植物制片技術研究生課件

1、 植物解剖與制片技術植物解剖與制片技術 Plant Anatomy and Sectioning Technology 學時分配：學時分配：理論課理論課 4學時；實驗課學時；實驗課 24學時學時。 教學目的：教學目的：通過對植物制片技術的掌握，為研通過對植物制片技術的掌握，為研究植物胚胎學、植物解剖學、作物栽培、遺傳究植物胚胎學、植物解剖學、作物栽培、遺傳育種等教學、科研提供必備的技術。育種等教學、科研提供必備的技術。 主要參考書目：主要參考書目：1 植物顯微技術，王灶安主編，農業(yè)出版社；植物顯微技術，王灶安主編，農業(yè)出版社；2 植物制片技術，李正理編著，科學出版社；植物制片技術，李正理編著，

2、科學出版社；3 西北植物學報西北植物學報，植物研究植物研究，武漢植物學武漢植物學研究研究，植物分類學報植物分類學報等學術雜志。等學術雜志。考核方式：撰寫實驗報告：對所觀察的器官結構考核方式：撰寫實驗報告：對所觀察的器官結構進行詳細的描述并作進一步的討論，附上植物器進行詳細的描述并作進一步的討論，附上植物器官顯微結構圖。官顯微結構圖。植物顯微制片技術植物顯微制片技術 植物制片的類型和方法u切片法：徒手切片法徒手切片法 石蠟切片法石蠟切片法 滑走切片機切片法滑走切片機切片法 半薄切片法半薄切片法 超薄切片法超薄切片法u非切片法：非切片法：離析法離析法 壓片法壓片法 整體封存法整體封存法石蠟法制片原

3、理與方法石蠟法制片原理與方法 一、材料的選擇與分割一、材料的選擇與分割 1. 新鮮、健康、有代表性的材料；新鮮、健康、有代表性的材料； 2.生長發(fā)育的不同階段生長發(fā)育的不同階段; 3.大小適當，大小適當，0.5cm左右左右. 二、殺生、固定與保存二、殺生、固定與保存 殺生：殺生： 固定：固定： 1 根據(jù)固定目的物本身的結構性質；根據(jù)固定目的物本身的結構性質； 2 分割大的材料；分割大的材料； 3 抽氣；抽氣； 4 標記標記. (整染）整染） 固定液的配置及使用：固定液的配置及使用： FAA固定液：固定液： 適用范圍：根、莖、葉、花藥、子房適用范圍：根、莖、葉、花藥、子房 固定時間：固定時間：2

4、4h 低溫低溫 配方配方 ： 福爾馬林福爾馬林 5ml 冰醋酸冰醋酸 5ml 70% 酒精酒精 90ml 卡諾固定液：卡諾固定液： 適用范圍：根尖、花藥、子房適用范圍：根尖、花藥、子房 固定時間：小于固定時間：小于24h ，15-30分鐘分鐘 配方配方 ： a b 純酒精純酒精 15ml 30ml 氯仿氯仿 5ml 冰醋酸冰醋酸 5ml 1ml 保存：保存： 70% 酒精酒精 三、脫水三、脫水 作用：作用：1 除去組織內的水分；除去組織內的水分； 2 使石蠟順利進入細胞內使石蠟順利進入細胞內脫水劑：脫水劑： 1 酒精：酒精：50%-70%-85%-95%-100%（梯度脫水）（梯度脫水） 2

5、二氧雜環(huán)己烷二氧雜環(huán)己烷 3 正丁醇正丁醇 4 叔丁醇叔丁醇 5 丙酮丙酮 四四 、透明、透明 作用：作用：1 使材料透明、干凈；使材料透明、干凈； 2 便于包埋劑及封固劑的進入便于包埋劑及封固劑的進入 透明劑：透明劑： 1 二甲苯：二甲苯：1/2純酒精純酒精+1/2二甲苯二甲苯 二甲苯二甲苯 2 甲苯或苯；甲苯或苯； 3 氯仿氯仿 4 丁香油、香柏油等丁香油、香柏油等 五、浸蠟五、浸蠟 1 低溫浸蠟：低溫浸蠟：40左右（左右（1夜）夜） 2 高溫浸蠟：高溫浸蠟：58左右左右 （6小時以內）小時以內） 六、包埋六、包埋 1 選取合適熔點的石蠟；選取合適熔點的石蠟； 2 包埋用具的準備包埋用具的

6、準備 要點：動作迅速要點：動作迅速 七、切片七、切片 1 修塊修塊; 2 切片切片: 厚度在厚度在8-14m a 切片有裂紋切片有裂紋 b 蠟帶彎曲蠟帶彎曲 c 材料破碎材料破碎 d 切片卷成圓筒切片卷成圓筒 e 蠟帶皺縮蠟帶皺縮 八、粘片與展片八、粘片與展片 粘片劑粘片劑: 明膠明膠 1 g 石炭酸石炭酸 2 g 甘油甘油 15 ml 蒸餾水蒸餾水 100ml 方法方法: a 38 左右左右 b 涂抹粘片劑涂抹粘片劑 c 將蠟片置于玻片中央將蠟片置于玻片中央 d 材料呈透明質感材料呈透明質感 e 38 烘烤至干燥烘烤至干燥 f 標記標記 九、脫蠟九、脫蠟 方法方法: 二甲苯二甲苯 30分鐘分

7、鐘(40 溫箱中溫箱中) 二甲苯二甲苯 10分鐘分鐘 十、染色十、染色 （一）染料的分類（一）染料的分類 a 來源：天然來源：天然 人工人工 b 化學性質：堿性：番紅化學性質：堿性：番紅 酸性：固綠酸性：固綠 中性：中性： c 性能：性能： 核染料：核染料： 蘇木精、番紅蘇木精、番紅 細胞質染料：固綠、苯胺藍細胞質染料：固綠、苯胺藍 細胞壁染料：番紅細胞壁染料：番紅 組織化學染料；蘇丹組織化學染料；蘇丹 熒光染料：熒光染料： （二）幾種常用染料的性質及配制（二）幾種常用染料的性質及配制 a 蘇木精：溶于酒精、甘油和熱水中。蘇木精：溶于酒精、甘油和熱水中。 b 番紅：溶于酒精、水中。番紅：溶于酒

8、精、水中。 c 固綠固綠 ：易溶于酒精。：易溶于酒精。 d 堿性品紅：作為組化試劑，用于檢驗堿性品紅：作為組化試劑，用于檢驗DNA、多糖物質等、多糖物質等 （三）一般的染色方法（三）一般的染色方法 1 材料是否完整材料是否完整: 整體染色整體染色 切片染色切片染色 2 染料的種類染料的種類: 單染單染 二重染色二重染色 三重三重(多重多重)染色染色 （四）染色時注意的事項（四）染色時注意的事項 1 根據(jù)觀察目的、樣品的結構性質；根據(jù)觀察目的、樣品的結構性質； 2 溶液和染液的濃度相同；溶液和染液的濃度相同； 3 堿性染液先染，酸性染液后染；堿性染液先染，酸性染液后染； 4 染色可深不可淺；染色

9、可深不可淺； 5 染色的時間；染色的時間； 十一、封藏與封藏劑十一、封藏與封藏劑目的：目的：1 長期保存長期保存 2 使材料可以清楚的顯現(xiàn)出來使材料可以清楚的顯現(xiàn)出來封藏劑種類：封藏劑種類： 1 樹脂性封藏劑：樹脂性封藏劑：香柏油、合成樹脂香柏油、合成樹脂、加拿大加拿大樹膠：溶于二甲苯、氯仿等溶劑，熔點為樹膠：溶于二甲苯、氯仿等溶劑，熔點為61，不能加熱，折光率近似玻璃，不能加熱，折光率近似玻璃，1.547。 2 水溶性封藏劑水溶性封藏劑：阿拉伯樹膠、甘油、明膠、：阿拉伯樹膠、甘油、明膠、糖漿等。糖漿等。 十二十二 顯微觀察與照相顯微觀察與照相石蠟法制片流程石蠟法制片流程 步驟一：步驟一： （

10、整染）（整染） 取材取材 固定固定脫水脫水(70%酒精酒精85%酒精酒精95%酒精酒精100%酒精酒精100%酒精酒精,每每步步2-4h)透明（透明（1/2二甲苯二甲苯+1/2酒精，酒精， 2h；純二甲苯，；純二甲苯，2h）低溫浸蠟（加碎蠟低溫浸蠟（加碎蠟至飽和，至飽和，40，過夜）（一天），過夜）（一天） 步驟二：步驟二：繼續(xù)低溫繼續(xù)低溫浸蠟浸蠟（40，過夜），過夜）高溫浸蠟（高溫浸蠟（58，換純蠟，每，換純蠟，每2h換蠟一次，換蠟一次，不超過不超過6h）包埋包埋（一個蠟船放（一個蠟船放3-4個材料）（一天）個材料）（一天） 步驟三：步驟三：修塊修塊切片切片粘片粘片展片展片 烘片（一天）烘片（一天） 步驟四：脫蠟與染色：步驟四：脫蠟與染色：二甲苯二甲苯（30分鐘，分鐘，40度溫箱）度溫箱）二甲苯二甲苯（10分鐘）分鐘） 復水（復水（ 1/2二二 甲苯甲苯+1/2酒精酒精100%酒精酒精95%酒精，酒精，每步每步10分鐘分鐘） 染色（番紅，染色（番紅，85%酒精配置，酒精配置，過夜過夜）（半天）（半天） 步驟五：步驟五