第24章呼吸道病毒

1、第一節(jié)第一節(jié) 正黏病毒科正黏病毒科（orthomyxoviridae）所致致病所致致病傳染源傳染源-患者或病毒攜帶者患者或病毒攜帶者致病機(jī)制致病機(jī)制病毒病毒-呼吸道呼吸道-毒素樣物質(zhì)進(jìn)入血液毒素樣物質(zhì)進(jìn)入血液全身中毒癥狀全身中毒癥狀局部黏膜上皮炎癥局部黏膜上皮炎癥同型有同型有1 2年免力年免力 免疫物質(zhì)為免疫物質(zhì)為sIgA及中和抗體（及中和抗體（IgG 、IgM） 流行性感冒流行性感冒 混勻混勻顯微鏡檢查顯微鏡檢查免疫電鏡免疫電鏡 特異性抗體特異性抗體+標(biāo)本標(biāo)本/細(xì)胞培養(yǎng)物，離心沉渣，電鏡檢查。細(xì)胞培養(yǎng)物，離心沉渣，電鏡檢查。免疫熒光鏡檢免疫熒光鏡檢 鼻咽拭子鼻咽拭子 涂片固定涂片固定+抗甲型

2、、抗甲型、乙型流感乙型流感V抗體抗體 ，加熒光標(biāo)記的，加熒光標(biāo)記的抗抗體染色，熒光鏡觀察?？箍贵w染色，熒光鏡觀察。 流行性感冒病毒的形態(tài)流行性感冒病毒的形態(tài) 羊膜腔（初次分離）羊膜腔（初次分離） 尿囊腔（傳代）尿囊腔（傳代） 動(dòng)物接種動(dòng)物接種 少用。以雪貂最易感，也可用小鼠、地鼠、豚鼠。少用。以雪貂最易感，也可用小鼠、地鼠、豚鼠。鼻腔洗液鼻腔洗液咽喉拭子咽喉拭子 傳代狗腎傳代狗腎C（MDCK） 人胚腎人胚腎C或換腎或換腎C 710d 一般無細(xì)胞病變效應(yīng)（一般無細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）（1）病毒的分離）病毒的分離 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng) 3324甲、乙型流感甲、乙型流感V 1011日齡雞胚日齡雞胚 丙型

3、流感丙型流感V 98日齡雞胚日齡雞胚 孵育孵育23d（丙型（丙型5d）雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng) 接種接種收獲收獲標(biāo)本標(biāo)本 羊水或尿液羊水或尿液 血凝血凝T檢查檢查其他鑒定方法其他鑒定方法 補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)（補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)（CF） 中和試驗(yàn)中和試驗(yàn) 測(cè)定病毒測(cè)定病毒RNA（2）鑒定）鑒定+ 血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)（HI） - 盲傳一代盲傳一代 -1015d培養(yǎng)培養(yǎng)-血凝試驗(yàn)血凝試驗(yàn) 直接檢測(cè)臨床標(biāo)本或直接檢測(cè)臨床標(biāo)本或 IF（免疫熒光法）（免疫熒光法） 細(xì)胞培養(yǎng)物中流感細(xì)胞培養(yǎng)物中流感V EIA（酶免疫測(cè)定）（酶免疫測(cè)定） 動(dòng)態(tài)連續(xù)免疫熒光法動(dòng)態(tài)連續(xù)免疫熒光法 直接檢測(cè)甲型流感直接檢測(cè)甲型流感 臨床常用試劑

4、盒臨床常用試劑盒 直接檢測(cè)甲型直接檢測(cè)甲型/乙型流感乙型流感 但不能識(shí)別二者但不能識(shí)別二者 直接檢測(cè)甲型直接檢測(cè)甲型/乙型流感乙型流感 且能識(shí)別二者且能識(shí)別二者 抗體檢測(cè)抗體檢測(cè) 取急性期（發(fā)生取急性期（發(fā)生13d）、恢復(fù)期（病后）、恢復(fù)期（病后3周）雙份血檢，周）雙份血檢，測(cè)抗流感測(cè)抗流感V的抗體水平。的抗體水平。 常用方法：常用方法：HI和和EIA。從標(biāo)本中提取病毒從標(biāo)本中提取病毒RNA，點(diǎn)樣于尼龍膜上點(diǎn)樣于尼龍膜上，干燥干燥 后后與與32P標(biāo)標(biāo)記的流感病記的流感病毒特異性毒特異性cDNA探針進(jìn)行分子雜交，孵育探針進(jìn)行分子雜交，孵育6h，經(jīng)放射，經(jīng)放射自顯影檢測(cè)點(diǎn)樣膜是否結(jié)合有探針。自顯影

5、檢測(cè)點(diǎn)樣膜是否結(jié)合有探針。 用用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增標(biāo)本中流感技術(shù)擴(kuò)增標(biāo)本中流感V RNA。 二、禽流感病毒二、禽流感病毒 禽流感病毒禽流感病毒(avian influenza virus ,AIV)(avian influenza virus ,AIV)是甲型流是甲型流感病毒的一種亞型，可引起禽流行性感冒（簡(jiǎn)稱禽流感）。感病毒的一種亞型，可引起禽流行性感冒（簡(jiǎn)稱禽流感）。近十幾年，禽流感多次呈暴發(fā)性、大范圍性流行近十幾年，禽流感多次呈暴發(fā)性、大范圍性流行, ,涉及多涉及多個(gè)國(guó)家和地區(qū)。原本只感染雞的禽流感病毒亦令人類患病。個(gè)國(guó)家和地區(qū)。原本只感染雞的禽流感病毒亦令人類患病。目前發(fā)現(xiàn)最易感染人

6、類的高致病性禽流感病毒亞型有目前發(fā)現(xiàn)最易感染人類的高致病性禽流感病毒亞型有H5N1H5N1、H9N2H9N2、H7N7H7N7、H7N2H7N2、H7N3 H7N3 等，其中感染等，其中感染H5N1H5N1亞型的患者亞型的患者病情嚴(yán)重，致死率高。病情嚴(yán)重，致死率高。 三、甲型三、甲型H1N1流感病毒流感病毒 引起甲型引起甲型H1N1流感，在人群中傳播。流感，在人群中傳播。該病毒毒株包含豬流感、禽流感和人流感該病毒毒株包含豬流感、禽流感和人流感三種流感病毒的三種流感病毒的基因片段基因片段。人群對(duì)甲型。人群對(duì)甲型H1N1流感病毒普遍易感，并可經(jīng)人傳染人，流感病毒普遍易感，并可經(jīng)人傳染人，2009年

7、開始，甲型年開始，甲型H1N1流感在全球范圍內(nèi)流感在全球范圍內(nèi)大規(guī)模流行。大規(guī)模流行。2010年年8月，世衛(wèi)組織宣布甲月，世衛(wèi)組織宣布甲型型H1N1流感大流行期已經(jīng)結(jié)束。流感大流行期已經(jīng)結(jié)束。對(duì)人致病的副黏病毒主要有：對(duì)人致病的副黏病毒主要有： 麻疹病毒麻疹病毒 腮腺炎病毒腮腺炎病毒 副流感病毒副流感病毒 呼吸道合胞病毒等呼吸道合胞病毒等 麻疹病毒是麻疹的病原體，只有一個(gè)血清型。麻疹病毒是麻疹的病原體，只有一個(gè)血清型。 入侵入侵（CD46為為病毒受體）病毒受體）呼吸道上皮細(xì)呼吸道上皮細(xì)胞內(nèi)增殖胞內(nèi)增殖入血（第一次入血（第一次病毒血癥）病毒血癥）侵入淋巴組侵入淋巴組織和單核吞織和單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)

8、噬細(xì)胞系統(tǒng)增殖后再次入增殖后再次入血（第二次病血（第二次病毒血癥）毒血癥）多種組織、器官受累，表現(xiàn)多種組織、器官受累，表現(xiàn)為細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞，為細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞，核內(nèi)形成嗜酸性包涵體等核內(nèi)形成嗜酸性包涵體等（二）微生物檢驗(yàn)（二）微生物檢驗(yàn)1 1標(biāo)本采集與處理標(biāo)本采集與處理 取發(fā)病早期的鼻咽拭子、鼻取發(fā)病早期的鼻咽拭子、鼻 咽洗液、痰、血、尿以及雙份血清。咽洗液、痰、血、尿以及雙份血清。2 2標(biāo)本直接檢查標(biāo)本直接檢查 3 3病毒分離與鑒定病毒分離與鑒定4. 4. 抗原檢測(cè)抗原檢測(cè) 5. 5. 抗體檢測(cè)抗體檢測(cè) 6. 6. 核酸檢測(cè)核酸檢測(cè) 典型的麻疹可以根據(jù)臨床癥狀確診，典型的麻疹可以根

9、據(jù)臨床癥狀確診，輕型及其他不典型麻疹需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。輕型及其他不典型麻疹需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。 腮腺炎病毒是流行性腮腺炎的病原體，腮腺炎病毒是流行性腮腺炎的病原體，只有一個(gè)血清型，人是其唯一宿主。只有一個(gè)血清型，人是其唯一宿主。副流感副流感V是小兒急性下呼吸道感染的重要病原體。是小兒急性下呼吸道感染的重要病原體。只引起成人輕型上呼吸道癥狀。只引起成人輕型上呼吸道癥狀。主要通過與感染者密切接觸或由飛沫經(jīng)呼吸道傳主要通過與感染者密切接觸或由飛沫經(jīng)呼吸道傳播播副流感病毒有副流感病毒有4個(gè)血清型，個(gè)血清型， 1型和型和2型是主要致病因子型是主要致病因子 3型常引起下呼吸道感染型常引起下呼吸道感染 4型只

10、引起輕型上呼吸道感染型只引起輕型上呼吸道感染 1型和型和3型也是醫(yī)院感染的重要病原型也是醫(yī)院感染的重要病原 一、腺病毒（一、腺病毒（adenovirus）n分離培養(yǎng)：分離培養(yǎng)： 接種原代人胚細(xì)胞后傳代接種原代人胚細(xì)胞后傳代Hela細(xì)胞等上皮細(xì)胞，觀察細(xì)胞等上皮細(xì)胞，觀察 細(xì)胞病變效應(yīng)細(xì)胞病變效應(yīng)n血清學(xué)檢測(cè)：血清學(xué)檢測(cè)： 酶聯(lián)免疫、熒光免疫試驗(yàn)酶聯(lián)免疫、熒光免疫試驗(yàn)n核酸檢測(cè)：核酸檢測(cè)： 用用PCR法檢測(cè)病毒特異性法檢測(cè)病毒特異性DNA。 風(fēng)疹病毒是風(fēng)疹病毒是引起風(fēng)疹（又名德國(guó)麻疹）的病引起風(fēng)疹（又名德國(guó)麻疹）的病原體。只有一個(gè)血清型，人是唯一自然宿主。原體。只有一個(gè)血清型，人是唯一自然宿主。

11、1風(fēng)疹風(fēng)疹 兒童是主要易感者。潛伏期兒童是主要易感者。潛伏期1025d，前驅(qū)期癥狀有，前驅(qū)期癥狀有發(fā)熱、咽痛、咳嗽等。耳后及枕下發(fā)熱、咽痛、咳嗽等。耳后及枕下L結(jié)腫大，有明顯壓痛，結(jié)腫大，有明顯壓痛，繼而在面部首先出現(xiàn)淺紅色斑丘疹迅速遍及全身。癥狀較輕，繼而在面部首先出現(xiàn)淺紅色斑丘疹迅速遍及全身。癥狀較輕，無需治療。無需治療。2先天性風(fēng)疹綜合征先天性風(fēng)疹綜合征（classical congenital rubella syndrome,CRS）。是孕婦在妊娠早期（妊娠）。是孕婦在妊娠早期（妊娠20周內(nèi)）感染周內(nèi)）感染風(fēng)疹病毒，病毒經(jīng)胎盤垂直傳播感染胎兒，致使胎兒出生后風(fēng)疹病毒，病毒經(jīng)胎盤垂直傳

12、播感染胎兒，致使胎兒出生后患先天性心臟病、耳聾、失明、智力障礙，流產(chǎn)死胎?；枷忍煨孕呐K病、耳聾、失明、智力障礙，流產(chǎn)死胎。 臨床上檢測(cè)母親或胎兒血液或胎兒血液中抗風(fēng)疹病毒臨床上檢測(cè)母親或胎兒血液或胎兒血液中抗風(fēng)疹病毒IgM，抗體或檢測(cè)胎兒絨毛膜中無風(fēng)疹病毒，抗體或檢測(cè)胎兒絨毛膜中無風(fēng)疹病毒Ag或取羊水進(jìn)行或取羊水進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)，以確定感染和中止妊娠。病毒分離培養(yǎng)，以確定感染和中止妊娠。 標(biāo)本采集標(biāo)本采集 咽拭子、鼻拭子、鼻黏膜咽拭子、鼻拭子、鼻黏膜 咽拭子和洗液咽拭子和洗液 鼻咽拭子、糞便鼻咽拭子、糞便檢檢 活檢（感染后活檢（感染后23d） 胃腸胃腸糞便糞便 驗(yàn)驗(yàn) 直接檢查直接檢查 電鏡、免疫電鏡電鏡、免疫電鏡 電鏡呈日冕狀或電鏡呈日冕狀或 電鏡查電鏡查V顆粒顆粒 冠狀冠狀V顆粒顆粒方方 ELISA檢測(cè)檢測(cè)V的的Ag法法 分離分離 人二倍體細(xì)胞人二倍體細(xì)胞 人胚氣管人胚氣管 雞胚尿囊膜、尿囊雞胚尿囊膜、尿囊 根據(jù)對(duì)酸穩(wěn)定及中和根據(jù)對(duì)酸穩(wěn)定及中和T 有病毒生長(zhǎng)用免疫有病毒生長(zhǎng)用免疫 HeLa、KB、FL 鑒定血清型鑒定血清型 電鏡鑒定電鏡鑒定 血凝抑制抗體中和血凝抑制抗體中和 試驗(yàn)鑒定型別試驗(yàn)鑒定型別 鼻病毒鼻病毒 冠狀