標(biāo)本中未知細(xì)菌的分離和鑒定

1、 掌握膿汁標(biāo)本中未知細(xì)菌的鑒別 掌握糞便標(biāo)本中未知細(xì)菌的鑒別實(shí)驗(yàn)步驟 標(biāo)本采集 分離培養(yǎng) 擴(kuò)增 染色，觀察鏡下形態(tài)結(jié)構(gòu)特征 生化反應(yīng)檢測(cè) 血清學(xué)實(shí)驗(yàn) 藥物（抗生素）敏感實(shí)驗(yàn)一、膿汁標(biāo)本中未知病原菌一、膿汁標(biāo)本中未知病原菌的分離鑒定的分離鑒定膿汁標(biāo)本檢驗(yàn)流程示意圖膿汁標(biāo)本檢驗(yàn)流程示意圖膿膿 汁汁革蘭氏染色，鏡檢革蘭氏染色，鏡檢血平板瓊脂血平板瓊脂觀察菌落形態(tài)及溶血情況觀察菌落形態(tài)及溶血情況生化反應(yīng)及致病力試驗(yàn)生化反應(yīng)及致病力試驗(yàn) （一）標(biāo)本：含菌棉拭子 （二）分離方法： 將棉拭子輕按血瓊脂平板，然后用劃線分離法分離，37培養(yǎng)24h。菌落圓形、直徑約菌落圓形、直徑約2mm、凸起、表面光滑、潤(rùn)濕、凸

2、起、表面光滑、潤(rùn)濕、邊緣整齊。邊緣整齊。金黃色葡萄球菌呈金黃金黃色葡萄球菌呈金黃色，白色葡萄球菌呈白色色，白色葡萄球菌呈白色金黃色葡萄球菌菌落周金黃色葡萄球菌菌落周圍有透明溶血環(huán)圍有透明溶血環(huán)白色葡萄球菌：白色色素，無溶血環(huán)白色葡萄球菌：白色色素，無溶血環(huán)白色葡萄球菌與金黃色葡萄球菌溶血素比較以上為第一次實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果做為操作考試成績(jī)（三）分離、擴(kuò)增細(xì)菌（不做，第一次的量已夠） 目的：得到純種細(xì)菌后，大量擴(kuò)增細(xì)菌 方法: 斜面培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基（最常用） 平板培養(yǎng)基以下實(shí)驗(yàn)選兩種菌落做(四)涂片鏡檢（選作） 根據(jù)菌落特點(diǎn)及溶血情況，取溶血菌落進(jìn)行革蘭氏染色 鏡下可見：球形，葡萄串狀，G+（五）生

3、化反應(yīng) 觸酶試驗(yàn)：金葡陽性 生化管：甘露醇（原理及現(xiàn)象同葡萄糖，金黃色葡萄球菌使培養(yǎng)基由紫色變黃色，陽性）金黃色葡萄球菌血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)（血漿沒購(gòu)買到） 多數(shù)致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可被血漿中的協(xié)同因子激活為凝血酶，使含有枸櫞酸納獲肝素抗凝劑的兔或人血漿中的纖維蛋白原變成不溶性的纖維蛋白，導(dǎo)致血漿凝固。非致病性葡萄球菌一般不產(chǎn)生此酶。血漿凝固酶血清生理鹽水抑菌圈抑菌圈（六）藥物敏感實(shí)驗(yàn)青霉素青霉素慶大霉素慶大霉素菌必治菌必治環(huán)丙沙星環(huán)丙沙星抑菌圈抑菌圈（mm）（七）實(shí)驗(yàn)結(jié)果和意義 上報(bào)結(jié)果，輔助診斷疾病 上報(bào)藥物敏感實(shí)驗(yàn)結(jié)果，輔助治療二、二、糞便標(biāo)本中未知細(xì)菌的鑒別 （一）標(biāo)本：含菌棉拭

4、子 （二）劃線分離 平板：SS平板 劃線分離法：培養(yǎng)24h，大腸桿菌菌落紅色，變形桿菌菌落無色透明SS平板：腸道桿菌致病性鑒別SS平板培養(yǎng)：非致病菌：分解乳糖，PH下降，菌落顯紅色如大腸桿菌致病菌：不分解乳糖，PH不下降，菌落顯無色如痢疾桿菌、傷寒桿菌大腸桿菌：發(fā)酵乳糖 紅色菌落紅色菌落以上為第一次實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果做為操作考試成績(jī)（三）分離、擴(kuò)增細(xì)菌（不做） 目的：得到純種細(xì)菌后，大量擴(kuò)增細(xì)菌 方法: 斜面培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基（最常用） 平板培養(yǎng)基以下實(shí)驗(yàn)選兩種菌落做(四)涂片鏡檢（選做） Granms staining 鏡下可見：桿形，散在排列狀，G（五）生化管 乳糖生化管：發(fā)酵乳糖反應(yīng) 葡萄糖生

5、化管：發(fā)酵葡萄糖反應(yīng) H2S反應(yīng)管：如菌種（乙型副傷寒沙門菌、變形桿菌）產(chǎn)生H2S，則與管內(nèi)Pb發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生黑色的PbS，從而使菌落變黑 尿素生化管：變形桿菌 具有尿素酶，迅速分解尿素，PH升高穿刺培養(yǎng)：動(dòng)力實(shí)驗(yàn)（不做，示教） 無動(dòng)力無動(dòng)力 有動(dòng)力有動(dòng)力抑菌圈抑菌圈（六）藥物敏感實(shí)驗(yàn)青青慶慶菌菌環(huán)環(huán)抑菌圈抑菌圈（mm） （一）標(biāo)本：含菌棉拭子 （二）分離方法： 將棉拭子輕按血瓊脂平板，然后用劃線分離法分離，37培養(yǎng)24h。金黃色葡萄球菌血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)（血漿沒購(gòu)買到） 多數(shù)致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可被血漿中的協(xié)同因子激活為凝血酶，使含有枸櫞酸納獲肝素抗凝劑的兔或人血漿中的纖維蛋白原變成不溶性的纖維蛋白