薄層層析常用顯色劑配制及顯色方法

1、碘： 適用于不飽和或者芳香族化合物 配制方法：在100ml廣口瓶中，放入一張濾紙，少許碘粒。 或者在瓶中，加入10g碘粒，30g硅膠高錳酸鉀適用于含還原性基團化合物，比如羥基，氨基，醛 配制方法 ：1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH + 200mL 水. 使用期3個月磷鉬酸(PMA)廣譜 配制方法 ：10 g of 磷鉬酸+100 mL 乙醇紫外燈 適用于含共軛基團的化合物，芳香化合物硫酸鈰生物堿 配制方法：10%硫酸鈰(IV)+15%硫酸的水溶液氯化鐵 苯酚類化合物 配制方法：1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液.桑色素(羥基黃酮) 廣譜,

2、有熒光活性 配制方法：0.1% 桑色素+甲醇茚三酮 適用于氨基酸 配制方法：1.5g 茚三酮 + 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸二硝基苯肼(DNP) 適用于醛和酮 配制方法：12g二硝基苯肼+ 60mL 濃硫酸 + 80mL 水 + 200mL 乙醇香草醛(香蘭素) 廣譜 配制方法：15g 香草醛 + 250mL 乙醇 +2.5mL 濃硫酸溴甲酚綠適用于羧酸，pKa<=5.0 配制方法 ：在100ml乙醇中，加入0.04g溴甲酚綠，緩慢滴加0.1M的NaOH水溶液，剛好出現(xiàn)藍色即至。鉬酸鈰廣譜配制方法：235 mL 水 + 12 g 鉬酸氨 + 0.5 g 鉬酸鈰氨 + 1

3、5 mL 濃硫酸茴香醛(對甲氧基苯甲醛)1 廣譜 配制方法：135 乙醇 + 5 mL 濃硫酸 + 1.5 mL of 冰醋酸 + 3.7 mL 茴香醛，劇烈攪拌，使混合均勻.茴香醛(對甲氧基苯甲醛)2 適用于萜烯，桉樹腦(cineoles), withanolides, 出油柑堿(acronycine) 配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水 (1:10:20:80)胺類物質(zhì)常用的是：（1）磷鉬酸顯色劑：磷鉬酸 5%-10% 乙醇溶液，淡黃色，久置變?yōu)闇\綠色，不影響使用。浸板或噴板，加熱，淺黃色背景，還原性物質(zhì)顯藍綠色斑點，如果斑點太濃，可能顯深黃色。（2）CAM顯色劑:鉬酸銨9.6g,硫酸

4、鈰0.4g,10%硫酸水溶液 200ml,混勻，極淡的黃色溶液，棕色瓶密閉保存，噴板，加熱，白色背景，還原性物質(zhì)顯深藍色斑點。 顯色的方法各種各樣，主要根據(jù)化合物的性質(zhì)選擇不同的顯色方法。許多關(guān)于植物有效成分提取與分離的書上都有介紹，通用的有碘、硫酸乙醇、香草醛硫酸等，當然還有許多專用的顯色劑，如：溴甲酚綠使有機酸顯黃色，三氯化鐵使酚羥基顯藍色，碘化鉍鉀使生物堿顯桔黃色.顯色劑化合物苯胺鄰苯二甲酸酯 碳水化合物，糖類溴甲酚綠羧酸二甲氨基苯甲醛 氨基酸，多肽磷鉬酸苯酚類若丹明 類酯類薄層層析常用顯色劑配制及顯色方法附錄附錄1 薄層層析及紙層析常用顯色劑配制及顯色方法通用試劑(1) 重絡(luò)

5、酸鉀-硫酸:檢查一般有機物.噴灑劑:5克重絡(luò)酸鉀溶于100毫升40%硫酸中.薄層檢查:噴灑后加熱到150至班點出現(xiàn)(2) 熒光素-溴:檢查不飽和化合物噴灑劑:0.1克熒光素溶于100毫升乙醇中溴試劑:5%的溴的四氯化碳溶液噴灑后處理:噴灑熒光素溶液后,放置存有溴溶液的缸內(nèi),可于紫外線分析燈下檢查熒光,熒光素與溴化和成曙紅(Eosin)(無螢光),而不飽和化合物則成溴加成物,保留了原有熒光;若點樣較多,則呈黃色斑點,底板呈紅色.(3) 碘:檢查一般有機物.  方法:a 層析譜放密閉缸內(nèi)或瓷盤內(nèi)，缸內(nèi)預(yù)先放有碘結(jié)晶少許，大部分有機化合物呈棕色斑點。B 層析譜放碘蒸氣中

6、5分鐘（或噴5碘的氯仿溶液）取出置空氣中待過量的碘蒸氣全部揮發(fā)后，噴1淀粉的水溶液，斑點轉(zhuǎn)成藍色。（4）硫酸：通用噴灑劑：5的濃硫酸乙醇溶液，或15濃硫酸正丁醇溶液，或濃硫酸醋酸（1：1）噴灑后處理：空氣中干燥15分鐘，再熱至110直至出現(xiàn)顏色或熒光。（5）硝酸銀氫氧化銨（Tollen-Zaffaroni）試劑：檢查還原性物質(zhì)。溶液I : 0.1%N硝酸銀; 溶液II: 5N氫氧化銨噴灑劑: I和II以1:5混合(臨用前混合)噴灑后處理: 105加熱510分鐘,至深黑色斑點出現(xiàn). (6)磷鉬酸或磷鎢酸,硅鎢酸:檢查還原性物質(zhì),類脂體,生物堿,甾體噴灑劑: 510%磷鉬酸或磷鎢酸或硅鎢

7、酸乙醇溶液噴灑后處理: 120加熱至斑點出現(xiàn).沉淀試劑: 1克硅鎢酸溶于20毫升水中,加10%鹽酸至強堿性. 生物堿  (7)硫酸?=硫酸:檢查生物堿及含碘化合物  噴灑劑: 0.1克硫酸?混懸于4毫升水中,加入1克三氯醋酸,加熱至沸,逐滴加入濃硫酸至澄清.  噴灑后處理: 110加熱數(shù)分鐘至斑點出現(xiàn).  (8)碘化鉍鉀(Dragendorff)試劑:檢查生物堿及其他含氟化合物.溶液I: 0.85克次硝酸鉍溶于10毫升冰醋酸40毫升水中溶劑II: 8克碘化鉀溶于20毫升水中.制備液I+II,等體積混合.可用于棕色瓶中保存較長時間,一般制備液可作沉淀試劑用

8、.噴灑液: 制備液1毫升與2毫升醋酸,10毫升水混合即得(9).碘化汞鉀(Mayer)試劑: 檢查生物堿.制備液: 13.55克氯化汞和49.8克碘化鉀各溶于20毫升水中,等體積混合并用水稀釋至1000毫升.噴灑液: 制備液加1/10體積的17%鹽酸.噴灑后處理: 觀察斑點,并于紫外線熒光分析燈下檢出.(10) ?酸納-濃硫酸(Mandelin)試劑:檢查生物堿.1%>酸納的濃硫酸溶液.與多種生物堿呈不同顏色.(11)碘碘化鉀(Wagner)試劑:檢查生物堿.1克碘及10克碘化鉀,溶于50毫升水中,加熱,加2毫升醋酸,再用水稀釋至100毫升.可作紙層板顯色劑,液可作沉淀試劑.酚類,鞣質(zhì)&

9、#160;(12)三氯化鐵:檢查酚類及?酸. 噴灑劑:15%三氯化鐵的水溶液或乙醇溶液.并加鹽酸少許.?酸呈紅色斑點,酚類稱藍色或綠色斑點. (13)鐵氰化鉀-三氯化鉀:檢查酚類,芳香胺類及還原性物質(zhì).噴灑劑: 1%鐵氰化鉀水溶液,2%三氯化鐵水溶液.臨用前等體積混合.噴灑后處理: 噴灑后酚性物質(zhì)呈藍色斑點.再噴2N鹽酸,能使顏色加深,紙譜可用烯鹽酸洗去噴灑液.(14) 4-胺基安替比林-鐵氰化鉀(Emerson反應(yīng)): 檢查酚類.噴灑劑: I . 2%4-氨基安替比林乙醇溶液;       II. 8%鐵氰化鉀水

10、溶液. 或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%鐵氰化鉀水溶液方法: 先噴灑I,再噴灑II,即顯色,或再放入密閉缸中,缸內(nèi)放25%氫氧化銨,即產(chǎn)生橙色至深紅色.(15) 對氨基苯磺酸,重氮鹽(Pauly試劑): 檢查酚類,芳香胺類及能偶合的雜環(huán)化合物. 噴灑劑: 4.5克對氨基苯磺酸,加熱溶于45毫升12N鹽酸中,用水稀釋至500毫升,取10毫升稀釋液用冰冷卻,加10毫升冷4.5%亞硝酸鈉水溶液,0放15分鐘(此試劑于0可保存3天),用前加等體積1%碳酸鈉水溶液.一般重氮化試劑,也可用聯(lián)苯胺,對硝基苯胺等.(16) 對甲苯磺酸: 檢查甾體,黃酮,鞣質(zhì).噴灑劑: 20%對甲苯磺

11、酸氯仿溶液.噴灑后處理: 100加熱數(shù)分鐘,紫外線分析燈下檢查熒光斑點.含氧雜環(huán)及蒽醌類*(17) 三氯化鋁: 檢查黃酮體.噴灑1%三氯化鋁乙醇液于紫外線熒光分析燈下檢示,呈黃色熒光(18)堿式醋酸鉛: 檢查黃酮體.噴灑劑: 飽和堿式醋酸鉛(或飽和醋酸鉛)水溶液.于紫外線熒光分析燈下檢查熒光斑點.(19)醋酸鎂: 檢查蒽醌甙,甙元及黃酮體噴灑劑: 0.5%醋酸鎂甲醇溶液方法: 90加熱5分鐘,呈紅色至紫色斑點.(20)氫氧化鉀: 檢查香豆素,蒽醌甙及甙元噴灑劑: 510%氫氧化鉀的甲醇溶液.于日光及紫外線熒光分析燈下檢示斑點.萜類,甾體(21) 三氯化銻(Carr-Price試劑): 檢查甾體

12、,萜類,皂類.噴灑劑: 25克三氯化銻溶于75克氯仿中(亦可以用氯仿或四氯化碳的飽和溶液).噴灑后處理: 100加熱5分鐘,于紫外線熒光分析燈下檢示熒光.(22) 五氯化銻: 檢查甾體,萜類,皂甙.噴灑劑: 五氯化銻-氯仿或四氯化碳(1:4),用前新鮮配制.噴灑后處理: 120加熱至斑點出現(xiàn),并于紫外線熒光分析燈下檢示.(23)香蘭醛-硫酸: 檢查高級醇類,酚類,甾體,萜類,芳香油.噴灑劑: 1克香蘭素溶于100毫升濃硫酸,或0.5克香蘭醛溶于100毫升硫酸-乙醇(4:1)中.噴灑后處理: 室溫或120加熱觀察顯色斑點.(24) 4-二甲氨基苯甲醛,醋酸,磷酸(E.P.試劑): 檢查? Azu

13、lene 及?前體 Proazulene.噴灑劑: 0.25克4-二甲氨基苯甲醛,溶于50毫升醋酸5克85磷酸和20毫升水的混合液中(棕色瓶中保存數(shù)月)  ?:烴室溫即成藍紫色斑點,>前體于80加熱10分鐘出現(xiàn)藍紫色斑點.  (25) 氯胺T三氯醋酸: 檢查強心甙.  噴灑劑: I. 3%氯仿T水溶液新鮮制備.         II. 25%三氯醋酸乙醇溶液(能保存數(shù)天).  10毫升I加40毫升II,用前混合. 噴灑后處理: 110加熱7分鐘,紫外線熒光分析

14、燈下檢示呈藍色或黃色熒光. (26) 亞硝酸基鐵氰化鈉-氫氧化鈉(Legal試劑): 檢查不飽和內(nèi)酯;甲基酮或活性次甲基,常用于強心甙噴灑劑: 1克亞硝基鐵氰化鈉溶于100毫升2N氫氧化鈉-乙醇(1:1)的水溶液.顯紅色或紫色斑點.         (27) 3,5-二硝基苯甲酸(Legal試劑): 檢查強心甙,-不飽和內(nèi)酯.噴灑劑: 1克3,5-二硝基苯甲酸溶于50毫升甲醇,加入1N氫氧化鉀50毫升.強心甙呈紫紅色斑點. 糖類(28) 鄰苯二甲基苯胺: 檢查還原糖.  噴灑劑: 0.

15、93克苯氨,1.66克鄰苯二甲酸溶于100毫升水飽和的正丁醇中.  噴灑后處理: 105加熱10分鐘.(29) 2,3,5-Triphenyl-tetrazolium chloride (T.T.C.)：檢查還原糖及其他還原物質(zhì)。 溶液I：4（T.T.C.）甲醇溶液；  溶液II：1N氫氧化鈉。噴灑液：I，II，臨用前等體積混合。噴灑后處理：100加熱510分鐘，得紅色斑點。（30）Keller-Kiliani試劑：檢查去氧糖，常用于強心甙。試液：100毫升冰醋酸加三氯化鐵試液0.5毫升混合均勻.試樣1毫克加試液2毫克溶解后,沿試官管壁滴入濃硫酸2毫升,接觸面即顯

16、棕色,漸變淺綠,藍色.最后冰醋酸層全部燃呈藍色.(31) 1,3-二羥基萘-磷酸: 檢查糖類.噴灑液: 0.2%1,3-二羥基萘(Naphthoresorcinol)乙醇溶液100毫升,與10毫升85%磷酸混合.  (32) 費林溶液(Fehling): 檢查還原糖.溶液I: 69.3克結(jié)晶硫酸銅溶于1000毫升水中.上述二溶液如不清可濾過.臨用前等體積混合. 氨基酸(33) 茚三酮: 檢查氨基酸及氨基糖.噴灑劑: 0.3克茚三酮溶于100毫升正丁醇,加入3毫升醋酸;或0.2克茚三酮溶于100毫升乙醇(或丙酮中).噴灑后處理: 110加熱至斑點出現(xiàn).(34) 吲哚醌: 檢查氨基酸和一些肽.噴灑劑: 0.2%吲哚醌(Isatin)丙酮溶液,含4%醋酸;或用100毫升1%吲哚醌丙酮溶液加10毫升醋酸.噴灑后處理: 100110加熱10分鐘.(35) 1,2-萘醌-4-硫磺酸(Folin試劑): 檢查氨基酸.噴灑劑: 新鮮制備0.02克1,2-萘醌-4-磺酸鈉,溶于100毫升5%碳酸鈉中.噴灑后處理: 室溫放于,不同氨基酸出現(xiàn)不同顏色.有機酸(36) 酸堿指示劑: 檢查有機酸.噴灑劑: 0.05%溴酚藍(或溴甲酚綠,或溴麝香草酚藍)的乙醇溶液.(37) 氧化