抗核抗體ANA檢測(cè)與臨床應(yīng)用

1、自身免疫抗體檢測(cè)及臨床意義自身免疫抗體檢測(cè)及臨床意義精選ppt抗核抗體（ANA）檢測(cè)與臨床應(yīng)用ANA的靶抗原分布：細(xì)胞核整個(gè)細(xì)胞，包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂周期蛋白等。ENA：抗可提取核抗原，包括RNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70和Jo-1等六種靶抗原抗核抗體的定義傳統(tǒng)定義：針對(duì)細(xì)胞核成分的自身抗體的總稱(chēng)。廣義定義：針對(duì)細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱(chēng)。對(duì)ANA的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗體的總稱(chēng) ANA可見(jiàn)于多種疾病，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組織病的診斷、病情判斷和療效觀察的指標(biāo) 高滴度ANA則高度提示自身免疫性疾病 在非結(jié)締組織

2、病中也可出現(xiàn)陽(yáng)性；正常人中（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽(yáng)性，但滴度低目前，ANA檢測(cè)已成為臨床上的一個(gè)極重要的自身免疫病的篩查實(shí)驗(yàn)。ANA檢測(cè)的臨床意義ANA檢測(cè)的臨床意義系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動(dòng)期非活動(dòng)期藥物誘導(dǎo)的紅斑狼瘡混合性結(jié)締組織?。∕CTD、Sharp綜合征）類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥多發(fā)性肌炎及皮肌炎干燥綜合征慢性活動(dòng)性肝炎潰瘍性結(jié)腸炎其它風(fēng)濕病正常人9510080100100100204020508595305070803040265-10美國(guó)風(fēng)濕學(xué)會(huì)(ACR)立場(chǎng)聲明 HEp-2 細(xì)胞包含大約100 至150 種自身抗原 其它初篩方法僅具有少量自身抗原大約 35% SLE患者和IF

3、T-ANA陽(yáng)性患者在其它初篩實(shí)驗(yàn)中為陰性結(jié)果建議： IIFT-ANA仍然為ANA檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn) 醫(yī)院或商業(yè)診斷所應(yīng)用其它ANA檢測(cè)方法時(shí)，必須要求為臨床大夫提供足夠的數(shù)據(jù)證明其它ANA檢測(cè)方法與IFT比較具有同樣或更高的敏感度和特異性 實(shí)驗(yàn)室在ANA報(bào)告當(dāng)中必須注明ANA檢測(cè)方法EUROIMMUNANA篩查:間接免疫熒光法(IFT) 抗原譜完整 (細(xì)胞核、細(xì)胞漿) 檢測(cè)ANA的金標(biāo)準(zhǔn)，具有很高的敏感性和特異性 基質(zhì)組合: HEp-2細(xì)胞+靈長(zhǎng)類(lèi)肝HEp-2細(xì)胞: 篩查不同的自身抗體均質(zhì)型核膜型核點(diǎn)型核糖體P蛋白著絲點(diǎn)型AMA核仁型高爾基體Scl-70溶酶體Sm/RNP肌動(dòng)蛋白SS-A/SS-B波

4、形蛋白系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (SLE)ANCA 相關(guān)性血管炎慢性炎癥性結(jié)締組織病 (CICTD)干燥綜合征 (SS)Systemischer LupusErythematodes (SLE)dsDNA系統(tǒng)性硬化癥 (SSc)Scl -70 and CenpBSS-A and SS-B慢性炎癥性結(jié)締組織病(CICTD)多肌炎/皮肌炎 (PM/DM)Myositis Profile夏普綜合征(MCTD)RNPRheumatoideArthritis (RA)EUROIMMUN系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (SLE) 紅斑狼瘡的特點(diǎn)臨床醫(yī)生: 容易誤診的一類(lèi)致死性疾病免疫學(xué)家: 所有免疫系統(tǒng)的要件均參與致病機(jī)理產(chǎn)生過(guò)程

5、 臨床發(fā)病特點(diǎn)發(fā)病率: 40/100,000(北歐);200/100,000(黑人);250,000 (美國(guó))患者壽命:4年/50%(1950); 15/80%(當(dāng)前); 20歲診斷/35歲死亡幾率1:6以上受累;96%)EUROIMMUNSLE 各器官的表現(xiàn)關(guān)節(jié)炎 (至少2個(gè)關(guān)節(jié)血液系統(tǒng)受累 (貧血等; 60%)狼瘡腎炎 (51%)漿膜炎 (胸膜炎, 心包炎; 77%)神經(jīng)系統(tǒng)受累 (30%)皮膚 (蝴蝶狀皮疹,盤(pán)狀狼瘡; 74%)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)代表性的抗體抗 dsDNA 抗體抗核小體抗體抗 Sm 抗體抗核糖體 P 蛋白抗體30-90%50-95%5-10%5-15%EUROIMM

6、UNEUROIMMUN核均質(zhì)型HEp-2細(xì)胞/猴肝HEp-2細(xì)胞猴肝抗dsDNA 抗體- 檢測(cè)方法: IIFT, Farr-法 (RIA), ELISA or BlotIIFT dsDNAHEp-2細(xì)胞綠蠅短膜蟲(chóng) 高度特異性抗體; 70%患者陽(yáng)性，0.5%正常人或RA患者陽(yáng)性 滴度與疾病活動(dòng)性相關(guān)，但不適用于所有患者 抗體滴度上升但臨床癥狀不明顯的患者，抗體檢測(cè)后5年內(nèi)80%患者進(jìn)入活動(dòng)期抗dsDNA抗體與SLE最新版“Autoantibodies” 描述不同實(shí)驗(yàn)方法的結(jié)果并無(wú)可比性：1、抗原來(lái)源不同；2、抗原展現(xiàn)形式不同；3、實(shí)驗(yàn)體系反應(yīng)條件不同。核均質(zhì):抗核小體抗體(ANuA)靶抗原:ds

7、DNA-組蛋白-復(fù)合物的構(gòu)象決定簇方法:IIFAELISA, Blot臨床意義:SLE, 陽(yáng)性率 50-95% (特異性100%)EUROIMMUN抗核小體 ELISA:敏感性、特異性、疾病活動(dòng)度 ANuA 與疾病的活動(dòng)性相關(guān)性強(qiáng) (SLE DAI score)分組SLE干燥綜合癥皮肌炎/多肌炎系統(tǒng)性硬化癥類(lèi)風(fēng)濕/骨關(guān)節(jié)炎強(qiáng)直性脊柱炎健康對(duì)照組特異性n233414033602031225抗核小體陽(yáng)性144 (61.8%)1 (2.4%)1 (2.5%)1 (3.0%)1 (1.7%)0098.2%Su et al., Clin Immunol 122: 115-120, 2007LNTP(%)

8、LN(%)CON(%)ANuAAnti-dsDNA79431841933LNTP = lupus nephritis requiring renal transplantation（狼瘡腎炎需要腎移植）LN = biopsy proven lupus nephritis（腎活檢確診為狼瘡腎炎）CON = SLE patients without nephritis（無(wú)腎炎SLE患者）伴有狼瘡腎炎的嚴(yán)重SLE的生物標(biāo)記物ANuA 與狼瘡性腎炎Stinton et al., Lupus 15: 394-400, 2007 狼瘡腎炎是SLE的一種潛在的嚴(yán)重并發(fā)癥 (高達(dá) 50%) 1.2% 需要進(jìn)行

9、腎移植的患者有狼瘡腎炎EUROIMMUN抗U1-nRNP與Sm抗體HEp-2細(xì)胞猴肝HEp-2細(xì)胞抗U1-nRNP與Sm抗體抗U1-nRNP/Sm抗體抗Sm抗體SLE抗U1-nRNP抗體SLESharp綜合征(MCTD)EUROIMMUN抗U1-nRNP與Sm抗體SLE: 15-40%MCTD: 95-100%SLE: 5-30%EUROIMMUN抗U1-RNP抗體抗Sm抗體Function: Pre-mRNA splicingEUROLINEANA 譜 最多18種抗原，增加了RNP亞單位 自動(dòng)化 操作 全自動(dòng)化 結(jié)果判讀EUROIMMUN實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋?zhuān)ˋNA譜）：抗U1-nRNP/Sm和S

10、m抗體抗 nRNP/Sm抗體抗 Sm 抗體結(jié)果解釋-?+-+-+-+U1-nRNP:Sm: -U1-nRNP:Sm: +U1-nRNP:Sm: -結(jié)果不可靠陰性SLESLE 或 MCTD無(wú)EUROIMMUN抗核糖體P蛋白抗體HEp-2細(xì)胞猴肝40 S亞單位60 S亞單位P0P2 P2according to: Mahler et al., J Mol Med, 2003抗原:核糖體60S亞單位的3個(gè)蛋白：P0, P1, P2.在羧基末端有相同的免疫反應(yīng)表位。核糖體P抗原的五聚體復(fù)合物。P1 P1核糖體 P蛋白核糖體 P 蛋白 ELISA:敏感性和特異性 (1)群組SLE其他結(jié)締組織病*健康獻(xiàn)血

11、員n36079206抗核糖體 P 蛋白陽(yáng)性數(shù)34 (9.4%)0%0%*系統(tǒng)性硬化癥, 干燥綜合癥, 皮肌炎/多肌炎 對(duì) SLE 100% 特異EUROIMMUN核糖體 P 蛋白 ELISA:敏感性和特異性(2)群組SLEMCTDSSSScRAHD特異性n18521556689100310抗核糖體P蛋白陽(yáng)性數(shù)10 (5.4%)00000100%EUROIMMUNEUROIMMUNHEp-2細(xì)胞增殖型細(xì)胞核抗原 (PCNA)Hep-2細(xì)胞猴肝增殖型細(xì)胞核抗原 (PCNA)靶抗原:表達(dá)為細(xì)胞周期依賴(lài)性(S-期)三聚體 (36 kDa)，是 DNA 多聚酶的輔因子并參與 DNA 修復(fù)調(diào)控檢測(cè):IIF

12、T, Blot臨床意義:SLE高特異性 (陽(yáng)性率 3-7%), 與腎臟和CNS及血小板減少相關(guān)系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (SLE)ANCA 相關(guān)性血管炎慢性炎癥性結(jié)締組織病 (CICTD)干燥綜合癥 (SS)Systemischer LupusErythematodes (SLE)dsDNA系統(tǒng)性硬化癥 (SSc)Scl -70 and CenpBSS-A and SS-B慢性炎癥性結(jié)締組織病(CICTD)多肌炎/皮肌炎 (PM/DM)Myositis Profile夏普綜合癥(MCTD)RNPRheumatoideArthritis (RA)EUROIMMUN干燥綜合征（Sjgrens Syndrom

13、e） 外分泌腺受累的自身免疫疾病 癥狀:- 口腔干燥- 唾液及眼淚減少- 腮腺腫脹口腔干燥- 胰腺外分泌腺分泌不足腮腺腫脹EUROIMMUN干燥綜合征SS-A (60 kDa)SS-B (47 kDa)40-95%40-95%代表性抗體EUROIMMUN抗SS-A/SS-B抗體HEp-2細(xì)胞猴肝SS-A 抗原Boire et al., 1995: - Ro-52抗體不與SS-A 抗原結(jié)合- 純化的 SS-A 抗原不包含 Ro-52RNA + SS-A (60 kDa) + Ro-52hY-RNARNA + SS-A (60 kDa)hY-RNASS-A (Ro-60), Ro-52 and S

14、S-B干燥綜合癥:40-95%SLE:20-60%新生兒狼瘡:抗SS-B抗體干燥綜合癥:SLE:新生兒狼瘡:40-95%10-20%78%抗Ro-52 (52 kDa)抗體非特異EUROIMMUN功能: 調(diào)控RNA翻譯抗SS-A (60 kDa)抗體功能:RNA聚合酶III輔助蛋白96%XEUROIMMUN抗Ro-52抗體:不同組別中均可出現(xiàn)抗Ro-52抗體:風(fēng)濕性疾病中的陽(yáng)性率疾病干燥綜合癥系統(tǒng)性硬化癥肌炎SLEMCTDRAn88812621021165抗Ro-52抗體陽(yáng)性81 %28 %31 %38 %19 %5% 抗Ro-52抗體 在干燥綜合癥中陽(yáng)性率較高，但沒(méi)有疾病特異性Meyer,

15、Schlumberger et al., 4th Asian Congress on Autoimmunity, Singapore, Sept. 2009EUROIMMUNAnti-Ro52:肝臟疾病中的陽(yáng)性率疾病PBCAIHHBVHCV獻(xiàn)血員n10060505050抗Ro-52抗體 陽(yáng)性27 %35 %10 %22 %0 抗Ro-52抗體沒(méi)有疾病特異性Meyer, Schlumberger et al., 4th Asian Congress on Autoimmunity, Singapore, Sept. 2009系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (SLE)ANCA 相關(guān)性血管炎慢性炎癥性結(jié)締組織病 (

16、CICTD)干燥綜合癥 (SS)Systemischer LupusErythematodes (SLE)dsDNA系統(tǒng)性硬化癥 (SSc)Scl -70 and CenpBSS-A and SS-B慢性炎癥性結(jié)締組織病(CICTD)多肌炎/皮肌炎 (PM/DM)Myositis Profile夏普綜合癥(MCTD)RNPRheumatoideArthritis (RA)EUROIMMUN系統(tǒng)性硬化癥 (SSc) 血管與結(jié)締組織受累的自身免疫疾病 癥狀:- 指端硬化 (thin, sclerotic fingers)- 爪型手- 面具臉 (嘴周邊出現(xiàn)皺紋, 嘴唇變薄)- 毛細(xì)血管擴(kuò)張 (表面血

17、管永久性擴(kuò)張)- 表皮鈣質(zhì)沉著 (血管壁與皮膚鈣化)指端硬化，爪型手毛細(xì)血管擴(kuò)張面具臉EUROIMMUN 質(zhì)沉著皮膚鈣EUROIMMUN系統(tǒng)性硬化癥實(shí)驗(yàn)室結(jié)果和臨床數(shù)據(jù)的聯(lián)合分析，有助于降低疾病診斷的模糊性，同時(shí)為未來(lái)研究硬化癥提供基礎(chǔ)。系統(tǒng)性硬化癥 (SSc)代表性抗體抗著絲點(diǎn)抗體抗Scl-70抗體抗原纖維蛋白抗體抗RNA多聚酶抗體抗PM-Scl抗體12-43%18-30%6-8%2-23%1-16%EUROIMMUNEUROIMMUN抗著絲點(diǎn)抗體HEp-2細(xì)胞/猴肝HEp-2細(xì)胞猴肝EUROIMMUN抗著絲點(diǎn)抗體靶抗原:著絲點(diǎn)-DNA 聯(lián)合蛋白:著絲點(diǎn)蛋白 (A, B, C, D)檢測(cè)方法

18、:IIFT, ELISA, Blot臨床意義:局限性 硬皮病 (CREST綜合癥):經(jīng)常出現(xiàn)在: 硬皮病-PBC-重疊綜合癥EUROIMMUN抗Scl-70抗體HEp-2細(xì)胞/猴肝HEp-2細(xì)胞猴肝細(xì)胞核仁:抗Scl-70抗體靶抗原:DNA-拓?fù)洚悩?gòu)酶 I (100 kDa)DNA 雙螺旋復(fù)制和轉(zhuǎn)錄檢測(cè)方法:IIFA, ELISA, Blot臨床意義:彌散性硬皮病的診斷標(biāo)志 (50-75%).預(yù)后: 較著絲點(diǎn)陽(yáng)性的患者病情更嚴(yán)重?？怪z點(diǎn)B蛋白抗體與 抗Scl-70抗體系統(tǒng)性硬化癥n = 295抗 Scl-70 抗體陽(yáng)性 陰性抗著絲點(diǎn) B蛋白抗體陽(yáng)性陰性166106122 59% 系統(tǒng)性硬化癥

19、患者分別出現(xiàn)抗著絲點(diǎn)抗體或抗Scl-70抗體陽(yáng)性EUROIMMUNEUROIMMUN抗RNA聚合酶I抗體HEp-2細(xì)胞/猴肝HEp-2細(xì)胞猴肝抗原纖維蛋白抗體HEp-2細(xì)胞/猴肝HEp-2細(xì)胞猴肝EUROIMMUNEUROIMMUN抗PM-Scl抗體HEp-2細(xì)胞/猴肝HEp-2細(xì)胞猴肝抗PM-Scl抗體靶抗原:PM-Scl: 11 到 16 個(gè)多肽復(fù)合物在rRNA 和一些 U-snRNAs剪接中起作用(PM-Scl-100, PM-Scl-75)檢測(cè)方法:IIFT, ELISA, Blot臨床意義:重疊綜合癥的診斷標(biāo)志，表現(xiàn)為肌炎和硬皮病癥狀 (陽(yáng)性率 50-70%).EUROLINE系統(tǒng)性

20、硬化癥譜 一個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)l包括13 種高特異性純化抗原 系統(tǒng)性硬化癥(SSc)血清學(xué)診斷 EUROBlotMaster自動(dòng)化操作 EUROLineScan軟件全自動(dòng)結(jié)果判讀患者血清: 129 份SSc血清和202 份對(duì)照血清 50 PM/DM, 50 SLE, 42 RA, 60HD 所有抗原的血清命中率為: 85.3%.系統(tǒng)性硬化癥相關(guān)抗體Meyer et al., 7th Congress on Autoimmunity in Ljubljana, May 2010Arthritis Research & Therapy (in press).相關(guān)參考資料Antibodies agai

21、nst PM/Scl-75 and PM/Scl-100 areindependent markers for different subsets of systemicsclerosis patients.K. Hanke, C. Brckner, C. Dhnrich, D. Huscher, L.Komorowski, W. Meyer, A. Janssen, M. Backhaus, M. Becker,A. Kill, K. Egerer, G.R. Burmester, F. Hiepe, W. Schlumbergerand G. RiemekastenArthritis Re

22、search & Therapy , 2009: 11Diagnostic value of anti-topoisomerase I antibodies in a large monocentric cohort.Hanke K, Dhnrich C, Brckner CS, Huscher D, Becker M, Jansen A, Meyer W, Egerer K,Hiepe F, Burmester G, Schlumberger W, Riemekasten G.系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (SLE)ANCA 相關(guān)性血管炎慢性炎癥性結(jié)締組織病 (CICTD)干燥綜合癥 (SS)Sy

23、stemischer LupusErythematodes (SLE)dsDNA系統(tǒng)性硬化癥 (SSc)Scl -70 and CenpBSS-A and SS-B慢性炎癥性結(jié)締組織病(CICTD)多肌炎/皮肌炎 (PM/DM)Myositis Profile夏普綜合癥(MCTD)RNPRheumatoideArthritis (RA)EUROIMMUN- 皮膚癥狀:- 紅斑- 膝蓋/手指關(guān)節(jié)處皮膚異變- 皮膚褪色多肌炎/皮肌炎 (PM/DM) 皮膚與肌肉受累的自身免疫疾病 癥狀:- 肌肉疼痛/肌無(wú)力 (如：肩膀/骨盆)多肌炎/皮肌炎(PM/DM)代表性抗體Jo-1Mi-2 (esp. in

24、DM)PM-Scl (PSS-重疊綜合征)PL-7PL-1225-35%15-30%8%3-6%3%EUROIMMUN抗Jo-1抗體HEp-2細(xì)胞/猴肝HEp-2細(xì)胞猴肝胞漿顆粒: 抗Jo-1抗體靶抗原:Jo-1 (組胺酰-tRNA 合成酶)檢測(cè)方法:IIFA, ELISA, Blot臨床意義:對(duì)多肌炎具有高度特異性 (陽(yáng)性率 25-35%)Jo-1: 病情嚴(yán)重的標(biāo)志。常與肺纖維化有關(guān) (70%)EUROIMMUN氨?；?tRNA-合成酶氨?；?tRNA合成酶Jo-1: 組氨酰l-tRNA合成酶PL-7: 蘇氨?；?tRNA合成酶PL-12: 丙氨酰-tRNA合成酶OJ: 異亮氨酸-tRNA合

25、成酶EJ: 甘氨酰-tRNA合成酶EUROIMMUN抗Mi-2抗體HEp-2細(xì)胞/猴肝HEp-2細(xì)胞猴肝細(xì)胞核顆粒:Anti-Mi-2靶抗原:多組分系統(tǒng);與組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶和核小體重塑活性有關(guān)的主要抗原 (218kDa)臨床意義:肌炎 5-15% (主要是皮肌炎)EUROIMMUN抗Ku抗體HEp-2細(xì)胞/猴肝HEp-2細(xì)胞猴肝細(xì)胞核顆粒:抗Ku抗體 (p70/p80)靶抗原:DNA結(jié)合的非組蛋白和DNA依賴(lài)的蛋白酶異源二聚體分析方法:IIFA, Blot臨床意義:PM/Scl-重疊綜合癥 30-55%SLE 5-10%EUROIMMUN其他與肌炎相關(guān)的抗體Anti-SRPAnti-PL-1

26、2HEp-2細(xì)胞HEp-2細(xì)胞EUROLINE 肌炎相關(guān)抗原 一個(gè)膜條上包括7 或 11 種高度純化抗原(新: PM-Scl, SRP, EJ, OJ) DM 和 PM及原發(fā)性肌炎的血清學(xué)診斷 EUROBlotMaster 自動(dòng)化操作 EUROLineScan全自動(dòng)化判讀結(jié)果153 份肌炎患者血清 50 DM, 89 PM,4 juvenile DM, 10 IBM 77 份對(duì)照血清 26 SjS, 26 SLE, 25 SSc Anti-Mi-2KuPM-Scl100Jo-1PL-7PL-12SRPPrevalence3%3%7%12 %2%0%5%Specificity100 %97 %100 %99 %100 %100 %97 %EUROLINE 肌炎相關(guān)抗原患者血清:所有抗原的血清學(xué)命中率: 26%.Rnnelid et al., Autoimmun Rev, 2009EUROIMMUN患者血清:208 份肌炎患者血清214 份對(duì)照血清 50 HD, 65 SLE, 34 SSc, 21 SjS,13 非自身免疫性肌病,23 CTD-相關(guān)性肌炎,8 關(guān)節(jié)病Anti-Prevalence Specific