紫外-可見分光光度法

1、1第四章 紫外可見分光光度法（Ultraviolet and Visible Spectrophotometry） 24.1 概述4.2 光的吸收定律朗伯比爾定律4.3 紫外可見分光光度計(jì)及測(cè)定方法4.4 顯色反應(yīng)及其影響因素4.5 紫外可見分光光度法的誤差和測(cè)量 條件的選擇4.6 紫外可見分光光度法應(yīng)用實(shí)例概要3學(xué)習(xí)要求1了解物質(zhì)顏色與光的吸收關(guān)系2掌握朗伯比爾定律3了解紫外可見分光光度法的基本概念、原理4熟悉紫外可見分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)與操作5掌握紫外可見分光光度法的測(cè)定方法44.1 概述是基于物質(zhì)分子對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的分析方法。按物質(zhì)吸收光的波長(zhǎng)不同，可分為可見分光光度法、紫外分光

2、光度法及紅外分光光度法。特點(diǎn)：*靈敏度較高（10-6g），適用于微量組分的測(cè)定。但相對(duì)誤差較大（25%）。*具有操作方便、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、靈敏度和選擇性較好等優(yōu)點(diǎn)，為常規(guī)的儀器分析方法。54.1.1光的基本性質(zhì) 光是一種電磁波。所有電磁波都具有波粒二象性。光的波長(zhǎng)、頻率與光速c的關(guān)系為：（9-1） 光速在真空中等于2.9979108ms-1。光子的能量與波長(zhǎng)的關(guān)系為：（9-2）式中E為光子的能量；為頻率；h為普朗克常數(shù)，為6.62610-34JS。chc/hE6電磁波譜7表4-1 電磁波譜范圍表光譜名稱波長(zhǎng)范圍 躍遷類型 分析方法X射線 10-1100nm K和L層電子 X射線光譜法遠(yuǎn)紫外光 1

3、0200nm 中層電子 真空紫外光度法近紫外光 200400nm 外層電子 紫外光度法可見光 400750nm 外層電子 比色及可見光度法近紅外光 0.752.5m 分子振動(dòng) 近紅外光譜法中紅外光 2.55.0m 分子振動(dòng) 中紅外光譜法遠(yuǎn)紅外光 5.01000m 分子轉(zhuǎn)動(dòng)和振動(dòng) 遠(yuǎn)紅外光譜法微波 0.1100cm 分子轉(zhuǎn)動(dòng) 微波光譜法無(wú)線電波 11000m 核的自旋 核磁共振光譜法84.1.2物質(zhì)的顏色與光的關(guān)系(monochromatic light)只具有一種波長(zhǎng)的光。 由兩種以上波長(zhǎng)組成的光。是由紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等各種色光按一定比例混合而成的。是由于物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光具有選擇性

4、的吸收作用而產(chǎn)生的。例如：硫酸銅溶液因吸收白光中的黃色光而呈藍(lán)色；高錳酸鉀溶液因吸白光中的綠色光而呈紫色。因此，物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色和吸收的光顏色之間是互補(bǔ)關(guān)系。9 如果把兩種適當(dāng)顏色的光按一定的強(qiáng)度比例混合也可以得白光，這兩種光就叫。如果吸收光在可見區(qū),吸收光的顏色與透過光的顏色為互補(bǔ)關(guān)系,物質(zhì)呈現(xiàn)透過光的顏色。 如果吸收光在紫外區(qū)，則物質(zhì)不呈現(xiàn)顏色光的互補(bǔ)性與物質(zhì)的顏色10吸收光譜(absorption spectrum)或吸收曲線 測(cè)定某種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)單色光的吸收程度，以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖。 KMnO4溶液在特定波長(zhǎng)附近的綠色光吸收最強(qiáng)，而對(duì)紫色光吸收最弱。光吸收程度最大處的叫

5、做最大吸收波長(zhǎng)，用max表示。不同濃度的KMnO4溶液所得的吸收曲線都相似，其最大吸收波長(zhǎng)不變，只是相應(yīng)的吸光度大小不同。11 精密配置0.05g/L的KMnO4標(biāo)準(zhǔn)溶液，搖勻作為樣品。以蒸餾水為空白，依次選擇440，460，480，500，520，540，560，580，600，620，640，660，680，700nm波長(zhǎng)為測(cè)定點(diǎn)，依法測(cè)出的各點(diǎn)的吸收度A。以測(cè)定波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)測(cè)出的吸光度Ai為縱坐標(biāo)，繪制吸收曲線。從吸收曲線處找出最大吸收波長(zhǎng)max.KMnO4吸收曲線的繪制12E=hv=h(C/)分子的吸收分子的吸收光譜是與其光譜是與其相應(yīng)的電子相應(yīng)的電子能級(jí)特征相能級(jí)特征相關(guān)的。

6、同時(shí)關(guān)的。同時(shí)也與振動(dòng)和也與振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)有轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)有關(guān)。關(guān)。分子的光吸收機(jī)理 134.2 光的吸收定律Lambert-beer定律9.2.1 朗伯比爾定律當(dāng)一束平行的單色光照射到有色溶液時(shí)，光的一部分將被溶液吸收，一部分透過溶液，還有一部分被器皿表面所反射。設(shè)入射光強(qiáng)度為I0，透過光強(qiáng)度為It，溶液的濃度為c，液層寬度為b，經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明它們之間有下列關(guān)系：kcbIIA0lg(9-3)14透光度、吸光度與溶液濃度及液層寬度的關(guān)系 （9-4） 溶液濃度與寬度的乘積與吸光度成正比，而不是與透光度成正比。以上兩式中k是比例系數(shù)，與入射光波長(zhǎng)、溶液的性質(zhì)及溫度有關(guān)。當(dāng)入射光波長(zhǎng)和溶液溫度一定時(shí)，k代表單

7、位濃度的有色溶液放在單位寬度的比色皿中的吸光度.。當(dāng)c的單位為gL-1，b的單位為cm時(shí)，k以a表示，稱為吸光系數(shù)(absorption coefficient)，其單位為L(zhǎng)g-1cm-1，此時(shí)式（9-3）變?yōu)?abcA kbcT1lg IIlgA0(9-5)15 如果濃度c的單位為molL-1，b的單位為cm，這時(shí)k常用 表示。稱為摩爾吸光系數(shù)(molar absorptivity)，其單位為L(zhǎng)mol-1cm-1，它表示吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度為1molL-1，溶液的寬度為1cm時(shí)，溶液對(duì)光的吸收能力。 值越大，表示吸光質(zhì)點(diǎn)對(duì)某波長(zhǎng)的光吸收能力愈強(qiáng)，故光度測(cè)定的靈敏度越高。值在103以上即可進(jìn)行分光光

8、度法測(cè)定，高靈敏度的分光光度法可達(dá)到105106。于是式（9-3）可寫成為：A=bc （9-6）與a的關(guān)系為：=Ma （9-7） 式中M為吸光物質(zhì)的摩爾質(zhì)量16kcbIIA0lg實(shí)際測(cè)定中選用參比的重要性17例9-1 濃度為25.0g/50mL的Cu2+溶液，用雙環(huán)已酮草酰二腙分光光度法測(cè)定，于波長(zhǎng)600nm處，用2.0cm比色皿測(cè)得T=50.1%，求吸光系數(shù)a和摩爾吸光系數(shù)。已知M(Cu)=64.0。解 已知T=0.501，則A=lgT=0.300，b=2.0cm,則根據(jù)朗伯比爾定律 A=abc，而= Ma = 64.0gmol-13.00102 Lg-1cm-1=1.92104(Lmol-

9、1cm-1)1000.5100 .50100 .251436LgLgc（11 -2-14.L.g103.001000. 50 . 2300. 0cmLgcmbcAa18例例9-29-2 某有色溶液，當(dāng)用1cm比色皿時(shí)，其透光度為T，若改用2cm比色皿，則透光度應(yīng)為多少？解解: : 由A=-lgT=abc可得 T=10-abc 當(dāng)b1=1cm時(shí)，T1=10-ac=T 當(dāng)b2=2cm時(shí)，T2=10-2ac=T219:當(dāng)儀器所能測(cè)出最小吸光度A=0.001時(shí)，單位截面積光程內(nèi)所檢測(cè)出來(lái)的吸光物質(zhì)的最低量，單位是ugcm-2。S和的關(guān)系推導(dǎo)如下：A=0.001=cb ，故 （9-8） c的單位是mol

10、L1，即mol (1000cm3)1，b的單位是cm，則cb單位為mol (1000cm2）1，再乘以吸光物質(zhì)摩爾質(zhì)量M（gmol1）就是單位截面積光程內(nèi)吸光物的質(zhì)量，即為S，所以將（9-8）式中的bc代入得001. 0cb3610101000cbcbMMSMS 20例9-3 用氯磺酚法測(cè)定鈮，50mL溶液中含鈮50.0g，用2.0cm比色皿測(cè)得吸光度為0.701，求桑德爾靈敏度。解: : 已知A=0.701，b=2.0cm，M(Nb)=92.9gmol-1C則根據(jù)朗伯一比爾定律可得根據(jù)式（9-9），桑德爾靈敏度S為)(1008. 19 .92100 .50100 .5015136Lmolmo

11、lgLgbcA)(1025. 31008. 10 . 2701. 011415cmmolLLmolcmMS)(1086. 21025. 39 .92231141cmgcmmolLmolg21 定量分析時(shí)，通常液層厚度是相同的，按照比爾定律，濃度與吸光度之間的關(guān)系應(yīng)該是一條通過直角坐標(biāo)原點(diǎn)的直線。但在實(shí)際工作中，往往會(huì)偏離線性而發(fā)生彎曲，見圖9-4中的虛線。若在彎曲部分進(jìn)行定量，將產(chǎn)生較大的測(cè)定誤差。4.2.2 偏離朗伯一比爾定律的原因22 朗伯一比爾定律只對(duì)一定波長(zhǎng)的單色光才能成立，但在實(shí)際工作中，即使質(zhì)量較好的分光光度計(jì)所得的入射光，仍然具有一定波長(zhǎng)范圍的波帶寬度。在這種情況下，吸光度與濃度

12、并不完全成直線關(guān)系，因而導(dǎo)致了對(duì)朗伯一比爾定律的偏離。所得入射光的波長(zhǎng)范圍越窄，即“單色光”越純，則偏離越小。 單色光不純所引起的偏離23由于溶液本身的原因所引起的偏離 吸光系數(shù)k與溶液的折光指數(shù)n有關(guān)。溶液濃度在0.01molL-1或更低時(shí)，n基本上是一個(gè)常數(shù)，說(shuō)明朗伯一比爾定律只適用于低濃度的溶液。濃度過高會(huì)偏離朗伯一比爾定律。 朗伯比爾定律是建立在均勻、非散射的溶液這個(gè)基礎(chǔ)上的。如果介質(zhì)不均勻，呈膠體、乳濁、懸浮狀態(tài)，則入射光除了被吸收外，還會(huì)有反射、散射的損失，因而實(shí)際測(cè)得的吸光度增大，導(dǎo)致對(duì)朗伯比爾定律的偏離。24 溶質(zhì)的離解、締合、互變異構(gòu)及化學(xué)變化也會(huì)引起偏離。其中有色化合物的離

13、解是偏離朗伯比爾定律的主要化學(xué)因素。例如，顯色劑KSCN與Fe3+形成紅色配合物Fe(SCN)3，存在下列平衡：Fe(SCN)3 Fe3+3SCN溶液稀釋時(shí)，上述平衡向右，離解度增大。所以當(dāng)溶液體積增大一倍時(shí)，F(xiàn)e(SCN)3的濃度不止降低一半，故吸光度降低一半以上，導(dǎo)致偏離朗伯比爾定律。254.3 紫外可見分光光度計(jì)及測(cè)定方法9.3.1分光光度計(jì)基本構(gòu)造 ) ：可見分光光度計(jì)都以鎢燈（3601000nm）作光源。鎢燈是612V的鎢絲燈泡，儀器裝有聚光透鏡使光線變成平行光，為保證光強(qiáng)度恒定不變，配有穩(wěn)壓電源。紫外可見分光光度計(jì)除有鎢燈外其光源還有氫燈，氫燈發(fā)射150400nm波長(zhǎng)的光，適用于2

14、00400nm波長(zhǎng)范圍的紫外分光光度法測(cè)定。26 ：其作用是將光源輻射的復(fù)合光分解成按波長(zhǎng)順序排列的單色光。包括狹縫和色散元件及準(zhǔn)直鏡三部分。色散元件用棱鏡或光柵制成。玻璃棱鏡的色散波段一般在360700nm，主要用于可見分光光度計(jì)中。石英棱鏡的色散波段一般在2001000nm，可用于紫外可見分光光度計(jì)中。光柵其特點(diǎn)是工作波段范圍寬，適用性強(qiáng)，對(duì)各種波長(zhǎng)色散率幾乎一致。27又稱比色皿，是由無(wú)色透明的光學(xué)玻璃或熔融石英制成，用于盛裝試液或參比溶液。玻璃吸收池：在見光范圍內(nèi)使用。石英吸收池：在紫外光范圍內(nèi)使用。吸收池，通常有0.5cm、1cm、2cm、3cm和5cm寬，可適用于不同濃度范圍的試樣測(cè)

15、定。同一組吸收池的透光率相差應(yīng)小于0.5%。28把透過吸收池后透射光強(qiáng)度轉(zhuǎn)換成電訊號(hào)的裝置。 檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)具有靈敏度高、對(duì)透過光的響應(yīng)時(shí)間短、且響應(yīng)的線性關(guān)系好，對(duì)不同波長(zhǎng)的光具有相同的響應(yīng)可靠性。在分光光度計(jì)中常用光電管和光電倍增管等做檢測(cè)器。光電倍增管其靈敏度要比光電管約高200倍。29顯示器是將檢測(cè)器檢測(cè)的信號(hào)顯示和記錄下來(lái)的裝置。在分光光度計(jì)中常用的是微安表、數(shù)碼顯示管等。簡(jiǎn)單的分光光度計(jì)多用微安表。在標(biāo)尺上有透光度（T）和吸光度（A）兩種刻度，由于吸光度和透光度是負(fù)對(duì)數(shù)關(guān)系，因此透光度的刻度是均勻的，而吸光度的刻度是不均勻的。30分光光度計(jì)的主要類型單光束型31雙光束型3雙波長(zhǎng)分光光度

16、計(jì)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì) 特點(diǎn)：利用吸光度差值特點(diǎn)：利用吸光度差值定量消除干擾和吸收池定量消除干擾和吸收池不匹配引起的誤差不匹配引起的誤差33光電二極管陣列型（DAD)34 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 其方法是先配制一系列濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用選定的顯色劑進(jìn)行顯色，在一定波長(zhǎng)下分別測(cè)定它們的吸光度A。以A為縱坐標(biāo)，濃度c為橫坐標(biāo)，繪制A-c曲線，若符合朗伯比爾定律，則得到一條通過原點(diǎn)的直線，稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后用完全相同的方法和步驟測(cè)定被測(cè)溶液的吸光度，便可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出對(duì)應(yīng)的被測(cè)溶液濃度或含量，這就是標(biāo)準(zhǔn)曲線法。 在儀器、方法和條件都固定的情況下，標(biāo)準(zhǔn)曲線可以多次使用而不必重新制作，因而標(biāo)準(zhǔn)曲線法適用于大量的經(jīng)常

17、性的工作。4.3.2分光光度測(cè)定的方法35Blank Standard Sample Sample00.10.20.30.40.50.60.70.8024681012Concentration (ug/mL)Abs36 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法(直接比較法) 將試樣溶液和一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液在相同條件進(jìn)行顯色、定容，分別測(cè)出它們的吸光度，按下式計(jì)算被測(cè)溶液的濃度。k標(biāo)=k測(cè) b標(biāo)=b測(cè)所以 要求A與c線性關(guān)系良好，被測(cè)樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度接近，以減少測(cè)定誤差。用一份標(biāo)準(zhǔn)溶液即可計(jì)算出被測(cè)溶液的含量或濃度，方便，操作簡(jiǎn)單。標(biāo)標(biāo)標(biāo)測(cè)測(cè)測(cè)標(biāo)測(cè)bckbckAA標(biāo)標(biāo)測(cè)測(cè)ccAA37 3吸光系數(shù)法在沒有標(biāo)準(zhǔn)品可供比較測(cè)定的條

18、件下，按文獻(xiàn)規(guī)定條件測(cè)定被測(cè)物的吸光度，從樣品的配制濃度、測(cè)定的吸光度及文獻(xiàn)查出的吸光系數(shù)即可計(jì)算樣品的含量，因?yàn)?則樣品含量bc Aa樣%100abc%100a標(biāo)標(biāo)樣Aa38 例9-4 已知維生素B12在361nm條件下a標(biāo)=20.7Lg1cm1。精確稱取樣品30mg，加水溶解稀釋至1000mL，在波長(zhǎng)361nm下，用1.00cm吸收池測(cè)得溶液的吸光度為0.618，計(jì)算樣品維生素B12的含量。解： A=a樣bc則維生素B12的含量=1)1000/30(618. 0bcaA樣116 .20cmgL%5 .99%10020.7.620394.4.1 顯色反應(yīng)及顯色劑： 這種被測(cè)元素在某種試劑的作

19、用下，轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)叫顯色反應(yīng)（color reaction），所加入試劑稱為顯色劑(color reagent)。 常見的顯色反應(yīng)大多數(shù)是生成配合物的反應(yīng)，少數(shù)是氧化還原反應(yīng)和增加吸光能力的生化反應(yīng)。 顯色劑顯色劑4.4 顯色反應(yīng)及其影響因素40 顯色反應(yīng)的要求： 所用的顯色劑僅與被測(cè)組分顯色而與其它共存組分不顯色，或其它組分干擾少。 有色化合物有大的摩爾吸光系數(shù)，一般應(yīng)有104105數(shù)量級(jí)。 顯色劑與被測(cè)物質(zhì)的反應(yīng)要定量進(jìn)行，生成有色配合物的組成要恒定。 即要求配合物有較大的穩(wěn)定常數(shù)，有色配合物不易受外界環(huán)境條件的影響，亦不受溶液中其它化學(xué)因素的影響。有較好的重現(xiàn)性，結(jié)果才準(zhǔn)確。

20、有色配合物與顯色劑之間的顏色差別要大，這樣試劑空白小，顯色時(shí)顏色變化才明顯。41 4.4.2影響顯色反應(yīng)的因素顯色反應(yīng)一般可表示為M+R MRM+R MR42 許多顯色劑都是有機(jī)弱酸或有機(jī)弱堿，溶液的酸度會(huì)直接影響顯色劑的解離程度。對(duì)某些能形成逐級(jí)配合物的顯色反應(yīng)，產(chǎn)物的組成會(huì)隨介質(zhì)酸度的改變而改變，從而影響溶液的顏色。另外，某些金屬離子會(huì)隨著溶液酸度的降低而發(fā)生水解，甚至產(chǎn)生沉淀，使穩(wěn)定性較低的有色配合物的解離。43 有些反應(yīng)需要加熱。有些顯色劑或有色配合物在較高溫度下易分解褪色。此外溫度對(duì)光的吸收及顏色深淺也有影響，要求標(biāo)準(zhǔn)溶液和被測(cè)溶液在測(cè)定過程中溫度一致。 顯色反應(yīng)有快慢，有的有色配合

21、物容易褪色，因此不同的顯色反應(yīng)需放置不同的時(shí)間，并在一定的時(shí)間范圍內(nèi)進(jìn)行比色測(cè)定。44 例如，被測(cè)金屬離子M與顯色劑R反應(yīng)，生成有色配合物MRn，此時(shí)，若M有配位效應(yīng)，R有酸效應(yīng)，影響M配位反應(yīng)的完全程度。通常，當(dāng)金屬離子有99%以上被配位時(shí)，就可認(rèn)為反應(yīng)基本上是完全的。 吸光度增加，造成正干擾。被測(cè)組分或顯色劑的濃度降低，引起負(fù)干擾。454.5 紫外可見分光光度法的誤差和測(cè)量條件的選擇4.5.1分光光度法的誤差 利用標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線段來(lái)測(cè)定被測(cè)溶液的濃度，從而減少由入射光為非單色光引起的誤差；也可以利用試劑空白和確定適宜的濃度范圍來(lái)減少由溶液本身所引起的誤差。 吸光度與透光率是負(fù)對(duì)數(shù)關(guān)系，故吸

22、光度的標(biāo)尺刻度是不均勻的。一般來(lái)說(shuō)透光率為2065（吸光度為0.20.7）時(shí)，濃度測(cè)量的相對(duì)誤差都不太大。這就是分光光度分析中比較適宜的吸光度范圍。46 比色皿的質(zhì)量，檢流計(jì)的靈敏度。，光源不穩(wěn)定、棱鏡的性能、安裝條件及光電管的質(zhì)量等都可以使分析產(chǎn)生誤差。 由分析人員所采用的實(shí)驗(yàn)條件與正確的條件有差別所引起的，如顯色條件和測(cè)量條件掌握得不好等。474.5.2分光光度法測(cè)量條件的選擇 以最大吸收波長(zhǎng)max為測(cè)量的入射光波長(zhǎng)。在此波長(zhǎng)處，摩爾吸光系數(shù)最大，測(cè)定的靈敏度最高。 若干擾物在max處也有吸收，在干擾最小的條件下選擇吸光度最大的波長(zhǎng)。有時(shí)為了消除其它離子的干擾，也常常加入掩蔽劑。48 透光

23、度讀數(shù)誤差T是一個(gè)常數(shù)，但在不同的讀數(shù)范圍內(nèi)所引起的濃度的相對(duì)誤差卻是不同的。因此，為了減小濃度的相對(duì)誤差，提高測(cè)量的準(zhǔn)確度，一般應(yīng)控制被測(cè)液的吸光度A在0.20.7（透光度為65%20%）。當(dāng)溶液的吸光度不在此范圍時(shí)，可以通過改變稱樣量、稀釋溶液以及選擇不同厚度的比色皿來(lái)控制吸光度。49原則:使試液的吸光度能真正反映待測(cè)物的濃度。 利用空白試驗(yàn)來(lái)消除因溶劑或器皿對(duì)入射光反射和吸收帶來(lái)的誤差。純?nèi)軇┛瞻?當(dāng)試液、試劑、顯色劑均為無(wú)色時(shí)，用純?nèi)軇ɑ蛘麴s水）作參比溶液。試劑空白 試液無(wú)色，而試劑或顯色劑有色時(shí)，加入相同量的顯色劑和試劑,作為參比溶液。試液空白 試劑和顯色劑均無(wú)色，試液中其它離子有

24、色時(shí)，用不加顯色劑的溶液作為參比溶液。504.6 紫外紫外-可見分光光度計(jì)的實(shí)際應(yīng)用可見分光光度計(jì)的實(shí)際應(yīng)用-定性分析定性分析 不飽和有機(jī)化合物（特別是含共軛體系的有機(jī)化合物）既含有未共享的n電子又含有電子，其中的*躍遷吸收譜帶和n-*躍遷吸收譜帶屬于紫外可見特征吸收光譜。 可以將在相同條件下測(cè)得的未知物的吸收光譜與標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行比較來(lái)作定性分析。如果吸收光譜的形狀，包括吸收光譜的 、 、吸收峰的數(shù)目、位置、拐點(diǎn)以及等完全一致，則可以初步認(rèn)為是同一化合物。maxmin51山梨酸標(biāo)樣苯甲酸標(biāo)樣雪碧樣品52有機(jī)化合物構(gòu)型構(gòu)象的判斷 有機(jī)化合物構(gòu)型確定圖例53紫外標(biāo)準(zhǔn)光譜圖及有關(guān)手冊(cè) “Sadtler

25、 Standard Spectra(Ultraviolet)” Heyden,London,1978. “Ultraviolet Spectra of Aromatic Compounds” Wiley,New York,1951. “Handbook of Ultraviolet and Visible Absorption Spectra of Organic Compounds” New York, Plenum,1967 “Oranic Electronic Spectral Data”54 根據(jù)Woodward-Fieser規(guī)則和Scott規(guī)則來(lái)計(jì)算最大吸收波長(zhǎng)，并與實(shí)驗(yàn)值進(jìn)行比較，

26、來(lái)確認(rèn)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。Woodward-Fieser規(guī)則是計(jì)算共軛二烯、多烯烴及共軛烯酮類化合物 的經(jīng)驗(yàn)規(guī)則。該規(guī)則主要以類丁二烯結(jié)構(gòu)作為母體得到一個(gè)最大吸收的基數(shù)，然后對(duì)連接在母體上的不同取代基以及其他結(jié)構(gòu)因素加以修正，得到一個(gè)化合物的 總值。用Scott規(guī)則來(lái)計(jì)算芳香族羰基衍生物和取代苯的 。其方法類似于Woodward-Fieser規(guī)則。maxmaxmax1. 純度檢驗(yàn)純度檢驗(yàn) 如果某一化合物的紫外-可見光區(qū)沒有吸收峰，而雜質(zhì)有較強(qiáng)的吸收，則可方便地檢出該化合物中痕量的雜質(zhì)。 例如例如：檢定CH3OH或C2H5OH中的雜質(zhì)苯，可利用苯在256nm處的B吸收帶，于max=256 nm檢出；而甲

27、醇或乙醇在此波長(zhǎng)處幾乎沒有吸收。 2. 未知樣品的檢定未知樣品的檢定 通常將未知樣品的紫外-可見吸收光譜與標(biāo)準(zhǔn)譜相對(duì)照。3. 分子結(jié)構(gòu)的推測(cè)分子結(jié)構(gòu)的推測(cè) 根據(jù)化合物的紫外-可見區(qū)吸收光譜可以推測(cè)所含的官能團(tuán)。 單憑紫外-可見光譜并不能決定分子的結(jié)構(gòu)，還需與紅外光譜、質(zhì)譜和核磁共振譜等綜合考查，方可定論。（1）若一個(gè)化合物在220800nm無(wú)吸收峰， 則此分子結(jié)構(gòu)中不含共軛體系，沒有醛基、羰基、溴或碘。它可能是脂肪族碳?xì)浠衔铩㈦?、醇、醚、羰基、氯化烴和氟化烴。（2）210280nm有吸收，可能含有兩個(gè)共軛單位。（3）260300nm有強(qiáng)吸收帶，表示有35個(gè)共軛單位。（4）280300nm有弱

28、吸收帶，示有羰基存在。280300nm有中等強(qiáng)度的吸收帶，且有一定的精細(xì)結(jié)構(gòu)，示有苯環(huán)結(jié)構(gòu)。4. 有機(jī)化合物異構(gòu)體的判別（順反異構(gòu)、互有機(jī)化合物異構(gòu)體的判別（順反異構(gòu)、互變異構(gòu)和旋光異構(gòu)等）變異構(gòu)和旋光異構(gòu)等） 無(wú)共軛， 204nm有弱吸收 有共軛，245nm有強(qiáng)吸收 對(duì)于順反異構(gòu)來(lái)說(shuō)，一般順式異構(gòu)體的最大吸收峰波長(zhǎng)比反式異構(gòu)體要小，因此可用紫外-可見吸收光譜法進(jìn)行區(qū)別。5研究化學(xué)反應(yīng)的速度研究化學(xué)反應(yīng)的速度 例：催化分光光度法 6測(cè)定絡(luò)合物的組成測(cè)定絡(luò)合物的組成 常用的方法有：斜率比法、摩爾比法、等摩爾連續(xù)變化法（連續(xù)濃度變更法）、平衡移動(dòng)法等。7. 有機(jī)化合物分子量的測(cè)定有機(jī)化合物分子量的測(cè)定 某種物質(zhì)的紫外-可見吸收光譜，是該物質(zhì)內(nèi)部特征結(jié)構(gòu)的反映。所謂物質(zhì)的內(nèi)部特征結(jié)構(gòu)，主要指的是該物質(zhì)分子中所含有的發(fā)色團(tuán)。 對(duì)于具有相同發(fā)色團(tuán)的不同物質(zhì)，如果都取相同的重量（或配成相同濃度的溶液），則分子量越大者，發(fā)色團(tuán)所占的比例越小，吸收強(qiáng)度越??；反之，分子