶解和防加入速度不能太快，?yīng)分批加入，并充分?jǐn)嚢瑁蛊渫耆芙夂头乐咕植繚舛冗^高；止局部濃度過高；2 2）加入飽和溶液法）加入飽和溶液法 用于要求飽和度不高而原來溶液體積不大的用于要求飽和度不高而原來溶液體積不大的情況；情況；它可防止局部過濃，但加量較多時(shí)，料液會(huì)被稀釋。它可防止局部過濃，但加量較多時(shí)，料液會(huì)被稀釋。3 3）透析平衡法）透析平衡法 先將鹽析的樣品裝于透析袋中，然后浸入飽和硫酸先將鹽析的樣品裝于透析袋中，然后浸入飽和硫酸銨中進(jìn)行透析，袋內(nèi)飽和度逐漸提高，達(dá)到設(shè)定濃度后，目的蛋白銨中進(jìn)行透析，袋內(nèi)飽和度逐漸提高，達(dá)到設(shè)定濃度后，目的蛋白析出。該法優(yōu)點(diǎn)在于硫酸

14、銨濃度變化有連續(xù)性，鹽析效果好，但程析出。該法優(yōu)點(diǎn)在于硫酸銨濃度變化有連續(xù)性，鹽析效果好，但程序煩瑣，故多用于結(jié)晶。序煩瑣，故多用于結(jié)晶。23硫酸銨終濃度硫酸銨終濃度,%飽和度飽和度606570758090100每每1L溶液加固體硫酸銨的質(zhì)量溶液加固體硫酸銨的質(zhì)量(g)硫硫酸酸銨銨初初濃濃度度，%飽飽和和度度0390430472516561662767103263654064494945926942026230034038242452061925230267307348390485583301982352733143564495463317721425229233342652235164200

15、238178319411506401321682052452853754694599134171210250339431調(diào)整硫酸銨溶液飽和度計(jì)算表（調(diào)整硫酸銨溶液飽和度計(jì)算表（25）24操作注意事項(xiàng)操作注意事項(xiàng)(1)加固體硫酸銨時(shí)，必須注意表中的溫度。加固體硫酸銨時(shí)，必須注意表中的溫度。(2)分段鹽析時(shí)，要考慮到每次分段后蛋分段鹽析時(shí)，要考慮到每次分段后蛋白質(zhì)濃度的變化。白質(zhì)濃度的變化。(3) 鹽析條件如鹽析條件如pH、溫度和硫酸銨的純度、溫度和硫酸銨的純度都必須嚴(yán)格控制。都必須嚴(yán)格控制。(5) 鹽析過程中，攪拌必須規(guī)則和溫和。鹽析過程中，攪拌必須規(guī)則和溫和。(6) 反應(yīng)至少應(yīng)在反應(yīng)至少應(yīng)在5

16、0mmol/L緩沖溶液中進(jìn)行。緩沖溶液中進(jìn)行。(4) 鹽析后一般要放置鹽析后一般要放置0.51h。25鹽析法結(jié)晶肌紅蛋白26分步鹽析法: 生產(chǎn)上有時(shí)先以較低的鹽濃度除去部分雜蛋白，再提高飽和度沉淀目的物。血清血清球蛋白球蛋白清蛋白清蛋白(NH(NH4 4) )2 2SOSO4 450%50%飽和度飽和度飽和飽和析出析出析出析出27反抽提法,共沉淀較低濃度鹽溶液溶雜蛋白大腸桿菌RNA聚合酶的制備28硫酸銨鹽析方法的優(yōu)點(diǎn)硫酸銨鹽析方法的優(yōu)點(diǎn)經(jīng)濟(jì)；不需特殊設(shè)備；操作簡(jiǎn)便；安全；應(yīng)用范圍廣；較少引起變性（有時(shí)對(duì)生物分子具有穩(wěn)定作用）29水解變酸；水解變酸；高高pH pH 釋氨，腐蝕；釋氨，腐蝕；殘留產(chǎn)

17、品有影響。殘留產(chǎn)品有影響。硫酸銨鹽析法的缺點(diǎn)：硫酸銨鹽析法的缺點(diǎn)：30脫鹽的方法脫鹽的方法3132 有機(jī)溶劑沉淀法即向水溶液中加入一定量親水性的有機(jī)溶劑，降低溶質(zhì)的溶解度，使其沉淀析出的分離純化方法。第二節(jié)第二節(jié) 有機(jī)溶劑沉淀法有機(jī)溶劑沉淀法有機(jī)溶劑沉淀的基本原理有機(jī)溶劑沉淀的基本原理n有機(jī)溶劑能降低水溶液的介電常數(shù)；n有機(jī)溶劑能破壞蛋白質(zhì)表面的水膜。 33l親水性有機(jī)溶劑加入溶液親水性有機(jī)溶劑加入溶液后降低了介質(zhì)的介電常數(shù)，后降低了介質(zhì)的介電常數(shù)，使溶質(zhì)分子之間的靜電引使溶質(zhì)分子之間的靜電引力增加。力增加。l水溶性有機(jī)溶劑本身的水水溶性有機(jī)溶劑本身的水合作用降低了自由水的濃合作用降低了自由水

18、的濃度，壓縮了溶質(zhì)分子表面度，壓縮了溶質(zhì)分子表面原有水化層的厚度，導(dǎo)致原有水化層的厚度，導(dǎo)致溶質(zhì)分子脫水凝聚。溶質(zhì)分子脫水凝聚。原理34有機(jī)溶劑沉淀有機(jī)溶劑沉淀35 缺點(diǎn)缺點(diǎn)：有機(jī)溶劑沉淀法易使蛋白質(zhì)等生有機(jī)溶劑沉淀法易使蛋白質(zhì)等生物大分子變性，操作需在低溫下進(jìn)行；物大分子變性，操作需在低溫下進(jìn)行；需要耗用大量有機(jī)溶劑，成本較高；需要耗用大量有機(jī)溶劑，成本較高；有有機(jī)溶劑一般易燃易爆，所以貯存比較困難機(jī)溶劑一般易燃易爆，所以貯存比較困難或麻煩。或麻煩。有機(jī)溶劑沉淀法的特點(diǎn)：有機(jī)溶劑沉淀法的特點(diǎn)： 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：分辨能力比鹽析法高。分辨能力比鹽析法高。有機(jī)有機(jī)溶劑沸點(diǎn)低，易揮發(fā)除去，不會(huì)殘留于溶劑沸

19、點(diǎn)低，易揮發(fā)除去，不會(huì)殘留于成品中，產(chǎn)品更純凈，沉淀物與母液間成品中，產(chǎn)品更純凈，沉淀物與母液間的密度差較大，分離容易。的密度差較大，分離容易。36二、操作條件的控制二、操作條件的控制 1 1、溶劑選擇、溶劑選擇 常用的溶劑是乙醇、丙酮、甲醇，其他溶劑如二甲基甲酰胺、二甲基亞砜也可做沉淀劑。 沉淀用有機(jī)溶劑的選擇主要應(yīng)考慮沉淀作用強(qiáng)、對(duì)生物分子的變性作用小、毒性小以及揮發(fā)性適中。 2 2、溫度、溫度 在使用有機(jī)溶劑沉淀生物高分子時(shí)務(wù)必控制在低溫下進(jìn)行。373 3、溶液酸堿度的控制、溶液酸堿度的控制 控制溶液pH時(shí)務(wù)必使溶液中大多數(shù)蛋白質(zhì)分帶有相同電荷;而不要讓目的物與主要雜質(zhì)分子帶相同電荷，以

20、致出現(xiàn)共沉作用。4 4、離子強(qiáng)度的控制、離子強(qiáng)度的控制 用溶劑沉淀蛋白質(zhì)時(shí)離子強(qiáng)度多控制在0.01-0.05mol/L較好，通常不應(yīng)超過5%的含量。 常用的助沉劑多為低濃度的單價(jià)鹽，有醋酸鈉、醋酸銨和氯化鈉等。385 5、樣品濃度的控制、樣品濃度的控制 一般認(rèn)為蛋白質(zhì)的初始濃度為0.5%-2%為好，粘多糖則以1%-2%較合適。6 6、某些金屬離子的助沉淀作用、某些金屬離子的助沉淀作用 實(shí)際操作時(shí)往往先加溶媒沉淀除去雜蛋白，再加Zn2+沉淀目的物。39兩性電解質(zhì)在溶液pH處于等電點(diǎn)pI時(shí)，分子表面凈電荷為零，使兩性溶質(zhì)溶解度下降，析出沉淀。1、等電點(diǎn)沉淀法、等電點(diǎn)沉淀法第三節(jié)第三節(jié) 其他沉淀法其

21、他沉淀法402、選擇性變性沉淀法、選擇性變性沉淀法利用表面活性劑或有機(jī)溶劑引起變性；利用對(duì)熱的穩(wěn)定性不同，加熱破壞某些組分 而保留另一些組分；選擇性的酸堿變性。41 不同分子量的聚乙二醇（PEG）應(yīng)用較多的是相對(duì)分子質(zhì)量6000-20 000的PEG ； 聚乙烯吡咯烷酮和葡聚糖等。 3、有機(jī)聚合物沉淀法、有機(jī)聚合物沉淀法 常用的有機(jī)多聚物：常用的有機(jī)多聚物：42金屬?gòu)?fù)合鹽金屬?gòu)?fù)合鹽 所用的金屬離子，包括Fe2+、Ba2+、Mg2+、 Hg2+、Ag2+等；蛋白質(zhì)和酶分子中因?yàn)楹辛u基、氨基、咪唑基和硫氫基等，均可以和上述金屬離子作用形成鹽復(fù)合物有機(jī)酸類復(fù)合鹽有機(jī)酸類復(fù)合鹽 含氮有機(jī)酸如苦味酸、

22、苦桐酸和鞣酸等能夠與有機(jī)分子的堿性功能團(tuán)形成復(fù)合物而沉淀析出。 4、生成鹽類復(fù)合物的沉淀、生成鹽類復(fù)合物的沉淀43CTAB（十六烷基三甲基季胺溴化物）；CPC(十六烷基氯化吡啶)；SDS（十二烷基磺酸鈉）等。5、離子型表面活性、離子型表面活性6、離子型多聚物沉淀、離子型多聚物沉淀是一類溫和的沉淀劑，常用的有核酸（多聚陰離子）可作 用于堿性蛋白；魚精蛋白（多聚陽離子）則作用于酸性蛋白質(zhì)。44第四節(jié)第四節(jié) 結(jié)結(jié) 晶晶 法法454647484950 過飽和溶液的形成過飽和溶液的形成蒸發(fā)法蒸發(fā)法冷卻法冷卻法化學(xué)反應(yīng)結(jié)晶法化學(xué)反應(yīng)結(jié)晶法鹽析結(jié)晶法鹽析結(jié)晶法等電點(diǎn)法等電點(diǎn)法復(fù)合法復(fù)合法制備制備 結(jié)晶的首要

23、條件是溶液的過飽和。結(jié)晶的首要條件是溶液的過飽和。51 1. 1.蒸發(fā)法蒸發(fā)法 借蒸發(fā)出去部分溶劑的結(jié)晶方法。使溶液在借蒸發(fā)出去部分溶劑的結(jié)晶方法。使溶液在加壓、常壓或減壓下加壓、常壓或減壓下加熱，加熱，蒸發(fā)除去一部分溶蒸發(fā)除去一部分溶劑，以達(dá)到或維持溶液過飽和度。劑，以達(dá)到或維持溶液過飽和度。 適于溶解度隨溫度變化不顯著的物質(zhì)或隨溫適于溶解度隨溫度變化不顯著的物質(zhì)或隨溫度升高溶解度降低的物質(zhì)。度升高溶解度降低的物質(zhì)。52 2. 2.冷卻法冷卻法 基本上不除去溶劑，而是使溶液基本上不除去溶劑，而是使溶液冷卻降溫冷卻降溫成為成為過飽和溶液。過飽和溶液。 此法適于溶解度隨溫度降低而顯著減小的物質(zhì)此

24、法適于溶解度隨溫度降低而顯著減小的物質(zhì) 3. 3.化學(xué)反應(yīng)結(jié)晶法化學(xué)反應(yīng)結(jié)晶法 向溶液中加入反應(yīng)劑，生成一個(gè)向溶液中加入反應(yīng)劑，生成一個(gè)新的溶解度更新的溶解度更低的物質(zhì)，低的物質(zhì)，當(dāng)濃度超過它的溶解度時(shí)就有結(jié)晶析當(dāng)濃度超過它的溶解度時(shí)就有結(jié)晶析出。出。 如：在抗生素的溶液中加入成鹽劑（酸、堿或如：在抗生素的溶液中加入成鹽劑（酸、堿或鹽類），使抗生素以鹽類），使抗生素以鹽的形式鹽的形式結(jié)晶析出。結(jié)晶析出。 NaOHNaOH, CH, CH3 3COOKCOOK53 4. 4.解析法解析法 向溶液中加入某些物質(zhì)，使溶質(zhì)的溶解度降低，向溶液中加入某些物質(zhì)，使溶質(zhì)的溶解度降低，形成過飽和溶液而結(jié)晶析出

25、。形成過飽和溶液而結(jié)晶析出。 抗溶劑或沉淀劑：固體、液體、氣體抗溶劑或沉淀劑：固體、液體、氣體 抗溶劑的特點(diǎn)：極易溶解在原溶液的溶劑中抗溶劑的特點(diǎn)：極易溶解在原溶液的溶劑中 鹽析結(jié)晶法：用鹽析結(jié)晶法：用固體氯化鈉固體氯化鈉作為抗溶劑使溶液作為抗溶劑使溶液 中的溶質(zhì)盡可能的結(jié)晶出來中的溶質(zhì)盡可能的結(jié)晶出來有機(jī)溶劑結(jié)晶法：向水溶液中加入一定量的有機(jī)溶劑結(jié)晶法：向水溶液中加入一定量的親水親水 性的有機(jī)溶劑性的有機(jī)溶劑，降低溶質(zhì)的溶解，降低溶質(zhì)的溶解 度，使其結(jié)晶析出度，使其結(jié)晶析出水析結(jié)晶法：易溶于有機(jī)溶劑的物質(zhì)，向其溶液水析結(jié)晶法：易溶于有機(jī)溶劑的物質(zhì)，向其溶液 中加入適量中加入適量水水即可析出晶體即可析出晶體54 5. 5.等電點(diǎn)法等電點(diǎn)法 利用某些生物物質(zhì)具有利用某些生物物質(zhì)具有兩性化合物性質(zhì)兩性化合物性質(zhì)當(dāng)溶當(dāng)溶液液pHpH值調(diào)至等電點(diǎn)時(shí)溶