實驗十三免疫濁度試驗

1、醫(yī)學免疫學實驗指導(dǎo)實驗十三 免疫濁度試驗由長沙達爾鋒生物科技有限公司整理【文章介紹】實驗是映證理論，對學生進行基本技能訓練和培養(yǎng)科學研究能力的手段。BioRike博瑞克根據(jù)醫(yī)學免疫學實驗指導(dǎo)一書系統(tǒng)整理了14個實驗項目，每個實驗說明實驗?zāi)康?，實驗原理，實驗?nèi)容方法，實驗要求及注意事項，希望廣大師生能夠從中有所收獲。BioRike簡介：BioRike（中文簡稱“博瑞克”）是長沙達爾鋒生物科技有限公司旗下的產(chǎn)品品牌,由旗下專業(yè)的生命科學實驗室BioRike博瑞克研發(fā)和生產(chǎn)。BioRike是一家致力于生命科學和生物技術(shù)領(lǐng)域的高科技實驗室，專門從事以Elisa試劑盒、抗體、細胞因子、免疫檢測試劑盒、血

2、清等免疫學產(chǎn)品為主的生物試劑的研發(fā)與銷售?！緦嶒?zāi)康摹空莆彰庖邼岫葴y定的原理，熟悉其操作方法，了解其應(yīng)用及意義?！緦嶒炘怼靠乖涂贵w在液相中反應(yīng)，所形成的免疫復(fù)合物使液相出現(xiàn)濁度，復(fù)合物的量與濁度呈正相關(guān)。這種濁度可以反射、散射和吸收入射的光線，使入射光衰減，因此可通過測定透射光衰減（以A值表示）或散射光強度來檢測抗原抗體反應(yīng)。本實驗以常用透射比濁法檢測人血清IgG為例。在反應(yīng)系統(tǒng)中IgG抗體過量時，所形成的免疫復(fù)合物與血清IgG量呈正相關(guān)，而形成的濁度大小與入射光的衰減呈正相關(guān)，因此測定A值反映液相中的抗原量，通過參照標準曲線或標準品數(shù)值的計算，即可得知待測血清中IgG含量?！緦嶒炗闷贰?

3、.標本：待測人血清、標準血清（混合正常人新鮮血清）、人IgG標準品（或凍干人血清IgG參考標準）。2.PEG溶液：PEG 6000-8000 4.0g、NaF 1.0g、Na2HPO412H2O 10.15g、NaH2PO42H2O 1.0g、NaN3 0.1g，加蒸餾水至100ml。3.其他試劑：羊抗人IgG抗血清、生理鹽水、蒸餾水。4.主要器材：分光光度計（721或731等）、水浴箱、微量移液器、刻度吸管、試管等?！静襟E和方法】1.系列標準管準備：用生理鹽水稀釋人IgG標準品或人血清IgG工作標準，使其濃度分別為5.5g/L、11.0g/L、22.0g/L、44.0g/L（濃度可根據(jù)不同制

4、劑略有變動）。取上述IgG標準液10l，分放于4個試管中；另取生理鹽水10l，放于第5只試管中，作為空白對照。分別做好標記。2.血清管準備：將待測血清和標準血清均做1:10稀釋（0.1ml血清+1.0ml生理鹽水），各取10l，分放于預(yù)先標記的試管中。3.抗體制備：用PEG溶液稀釋羊抗人IgG抗血清，注意保持適宜的抗體濃度。4.抗原抗體反應(yīng)：向各標準管和血清管中分別加入稀釋抗血清，混勻后至37水浴30min。5.測定：用分光光度計進行測定，使用340nm波長，用生理鹽水校正零點。逐次測定各標準管和血清管，準確讀取和記錄各自的A值?！窘Y(jié)果和評價】 1.以4個濃度的IgG標準品的A值為縱坐標，以其

5、分別的IgG含量為橫坐標，繪制出標準曲線。各血清管IgG 含量可從標準曲線上查得。標準血清的IgG含量應(yīng)該處于正常參考值的范圍以內(nèi)，否則應(yīng)考慮實驗結(jié)果可能有問題。2.也可用分段直線計算法得到結(jié)果，舉例如下：標準管序號 1 2 3 4 標準管IgG 含量（g/L） 5.5 11.0 22.0 44.0標準管A值 0.04 0.08 0.14 0.26血清管A值 0.10以上例子中，血清管的A值位于標準管1和標準管3之間，計算如下：（22.0-11.0）/(0.14-0.08)×（0.10-0.08）+11.0=14.7(g/L)3.正常血清IgG 參考值8.0-16.0 g/L。【注意事項】1.由于不同制品羊抗人IgG 抗血清的效價不同，所以對每批制品都需要測定最適宜的抗體濃度。2.PEG的分子量不同，性質(zhì)也有所區(qū)別；PEG溶液濃度不同所沉淀的免疫復(fù)合物也不同，濃度越大沉淀的復(fù)合物越小。20g/L濃度只能沉淀較大復(fù)合物，40g/L濃度可沉淀較小復(fù)合物，但濃度50g/L，PEG選擇性沉淀免疫復(fù)合物的特征即行消失?！九R床意義】1.血清IgG降低，主要見于先天性低IgG血癥，例如Bruton型免疫球蛋白缺乏癥和聯(lián)合免疫缺陷病等。亦可見于獲得性低免疫球蛋白血癥，常低于5.0g/L,例如剝脫性皮炎、腸淋巴管擴張癥、腎病綜合征、淋巴肉瘤、霍奇金病等。2.血清IgG升