超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法快速測定生物樣品中莽草毒素

1、G3論文發(fā)表專家一0J國學朮發(fā)叢網(wǎng)超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法快速測定生物樣品中莽草摘要建立了超高效液相色譜三重四極桿質(zhì)譜法檢測血漿、尿液、嘔吐物和藥材中八角屬植物有毒倍半萜內(nèi)酯標志物莽草毒素的檢測方法。血漿樣品經(jīng)多重機制雜質(zhì)吸附萃取凈化柱萃取，尿液樣品經(jīng)硅藻土柱吸附叔丁基甲醚萃取、植物樣品經(jīng)叔丁基甲醚液液萃取，以水和甲醇為流動相進行梯度洗脫，在uplcbehc18林上實現(xiàn)分I；紜采用負肉fesims/msmrm方式檢測。一次進樣分析時間為5min。血漿和尿液中的平均加標回收率分別為92.6%100.3%和101%-118%相對標準偏差分別為3.8%11呀口6.4%17%(n=6);定量限(s

2、/n=10)分別為2.0和1.0?symbolmag/l。本方法簡單、準確、靈敏，適合于莽草毒素中毒樣品的測定。關(guān)鍵詞超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；莽草毒素；血漿；尿液；生物樣品1引言八角茴香為木蘭科植物八角茴香(illiciumverumhook.f.)的果實，有溫陽，散寒，理氣等功效，用于治療寒疝腹痛、腎虛腰痛、脘腹冷痛等病癥，民間常用作烹飪調(diào)料。由于同屬植物果實的形態(tài)相似，八角茴香有許多偽品，如紅茴香、莽草、野八角等，有的具有毒性，誤用會引起中毒1,2*特別足H本莽E(論文發(fā)表專家illiciumanisatuml.）毒性較大。同屬多種植物中曾分離出莽草毒素（anisatin）、新莽草毒素（n

3、eoanisatin）和偽莽草毒素（pseudoanisatin）等倍半萜內(nèi)酯類成分3,4,并證實莽草毒素為丫姒棊酸受體卄寛爭性扌古抗劑5,6小鼠腹腔注射可引起驚厥、死亡，ld50為0.76mg/kg體重7飲兀八角茴否茶引起的中毒事件在歐美國家也時有報道8，為了控制八角茴香品質(zhì)和鑒別偽品，可采用熱解析氣質(zhì)聯(lián)用法測定揮發(fā)汕特征成分9.!采用熒光顯微鏡和掃描電鏡進行顯微結(jié)構(gòu)鑒別10丨采用pcr技術(shù)分析核酸片段11!采用薄層層析法對植物中黃酮類和酸性成分進行分析，結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定莽草毒素12:上述力法屮.僅lcms/ms方法可對引起中毒的主要成分莽草毒素進行定量測定。本研究建立了upl

4、cms/ms快速測定生物樣品中莽草毒素的檢測方法，并應(yīng)用于實際樣品的測定，方法簡便、快速、準確和靈敏。2實驗部分2.1儀器與試劑aquityuplcquattropremierxe超高效液相色譜串聯(lián)丿頁譜儀，配電噴霧源，masslynx4.1工作站（美國waters公司）;brukeravanee500mhz超導核磁共振儀（瑞士bruker公司）；mr32i大容量高速冷凍離心機（法國jouan公司）；ultraturraxt25型論文發(fā)表專家一m國學朮友叢網(wǎng)勻質(zhì)機（德國ikawerke公司）；205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士burch公司）;2510超聲波清洗機（美國branson公司）；ms2旋渦混旋

5、器（德國ika公司）；nevap氮吹儀（12孔，美國organomation公司）；tdz5ws自動平衡離心機（湘儀離心機儀器有限公司）；gradienta10millq超純水器（法國millipore公司）。乙腈和甲醇（hplc級，德國merck公司），叔丁基甲醚（hplc級，美國tedia公司）。cleanertmasb管（60mg/1ml）、cleanertmasa管（60mg/1ml）、cleanert蛋白沉淀管（1ml）和cleanertsle管（200mg/3ml）（人津陳納艾杰爾科技公“八角茴香，紅茴香（市售人2.2莽草毒素標準品制備150g紅茴香果實經(jīng)石油醚脫脂、甲醇提取，濃縮提取物除去甲醇，殘渣溶于水，再用乙酸乙酯萃取，萃取物經(jīng)硅膠柱多次層析，氯仿川呻（97：3,v/v）洗脫，得無色針晶（30mg）,2.3色譜和質(zhì)譜條件acquityuplcbehc18