薄層色譜 操作技術(shù)

1、實(shí)驗(yàn)四 薄層色譜計(jì)劃學(xué)時(shí)：3學(xué)時(shí)一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、了解薄層色譜的基本原理和應(yīng)用。2、掌握薄層色譜的操作技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理：1、原理薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固液吸附色譜。樣品在薄層板上的吸附劑（固定相）和溶劑（移動(dòng)相）之間進(jìn)行分離。由于各種化合物的吸附能力各不相同，在展開劑上移時(shí)，它們進(jìn)行不同程度的解吸，從而達(dá)到分離的目的。2、薄層色譜的用途： 1）化合物的定性檢驗(yàn)。（通過與已知標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)比的方法進(jìn)行未知物的鑒定） 在條件完全一致的情況，純碎的化合物在薄層色譜中呈現(xiàn)一定的移動(dòng)距離，稱比移值（Rf值），所以利用薄層色譜法可以鑒

2、定化合物的純度或確定兩種性質(zhì)相似的化合物是否為同一物質(zhì)。但影響比移值的因素很多，如薄層的厚度，吸附劑顆粒的大小，酸堿性，活性等級(jí)，外界溫度和展開劑純度、組成、揮發(fā)性等。所以，要獲得重現(xiàn)的比移值就比較困難。為此，在測(cè)定某一試樣時(shí)，最好用已知樣品進(jìn)行對(duì)照。2、快速分離少量物質(zhì)。 （幾到幾十微克，甚至0.01µg） 3、跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時(shí)，常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失，來(lái)判斷反應(yīng)是否完成。4、化合物純度的檢驗(yàn)（只出現(xiàn)一個(gè)斑點(diǎn)，且無(wú)拖尾現(xiàn)象，為純物質(zhì)。）此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。三 、實(shí)驗(yàn)裝置 薄層板在不同的層析缸中展開的方

3、式 四、實(shí)驗(yàn)操作步驟：1、吸附劑的選擇薄層色譜的吸附劑最常用的是氧化鋁和硅膠。 1）、硅膠： “硅膠H”不含粘合劑；“硅膠G”含煅石膏粘合劑；其顆粒大小一般為260目以上。顆粒太大，展開劑移動(dòng)速度快，分離效果不好；反之，顆粒太小，溶劑移動(dòng)太慢，斑點(diǎn)不集中，效果也不理想。化合物的吸附能力與它們的極性成正比，具有較大極性的化合物吸附較強(qiáng)，因而Rf值較小。酸和堿 > 醇、胺、硫醇 > 酯、醛、酮 > 芳香族化合物 > 鹵代物、醚 >烯 > 飽和烴本實(shí)驗(yàn)選擇的吸附劑為薄層色譜用硅膠G。2、薄層板的制備（濕板的制備）薄層板制備的好壞直接影響色譜的結(jié)果。薄層應(yīng)盡量均勻且

4、厚度要固定。否則，在展開時(shí)前沿不齊，色譜結(jié)果也不易重復(fù)。在燒杯中放入2g硅膠G，加入56ml 0.5%的羧甲基纖維素鈉水溶液，調(diào)成糊狀。將配制好的漿料傾注到清潔干燥的載玻片上，拿在手中輕輕的左右搖晃，使其表面均勻平滑，在室溫下晾干后進(jìn)行活化。本實(shí)驗(yàn)用此法制備薄層板4片。3、薄層板的活化將涂布好的薄層板置于室溫涼干后，放在烘箱內(nèi)加熱活化，活化條件根據(jù)需要而定。硅膠板一般在烘箱中漸漸升溫，維持105110活化30min。氧化鋁板在200烘4h可得到活性為級(jí)的薄板，在150160烘4h可得活性為級(jí)的薄板。活化后的薄層板放在干燥器內(nèi)保存待用。4、點(diǎn)樣先用鉛筆在距薄層板一端1cm處輕輕劃一橫線作為起始線

5、，然后用毛細(xì)管吸取樣品，在起始線上小心點(diǎn)樣，斑點(diǎn)直徑一般不超過2mm。若因樣品溶液太稀，可重復(fù)點(diǎn)樣，但應(yīng)待前次點(diǎn)樣的溶劑揮發(fā)后方可重新點(diǎn)樣，以防樣點(diǎn)過大，造成拖尾、擴(kuò)散等現(xiàn)象，而影響分離效果。若在同一板上點(diǎn)幾個(gè)樣，樣點(diǎn)間距離應(yīng)為1。點(diǎn)樣要輕，不可刺破薄層。5、展開薄層色譜的展開，需要在密閉容器中進(jìn)行。為使溶劑蒸氣迅速達(dá)到平衡，可在展開槽內(nèi)襯一濾紙。在層析缸中加入配好的展開溶劑，使其高度不超過1cm。將點(diǎn)好的薄層板小心放入層析缸中，點(diǎn)樣一端朝下，浸入展開劑中。蓋好瓶蓋，觀察展開劑前沿上升到一定高度時(shí)取出，盡快在板上標(biāo)上展開劑前沿位置。晾干，觀察斑點(diǎn)位置，計(jì)算Rf值。6、顯色被分離物質(zhì)如果是有色組

6、分，展開后薄層色譜板上即呈現(xiàn)出有色斑點(diǎn)。如果化合物本身無(wú)色，則可用碘蒸氣熏的方法顯色。還可使用腐蝕性的顯色劑如濃硫酸、濃鹽酸和濃磷酸等。對(duì)于含有熒光劑的薄層板在紫外光下觀察，展開后的有機(jī)化合物在亮的熒光背景上呈暗色斑點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)樣品本身具有顏色，不必在熒光燈下觀察。五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、檢驗(yàn)甲基橙的純度。（通過與已知標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)比的方法檢驗(yàn)物質(zhì)是否純凈）實(shí)驗(yàn)樣品：甲基橙粗品（自制）、甲基橙純品。溶劑：乙醇：水=1：1 展開劑：丁醇：乙醇：水=10：1：12、混合物的分離實(shí)驗(yàn)樣品：圓珠筆芯油溶劑：95%乙醇展開劑：丁醇：乙醇：水=9：3：1（體積比）3、1%偶氮苯、1%間硝基苯胺、熒光黃(95%乙醇, 1mg/1ml)、次甲基藍(lán)、環(huán)己烷:乙酸 9:1 五、實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵步驟：1、載玻片應(yīng)干凈且不被手污染，吸附劑在玻片上應(yīng)均勻平整。2、點(diǎn)樣不能戳破薄層板面，各樣點(diǎn)間距11.5cm，樣點(diǎn)直徑應(yīng)不超過2mm。3、展開時(shí)，不要讓展開劑前沿上升至底線。否則，無(wú)法確定展開劑上升高度，即無(wú)法求得Rf值和準(zhǔn)確判斷粗產(chǎn)物中