干細(xì)胞治療工作流程課件

1、干細(xì)胞治療工作流程臍帶血臨床采集流程干細(xì)胞是一種未分化的細(xì)胞，具有自我更新、分化、發(fā)育再生各種組織器官和人體的潛在功能。臍帶血廣泛的應(yīng)用前景備受關(guān)注，臍帶血本屬于廢棄物，但是醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步使得它的價(jià)值得到了空前的提升。1989年，法國的魯克羅曼教授用HLA相合的同胞臍帶血干細(xì)胞進(jìn)行移植，成功地治療了一例遺傳性疾病 范可尼貧血癥，之后短短的15年的時(shí)間內(nèi)，醫(yī)學(xué)界利用臍帶血干細(xì)胞已成功治愈和改善了多種疾病，包括:血液系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病、神經(jīng)和血管系統(tǒng)疾病、腦部疾病、腫瘤、糖尿病等?，F(xiàn)在在兒童的干細(xì)胞移植方面，由于可以存在1-2個(gè)HLA位點(diǎn)的不配型，免疫排斥反應(yīng)小等原因，臍帶血干細(xì)胞已成為治療一

2、些重大疾病的有效手段。同時(shí)，干細(xì)胞的進(jìn)一步開發(fā)，還可用于抗衰老、器官修復(fù)、美容等保健領(lǐng)域。干細(xì)胞技術(shù)和臨床應(yīng)用的飛速發(fā)展，給人類的健康帶來了新的希望和保障。但是作為采集臍帶血最主要的工作人員，我們所需要的操作是非常簡單的，但是對(duì)于術(shù)中操作之外，我們還是會(huì)遇到以下的問題。解決這些問題，我們才能放心的采集，存儲(chǔ)，備用。但是真正合法，安全，便捷的讓臍帶血內(nèi)的干細(xì)胞移植到有需要的患者體內(nèi)，需要按以下流程操作：臍帶血采集條件：以初產(chǎn)婦、年齡在45歲以內(nèi)或35歲以內(nèi)經(jīng)產(chǎn)婦，身體健康者為宜。臍帶血安全流程 1、傳染病檢查：孕婦在產(chǎn)前要做好身體檢查。這些檢查包括:肝功能是否正常，有無梅毒螺旋體，艾滋病病毒(H

3、IV )、乙型肝炎病毒(HBV )、丙型肝炎病毒(HCV)等病原體檢測。如果其中有一樣是陽性的話，就不要再進(jìn)行采集了。 2、采集和儲(chǔ)存的無菌觀念：在自然分娩的情況下，一定要注意消毒。被厭氧菌和需氧菌污染，檢測為陽性時(shí)都不能儲(chǔ)存和使用。在臍血被采集后，應(yīng)該盡快保存在2-8的恒溫箱中，并遠(yuǎn)離輻射源，不要讓X射線照到。這樣的臍帶血經(jīng)科學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，放置24小時(shí)或在-23以下48小時(shí)，其中的干細(xì)胞的活性是沒有明顯影響的，但最長不應(yīng)該超過72小時(shí)。采集流程 何種方法采集臍帶血更好些呢？Solves5等證實(shí)了剖宮產(chǎn)情況下，以下兩種采集方法體內(nèi)采集法對(duì)得到的臍帶血除血細(xì)胞比容及血小板外，其他各項(xiàng)沒有明顯不同。

4、體內(nèi)采集法：產(chǎn)婦施行常規(guī)的子宮橫切術(shù)，將胎兒取出后，立即用兩把止血鉗夾住臍帶，將其與胎兒分離，然后用碘酒和70%酒精消毒臍帶，做臍靜脈穿刺后，臍帶血通過重力的作用流人內(nèi)含抗凝劑的無菌采集袋，采集完將其放入4冰箱中保存。體外采集法：同樣對(duì)產(chǎn)婦行子宮橫切術(shù)，待胎盤自然或人工剝離后，立即將其置于采集區(qū)，胎盤取出與進(jìn)行采集之間時(shí)間盡可能縮短，將胎盤放在一個(gè)中間有孔的可供臍帶自然垂下的采集臺(tái)上，對(duì)臍帶進(jìn)行嚴(yán)格消毒后行臍靜脈穿刺，血液在重力的作用下流人采集袋中，將其放人4冰箱保存。臍帶血貯存因?yàn)槟氀牟杉?、運(yùn)輸、儲(chǔ)存和應(yīng)用事實(shí)上有別于一般血液，國際上通行的管理法規(guī)都將血液和組織細(xì)胞分別管理，而我國目前的法

5、規(guī)對(duì)臍血干細(xì)胞庫只簡單歸屬血液管理， 嚴(yán)重阻礙了干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。首先，來源不一樣，臍帶血是產(chǎn)婦和新生兒血循環(huán)以外的胎盤和臍帶中的血液，一直是醫(yī)院產(chǎn)科的廢棄物，采集對(duì)產(chǎn)婦和新生兒無任何風(fēng)險(xiǎn)，然而其采集作為產(chǎn)婦生產(chǎn)過程的一部分，只能由產(chǎn)科醫(yī)護(hù)人員進(jìn)行，不可能由其他人員采集；而其應(yīng)用主要是其中的干細(xì)胞，不會(huì)發(fā)生一般血液的公共安全問題。我們所在的手術(shù)室其實(shí)是臍帶血采集的主要場所，手術(shù)室護(hù)士以及產(chǎn)科醫(yī)生也將是臍帶血采集主要人員，因此對(duì)于臍帶血的采集問題還是需要有必要的認(rèn)識(shí)。1、采集足月妊娠的健康產(chǎn)婦臍血，以肝素抗凝（40u/ml），臍血采集量50100ml，采集后2h內(nèi)進(jìn)行分離純化處理。2、胎兒分娩后

6、立即抽取臍血,經(jīng)抗凝,2-8冰箱保存。骨髓采集流程接受干細(xì)胞治療的病人在術(shù)前應(yīng)加強(qiáng)營養(yǎng)，改善體質(zhì)。簽署知情同意書，干細(xì)胞治療志愿書，手術(shù)同意書，及相關(guān)法律文書。對(duì)病人進(jìn)行生命體征的觀測，有發(fā)熱和炎癥患者需要待炎癥控制后再進(jìn)行移植治療，女性病人避開月經(jīng)期。全身衰竭，嚴(yán)重肝腎功能損害的病人不宜進(jìn)行自體骨髓干細(xì)胞移植治療。此外，根據(jù)移植途徑的不同給病人做好相應(yīng)的術(shù)前處理。1： 術(shù)前心理疏導(dǎo)，消除患者緊張情緒。 重組人粒細(xì)胞刺激因子每天注射一支（皮下注射），打1-2天；病人身體狀態(tài)好，可不用做動(dòng)員。2：術(shù)前準(zhǔn)備普通骨穿針2個(gè)，10ml注射器20個(gè)，在采集骨髓前將每個(gè)注射器中加入1ml肝素（抗凝），一次

7、性采血袋或準(zhǔn)備一個(gè)200ml以上容量的瓶子，術(shù)前消好毒，上蓋橡膠蓋或者軟木蓋，以便插針頭，方便采集的骨髓往瓶中注入。術(shù)前30min行常規(guī)劑量頭孢二代抗菌。3：骨髓采集一般為24個(gè)點(diǎn)的采集，在兩個(gè)點(diǎn)不能夠采集好的情況下，采集最大4個(gè)點(diǎn)。4：將采集好的骨髓或臍帶血用醫(yī)用紗布包裹，送分離。送病人回病房。5：將分離好的干細(xì)胞用生理鹽水稀釋成4-5ml干細(xì)胞懸液備用。6：術(shù)后進(jìn)行48小時(shí)體溫監(jiān)測。適應(yīng)癥理論上干細(xì)胞能夠治療一切細(xì)胞損傷性疾病。目前已經(jīng)使用寧夏中聯(lián)達(dá)生物有限公司產(chǎn)品應(yīng)用技術(shù)成熟、療效可靠、安全性高的疾病主要有：肝炎肝硬化、潰瘍性結(jié)腸炎、糖尿病足、閉塞性脈管炎下肢壞死、神經(jīng)損傷性疾病、老年癡

8、呆癥、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、帕金森氏病、糖尿病等禁忌癥一切非細(xì)胞損傷性疾?。谎翰?；肝腎功能嚴(yán)重不足；發(fā)燒病人；有嚴(yán)重出血傾向病人；孕婦或哺乳期女性；合并大量腹腔、肺部或其他系統(tǒng)嚴(yán)重感染；心、肺、腎等重要臟器功能不全/衰竭不能配合治療；過敏體質(zhì)等其他嚴(yán)重情況影響治療等?？剖疫\(yùn)作流程選擇病例術(shù)前準(zhǔn)備（術(shù)前相關(guān)檢查、談話記錄、知情同意書，干細(xì)胞來源選擇臍帶血、骨髓血）標(biāo)準(zhǔn)收費(fèi) 臍帶血通知婦產(chǎn)科或廠家 治療前兩日通知細(xì)胞分離室 骨髓血不能在細(xì)胞分離室采則通知手術(shù)室（術(shù)前一日通知） 需介入的通知介入科（術(shù)前一日通知）或再次通知手術(shù)室治療當(dāng)日；進(jìn)行骨髓血、臍帶血采集送細(xì)胞分離室分離分離時(shí)間3小時(shí)左右結(jié)

9、束干細(xì)胞送治療室（介入科或手術(shù)室治療）病人送回病房。神經(jīng)系統(tǒng)病變適應(yīng)癥腦外傷、腦外傷后遺癥 腦梗塞、腦出血脊髓損傷性截癱急性期末（一周） 腦發(fā)育不全、腦萎縮老年性癡呆、智力低下、帕金森病 腦癱、長期昏迷、植物生存狀態(tài) 肌萎縮側(cè)索硬化癥運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病治療方法經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈介入干細(xì)胞移植1、選擇符合適應(yīng)癥患者，排除心、肺、肝、腎等臟器重大疾患。2、行頭部磁共振、血、尿常規(guī)，凝血功能，輸血四項(xiàng)，乙肝三系，生化全套，胸部DR、心電圖等，排除手術(shù)禁忌。3、采用骨髓或臍帶血分離純化(負(fù)收集混合法)收集干細(xì)胞，總數(shù)需2×106/L。4、患者轉(zhuǎn)移至介入室，常規(guī)經(jīng)右腹股溝穿刺放置導(dǎo)管鞘，用5F多功能造影管分

10、別行雙側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈及椎基底動(dòng)脈造影，排除腦血管畸形等疾病，并經(jīng)雙側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈注入充分稀釋后干細(xì)胞懸液4-5ml，續(xù)推2ml生理鹽水。5、術(shù)后配合單唾液酸四己神經(jīng)節(jié)苷脂注射液等營養(yǎng)神經(jīng)治療。6、采用美國功能獨(dú)立性評(píng)測評(píng)分對(duì)患者術(shù)前、術(shù)后3個(gè)月、6個(gè)月進(jìn)行評(píng)定。主要評(píng)價(jià) 6個(gè)方面的能力：生活自理能力，括約肌控制能力，活動(dòng)能力，行動(dòng)能力，理解交流能力，社會(huì)認(rèn)識(shí)能力。腰穿注射干細(xì)胞移植1、 術(shù)前心理疏導(dǎo)，消除患者緊張情緒。2、 患者側(cè)臥，“抱膝凸腰”打開腰椎間隙。3、 選擇L34間隙為穿刺點(diǎn)，術(shù)野消毒鋪巾。4、 穿刺成功后引出腦脊液2-3ml。5、 取干細(xì)胞濃度2×106/L的提取液4ml緩慢推

11、注至蛛網(wǎng)膜下腔，續(xù)推2ml生理鹽水。6、 留針35min觀查病人，正常后拔針，無菌紗布覆蓋穿刺點(diǎn)，術(shù)后去枕平臥6小時(shí)。立體定向移植 采用立體定向技術(shù)定位病變部位，在局麻狀態(tài)下，顱骨鉆孔，插入穿刺針，應(yīng)用微量泵將事先準(zhǔn)備的干細(xì)胞緩慢注入靶點(diǎn)。腦室引流管注入靜脈滴注用生理鹽水稀釋至100ml一小時(shí)內(nèi)緩慢靜脈滴入肝病科適應(yīng)癥：肝炎后肝硬化失代償期 酒精性肝硬化失代償期 原發(fā)性膽汁淤積性肝硬化 丙肝后肝硬化失代償期 不明原因性肝硬化失代償期 自身免疫性肝病 藥物性肝病 急性重型肝炎 慢性重型肝炎 肝炎后肝硬化合并肝癌 重癥肝炎合并肝癌 治療方法肝固有動(dòng)脈介入：在DSA下經(jīng)股動(dòng)脈穿刺插管,置管于肝固有動(dòng)

12、脈進(jìn)行造影,觀察肝內(nèi)血管情況及有無占位性病變。將待用的細(xì)胞懸液10-15ml于10-15分鐘內(nèi)經(jīng)肝固有動(dòng)脈或左右肝動(dòng)脈緩慢注入;術(shù)畢拔管,穿刺點(diǎn)加壓包扎后返回病房,穿刺側(cè)下肢制動(dòng)6h。 內(nèi)分泌科適應(yīng)癥：型糖尿病 型糖尿病糖尿病足治療方法型糖尿病 采用環(huán)磷酰胺+ 兔抗胸腺細(xì)胞球蛋白方案預(yù)處理，兩日將分離好的干細(xì)胞稀釋至100ml靜脈回輸或在DSA引導(dǎo)下經(jīng)股動(dòng)脈穿刺插管置管于胰背動(dòng)脈將干細(xì)胞懸液10ml緩慢注入。型糖尿病在DSA引導(dǎo)下經(jīng)股動(dòng)脈穿刺插管置管于胰背動(dòng)脈將干細(xì)胞懸液10ml緩慢注入。型、型觀察治療前后胰島素注射劑量、HbA1c、平胰島功能、等變化。糖尿病足 將分離好的干細(xì)胞用生理鹽水稀釋

13、至60ml腿干細(xì)胞懸液備用。消毒、鋪巾，雙下肢貼皮膚保護(hù)膜。將干細(xì)胞懸液注射到患者缺血的下肢。從上向下順序注射，每個(gè)點(diǎn)注射約1ml，注射深度在1.52cm之間，相鄰的最大間距離為11.5cm。注射完畢后，注射點(diǎn)用無菌敷料包扎。血管外科閉塞性脈管炎治療方法：將分離好的干細(xì)胞用生理鹽水稀釋至60ml腿干細(xì)胞懸液備用。消毒、鋪巾，雙下肢貼皮膚保護(hù)膜。將干細(xì)胞懸液注射到患者缺血的下肢。從上向下順序注射，每個(gè)點(diǎn)注射約1ml，注射深度在1.52cm之間，相鄰的最大間距離為11.5cm。注射完畢后，注射點(diǎn)用無菌敷料包扎。骨科股骨頭壞死 干細(xì)胞治療方法：方法一：用臍帶血或在局麻下穿刺髂骨，取出自體骨髓150

14、mL，獲得干細(xì)胞懸液約1020 mL，于獲得干細(xì)胞后12 h內(nèi)先行股骨頭髓芯減壓，然后再行動(dòng)脈灌注，灌注完成后選擇旋股內(nèi)側(cè)動(dòng)脈注射入部分干細(xì)胞懸液后拔除導(dǎo)管及鞘管，隨后用特制刮勺伸入環(huán)鋸內(nèi)搔刮壞死區(qū)后，再將剩余干細(xì)胞懸液注射入環(huán)鋸內(nèi)，由環(huán)鋸內(nèi)填入大粗隆處正常松質(zhì)骨及少量明膠海綿（或生物膠）以防止干細(xì)胞漏出，拔除環(huán)鋸，皮膚縫合。方法二：在DSA引導(dǎo)下行股動(dòng)脈穿刺，將導(dǎo)管超選插入旋股內(nèi)動(dòng)脈、旋股外動(dòng)脈及閉孔動(dòng)脈，將獲得的干細(xì)胞懸液10ml20ml緩慢注入動(dòng)脈內(nèi)。術(shù)后采用髖關(guān)節(jié)Harris評(píng)分及影像學(xué)(主要為MRI)情況評(píng)定療效合骨不連 治療方法：x線透視下將1枚骨穿針準(zhǔn)確穿入骨不連部位，并用針尖輕

15、輕剝離骨不連部位的瘢痕組織及硬化骨質(zhì)；用注射器抽取已制備并稀釋好的干細(xì)胞加壓注入骨不連部位的髓腔內(nèi)、骨折斷端之間的纖維瘢痕中及其表面；每例不少于3個(gè)注射點(diǎn)，每點(diǎn)注射6 10ml，保證干細(xì)胞在骨不連處均勻分布，局部稍加壓包扎。注射量根據(jù)骨折部位而定，肱骨及脛骨中上段注射20 ml，脛骨下段骨折注射2030 ml。術(shù)后根據(jù)內(nèi)固定的堅(jiān)固程度，輔助使用外固定46周。注射1個(gè)月后復(fù)查x線片，如有硬化邊緣清晰，無新生骨形成，無骨小梁通過骨折縫隙，骨不連間隙無明顯縮小，患處壓痛減輕不明顯者，再次注射1次?？啥啻巫⑸?，每次注射間隔均為1個(gè)月左右。消化內(nèi)科適應(yīng)癥：潰瘍性結(jié)腸炎治療方法：首先確定潰瘍面的位置，潰瘍

16、面在腸系膜上動(dòng)脈以上的，在DSA經(jīng)股動(dòng)脈插管至腸系膜上動(dòng)脈，緩慢將干細(xì)胞懸液注入。潰瘍面在腸系膜上動(dòng)脈以下的，經(jīng)股動(dòng)脈插管至腸系膜下動(dòng)脈，緩慢將干細(xì)胞懸液注入?？肆_恩病治療方法：大劑量化療兩日，第三日將獲得的干細(xì)胞懸液用生理鹽水稀釋至100ml，采用大號(hào)針頭經(jīng)靜脈回輸干細(xì)胞。心內(nèi)科適應(yīng)癥： 心肌梗死 擴(kuò)張型心肌病 心力衰竭治療方法： 在進(jìn)行灌注前給病人做6分鐘步行測試并記錄數(shù)據(jù)，記錄病人EF值及腦鈉值。將分離好的干細(xì)胞稀釋成10ml干細(xì)胞懸液備用在手術(shù)室備除顫器。由股動(dòng)脈插管到冠狀動(dòng)脈的前降支，分別將干細(xì)胞緩慢（10min以上）注射到前降支遠(yuǎn)端、中端、近端。治療前后常規(guī)使用其他治療心肌病藥物。

17、腎內(nèi)科適應(yīng)癥：慢性腎臟病狼瘡性腎炎IGA腎病治療方法：在DSA引導(dǎo)下經(jīng)股動(dòng)脈插管至雙腎動(dòng)脈，將獲得的干細(xì)胞懸液20ml緩慢注入，每腎10ml。術(shù)后監(jiān)測患者的生命體征。泌尿外科、婦產(chǎn)科適應(yīng)病種： 壓力性尿失禁 勃起功能障礙使用方法： 壓力性尿失禁：尿道粘膜下和括約肌注射法：將干細(xì)胞懸液稀釋至1015ml，在超聲波三維顯示下，用10mm的針將干細(xì)胞懸液經(jīng)尿道周圍注射至尿道黏膜下及周圍的尿道括約肌內(nèi)，深度至膀胱頸為止，行四個(gè)方位尿道粘膜下和括約肌點(diǎn)狀注射，每點(diǎn)0.5-1ml。整個(gè)植入手術(shù)約分鐘，注射干細(xì)胞治療女性患者的療效較男性好,有效率分別為90%和72%。一般在接受注射34周后有充分顯效,且療效

18、似乎是長期的。勃起功能障礙：陰莖海綿體注射法、在腰麻下將干細(xì)胞懸液稀釋至6ml，用注射器抽取在陰莖神經(jīng)根部周圍及陰莖海綿體四個(gè)方位行12個(gè)點(diǎn)狀注射法，每點(diǎn)0.5ml。腫瘤科、血液科適應(yīng)病種：腫瘤放、化療后支持治療，增強(qiáng)造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)修復(fù)；肝癌介入栓塞合并干細(xì)胞治療；移植途徑： 1、靜脈滴注：在大劑量化療方案兩日后將臍帶血干細(xì)胞懸液稀釋到100ml生理鹽水中用大號(hào)針頭緩慢輸入。2、肝癌介入栓塞合并干細(xì)胞治療；在DSA下經(jīng)股動(dòng)脈穿刺插管, 行肝癌介入栓塞后將待用的細(xì)胞懸液10-15ml于10-15分鐘內(nèi)經(jīng)肝固有動(dòng)脈或左右肝動(dòng)脈緩慢注入;術(shù)畢拔管,穿刺點(diǎn)加壓包扎后返回病房,穿刺側(cè)下肢制動(dòng)6h。 風(fēng)濕免疫科適應(yīng)癥： 系統(tǒng)性紅斑狼瘡 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 多發(fā)性硬化 系統(tǒng)性硬化癥治療方法；患者進(jìn)入層流病房，兩日大劑量的化療，第三日將獲得的干細(xì)胞懸液用生理鹽水稀釋至100ml，采用大號(hào)針頭經(jīng)靜脈回輸干細(xì)胞。 呼吸科適應(yīng)癥：肺動(dòng)脈高壓肺纖維化移植途徑：上肢靜脈輸入法：用生理鹽水將干細(xì)胞懸液稀釋至100ml緩慢輸入。右心導(dǎo)管介入注射法：對(duì)PAH常進(jìn)行右心導(dǎo)管檢查測壓，治療時(shí)可采用直接插管進(jìn)入肺動(dòng)脈緩慢注射干細(xì)胞懸液各