腸桿菌的鑒定t

1、主講人：主講人：小組成員：小組成員： 目錄目錄實驗目的及背景實驗方法實驗結果實驗結論實驗目的及意義實驗目的及意義實驗背景 腸桿科細菌是一大群生腸桿科細菌是一大群生物學性狀非常相似的革蘭氏物學性狀非常相似的革蘭氏陰性桿菌，它們的酶十分活陰性桿菌，它們的酶十分活躍，能分解多種糖和醇類。躍，能分解多種糖和醇類。因此腸桿菌科細菌鑒定主要因此腸桿菌科細菌鑒定主要依靠生化反應和血清學反應。依靠生化反應和血清學反應。 而本實驗中已得知所給而本實驗中已得知所給的混合菌種中含有大腸桿菌、的混合菌種中含有大腸桿菌、志賀菌和沙門菌三種?？梢乐举R菌和沙門菌三種?？梢揽可磻b定大腸桿菌，靠生化反應鑒定大腸桿菌，血清

2、學鑒定區(qū)分志賀菌和沙血清學鑒定區(qū)分志賀菌和沙門菌。門菌。實驗目的通過對三種腸桿菌科細通過對三種腸桿菌科細菌的鑒定實驗，全面的菌的鑒定實驗，全面的熟悉細菌常規(guī)鑒定程序熟悉細菌常規(guī)鑒定程序和方法，初步掌握細菌和方法，初步掌握細菌鑒定實驗操作技能，學鑒定實驗操作技能，學會正確觀察記錄實驗結會正確觀察記錄實驗結果以及分析歸納實驗資果以及分析歸納實驗資料，得出正確的鑒定結料，得出正確的鑒定結論并撰寫合格的細菌鑒論并撰寫合格的細菌鑒定實驗報告。定實驗報告。腸桿菌混合液（老師提供）實驗方法實驗方法實驗材料伊紅亞甲藍瓊脂平板培養(yǎng)基雙糖含鐵培養(yǎng)基單糖發(fā)酵管硫酸亞鐵半固體培養(yǎng)基普通肉湯培養(yǎng)基西蒙枸櫞酸鹽培養(yǎng)基生化

3、反應鑒別配置培養(yǎng)基分離菌株純化培養(yǎng)血清學鑒定實驗方法實驗方法平板分離法分離菌株平板分離法分離菌株：v取腸桿菌混合溶液涂布于EMB平板培養(yǎng)基上，37恒溫箱倒置培養(yǎng)24h 后。v挑選菌落形態(tài)、顏色不一致的菌落保存待用。v紫黑色的單個菌落，可初步定為可疑大腸埃希菌菌落，編號；光滑無色透明的單個菌落可初步定為不發(fā)酵乳糖的，可疑志賀菌屬或沙門菌屬菌落，編號。v取雙糖鐵高層瓊脂斜面培養(yǎng)基，無菌操作接種已編號的可疑菌落，送37恒溫箱培養(yǎng)24-48小時。v觀察可疑細菌在雙糖鐵瓊脂斜面的生長現(xiàn)象并記錄。（用酸堿指示劑檢測雙糖鐵瓊脂斜面和瓊脂高層的顏色變化）v取潔凈載玻片，以滅菌接種環(huán)取12環(huán)志賀菌屬多價診斷血清

4、放在玻片上，然后燒環(huán)。v待環(huán)冷卻后用環(huán)在菌種斜面菌苔上蘸取少量細菌與血清混合，先在血清邊緣處將細菌研磨開，然后再混勻。v輕輕搖動載玻片，一邊搖動，一邊將載玻片稍微傾斜對光觀察凝集現(xiàn)象。v每株可疑菌落接種以下培養(yǎng)基：糖發(fā)酵管（葡，乳，麥，甘，蔗）各1支，蛋白胨水一支，葡萄糖蛋白胨水2支，西蒙枸櫞酸鹽瓊脂斜面1支，硫酸亞鐵瓊脂半固體培養(yǎng)基1支，普通肉湯瓊脂半固體培養(yǎng)基1支。v接種完畢后，試管置于試管架上，送37恒溫箱培養(yǎng)24-48小時候觀察記錄于表格中。vEMB培養(yǎng)基腸桿菌分離培養(yǎng)實驗結果實驗結果可疑的志賀菌和沙門菌(光滑無色透明） 可疑大腸桿菌（紫黑色且在亮光下可有綠色金屬光澤）v雙糖鐵瓊脂斜面

5、培養(yǎng)實驗結果實驗結果疑沙門菌1疑志賀菌疑大腸菌疑沙門菌2B3 B4 B5 B6v對疑志賀菌（B4）的血清鑒定結果實驗結果實驗結果有白色凝集有白色凝集無凝集現(xiàn)象無凝集現(xiàn)象實驗結果實驗結果v對疑沙門菌（B3）的血清鑒定結果有白色凝集有白色凝集無凝集現(xiàn)象無凝集現(xiàn)象v動力測試（普通肉湯半固體培養(yǎng)）u大腸桿菌和可疑沙門菌均有運動趨勢，瓊脂顯渾濁。u可疑志賀菌則緊沿穿刺路線生長。實驗結果實驗結果從左至右依次為：可疑大腸桿菌（可疑大腸桿菌（+）、可疑沙門（）、可疑沙門（+）、可疑志賀（）、可疑志賀（-）實驗結果實驗結果v生化反應鑒定蛋白胨水（I吲哚）v生化反應鑒定葡萄糖蛋白胨水（M甲基紅）依次為：可疑大腸桿

6、菌（可疑大腸桿菌（+）、可疑沙門菌（）、可疑沙門菌（+）、可疑志賀菌（）、可疑志賀菌（-）實驗結果實驗結果v生化反應鑒定葡萄糖蛋白胨水（Vp）從左至右依次為：可疑大腸桿菌（可疑大腸桿菌（- -）、可疑沙）、可疑沙門菌（門菌（- -）、可疑志賀菌（）、可疑志賀菌（- -）實驗結果實驗結果v生化反應鑒定西蒙枸櫞酸鹽瓊脂斜面（C）可疑大腸桿菌（可疑大腸桿菌（-）、可疑沙門菌（）、可疑沙門菌（-）、可疑志賀菌（）、可疑志賀菌（-）實驗結果實驗結果v萄發(fā)酵管葡萄糖試管均從原來藍色變?yōu)辄S色，試管均從原來藍色變?yōu)辄S色，并且小試管均有小氣泡，并且小試管均有小氣泡，所以三種可疑菌均有產(chǎn)氣產(chǎn)酸所以三種可疑菌均有產(chǎn)

7、氣產(chǎn)酸實驗結果實驗結果 三支葡萄糖發(fā)酵管依次分別接種培養(yǎng)了可疑大腸桿菌、可疑志賀桿菌、沙門桿菌。試管均呈原來的藍色，并且小試管均有無小氣泡，所以三種可疑菌的蔗糖發(fā)酵為陰性。實驗結果實驗結果v萄發(fā)酵管蔗糖 三支葡萄糖發(fā)酵管依次分別接種培養(yǎng)了可疑大腸桿菌、可疑志賀桿菌、可疑沙門桿菌。從左至右：大腸桿菌、沙門菌均產(chǎn)氣產(chǎn)酸，志賀菌大腸桿菌、沙門菌均產(chǎn)氣產(chǎn)酸，志賀菌為陰性為陰性實驗結果實驗結果v萄發(fā)酵管麥芽糖 三支葡萄糖發(fā)酵管依次分別接種培養(yǎng)了可疑大腸桿菌、可疑沙門桿菌、可疑志賀桿菌。v萄發(fā)酵管甘露醇實驗結果實驗結果 三支葡萄糖發(fā)酵管依次分別接種培養(yǎng)了可疑大腸桿菌、可疑沙門桿菌、可疑志賀桿菌。試管均從原

8、來藍色變?yōu)辄S色，試管均從原來藍色變?yōu)辄S色，并且小試管均有小氣泡，并且小試管均有小氣泡，所以三種可疑菌均有產(chǎn)氣產(chǎn)酸所以三種可疑菌均有產(chǎn)氣產(chǎn)酸其中沙門菌顏色較淺，產(chǎn)酸較少。其中沙門菌顏色較淺，產(chǎn)酸較少。實驗結果實驗結果v萄發(fā)酵管乳糖 三支葡萄糖發(fā)酵管依次分別接種培養(yǎng)了可疑大腸桿菌、可疑沙門桿菌、可疑志賀桿菌。只有可疑志賀菌試管變?yōu)辄S色，只有可疑志賀菌試管變?yōu)辄S色，并且只有可疑志賀菌試管的小試管無并且只有可疑志賀菌試管的小試管無小氣泡，小氣泡，所以可疑大腸桿菌、沙門菌均產(chǎn)氣產(chǎn)所以可疑大腸桿菌、沙門菌均產(chǎn)氣產(chǎn)酸菌，志賀菌的乳糖發(fā)酵為陰性。酸菌，志賀菌的乳糖發(fā)酵為陰性?？梢删銭MB雙糖鐵生長現(xiàn)象B3略

9、K/A,H2S -/+B4略K/A,H2S-B5略A/A,H2S-B6略K/A,H2S -/+腸桿菌科細菌初步鑒定結果記錄腸桿菌科細菌初步鑒定結果記錄表表實驗結果實驗結果表表 腸桿菌科部分細菌重要生物學特征腸桿菌科部分細菌重要生物學特征（ 產(chǎn)酸產(chǎn)氣，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，+產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，-不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣）不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣） 細菌編號糖發(fā)酵試驗吲哚甲基紅VP枸櫞酸鹽利用動力志賀菌屬多價判斷血清沙門菌屬多價判斷血清葡萄糖乳糖麥芽糖甘露醇蔗糖B3 -+-+ -+B4-+ -B5-+-+-實驗結果實驗結果實驗結論實驗結論根據(jù)B3和B4、B6的EMB菌落特點可初步判斷這三個菌落為致病菌落。經(jīng)過雙糖鐵純化培養(yǎng)后，B3和B6為H2S陽性，可初步診斷B3和B6為沙門菌屬。B4的雙糖鐵純化后為K/A及H2S陰性，可初步診斷為志賀菌屬。分別對B3和B4進行血清學鑒定，結果與初步診斷的預測一致，即B3在沙門菌屬血清中發(fā)生凝集反應，B4在志賀菌屬血清中發(fā)生凝集反應，由此可以肯定B3為沙門菌屬。根據(jù)實驗結