微生物生理學(xué)習(xí)題匯總?cè)A農(nóng)生科院王教授的課

1、微生物生理學(xué)習(xí)題11.16是通過篩選獲得的6株對某種氨基酸（F）營養(yǎng)缺陷型脈抱霉突變菌株，A-E 五種不同的有機化合物，它們可能是氨基酸 F合成代謝中的中間產(chǎn)物。下表是進(jìn)行 補充養(yǎng)料獲得的突變菌株的生長結(jié)果，+表示在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加某種有機物突變菌株能夠生長，-表示突變菌株不能生長。請根據(jù)表中結(jié)果推斷氨基酸F的合成途徑及各突變菌株發(fā)生突變的位點。BECDAFABCDEF1十一一一一十2+一十十十十3一一一一一+4十一十十一+5+一一十一+6+一十+一+2.粗糙脈抱菌有兩個繳氨酸營養(yǎng)缺陷型 vall和val2 ,菌株vall的培養(yǎng)液中有物質(zhì)B 積累，val2的培養(yǎng)液中有物質(zhì)A積累。菌株vall能

2、在含有緞氨酸或val2生長過的 培養(yǎng)液中生長。菌株val2能在含有繳氨酸的培養(yǎng)液中生長，但不能在vall生長過的培養(yǎng)液中生長。說明基因vall , val2以及物質(zhì)A, B和繳氨酸的關(guān)系。B Vall f A Val2 7 繳氨酸5.已經(jīng)證明T4噬菌體rII型快速溶菌突變由兩個順反子 rIIA和rIIB控制?，F(xiàn)有一 T4噬菌體，在rIIB中有一個點突變F。此突變噬菌體與突變噬菌體1, 2, 3混合感染 大腸桿菌K時，能夠出現(xiàn)rII型噬菌斑，但是和突變噬菌體 4則不能出現(xiàn)噬菌斑。如 何解釋這一現(xiàn)象。突變分別發(fā)生在兩個基因中，順式、反式均能互補。反式6. 1是10個表型相同的突變型.下表結(jié)果說明化

3、分屬于幾個基因（+表示有互 補作用,-表示無互補作用）突變型123456789101-+2一+一+一一+一3-+-+-+4一+一一+一5一+一一+6一一+一7一+一8一一+9一+10一7,沙門氏菌從谷氨酸合成脯氨酸的途徑如下圖Ec說明下列部分二倍體菌株哪一個為谷氨酸營養(yǎng)缺陷型。8.總結(jié)原核生物基因結(jié)構(gòu)，染色體和基因組的一般特點。重點！ ！基因結(jié)構(gòu)1 .基因結(jié)構(gòu)特點：a,包括編碼區(qū)和非編碼區(qū)2 .編碼區(qū)指起始密碼子到終止密碼子的一段核甘酸序列，原核不含內(nèi)含子，幾個 功能基因串聯(lián)組成一個轉(zhuǎn)錄單位。3,非編碼區(qū)包括編碼區(qū)上游調(diào)控區(qū)和下游終止子，上游調(diào)控區(qū)包括啟動子和調(diào)控 順式作用元件以及RBS下游終

4、止子分為依賴于不依賴p因子的終止子染色體:1 .原核生物遺傳物質(zhì)處在細(xì)胞內(nèi)相對集中的區(qū)域，一般稱為擬核，無核膜包裹。2 .原核生物的遺傳物質(zhì)是DNA也稱為染色體。3 .多數(shù)以雙鏈、共價閉合、環(huán)狀形式存在。4 .原核生物染色體以裸露 DN心子形式存在，其中DNA占80%以上，其余為RNA 和蛋白質(zhì)。5 .染色體中的蛋白質(zhì)有些參于 DNA勺折疊，有些與DNAM制、重組及轉(zhuǎn)錄過程?；蚪M：1 .基因排列的連續(xù)性2 .以單基因為主的操縱子和雙向基因表達(dá)3 .基因組的重復(fù)序列少而短4 .非編碼區(qū)主要是調(diào)控序列9.解釋下列概念：順反子，重疊基因，斷裂基因，移動基因和假基因順反子：一個不同突變之間沒有互補作

5、用的功能的區(qū)稱之為順反子。一個順反子就是 一個功能水平上的基因。重疊基因：一個基因的核甘酸與另一個基因的核甘酸之間存在著一定程度的重疊。斷裂基因：基因的編碼序列在 DNA分子上是不連續(xù)的，為不編碼序列所隔開，編碼序 列為外顯子，不編碼序列為內(nèi)含子。移動基因：可以從染色體或質(zhì)粒 DNA上的一個位置轉(zhuǎn)移到另一位置的遺傳元件。也叫 轉(zhuǎn)座子。假基因：與功能型基因高度同源，但是由于各種突變，而不能編碼蛋白產(chǎn)物的DNA片段。習(xí)題21 .孟德爾通過豌豆雜交試驗得到了哪些遺傳規(guī)律？對基因（遺傳因子）有怎樣的認(rèn)識？ a.分離定律：在形成配子時，成對的遺傳因子彼此分離，并且各自分配到不同的 配子中去。b.獨立分離

6、與自由組合：決定兩對相對性狀的兩對遺傳因子在F1雜合子中互不混淆，各自保持其獨立性a.性狀是由遺傳因子控制的，相對性狀是由細(xì)胞中相對遺傳因子控制（遺傳因子控制 細(xì)胞的發(fā)育）b.遺傳因子在體細(xì)胞中成對存在，一個來自父本，一個來自母本。c.孟德爾的遺傳因子（基因）的概念并不代表物質(zhì)實體，是一種與細(xì)胞的任何可見形 態(tài)結(jié)構(gòu)毫無關(guān)系的抽象單位。2 .摩爾根對果蠅的遺傳研究得到了哪些結(jié)論？對經(jīng)典遺傳學(xué)發(fā)展有何重要的意 義？1 .基因在染色體上；2 .在同一染色體上的基因存在著重組和連鎖現(xiàn)象；3 .在同一染色體上兩基因之間的距離越遠(yuǎn)，重組的頻率越高，而連鎖的頻率越低。意義：發(fā)展了基因的概念，把基因與染色體的

7、平行關(guān)系闡述清楚，為日后的基因定位 奠定理論基礎(chǔ)。3. “一個基因就是一個順反子”理論的提出對基因概念有哪些重要修正？1 .基因是染色體上的一個特定區(qū)段。2 .基因在染色體上是按線性順序排列的。3 .它既是一個功能單位，同時也是重組單位和突變單位。4 .基因是不可分割、三位一體的最小單位4. “一個基因一個酶”的實質(zhì)是什么？基因是通過控制酶促反應(yīng)，控制生理功能，進(jìn)而決定遺傳性狀。習(xí)題31 .解釋下列名詞：基因突變，點突變和染色體畸變。基因突變：是指生物體遺傳物質(zhì)發(fā)生了穩(wěn)定的可遺傳的變化。包括點突變和染色體畸變。點突變：一個基因內(nèi)部遺傳結(jié)構(gòu)或DNA序列的任何改變，即涉及一對或幾對堿基的缺失、插入

8、或置換。染色體畸變：涉及大段染色體的缺失、重復(fù)和到位等。2 .某一野生型和3個突變型的某一多肽的氨基酸序列是Ala-Pro-Trp-Ser-Glu-Lys-Cys-His 野生型Ala-Pro-Trp-Arg-Glu-Lys-Cys-His 突變型 1 Ala-Pro突變型2Ala-Pro-Gly-Val-Lys-Asn-Ala-Met 突變型 3說明突變型1, 2, 3的本質(zhì)。1 .錯義突變2 .無義突變3 .移碼突變3.下列堿基替換哪些是轉(zhuǎn)換？哪些是顛換?(1)AT TA; A> GC (3) GO TA1 .顛換2 .轉(zhuǎn)換3 .顛換4 .有一個發(fā)生缺失一個氨基酸突變的蛋白，請問基因

9、序列中缺失了幾個核甘酸?3個。因為3個核甘酸編碼一個氨基酸5 .分離到一個突變菌株，研究發(fā)現(xiàn)此突變不能發(fā)生回復(fù)突變。請問這一突變的本質(zhì)是 什么？染色體畸變6 .什么原因造成溫度敏感突變菌株對溫度敏感？a.由于基因突變，使得生物體在某一條件具有致死效應(yīng)，而在另一條件下沒有致死效 應(yīng)的突變體。b.造成這種突變的原因是基因突變使得蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)對溫度敏感，即在低溫時能 維持正常的空間結(jié)構(gòu)，而到高溫時空間結(jié)構(gòu)被破壞，蛋白失活。7 .請說明引起缺失，倒位，重復(fù)和插入突變的原因。a.缺失：造成缺失突變的機制是 DNA分子上兩區(qū)段間發(fā)生了同源重組，使得兩區(qū)段間 的DNAt斷丟失。b.倒位：造成倒位突變的機

10、制是 DN陰子上兩區(qū)段間發(fā)生了反向同源重組c.重復(fù)：造成重復(fù)突變的機制是兩個 DN粉子間發(fā)生了同源重組，使得基因拷貝增加d.插入：轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座是引起插入突變的主要原因。8 .請說明下列符號所表示的意義。重點！ ！His 和 His+; hisG+, hisG 和如 hisG-251; ?hisG, ?hisDG和? （hisD-rfb ）; hisG:Tn10 和 hisG2148 （Oc）; str和 str s。自身不能夠合成組氨酸的菌株的表現(xiàn)型為：His自身能夠合成組氨酸的菌株的表現(xiàn)型為：His+參與組氨酸合成的基因型（其中之一），表示野生型基因：hisG + ,指編碼ATP磷 酸核糖轉(zhuǎn)

11、移酶的DNAff列參與組氨酸合成的基因型（其中之一）突變了的基因：hisG ,合成組氨酸的其中一個基因 G的一個突變基因（等位基因251）: hisG-251 ;缺失組氨酸合成所需的一個基因 G: ?hisG ,缺失組氨酸合成所需的基因（不只一個基因）：？hisDG,跨越一個以上操縱子的缺失，由hisD延伸至gnd并進(jìn)入rfb的缺失：？（hisD-rfb ）;一個特定的在hisG基因中的Tn10插入，命名為hisG:Tn10一個在hisG基因中的赭石突變：hisG2148 （Oc）, 鏈霉素抗性基因：str。鏈霉素敏感基因：str s。9 .有一株大腸桿菌色氨酸營養(yǎng)突變株， 經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)在編碼色

12、氨酸合成酶 A亞基的基因中發(fā)生了一個無義突變（TAA。但是在研究該菌株的特性時，得到一株回復(fù)突變株，經(jīng)檢測A亞基基因中的無義突變?nèi)匀淮嬖凇?請根據(jù)學(xué)過的知識解釋出現(xiàn)上述現(xiàn)象的原因一種基因間的抑制基因突變是 tRNA基因突變。主要對無義突變起作用由于某些tRNA基因的突變，形成帶有不同于正常反密碼子的 tRNA這些反密碼子能識別終止密 碼子，可他卻帶有氨基酸。這些突變的tRNA能把某些氨基酸放在終止密碼子的位置上， 從而使蛋白合成繼續(xù)進(jìn)行。10 . 何為基因抑制？有哪些機制可能引起基因抑制？一個突變型在另一突變基因同時存在的情況下，如果后者使前者的表型恢復(fù)正常，則后一基因稱為前一基因的抑制基因。

13、而這種基因間的相互作用稱為基因抑制。基因內(nèi)抑制：置換抑制，移碼抑制。基因間抑制：被抑制的基因并不發(fā)生另一改變，抑制基因通過代謝作用的補償， 功能上的替代或是通過翻譯過程中的校正作用而使表型恢復(fù)正常。如突變型tRNA,核糖體突變型，代謝補償或功能替代。11 . 大桿菌組氨酸操縱子中有關(guān)基因的排列次序為hisGDCBHAFI今得到一株大腸桿菌組氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株，該菌株是在 hisG基因中發(fā)生了一個無義突變。分 析該操縱子中其他基因的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，hisG的下游基因的表達(dá)均下降了。請根據(jù)學(xué) 過的知識解釋發(fā)生上述現(xiàn)象的可能機理。一個操縱子上游基因的無義突變和插入突變均能引起轉(zhuǎn)錄極性。極性是轉(zhuǎn)錄提前終止

14、的結(jié)果，即轉(zhuǎn)錄極性，上述現(xiàn)象是轉(zhuǎn)錄極現(xiàn)象，機制為：1、原核生物的轉(zhuǎn)錄和翻譯是偶聯(lián)的，即轉(zhuǎn)錄和翻譯緊密相連，不能夠完成翻譯就會很 快導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄終止。2、正在轉(zhuǎn)錄的RNA聚合酶在每個結(jié)構(gòu)基因內(nèi)的某些位點會暫停，等待核糖體把 mRNA 翻譯為蛋白，同時使RNA!合酶從暫停點釋放，繼續(xù)轉(zhuǎn)錄。3、如果蛋白質(zhì)翻譯變慢或阻斷，轉(zhuǎn)錄終止因子 Rho蛋白，裝載到未翻譯的 mRNAt, 且沿著mRN移動，當(dāng)遇到RNA!合酶時，催化RNA!合酶/DNA/mRNAE元復(fù)合物解離， 即轉(zhuǎn)錄在某個暫停點終止。無義突變在基因中引入了終止密碼，導(dǎo)致翻譯提前終止，從mRNAt解離下來，使得Rho因子有機會與mRN結(jié)合，當(dāng)RN膘合

15、酶到達(dá)暫停點時，轉(zhuǎn)錄暫停，同時由于Rho 因子的作用，RN靡合酶從DNAt脫離，結(jié)果造成后續(xù)基因的表達(dá)降低或減少。習(xí)題51 .由于研究的需要，需要得到一株對鏈霉素有抗性的大腸桿菌。請根據(jù)學(xué)過的知識，設(shè)計一實驗篩選鏈霉素抗性的大長桿菌?？寺〕鲦溍顾乜剐曰颍瑢⑵洳迦脒m當(dāng)?shù)妮d體中，然后通過轉(zhuǎn)化或者轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法 入大腸桿菌中，然后在含有質(zhì)?；蚴删w的抗性選擇基因的平板上進(jìn)行轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)子 的選擇，然后再在含有鏈霉素的篩選平板中用適當(dāng)?shù)姆椒êY選出含有鏈霉素抗性基因 的重組子。最后挑取陽性克隆的單菌落進(jìn)行富集培養(yǎng)。2 .基因誘變遵循的原則是什么？a.擇簡便有效的誘變劑；b.處理單細(xì)胞或單抱子懸液，使每個細(xì)胞

16、均勻接促誘變劑并防止長出不純菌落；c.選用最適劑量的誘變劑；d.計或采用高效篩選方案或方法。3 .如何快速地利用化學(xué)誘變劑獲得微生物的突變？平板上涂布出發(fā)菌株在其上分區(qū)并放置誘變劑顆?；蛘从姓T變劑溶液的小濾紙片保溫培養(yǎng) 誘變劑周圍有一透明的制菌圈，在制菌圈的邊緣存在有若干突變株的菌落 根據(jù)要求篩選所需突變菌株。4.如何利用Tn10或Tn5隨機突變大腸桿菌？Tn101 .遞送載體感染抑制大腸桿菌菌株，制備噬菌體裂解物。2 .新制備的噬菌體裂解物感染非抑制大腸桿菌受體菌，40 C培養(yǎng)。3 .添加IPTG,誘導(dǎo)轉(zhuǎn)座酶表達(dá)。4 .篩選抗性菌株，獲得隨機突變體庫。5 .設(shè)計合適的方法，獲得目的突變體。T

17、n51 .人工體外構(gòu)建攜帶Tn5轉(zhuǎn)座酶識別的轉(zhuǎn)座位點的抗性基因盒;2 .獨立表達(dá)純化Tn5轉(zhuǎn)座酶；3 .體外使轉(zhuǎn)座酶與抗性基因盒結(jié)合；4 .電激轉(zhuǎn)化受體菌，根據(jù)抗性篩選轉(zhuǎn)化子。5 .簡述質(zhì)量粒拯救獲得目的基因的原理。重點！ ！人工體外構(gòu)建攜帶Tn5轉(zhuǎn)座酶識別位點、抗藥性基因盒和 R6Kr ori復(fù)制位點區(qū)的DNA 片段。其它，操作方法與“轉(zhuǎn)座體法” 一樣。得到突變菌株后，可以很快確定突變基 因的部分序列。6 .基因定位突變的一般原理。如何鑒定目的基因已經(jīng)被敲除？對已知的基因進(jìn)？行敲除、插入、缺失和替換或進(jìn)？行基因融合的遺傳操作，主要?用于研究已知基因的生理功能。7 .簡述利用大腸桿菌入噬菌體

18、Red重組系統(tǒng)進(jìn)行基因敲除的原理。1）基于入噬菌體的Red重組系統(tǒng)，可有效利用線性 DNAt段作為靶分子，對大腸桿菌染色體DNAa行基因敲除、替換、單堿基突變及體內(nèi)克隆等修飾。2）質(zhì)粒pKD20 or pKD46中exo、bet和gam基因都受阿拉伯糖啟動子的調(diào)控，因此能用L-阿拉伯糖誘導(dǎo)重組酶基因的表達(dá)。而且質(zhì)粒的溫度敏感型復(fù)制子使其很容易從細(xì)菌中去除。3）通過設(shè)計特定的引物，利用同源序列間的相似性和入噬菌體 Red重組系統(tǒng)進(jìn)行重組，從而替換掉靶序列中的目的基因。8,請設(shè)計基因敲除大腸桿菌lacZ基因方案。1.獲得LazZ的基因序列2,用kan抗性基因序列替代lazZ序列3 .在基因組kan

19、上下游分別設(shè)計引物4 .kan序列為模板擴增5,酶切消化，組裝到同源重組載體6 .轉(zhuǎn)化大腸桿菌，篩選9. 簡述利用反義RNA勾建突變菌株的原理。通過特定的方法和技術(shù)，以目的基因的相關(guān)序列為模板，設(shè)計編碼目的基因序列轉(zhuǎn)錄后的RNA勺反義RNA勺DN脂列，通過適當(dāng)?shù)妮d體轉(zhuǎn)入受體菌后，從而在受體菌內(nèi)轉(zhuǎn) 錄得到特定的反義RNA使其可以與目的基因序列轉(zhuǎn)錄后得到的 RNAS行結(jié)合，得到雙 鏈RNA從而阻止其翻譯，而阻斷特定生理代謝過程，最終得到突變菌株的技術(shù)過程。10. 在利用物理、化學(xué)或生物法進(jìn)行微生物突變后，如何進(jìn)行突變體的富集？各種方法的原理是什么？富集：淘汰野生型菌株，使缺陷型得以濃縮以便檢出。原

20、理：青霉素只能殺死生長繁殖的細(xì)菌，不能殺死停止分裂的細(xì)菌。5-澳脫氧尿甘濃縮法：原理：在 DNA復(fù)制時，5-澳脫氧尿甘替代胸腺喀咤脫氧核甘摻入DN砌子中，但是攜帶5-澳脫氧尿甘的DNA寸紫外線十分敏感。不生長的細(xì)胞，DNA 不復(fù)制，5-澳脫氧尿甘也不能摻入DNA在接觸紫外線時能夠存活下來。同位素自殺濃縮法：經(jīng)同位素（如 3H, 35S和32P）標(biāo)記的細(xì)菌細(xì)胞，在處于生長狀態(tài)時，同位素發(fā)生衰變，產(chǎn)生（3 -射線，能將處于生長狀態(tài)的細(xì)菌殺死，而突變菌株不能將吸收同位素，且在一定條件下不能生長，從而免于死亡。差別殺菌法：菌絲過濾法，高溫法。通過菌絲的特點不同和根據(jù)細(xì)菌對溫度的敏感程 度不同而進(jìn)行富集

21、11. 什么是麥康凱瓊脂培養(yǎng)基和四氮噪培養(yǎng)基？它們有何功用？麥康凱蛋白月東，中性紅（細(xì)菌染色劑），結(jié)晶紫（抑制革蘭氏陽性細(xì)菌），膽鹽（抑制革蘭氏陽性細(xì)菌，同時參與pH依賴的顏色變化）和某種碳水化合物。利用碳水化合物的細(xì)菌在這種培養(yǎng)基上形成紅色菌落，在發(fā)酵力強的細(xì)菌菌落周圍有膽鹽沉淀；不能夠利用碳水化合物的細(xì)菌形成無色菌落。可用于糖類代謝的研究。四氮噪培養(yǎng)基以營養(yǎng)瓊脂為基礎(chǔ)，添加氯化三苯四氮噪（TTC）。氧化型TTC是水溶性的，無色； 還原型TTC是水不溶性的，暗紅色。TTC能夠被有代謝活性的細(xì)菌還原；低 pH值可抑 制還原型TTC的產(chǎn)生?？衫锰妓衔锏募?xì)菌，產(chǎn)生酸，故TTC可以將利用和不利

22、用碳水化合物的細(xì)菌區(qū)別開來，即利用碳水化合物的細(xì)菌形成無色菌落，而不利用的 菌落形成紅色。12. 舉例說明“正向選擇培養(yǎng)法”在篩選細(xì)菌基因突變株中的應(yīng)用.13. 何為“影印技術(shù)”？如何應(yīng)用該技術(shù)篩選大腸桿菌谷氨酸營養(yǎng)突變菌株？14. 為了研究大腸桿菌DNAa成機制，需要篩選DNA合成的突變菌株。請設(shè)計試驗篩選大腸桿菌DN始成突變菌株。選擇適當(dāng)?shù)恼T變劑-30 C誘變大腸桿菌-30 C培養(yǎng)誘變后的菌體（使野生菌株和突變菌株均得到生長）-42 C富集：使用3H標(biāo)記的胸腺喀咤核甘（使野生菌株死亡，富集突變菌株）-30 C培養(yǎng)富集后的菌體（突變菌株）-影印到30c和42C 進(jìn)行篩選-進(jìn)行鑒定習(xí)題61.簡

23、述基因定點突變的兩種方法的原理。基因的定點突變有何用處？重點！ ！1 .以攜帶目的基因質(zhì)粒載體為模板，設(shè)計互補的突變引物，使用高保真的DNA聚合酶，進(jìn)行長鏈PCR2 .設(shè)計2對引物，其中1對為突變互補引物。以目的基因為模板， PC用別擴增， 得到兩個帶有點突變的DNAt段，然后以得到的兩個 DNAt段為模板，進(jìn)行重疊PCR 擴增，得到突變基因片段。然后進(jìn)行基因片段的克隆定點突變能迅速、高效的提高 DNA所表達(dá)的目的蛋白的性狀及表征，是基因研究 工作中一種非常有用的手段。3 .簡述錯誤傾向PCR勺原理。采用改變PC皈應(yīng)體系中四種核甘酸濃度比例、鎂離子濃度和使用保真性差的 DNA 聚合酶等措施，增

24、加目的基因突變率，進(jìn)而獲得目標(biāo)基因突變的技術(shù)。習(xí)題71 .質(zhì)粒的基本概念、在細(xì)菌細(xì)胞中的主要存在結(jié)構(gòu)，如何檢測質(zhì)粒的存在？常用的質(zhì) 粒抽提方法？質(zhì)粒如何命名？質(zhì)粒：一種獨立于微生物染色體外的，具有自我復(fù)制能力的的遺傳因子。抽提方法：堿裂解法或試劑盒抽提檢測：通常為瓊脂糖凝膠電泳檢測命名：小寫p開頭，后面接構(gòu)建者實驗室名或作者名的英文縮寫，有時還寫有阿拉伯 數(shù)字，表示同一類型的不同質(zhì)粒。2 .根據(jù)質(zhì)粒所賦予宿主的生物學(xué)特性，質(zhì)粒主要有幾種類型？質(zhì)粒主要有哪些特性?種類：致育因子、抗性因子、產(chǎn)細(xì)菌素質(zhì)粒、隱秘質(zhì)粒、毒性質(zhì)粒、代謝質(zhì)粒主要特性：1 .宿主細(xì)胞的非必須遺傳物質(zhì)2 .不同細(xì)胞內(nèi)存在的質(zhì)粒

25、大小不同3 .質(zhì)粒具有整合性4 .質(zhì)粒具有遷移能力5 .較高的耐堿性6 .質(zhì)?？梢员幌? .具有重組性8 .自我復(fù)制能力9 .不相容性3 .何為嚴(yán)緊型質(zhì)粒和松弛型質(zhì)粒？質(zhì)粒的主要復(fù)制機制有哪兩種？嚴(yán)謹(jǐn)型：拷貝數(shù)低的質(zhì)粒（一個細(xì)胞內(nèi) 1-幾個）松弛型：拷貝數(shù)高的質(zhì)粒（一個細(xì)胞內(nèi) 10-幾百）分為0型復(fù)制和滾環(huán)復(fù)制兩種其中0型復(fù)制分為單向復(fù)制和雙向復(fù)制4 .何為復(fù)制子？為什么說質(zhì)粒的復(fù)制起始位點對一個質(zhì)粒十分重要？復(fù)制子：即一個復(fù)制單位，質(zhì)粒、染色體都可以是一個復(fù)制子。復(fù)制起始位點：即質(zhì)粒具備的 ori位點，質(zhì)粒至少具備一個ori位點，因為該位點是 復(fù)制相關(guān)蛋白結(jié)合的部位，缺少復(fù)制起始位點，質(zhì)粒

26、就不能復(fù)制。5. ColEI復(fù)制調(diào)控機制如何？野生型 ColEI的拷貝數(shù)約是20個/每個細(xì)胞，pUC18是通過人工構(gòu)建的一個質(zhì)粒載體，它使用了ColE1質(zhì)粒的復(fù)制起始位點，為什么在細(xì)胞中pUC18的拷貝數(shù)能達(dá)到250個/每個細(xì)胞？A.ColE1的復(fù)制調(diào)控機制：1. 復(fù)制依賴宿主的復(fù)制酶系，質(zhì)粒本身不編碼復(fù)制所需的酶蛋白。2. 制從固定原點oriV開始，進(jìn)行單向復(fù)制。3. 復(fù)制需要一個 RN用I物：RNAII。4. 由質(zhì)粒編碼兩個負(fù)調(diào)控因子Rop蛋白和反義RNA(RNAD,控制著質(zhì)粒復(fù)制過程中所必需引物的合成，進(jìn)而控制著質(zhì)粒在細(xì)胞中的拷貝數(shù)。B.pUC18采用反義基因被缺失ColEI的復(fù)制起點區(qū)

27、，即缺少了 Ro幢白和RNAI的編碼序 列。6.簡述R1質(zhì)粒和pSC101質(zhì)粒的復(fù)制調(diào)控機制？R1質(zhì)粒復(fù)制調(diào)控：1 .RepA蛋白為其復(fù)制的必需因子2 .repA基因編碼該蛋白，由兩個啟動子 PcopB和PrepA控制；Pcopb編碼CopB蛋白和 RepA蛋白，PrepA啟動子編碼RepA蛋白；CopB蛋白能抑制PrepA啟動子，從而控制 repA蛋白的轉(zhuǎn)錄，控制R1質(zhì)粒的復(fù)制。3 .copA基因編碼反義RNA與repA基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物互補結(jié)合，使之被酶降解，抑制復(fù)制 進(jìn)行。pSC101 調(diào)控:1 .復(fù)制其實區(qū)有R1/R2/R3三個重復(fù)子序列，RepA蛋白為復(fù)制必需蛋白；2 .質(zhì)粒濃度低是，Re

28、pAM白與ori位點結(jié)合啟動復(fù)制；3 .質(zhì)粒濃度高時，RepA蛋白與自身啟動子結(jié)合阻遏自身的轉(zhuǎn)錄，RepA蛋白與R1、R2,R3 三個重復(fù)子結(jié)合使得兩個質(zhì)粒耦合在一次，進(jìn)一步抑制復(fù)制。7 .保證F質(zhì)粒在細(xì)胞中穩(wěn)定性的機制是什么？(1)質(zhì)粒結(jié)構(gòu)中還存在編碼主動分配體系的par區(qū)。(2)質(zhì)粒編碼的致死蛋白來抑制不含質(zhì)粒的分離子。8 .何為質(zhì)粒之間的不相容性？主要與哪些因素有關(guān)？質(zhì)粒不相容性：在無選擇壓力的條件下，親緣關(guān)系密切的兩種質(zhì)粒不能再同一宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定共存的現(xiàn)象。a, 質(zhì)粒的不相容性與質(zhì)粒的復(fù)制起始調(diào)控有密切關(guān)系b, 質(zhì)粒的不相容性還與質(zhì)粒的分配有關(guān)。9 .何為轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒？實現(xiàn)轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒轉(zhuǎn)移

29、的條件是什么？何為可移動質(zhì)粒？這類質(zhì)粒如何實現(xiàn)轉(zhuǎn)移？1 .轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒：通過菌體結(jié)合能自動地從一個細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一個細(xì)胞的質(zhì)粒。2 .移動質(zhì)粒：自身不能自主轉(zhuǎn)移，但在自主轉(zhuǎn)移質(zhì)粒共存的情況下，能從供體菌轉(zhuǎn)移 到受體菌的質(zhì)粒。3 .轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒的條件：有tra基因簇，有轉(zhuǎn)移位點oriT。4 .可移動質(zhì)粒需具備條件：bom位點：類似于F質(zhì)粒的oriT序列mobg因：功能類似于tra基因，負(fù)責(zé)質(zhì)粒轉(zhuǎn)移。主要提供核酸內(nèi)切酶。10. 何為廣寄主范圍質(zhì)粒？能通過接合轉(zhuǎn)移移動到不同種甚至不同屬的宿主菌，并在這些菌體內(nèi)穩(wěn)定存在的一種質(zhì)粒。11. 構(gòu)建人工載體的基本要求有哪些？1 .為一個獨立的復(fù)制子，含有復(fù)制位點，

30、能夠自主復(fù)制。2 .含有多個克隆位點，便于外源基因的插入。3,含有選擇性標(biāo)記，便于對陽性克隆篩選和鑒定。4,具有生物安全性。習(xí)題81,何為“中斷雜交”？在大腸桿菌染色體遺傳圖譜制做中如何應(yīng)用?a.將接合中的細(xì)菌按不同時間取樣，并將樣品放入攪拌器內(nèi)猛烈攪拌，以打斷細(xì)菌的接合管，終止接合。b.利用供體基因進(jìn)入受體細(xì)胞的順序和時間可繪制出細(xì)菌的遺傳學(xué)圖。2 .已知大腸桿菌HfrX的染色體轉(zhuǎn)移以e為起點，并且已知s位置在a-e等全部基因 的后端（ad的相對位置未知）。在HfrX a+b+c+d+e+ssx Fab-cd-es,雜交中，在含有 鏈霉素和a、b、c、d的培養(yǎng)基上選取重組子165個，并且分別

31、測定重組子的標(biāo)記：a+,70、 b+,0、c+, 85、d+, 10。寫出基因的排列順序。重組子越多，越靠前： e-c-a-d-b-s3 .在研究大腸桿菌耐酸機制時，通過隨機突變獲得了一株酸敏感突變菌株，已經(jīng)證明造成該性狀的為單基因突變（smg現(xiàn)有四株大腸桿菌 Hfr菌株，性狀如下圖。請將(23 min)smg®行初步定位。4 .大腸桿菌MH12偽油酸營養(yǎng)缺陷菌株，基因型為fabA: cat （cat為氯霉素抗性基因）， 大腸桿菌YYC1257F產(chǎn)生環(huán)丙烷十七脂肪酸，基因型為 cfa:kan （kan為卡那霉素抗 性基因），請用P1噬菌體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)導(dǎo)構(gòu)建菌株：fabA: cat cfa: kan。供體菌(cat抗性菌株)一 P1噬菌體感染-裂解-裂解液-感染受體菌-不含油酸-氯霉素抗性平板培養(yǎng)基篩選一目的菌株。5 .何為柯斯載體？有何特點和用途？ 一種細(xì)菌基因組為6000kb,今構(gòu)建其基因組文庫，請計算