輸血前配合性試驗(yàn)技術(shù)

1、1輸血前配合性試驗(yàn)技術(shù)輸血前配合性試驗(yàn)技術(shù)2主要內(nèi)容主要內(nèi)容一、一、ABOABO和和RhRh血型鑒定血型鑒定二、抗體篩選和鑒定二、抗體篩選和鑒定三、交叉配血試驗(yàn)三、交叉配血試驗(yàn)四、抗人球蛋白試驗(yàn)四、抗人球蛋白試驗(yàn)五、血小板輸注前的抗體檢測(cè)及配合試驗(yàn)五、血小板輸注前的抗體檢測(cè)及配合試驗(yàn)六、血漿輸注前配合試驗(yàn)六、血漿輸注前配合試驗(yàn)3輸血風(fēng)險(xiǎn)輸血風(fēng)險(xiǎn)4 血型定型是基礎(chǔ)血型定型是基礎(chǔ) 目的：準(zhǔn)確定型，選擇目的：準(zhǔn)確定型，選擇相容相容血液血液 意義：輸血安全、有效意義：輸血安全、有效5一、一、ABOABO和和RhRh血型鑒定血型鑒定1.ABO1.ABO定型定型 最適的反應(yīng)溫度為最適的反應(yīng)溫度為44，但在

2、室溫反應(yīng)，但在室溫反應(yīng)良好，常規(guī)的良好，常規(guī)的ABOABO定型試驗(yàn)僅在室溫進(jìn)行。定型試驗(yàn)僅在室溫進(jìn)行。6紅細(xì)胞常規(guī)紅細(xì)胞常規(guī)ABOABO定性定性 血型血型 正定型正定型 反定型反定型 抗抗 A A 抗抗 B Ac Bc B Ac Bc OcOc A + - - A + - - + -+ - B - + + B - + + - - - O - - + O - - + + -+ - AB + + - - AB + + - - - -7鑒定方法介紹鑒定方法介紹1 1）玻片法、試管法）玻片法、試管法( (經(jīng)典方法經(jīng)典方法) ) 玻片法和試管法的實(shí)驗(yàn)原理基本相同，二者的共同點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，玻片法只做正定型

3、,試管法進(jìn)行ABO血型鑒定的正定型和反定型。 缺點(diǎn)：操作不易自動(dòng)化、批量化、結(jié)果缺點(diǎn)：操作不易自動(dòng)化、批量化、結(jié)果不易保存不易保存82 2）微柱凝膠法）微柱凝膠法 過濾介質(zhì)為顆粒直徑過濾介質(zhì)為顆粒直徑26-103 nm26-103 nm的葡聚糖的葡聚糖100100凝膠，凝膠，凝膠間縫隙只允許游離紅細(xì)胞通過，與抗凝膠間縫隙只允許游離紅細(xì)胞通過，與抗 體反應(yīng)的紅細(xì)胞不能通過。體反應(yīng)的紅細(xì)胞不能通過。 工作程序和結(jié)果的判讀易于標(biāo)準(zhǔn)化，自動(dòng)化。該工作程序和結(jié)果的判讀易于標(biāo)準(zhǔn)化，自動(dòng)化。該實(shí)驗(yàn)方法還具有所需標(biāo)本少、結(jié)果準(zhǔn)確、抗干擾實(shí)驗(yàn)方法還具有所需標(biāo)本少、結(jié)果準(zhǔn)確、抗干擾能力強(qiáng)、溶血和脂血影響少、重復(fù)性

4、好等優(yōu)點(diǎn)，能力強(qiáng)、溶血和脂血影響少、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，有利于實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制，提高工作效率有利于實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制，提高工作效率。9微柱凝膠法結(jié)果微柱凝膠法結(jié)果10 3 3）PCRPCR血型基因分型血型基因分型 包括包括PCR-SSP(PCR-PCR-SSP(PCR-序列特異性引物序列特異性引物) )技術(shù)、技術(shù)、 PCR-SSO(PCR-PCR-SSO(PCR-序列特異性寡核序列特異性寡核苷酶探針苷酶探針) )技術(shù)、技術(shù)、PCR-SSCP(PCR-PCR-SSCP(PCR-單鏈構(gòu)單鏈構(gòu)象多態(tài)性象多態(tài)性) )技術(shù)、基因芯片等。技術(shù)、基因芯片等。11 基因分型技術(shù)的應(yīng)用：基因分型技術(shù)的應(yīng)用： 疑難血型

5、鑒定：疑難血型鑒定：ABO ABO 血型亞型的鑒定、血型亞型的鑒定、血型抗原減弱個(gè)體的血型鑒定、抗體消血型抗原減弱個(gè)體的血型鑒定、抗體消失的血型鑒定、獲得性失的血型鑒定、獲得性B B的鑒定等的鑒定等 直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性的患者血型鑒直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性的患者血型鑒定定 親子鑒定及法醫(yī)應(yīng)用等親子鑒定及法醫(yī)應(yīng)用等124) ABO4) ABO血型的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血型的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) 方法和原理是用熒光素標(biāo)記人源抗方法和原理是用熒光素標(biāo)記人源抗-A-A、抗、抗- -B B 單克隆抗體，與待測(cè)標(biāo)本中的紅細(xì)胞反單克隆抗體，與待測(cè)標(biāo)本中的紅細(xì)胞反應(yīng)應(yīng), ,然后用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)待測(cè)標(biāo)本中細(xì)胞然后用流式細(xì)胞

6、術(shù)檢測(cè)待測(cè)標(biāo)本中細(xì)胞與抗與抗-A-A、抗、抗-B -B 單克隆抗體的結(jié)合情況單克隆抗體的結(jié)合情況 成本高、操作復(fù)雜成本高、操作復(fù)雜, ,非常規(guī)方法非常規(guī)方法 利用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)孕婦血流中微量的胎兒利用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)孕婦血流中微量的胎兒紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)可以實(shí)現(xiàn)非侵入性胎兒血紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)可以實(shí)現(xiàn)非侵入性胎兒血型鑒定型鑒定13 抗原抗體比例：一般認(rèn)為增加抗體量能提抗原抗體比例：一般認(rèn)為增加抗體量能提高檢測(cè)敏感性，極少有顯著性抗體過量而高檢測(cè)敏感性，極少有顯著性抗體過量而抑制凝集反應(yīng)者（抑制凝集反應(yīng)者（前帶現(xiàn)象前帶現(xiàn)象）。）。2 2滴血清滴血清+1+1滴滴 2% 2%5%5%紅細(xì)胞紅細(xì)胞必要時(shí)血清增加到必

7、要時(shí)血清增加到10102020滴滴 前帶現(xiàn)象前帶現(xiàn)象：一種抗原：一種抗原- -抗體反應(yīng)的現(xiàn)象。以定量抗原檢測(cè)抗體反應(yīng)的現(xiàn)象。以定量抗原檢測(cè)抗體，若抗體過剩，可使所形成的免疫復(fù)合物反而減少，抗體，若抗體過剩，可使所形成的免疫復(fù)合物反而減少，而不出現(xiàn)凝集。而不出現(xiàn)凝集。14 鹽水試驗(yàn)多采用鹽水試驗(yàn)多采用立即立即離心法離心法, ,正確的操作是正確的操作是紅細(xì)胞懸液加到血清后立即離心并觀察結(jié)紅細(xì)胞懸液加到血清后立即離心并觀察結(jié)果。反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)而延誤立即離心的時(shí)間果。反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)而延誤立即離心的時(shí)間對(duì)對(duì)ABOABO血型系統(tǒng)的抗體檢出影響較大。血型系統(tǒng)的抗體檢出影響較大。 如果在室溫放置如果在室溫放置2

8、2分鐘后離心分鐘后離心, ,可能使凝可能使凝集減弱集減弱, ,并伴有溶血現(xiàn)象。并伴有溶血現(xiàn)象。 如果在室溫放置如果在室溫放置5 5分鐘后離心分鐘后離心, ,原有的凝原有的凝集可能消失集可能消失, ,并有溶血。并有溶血。15常規(guī)定型試劑要求常規(guī)定型試劑要求 第一、高度特異，只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞第一、高度特異，只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集抗原發(fā)生凝集 第二、抗第二、抗A A血清效價(jià)在血清效價(jià)在1 1：128128以上，抗以上，抗B B血清效價(jià)在血清效價(jià)在1 1：6464以上以上 第三、親和力要求抗體和抗原發(fā)生的速第三、親和力要求抗體和抗原發(fā)生的速度應(yīng)在兩者相加后度應(yīng)在兩者相加后1515秒內(nèi)出現(xiàn)凝集

9、，其秒內(nèi)出現(xiàn)凝集，其強(qiáng)度為強(qiáng)度為3 3分鐘時(shí)凝塊不小于分鐘時(shí)凝塊不小于1mm1mm2 2 第四，冷凝集素效價(jià)在第四，冷凝集素效價(jià)在1 1：4 4以下以下16ABOABO定型試驗(yàn)中的常見問題定型試驗(yàn)中的常見問題 1 1）技術(shù)和管理錯(cuò)誤：標(biāo)本、試劑、）技術(shù)和管理錯(cuò)誤：標(biāo)本、試劑、 器材原因；器材原因；離心力過度或不足；陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未離心力過度或不足；陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識(shí)別；漏加試劑、結(jié)果記錄和判斷錯(cuò)誤；細(xì)能識(shí)別；漏加試劑、結(jié)果記錄和判斷錯(cuò)誤；細(xì)胞與血清間比例不適當(dāng)。胞與血清間比例不適當(dāng)。 2 2）血清異常：）血清異常：WhartonWharton膠或血清蛋白引起緡膠或血清蛋白引起緡

10、錢狀形成，影響反定型結(jié)果。錢狀形成，影響反定型結(jié)果。 3 3）紅細(xì)胞致敏：受免疫球蛋白致敏的紅細(xì)胞，）紅細(xì)胞致敏：受免疫球蛋白致敏的紅細(xì)胞，在含高蛋白介質(zhì)的試劑中，可發(fā)生凝集。在含高蛋白介質(zhì)的試劑中，可發(fā)生凝集。 4 4）異?；蛐停海┊惓；蛐停篈BOABO亞型的檢查中，亞型的檢查中，A A、B B抗抗 原可能為弱抗原，難以檢出。原可能為弱抗原，難以檢出。17 5 5）近期輸血：試驗(yàn)前輸入）近期輸血：試驗(yàn)前輸入ABOABO血型不一致的紅細(xì)血型不一致的紅細(xì)胞，使血液標(biāo)本成為混合血型的紅細(xì)胞懸液，定胞，使血液標(biāo)本成為混合血型的紅細(xì)胞懸液，定型時(shí)顯示型時(shí)顯示“混合外觀凝集混合外觀凝集”現(xiàn)象?，F(xiàn)象。

11、 6 6）嵌合體血型（開米拉，）嵌合體血型（開米拉，chimerismchimerism）: :這種血型這種血型者體內(nèi)有兩類紅細(xì)胞群體，定型時(shí)可以出現(xiàn)者體內(nèi)有兩類紅細(xì)胞群體，定型時(shí)可以出現(xiàn)“混混合外觀凝集合外觀凝集”現(xiàn)象?，F(xiàn)象。 7 7）疾病因素導(dǎo)致抗原減弱：某些白血病患者和難）疾病因素導(dǎo)致抗原減弱：某些白血病患者和難治性貧血患者等。治性貧血患者等。 8 8）紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象：紅細(xì)胞因遺傳或獲得性的）紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象：紅細(xì)胞因遺傳或獲得性的表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。18 9 9）獲得性）獲得性B B：由于革蘭陰性桿菌的作用，紅細(xì)胞可：由于革蘭陰性桿菌的作用，紅細(xì)胞可獲

12、得獲得“類類B”B”的活性。的活性。 1010）血型特異性物質(zhì)過高：一些卵巢囊腫病例，血）血型特異性物質(zhì)過高：一些卵巢囊腫病例，血型物質(zhì)的濃度很高，可中和抗型物質(zhì)的濃度很高，可中和抗A A和抗和抗B B定型試劑，要定型試劑，要得到正確的正定型結(jié)果得到正確的正定型結(jié)果，必須洗滌紅細(xì)胞多次。必須洗滌紅細(xì)胞多次。 1111）近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療：由于使用大）近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療：由于使用大量的非同型的血漿作置換治療，造成反定型錯(cuò)誤。量的非同型的血漿作置換治療，造成反定型錯(cuò)誤。 1212）異常的血漿蛋白：受檢者血漿中異常的白蛋白、）異常的血漿蛋白：受檢者血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例和

13、高濃度的纖維蛋白原等導(dǎo)致緡錢狀形球蛋白比例和高濃度的纖維蛋白原等導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象。成，造成假凝集現(xiàn)象。19 13 13）不規(guī)則抗體的存在）不規(guī)則抗體的存在 1414）低丙種球蛋白血癥）低丙種球蛋白血癥: :低丙種球蛋白血癥（丙種球低丙種球蛋白血癥（丙種球蛋白量減低）病例，可能會(huì)因免疫球蛋白水平下降蛋白量減低）病例，可能會(huì)因免疫球蛋白水平下降而使血清定型時(shí)不凝集或弱凝集反應(yīng)。而使血清定型時(shí)不凝集或弱凝集反應(yīng)。 1515）藥物等因素：藥物、右旋糖酐及靜脈注射某些）藥物等因素：藥物、右旋糖酐及靜脈注射某些造影劑引起紅細(xì)胞凝集或類似凝集。造影劑引起紅細(xì)胞凝集或類似凝集。 1616）年齡因

14、素：免疫系統(tǒng)尚未健全的嬰兒、由母親）年齡因素：免疫系統(tǒng)尚未健全的嬰兒、由母親被動(dòng)獲得抗體的嬰兒，或抗體水平下降的老人，試被動(dòng)獲得抗體的嬰兒，或抗體水平下降的老人，試驗(yàn)時(shí)可出現(xiàn)異常的結(jié)果。驗(yàn)時(shí)可出現(xiàn)異常的結(jié)果。 1717）防腐劑因素）防腐劑因素20 正反定型不符的解決正反定型不符的解決 正定型中意外陽性或陰性的解決辦法：正定型中意外陽性或陰性的解決辦法： 加入自身對(duì)照加入自身對(duì)照 增加血清增加血清/ /細(xì)胞比例細(xì)胞比例 降低孵育溫度降低孵育溫度, ,延長(zhǎng)孵育時(shí)間延長(zhǎng)孵育時(shí)間 4 /22 /37 15min-30min4 /22 /37 15min-30min 鏡檢鏡檢 洗滌紅細(xì)胞洗滌紅細(xì)胞 用不

15、同來源的抗體試驗(yàn)用不同來源的抗體試驗(yàn) 用人源性試劑作吸收放散用人源性試劑作吸收放散( (并作相應(yīng)對(duì)照并作相應(yīng)對(duì)照) )21 反定型中意外陽性或陰性的解決辦法：反定型中意外陽性或陰性的解決辦法： 血清和篩選A1細(xì)胞陽性、A2細(xì)胞陰性、自身陰性：可能是含有抗A1的A或AB型 部分篩選細(xì)胞陽性、自身陰性：血清中含有意外抗體,用一組譜細(xì)胞,確定抗體特異性 室溫鹽水反應(yīng)抗體：MN、P、Lewis 排除冷抗體及緡錢狀凝集 排除多凝集 22正反定型不一致的思考及解決正反定型不一致的思考及解決1 1）首先考慮人為因素和試劑因素。）首先考慮人為因素和試劑因素。 重新采集血樣，核對(duì)試劑、離心條件等重新采集血樣，核

16、對(duì)試劑、離心條件等2 2）分析可能導(dǎo)致正、反定型不一致的原因）分析可能導(dǎo)致正、反定型不一致的原因3 3）針對(duì)性試驗(yàn)驗(yàn)證）針對(duì)性試驗(yàn)驗(yàn)證23ABOABO正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗抗A A 抗抗B B 抗抗A,B Ac Bc OcA,B Ac Bc Oc 2 2 4 4 4 4 3 3 2 2 2 2 分析：患者血型可能是分析：患者血型可能是B B型，體內(nèi)有冷凝集型，體內(nèi)有冷凝集素。素。 輸血：確認(rèn)血型之前可輸輸血：確認(rèn)血型之前可輸O O型洗滌紅細(xì)胞，型洗滌紅細(xì)胞，確認(rèn)后輸確認(rèn)后輸B B型紅細(xì)胞。型紅細(xì)胞。24ABOABO正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗抗A A 抗抗

17、B B 抗抗A,B Ac Bc OcA,B Ac Bc Oc 4 4 4 4 2 2 4 4 2 2 分析：患者的血型可能是分析：患者的血型可能是A A型。型。 巨球蛋白血癥或部分多發(fā)性骨髓瘤患者，巨球蛋白血癥或部分多發(fā)性骨髓瘤患者，血液中異常球蛋白升高，導(dǎo)致緡錢狀凝集。血液中異常球蛋白升高，導(dǎo)致緡錢狀凝集。 輸血：輸血：A A型紅細(xì)胞、血小板型紅細(xì)胞、血小板25ABOABO正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析 抗抗A A 抗抗B B 抗抗A,B Ac Bc A,B Ac Bc OcOc 4 4 2 2 4 4 3 3 分析：患者血型可能是分析：患者血型可能是A A型，獲得性型，獲得性B

18、B。 核對(duì)患者診斷，進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)。核對(duì)患者診斷，進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)。 輸血：輸血：A A型紅細(xì)胞型紅細(xì)胞26正反定性不符病歷正反定性不符病歷 正定型正定型 反定型反定型 抗抗A A 抗抗B B 抗抗A A1 1 Ac Bc Oc Ac Bc Oc 4+ - 4+ 1+ 2+ - 4+ - 4+ 1+ 2+ - 患者患者 王某王某 女女 6060歲歲 低蛋白血癥，重度貧血。抗低蛋白血癥，重度貧血?？贵w篩選使用聚凝胺法、體篩選使用聚凝胺法、 抗人球法均陰性抗人球法均陰性 ，顯示血型，顯示血型正反定型不符。結(jié)果有待正反定型不符。結(jié)果有待PCRPCR基因分型進(jìn)一步確認(rèn)?；蓟蚍中瓦M(jìn)一步確認(rèn)?；颊哒? 5月月

19、2727日日Hb 50g/LHb 50g/L，情況差，情況差, ,當(dāng)日給予輸注配合的當(dāng)日給予輸注配合的O O型型洗滌紅胞洗滌紅胞2U2U，于，于5 5月月2828日再次檢測(cè)日再次檢測(cè)HbHb達(dá)達(dá)69g/L69g/L，顯示紅，顯示紅細(xì)胞輸注有效。細(xì)胞輸注有效。27正反定型的意義正反定型的意義 準(zhǔn)確的血型判定利于指導(dǎo)臨床用血準(zhǔn)確的血型判定利于指導(dǎo)臨床用血 發(fā)現(xiàn)亞型發(fā)現(xiàn)亞型 抗原強(qiáng)度的改變與疾病相關(guān)抗原強(qiáng)度的改變與疾病相關(guān) 新抗原出現(xiàn)與疾病相關(guān)新抗原出現(xiàn)與疾病相關(guān) 排除假陰性或假陽性結(jié)果干擾排除假陰性或假陽性結(jié)果干擾28 美國美國FDAFDA分析了分析了1976197619851985年間輸血導(dǎo)年間

20、輸血導(dǎo)致的死亡原因，發(fā)現(xiàn)致的死亡原因，發(fā)現(xiàn)ABOABO血型錯(cuò)誤輸血導(dǎo)致血型錯(cuò)誤輸血導(dǎo)致的死亡占總死亡數(shù)的的死亡占總死亡數(shù)的5151。而這種錯(cuò)誤一。而這種錯(cuò)誤一般都是般都是責(zé)任事故責(zé)任事故，基本沒有技術(shù)原因，主，基本沒有技術(shù)原因，主要與管理有關(guān)。要與管理有關(guān)。 292 2RhRh血型鑒定血型鑒定 RhRh血型鑒定方法血型鑒定方法1)1)鹽水法鹽水法 常規(guī)檢測(cè)常規(guī)檢測(cè)RhDRhD抗原抗原, ,單克隆單克隆RhDRhD診斷試劑診斷試劑IgM IgM 2)2)抗人球蛋白法或酶介質(zhì)法抗人球蛋白法或酶介質(zhì)法 RhRh抗體屬抗體屬IgGIgG類，一般不能在鹽水介質(zhì)類，一般不能在鹽水介質(zhì)中與紅細(xì)胞發(fā)生凝集，中

21、與紅細(xì)胞發(fā)生凝集，IgMIgM型抗體鹽水介質(zhì)型抗體鹽水介質(zhì)陰性時(shí)，必須加做陰性時(shí)，必須加做IgGIgG型抗人球蛋白法或酶型抗人球蛋白法或酶介質(zhì)法介質(zhì)法3)3)微柱凝膠法微柱凝膠法30 D D抗原決定抗原決定RhRh是否陽性。是否陽性。 Rh Rh陰性分布頻率：白種人陰性分布頻率：白種人151520%20% 中國人中國人 0.4% 0.4% 中國漢族中國漢族0.34%0.34%3132RhRh血型鑒定出現(xiàn)假陽性的原因血型鑒定出現(xiàn)假陽性的原因 1 1）受檢細(xì)胞已被免疫球蛋白致敏，或標(biāo)本）受檢細(xì)胞已被免疫球蛋白致敏，或標(biāo)本血清中含有引起紅細(xì)胞凝集的因子。血清中含有引起紅細(xì)胞凝集的因子。 2 2）受檢

22、細(xì)胞與抗血清孵育的時(shí)間過長(zhǎng)，含）受檢細(xì)胞與抗血清孵育的時(shí)間過長(zhǎng)，含高蛋白的定型試劑會(huì)引起緡錢狀形成。高蛋白的定型試劑會(huì)引起緡錢狀形成。 3 3）標(biāo)本抗凝不當(dāng)，受檢過程中出現(xiàn)凝血或）標(biāo)本抗凝不當(dāng)，受檢過程中出現(xiàn)凝血或小的纖維蛋白凝塊，誤判為陽性。小的纖維蛋白凝塊，誤判為陽性。33 4 4）定型血清中含有事先未被檢測(cè)的其它）定型血清中含有事先未被檢測(cè)的其它特異性抗體，造成假陽性定型結(jié)果。特異性抗體，造成假陽性定型結(jié)果。 5 5）多凝集細(xì)胞造成定型的假陽性。）多凝集細(xì)胞造成定型的假陽性。 6 6）鑒定器材或抗血清被污染，造成假陽）鑒定器材或抗血清被污染，造成假陽性。性。34RhRh血型鑒定出現(xiàn)假陰性

23、的原因血型鑒定出現(xiàn)假陰性的原因 1 1）受檢細(xì)胞懸液濃度太高，與抗血清比）受檢細(xì)胞懸液濃度太高，與抗血清比例失調(diào)。例失調(diào)。 2 2）漏加或錯(cuò)加定型血清。）漏加或錯(cuò)加定型血清。 3 3）離心后重懸細(xì)胞扣時(shí)，搖動(dòng)用力過度，）離心后重懸細(xì)胞扣時(shí)，搖動(dòng)用力過度，搖散微弱的凝集。搖散微弱的凝集。 4 4）抗血清保存不當(dāng)，導(dǎo)致失效。）抗血清保存不當(dāng)，導(dǎo)致失效。 5 5）定型血清的使用方法錯(cuò)誤，沒有按說）定型血清的使用方法錯(cuò)誤，沒有按說明書進(jìn)行。明書進(jìn)行。35弱弱D D型型 弱弱D D抗原與大部分鹽水抗抗原與大部分鹽水抗D D試劑不產(chǎn)生直試劑不產(chǎn)生直接凝集反應(yīng)，而與部分的接凝集反應(yīng)，而與部分的IgGIgG抗

24、抗D D血清用血清用間接抗人球蛋白試驗(yàn)反應(yīng)陽性。間接抗人球蛋白試驗(yàn)反應(yīng)陽性。 因此當(dāng)我們初次得到因此當(dāng)我們初次得到RhRh陰性結(jié)果時(shí)，必陰性結(jié)果時(shí)，必須進(jìn)行須進(jìn)行Rh(D)Rh(D)陰性確認(rèn)試驗(yàn)，即用三種不陰性確認(rèn)試驗(yàn)，即用三種不同批號(hào)的同批號(hào)的IgGIgG抗抗D D定型，如果全部陰性方定型，如果全部陰性方可認(rèn)為該被檢者為可認(rèn)為該被檢者為Rh(D)Rh(D)陰性，否則，只陰性，否則，只要有一批為陽性，則可認(rèn)為是弱要有一批為陽性，則可認(rèn)為是弱D D型。型。36 弱弱D D型的臨床意義型的臨床意義 盡管弱盡管弱D D比正常陽性細(xì)胞抗原弱比正常陽性細(xì)胞抗原弱 ，但輸給，但輸給Rh(D)Rh(D)陰陰

25、 性的受血者后，性的受血者后， 自然有免疫產(chǎn)生抗自然有免疫產(chǎn)生抗D D的可能。同時(shí)的可能。同時(shí)若接受若接受Rh(D)Rh(D)陽性的細(xì)胞后，弱陽性的細(xì)胞后，弱D D型人也有可能產(chǎn)生型人也有可能產(chǎn)生 抗抗D D抗體。因此，作為供血者，弱抗體。因此，作為供血者，弱D D型歸類為型歸類為Rh(D) Rh(D) 陽性陽性 ，作為受血者弱，作為受血者弱D D型歸類為型歸類為Rh(D)Rh(D)陰性。陰性。 獻(xiàn)血者為弱獻(xiàn)血者為弱D D型，作為型，作為RhDRhD陽性血液陽性血液(AABB(AABB標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)) ) 受血者為弱受血者為弱D D型，作為型，作為RhDRhD陰性受血者陰性受血者(AABB(AABB

26、標(biāo)準(zhǔn)）標(biāo)準(zhǔn)）37 紅細(xì)胞紅細(xì)胞其他血型系統(tǒng)其他血型系統(tǒng) KellKell血型系統(tǒng)血型系統(tǒng) 在該血型系統(tǒng)的二個(gè)基在該血型系統(tǒng)的二個(gè)基因座上共有四個(gè)抗原：因座上共有四個(gè)抗原：K K與與k,k,和和KpaKpa與與KpbKpb。 K K與與k k抗原都具有一定程度的免疫原性。因抗原都具有一定程度的免疫原性。因中國人幾乎中國人幾乎100%K100%K抗原陰性，故無抗抗原陰性，故無抗-K-K。凝凝聚胺法無法檢測(cè)聚胺法無法檢測(cè)K K抗原和抗體。因此，凝聚抗原和抗體。因此，凝聚胺法只適合中國人。胺法只適合中國人。38二、不規(guī)則抗體篩選和鑒定二、不規(guī)則抗體篩選和鑒定1 1）抗體篩選）抗體篩選 所謂不規(guī)則抗體是

27、指抗所謂不規(guī)則抗體是指抗A A和抗和抗B B以外的血型抗體。以外的血型抗體。 篩選細(xì)胞篩選細(xì)胞 通常是由通常是由2-32-3個(gè)單人份的個(gè)單人份的O O型紅細(xì)胞組成一套篩選型紅細(xì)胞組成一套篩選細(xì)胞試劑，包括以下常見的抗原：細(xì)胞試劑，包括以下常見的抗原：RhRh系統(tǒng)系統(tǒng) 、MNSsMNSs系統(tǒng)、系統(tǒng)、P P系統(tǒng)、系統(tǒng)、LewisLewis系統(tǒng)、系統(tǒng)、DuffyDuffy系統(tǒng)等。不能將系統(tǒng)等。不能將過多人份紅細(xì)胞混合，以避免紅細(xì)胞混合后，對(duì)過多人份紅細(xì)胞混合，以避免紅細(xì)胞混合后，對(duì)弱抗原紅細(xì)胞的稀釋。弱抗原紅細(xì)胞的稀釋。39 抗體篩選試驗(yàn)可在交叉配合試驗(yàn)之前進(jìn)抗體篩選試驗(yàn)可在交叉配合試驗(yàn)之前進(jìn)行或一

28、起進(jìn)行，這樣有利于對(duì)患者抗體行或一起進(jìn)行，這樣有利于對(duì)患者抗體的早期確認(rèn)及鑒定臨床上具有意義的抗的早期確認(rèn)及鑒定臨床上具有意義的抗體，避免一些可能的情況而造成病情的體，避免一些可能的情況而造成病情的延誤。延誤。大約有大約有0.3%0.3% 2%2%的群體血清中含有的群體血清中含有同種抗體同種抗體。40 2 2）抗體鑒定）抗體鑒定 自身細(xì)胞檢查：觀察患者（受者）的自身細(xì)胞檢查：觀察患者（受者）的血清與患者（受者）自身細(xì)胞的反應(yīng)情血清與患者（受者）自身細(xì)胞的反應(yīng)情況，確定血清內(nèi)是否有自身抗體和同種況，確定血清內(nèi)是否有自身抗體和同種抗體二者同時(shí)存在。抗體二者同時(shí)存在。41 使用試劑細(xì)胞中的譜細(xì)胞（使

29、用試劑細(xì)胞中的譜細(xì)胞（panel panel cellcell）應(yīng)用各種抗體檢查技術(shù)，檢測(cè)患）應(yīng)用各種抗體檢查技術(shù)，檢測(cè)患者的血清，確定其抗體的特異性。者的血清，確定其抗體的特異性。 當(dāng)患者體內(nèi)的同種抗體有二種或二種當(dāng)患者體內(nèi)的同種抗體有二種或二種以以 上時(shí)，可采用吸收放散試驗(yàn)。上時(shí)，可采用吸收放散試驗(yàn)。42 譜細(xì)胞：譜細(xì)胞： 一般是由8-16人份的已知血型表現(xiàn) 型 O型紅細(xì)胞組成，具有各種不同的抗 原成分 ，根據(jù)譜紅細(xì)胞的反應(yīng)格局一 般可以鑒定常見的抗體。43 方法方法： 作抗體鑒定時(shí)，必須靈活應(yīng)用鹽水法、作抗體鑒定時(shí)，必須靈活應(yīng)用鹽水法、抗人球蛋白試驗(yàn)、聚凝胺（抗人球蛋白試驗(yàn)、聚凝胺（Po

30、lybrenePolybrene）法）法及凝膠法等各種技術(shù)，再結(jié)合吸收放散等及凝膠法等各種技術(shù)，再結(jié)合吸收放散等血清學(xué)手段，對(duì)抗體的特異性作分析。血清學(xué)手段，對(duì)抗體的特異性作分析。4445結(jié)果的判讀和解釋結(jié)果的判讀和解釋 溶血溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反應(yīng)陽性結(jié)果。先觀察有無溶血，后觀察反應(yīng)陽性結(jié)果。先觀察有無溶血，后觀察有無凝集。有無凝集。 記錄結(jié)果，并與以前結(jié)果對(duì)照。記錄結(jié)果，并與以前結(jié)果對(duì)照。46結(jié)果的判讀和解釋結(jié)果的判讀和解釋 抗體篩選試驗(yàn)抗體篩選試驗(yàn)不一定能檢出所有臨床意義的抗不一定能檢出所有臨床意義的抗體，抗低頻率抗原的抗體或有劑量效應(yīng)的抗

31、體，體，抗低頻率抗原的抗體或有劑量效應(yīng)的抗體，可能被漏檢。這時(shí)需要安排抗原性更完全和特可能被漏檢。這時(shí)需要安排抗原性更完全和特異性更強(qiáng)的篩選細(xì)胞做試驗(yàn)，或用敏感度更高異性更強(qiáng)的篩選細(xì)胞做試驗(yàn)，或用敏感度更高的技術(shù)做檢查。的技術(shù)做檢查。 與純合子抗原紅細(xì)胞反應(yīng)較強(qiáng)的抗體被稱為具有與純合子抗原紅細(xì)胞反應(yīng)較強(qiáng)的抗體被稱為具有“劑量效應(yīng)劑量效應(yīng)”，具有劑量效應(yīng)的血型系統(tǒng)包括具有劑量效應(yīng)的血型系統(tǒng)包括RhRh（D D除外）、除外）、KiddKidd、DuffyDuffy、MNSsMNSs、LutheranLutheran系統(tǒng)。劑量效應(yīng)在系統(tǒng)。劑量效應(yīng)在MNMN血型系統(tǒng)和血型系統(tǒng)和RhRh血型系統(tǒng)比較明顯

32、，血型系統(tǒng)比較明顯，在在ABOABO血型等其他系統(tǒng)不明顯。血型等其他系統(tǒng)不明顯。47三、交叉配血三、交叉配血 交叉配血試驗(yàn)也稱交叉配血試驗(yàn)也稱配合性試驗(yàn)配合性試驗(yàn)，實(shí)際上，實(shí)際上是檢查不配合性，使病人，獻(xiàn)血者血液是檢查不配合性，使病人，獻(xiàn)血者血液之間沒有可測(cè)到的不相配合的抗原、抗之間沒有可測(cè)到的不相配合的抗原、抗體成分，試驗(yàn)應(yīng)在體成分，試驗(yàn)應(yīng)在3737下進(jìn)行。在配血下進(jìn)行。在配血的任何步驟中均不產(chǎn)生溶血或凝集獻(xiàn)血的任何步驟中均不產(chǎn)生溶血或凝集獻(xiàn)血者的血液才能給予病人輸注。者的血液才能給予病人輸注。48 交叉配血包括：交叉配血包括： 1)1)主側(cè)配血主側(cè)配血: : 受血者血清對(duì)供者紅細(xì)胞，受血者

33、血清對(duì)供者紅細(xì)胞，檢測(cè)對(duì)供者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體。檢測(cè)對(duì)供者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體。 2)2)次側(cè)配血次側(cè)配血: : 受血者紅細(xì)胞對(duì)供血者血清，受血者紅細(xì)胞對(duì)供血者血清，檢測(cè)對(duì)受者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體。檢測(cè)對(duì)受者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體。 49交叉配血中可能出現(xiàn)的一些特殊問題交叉配血中可能出現(xiàn)的一些特殊問題 （1 1）緡錢狀的形成：血清在室溫和）緡錢狀的形成：血清在室溫和3737中，使紅細(xì)中，使紅細(xì)胞出現(xiàn)了假凝集，造成配血錯(cuò)誤，常見與多發(fā)性胞出現(xiàn)了假凝集，造成配血錯(cuò)誤，常見與多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、霍奇金病，以及其它表骨髓瘤、巨球蛋白血癥、霍奇金病，以及其它表現(xiàn)為血沉加速的一些病例中?，F(xiàn)為血沉加速的一些

34、病例中。（2 2）交叉配血試驗(yàn)結(jié)果不相容，顯示有未知的同種）交叉配血試驗(yàn)結(jié)果不相容，顯示有未知的同種抗體的存在?？贵w的存在。（3 3）在室溫反應(yīng)中，顯示有自身抗體。）在室溫反應(yīng)中，顯示有自身抗體。（4 4）血清中如含有溶血性抗體，則相應(yīng)紅細(xì)胞被溶）血清中如含有溶血性抗體，則相應(yīng)紅細(xì)胞被溶解而不是凝聚，結(jié)果為陽性若血清中存在補(bǔ)體而解而不是凝聚，結(jié)果為陽性若血清中存在補(bǔ)體而溶血，血清應(yīng)滅火后再做試驗(yàn)溶血，血清應(yīng)滅火后再做試驗(yàn)。50（5 5）存在抗體篩選試驗(yàn)陰性和交叉配血結(jié)）存在抗體篩選試驗(yàn)陰性和交叉配血結(jié)果陽性的現(xiàn)象，提示可能有未知的抗體果陽性的現(xiàn)象，提示可能有未知的抗體存在。存在。（6 6）交叉

35、配血試驗(yàn)中，離心力不當(dāng)，造成）交叉配血試驗(yàn)中，離心力不當(dāng)，造成假陰性和假陽性。假陰性和假陽性。（7 7）水浴箱溫度不正確，造成錯(cuò)誤結(jié)果。）水浴箱溫度不正確，造成錯(cuò)誤結(jié)果。（8 8）紅細(xì)胞不正確的洗滌和懸浮，使抗球）紅細(xì)胞不正確的洗滌和懸浮，使抗球蛋白試驗(yàn)出現(xiàn)假陰性。蛋白試驗(yàn)出現(xiàn)假陰性。51交叉配血的主要方法交叉配血的主要方法 紅細(xì)胞和血清在鹽水溶液中直接反應(yīng)紅細(xì)胞和血清在鹽水溶液中直接反應(yīng) 特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，設(shè)備簡(jiǎn)單，缺點(diǎn)是影響因素多，靈敏度低特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，設(shè)備簡(jiǎn)單，缺點(diǎn)是影響因素多，靈敏度低鹽水凝集法鹽水凝集法52低離子強(qiáng)度鹽水法低離子強(qiáng)度鹽水法 通過降低介質(zhì)溶液通過降低介質(zhì)溶液的離子強(qiáng)度，

36、減少的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞外圍離子云紅細(xì)胞外圍離子云的強(qiáng)度，促進(jìn)的強(qiáng)度，促進(jìn)IgGIgG分子在兩個(gè)紅細(xì)胞分子在兩個(gè)紅細(xì)胞間橋聯(lián)，而促進(jìn)凝間橋聯(lián)，而促進(jìn)凝集集 特點(diǎn)是縮短抗原抗特點(diǎn)是縮短抗原抗體反應(yīng)時(shí)間，提高體反應(yīng)時(shí)間，提高反應(yīng)靈敏度反應(yīng)靈敏度53酶法酶法 利用木瓜酶或菠蘿酶破壞紅細(xì)胞表面唾液酸，使紅細(xì)胞利用木瓜酶或菠蘿酶破壞紅細(xì)胞表面唾液酸，使紅細(xì)胞失去電荷，縮小細(xì)胞間距離失去電荷，縮小細(xì)胞間距離 同時(shí)改變紅細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)，使某些隱蔽的抗原暴露，同時(shí)改變紅細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)，使某些隱蔽的抗原暴露，從而增強(qiáng)凝集反應(yīng)從而增強(qiáng)凝集反應(yīng)54凝聚胺法凝聚胺法 利用多聚季胺鹽在介質(zhì)溶液中產(chǎn)生大量利用多聚季胺鹽

37、在介質(zhì)溶液中產(chǎn)生大量正電荷中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減少正電荷中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減少紅細(xì)胞間排斥，促進(jìn)凝集。紅細(xì)胞間排斥，促進(jìn)凝集。55抗人球蛋白法抗人球蛋白法 在鹽水凝集法的基礎(chǔ)上，加入抗人球蛋白抗體，在鹽水凝集法的基礎(chǔ)上，加入抗人球蛋白抗體，通過抗人球蛋白抗體的特異性橋連作用，促進(jìn)通過抗人球蛋白抗體的特異性橋連作用，促進(jìn)紅細(xì)胞的凝集紅細(xì)胞的凝集56凝膠卡式配血法凝膠卡式配血法 將紅細(xì)胞和血清加在凝膠上部反應(yīng)，離心后觀察凝集的紅細(xì)將紅細(xì)胞和血清加在凝膠上部反應(yīng)，離心后觀察凝集的紅細(xì)胞，被阻擋在小柱中凝膠的上部或中央，判斷凝集反應(yīng)陽胞，被阻擋在小柱中凝膠的上部或中央，判斷凝集反應(yīng)陽性游離的

38、紅細(xì)胞，被擠過裝有過濾介質(zhì)的小柱，而到達(dá)小性游離的紅細(xì)胞，被擠過裝有過濾介質(zhì)的小柱，而到達(dá)小柱的底部，判斷凝集反應(yīng)陰性柱的底部，判斷凝集反應(yīng)陰性 57抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析 抗體篩選陰性，交叉配血相合抗體篩選陰性，交叉配血相合 見于臨床上絕大多數(shù)標(biāo)本。見于臨床上絕大多數(shù)標(biāo)本。 抗體篩選陰性，血清中仍有可能含有臨床有意義抗體篩選陰性，血清中仍有可能含有臨床有意義的抗體（方法或篩選細(xì)胞）的抗體（方法或篩選細(xì)胞） 鹽水介質(zhì)試驗(yàn)作配血可能漏檢有意義的鹽水介質(zhì)試驗(yàn)作配血可能漏檢有意義的IgGIgG類抗體。類抗體。 只有用非鹽水介質(zhì)交叉配血，才能保證待輸?shù)难挥杏梅躯}水介質(zhì)交

39、叉配血，才能保證待輸?shù)难褪苷呦嗪?。和受者相合?8 抗體篩選陰性，鹽水直接離心交叉配血不合抗體篩選陰性，鹽水直接離心交叉配血不合 ABOABO血型錯(cuò)誤。血型錯(cuò)誤。 抗抗A A1 1存在于存在于A A2 2或或A A2 2B B，在直接鹽水交叉配血實(shí)驗(yàn)，在直接鹽水交叉配血實(shí)驗(yàn)中，抗中，抗A A1 1能引起大部分能引起大部分A A型紅細(xì)胞不相合。型紅細(xì)胞不相合。59 抗體篩選陰性，抗人球蛋白交叉配血不合抗體篩選陰性，抗人球蛋白交叉配血不合 獻(xiàn)血者紅細(xì)胞獻(xiàn)血者紅細(xì)胞DATDAT陽性（約陽性（約1/100001/10000） 患者抗體弱，獻(xiàn)血者紅細(xì)胞抗原性很強(qiáng)，表患者抗體弱，獻(xiàn)血者紅細(xì)胞抗原性很強(qiáng)，

40、表現(xiàn)為抗人球蛋白試驗(yàn)陽性?，F(xiàn)為抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。 針對(duì)低頻抗原的抗體，如針對(duì)低頻抗原的抗體，如DiegoDiego系統(tǒng)抗系統(tǒng)抗-Wra-Wra。60 抗體篩選陽性，交叉配血不合抗體篩選陽性，交叉配血不合 同種抗體、自身抗體、試劑問題、緡錢狀凝集，同種抗體、自身抗體、試劑問題、緡錢狀凝集，應(yīng)在輸血前查明原因。應(yīng)在輸血前查明原因。 必須進(jìn)行包括抗人球蛋白試驗(yàn)在內(nèi)的交叉配血，必須進(jìn)行包括抗人球蛋白試驗(yàn)在內(nèi)的交叉配血，配合后方能輸注。配合后方能輸注。 若無法找到血清學(xué)配合的血液，輸血科工作人員必須及時(shí)若無法找到血清學(xué)配合的血液，輸血科工作人員必須及時(shí)告知主管醫(yī)生輸血存在的危險(xiǎn)。若患者病危且臨床堅(jiān)持要

41、告知主管醫(yī)生輸血存在的危險(xiǎn)。若患者病危且臨床堅(jiān)持要輸，必須家屬簽署知情同意書，并經(jīng)主管醫(yī)生簽名納入病輸，必須家屬簽署知情同意書，并經(jīng)主管醫(yī)生簽名納入病歷后方可發(fā)血。并建議輸注去白加洗滌紅細(xì)胞。歷后方可發(fā)血。并建議輸注去白加洗滌紅細(xì)胞。61 血型、抗篩、交叉配血是輸血前試驗(yàn)的血型、抗篩、交叉配血是輸血前試驗(yàn)的“三保險(xiǎn)三保險(xiǎn)” 相合相合% 隨機(jī)隨機(jī) 6464 ABO ABO 99.499.4 RhRh 99.899.8 抗篩抗篩 99.9499.94 交叉配血交叉配血 99.9599.95 自身輸血自身輸血 10010062 ABO ABO亞型漏檢亞型漏檢 不規(guī)則抗體漏檢不規(guī)則抗體漏檢 尤其是低效

42、價(jià)尤其是低效價(jià), ,低親合力不規(guī)則抗體低親合力不規(guī)則抗體 漏檢漏檢 交叉配血漏檢交叉配血漏檢 一般抗篩與配血方法相同一般抗篩與配血方法相同, , 抗篩漏檢抗篩漏檢, , 配血自然也會(huì)漏檢配血自然也會(huì)漏檢 63病例探討病例探討 患者患者 女女 ,46,46歲歲,2012,2012年年3 3月月7 7日因乙肝肝硬化，消化道出日因乙肝肝硬化，消化道出血入院，查血入院，查Hb 46g/L ,Hb 46g/L ,血型血型A A型，型，Rh Rh 表型表型 ccDEE ccDEE ，當(dāng)日，當(dāng)日申請(qǐng)輸注申請(qǐng)輸注A A型懸浮紅細(xì)胞型懸浮紅細(xì)胞4U4U，輸完第一袋，輸完第一袋1.5U1.5U，第二袋輸，第二袋輸

43、注約注約50ml50ml后，出現(xiàn)血尿、高熱，停止輸血。輸血后立即復(fù)后，出現(xiàn)血尿、高熱，停止輸血。輸血后立即復(fù)查查Hb 62g/L Hb 62g/L ，1010余小時(shí)后再復(fù)查余小時(shí)后再復(fù)查Hb 53g/L Hb 53g/L 。 分析：分析： 輸血史：輸血史：2 2月月2323日于當(dāng)?shù)蒯t(yī)院輸過紅細(xì)胞，日于當(dāng)?shù)蒯t(yī)院輸過紅細(xì)胞，3 3月月3 3日出現(xiàn)不日出現(xiàn)不明原因血尿明原因血尿 復(fù)查供受者血型復(fù)查供受者血型 ：A A 型，型，RH(D)RH(D)陽性陽性 新舊標(biāo)本重做交叉配血、抗體篩選：聚凝胺法，抗人球法新舊標(biāo)本重做交叉配血、抗體篩選：聚凝胺法，抗人球法均陰性均陰性 輸血后患者標(biāo)本做輸血后患者標(biāo)本做

44、CoombsCoombs試驗(yàn)試驗(yàn) ：DATDAT陰性，標(biāo)本外觀溶血陰性，標(biāo)本外觀溶血64四、抗人球蛋白試驗(yàn)四、抗人球蛋白試驗(yàn) 抗人球蛋白試驗(yàn)是抗人球蛋白試驗(yàn)是19451945年由年由CoombsCoombs等人建等人建立的，又稱立的，又稱CoombsCoombs試驗(yàn)。分為直接抗球蛋試驗(yàn)。分為直接抗球蛋白試驗(yàn)（白試驗(yàn)（DATDAT）和間接抗球蛋白試驗(yàn)（）和間接抗球蛋白試驗(yàn)（IATIAT） 65抗人球蛋白試驗(yàn)原理抗人球蛋白試驗(yàn)原理 IgGIgG類血型抗體（主要是免疫抗體，如類血型抗體（主要是免疫抗體，如RhRh血血型抗體）分子量小，與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合型抗體）分子量小，與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，在鹽

45、水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反后，在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)，稱之為不完全抗體，但在加入抗應(yīng)，稱之為不完全抗體，但在加入抗-IgG-IgG后，后，以其以其搭橋搭橋作用則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)。作用則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)。 補(bǔ)體成分在體內(nèi)被紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物激補(bǔ)體成分在體內(nèi)被紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物激活以后，結(jié)合在紅細(xì)胞表面。在體外含補(bǔ)體活以后，結(jié)合在紅細(xì)胞表面。在體外含補(bǔ)體的多克隆抗體，或抗的多克隆抗體，或抗C3bC3b、抗、抗C3dC3d等單特異性等單特異性抗體與補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞反應(yīng)，使之凝集也抗體與補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞反應(yīng)，使之凝集也稱為抗人球蛋白試驗(yàn)。稱為抗人球蛋白試驗(yàn)。66抗人球蛋白試劑抗人球蛋

46、白試劑 多特異性抗球蛋白試劑：應(yīng)含有抗多特異性抗球蛋白試劑：應(yīng)含有抗IgGIgG和和抗抗-C3d-C3d。 單特異性抗球蛋白試劑：抗單特異性抗球蛋白試劑：抗IgGIgG、抗、抗IgMIgM、抗抗IgAIgA、抗、抗C3C3、C4C4的片段。的片段。67直接抗人球蛋白試驗(yàn)直接抗人球蛋白試驗(yàn) DATDAT是用來檢測(cè)體內(nèi)紅細(xì)胞致敏情是用來檢測(cè)體內(nèi)紅細(xì)胞致敏情 況，尤其是況，尤其是IgGIgG和和C3dC3d包被的紅細(xì)胞。包被的紅細(xì)胞。用于：用于： HDNHDN和自身免疫溶血性貧血的診斷和自身免疫溶血性貧血的診斷 紅細(xì)胞被藥物抗體致敏的檢查紅細(xì)胞被藥物抗體致敏的檢查 急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的檢查急

47、性和遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的檢查6869 間接抗人球蛋白試驗(yàn)間接抗人球蛋白試驗(yàn) 用于測(cè)定血清中存在的不完全抗體。用于測(cè)定血清中存在的不完全抗體。 用已知的不完全抗體來測(cè)定紅細(xì)胞血用已知的不完全抗體來測(cè)定紅細(xì)胞血型，如型，如RhRh血型。血型。 交叉配血。交叉配血。7071結(jié)果分析結(jié)果分析- -假陽性假陽性1)1)用免疫兔或羊制備的抗人球蛋白含有用免疫兔或羊制備的抗人球蛋白含有種間抗體。種間抗體。2)2)紅細(xì)胞在用鹽水洗滌時(shí)已有凝集。紅細(xì)胞在用鹽水洗滌時(shí)已有凝集。3)IAT3)IAT試驗(yàn)中所用試驗(yàn)中所用O O型紅細(xì)胞本身型紅細(xì)胞本身DATDAT陽性。陽性。724)4)不抗凝標(biāo)本在冷環(huán)境里經(jīng)過一段時(shí)

48、間的保不抗凝標(biāo)本在冷環(huán)境里經(jīng)過一段時(shí)間的保存后，自身冷抗體發(fā)生作用，激活補(bǔ)體，存后，自身冷抗體發(fā)生作用，激活補(bǔ)體，補(bǔ)體成分結(jié)合在紅細(xì)胞上，用多特異性抗補(bǔ)體成分結(jié)合在紅細(xì)胞上，用多特異性抗球蛋白試劑會(huì)發(fā)生假陽性。球蛋白試劑會(huì)發(fā)生假陽性。5)5)離心過度，紅細(xì)胞壓積過緊，不易充分搖離心過度，紅細(xì)胞壓積過緊，不易充分搖散散73結(jié)果分析結(jié)果分析- -假陰性假陰性1)1)致敏后的紅細(xì)胞洗滌不充分致敏后的紅細(xì)胞洗滌不充分, ,殘留殘留的球蛋白中和了試劑中的抗球蛋白，的球蛋白中和了試劑中的抗球蛋白，造成假陰性。造成假陰性。2)2)操作過程不連續(xù)，時(shí)間過長(zhǎng)，結(jié)合操作過程不連續(xù)，時(shí)間過長(zhǎng)，結(jié)合在紅細(xì)胞上的抗體解

49、離。在紅細(xì)胞上的抗體解離。3)3)紅細(xì)胞、血清和抗人球蛋白試劑保紅細(xì)胞、血清和抗人球蛋白試劑保存不當(dāng)都可能發(fā)生活性減弱或喪失。存不當(dāng)都可能發(fā)生活性減弱或喪失。744)4)紅細(xì)胞過多，反應(yīng)減弱；紅細(xì)胞過少，紅細(xì)胞過多，反應(yīng)減弱；紅細(xì)胞過少，看結(jié)果不準(zhǔn)確，都影響結(jié)果。看結(jié)果不準(zhǔn)確，都影響結(jié)果。5)5)試劑中抗人球蛋白濃度過大，有試劑中抗人球蛋白濃度過大，有前帶現(xiàn)前帶現(xiàn)象象。6)6)孵育時(shí)間和溫度不當(dāng)，會(huì)使反應(yīng)結(jié)果減孵育時(shí)間和溫度不當(dāng)，會(huì)使反應(yīng)結(jié)果減弱或變?yōu)榧訇幮?。觀察結(jié)果時(shí)過度搖動(dòng)弱或變?yōu)榧訇幮浴Ｓ^察結(jié)果時(shí)過度搖動(dòng)試管，搖散細(xì)小凝塊。試管，搖散細(xì)小凝塊。75注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 每次試驗(yàn)要設(shè)有陰性和陽

50、性對(duì)照。每次試驗(yàn)要設(shè)有陰性和陽性對(duì)照。 陰性結(jié)果要加入一滴陰性結(jié)果要加入一滴IgGIgG致敏紅細(xì)胞致敏紅細(xì)胞 實(shí)驗(yàn)器材清潔。實(shí)驗(yàn)器材清潔。 注意抗原抗體比例、孵育時(shí)間、溫度等注意抗原抗體比例、孵育時(shí)間、溫度等條件。條件。 嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)方法操作。嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)方法操作。 排除自身抗體干擾。排除自身抗體干擾。76DATDAT陽性患者引起的疑難配血陽性患者引起的疑難配血 主要有以下兩種主要有以下兩種: : 交叉配血主側(cè)陽性交叉配血主側(cè)陽性, ,次側(cè)陽性次側(cè)陽性 這種情況下患這種情況下患者血清往往含有自身抗體且伴有不規(guī)則抗體的存者血清往往含有自身抗體且伴有不規(guī)則抗體的存在。在。（1 1）用自身紅細(xì)胞進(jìn)行

51、吸收試驗(yàn)，去除患者血清中）用自身紅細(xì)胞進(jìn)行吸收試驗(yàn)，去除患者血清中的自身抗體。的自身抗體。（2 2）取吸收去除自身抗體患者血清做不規(guī)則抗體篩）取吸收去除自身抗體患者血清做不規(guī)則抗體篩查和特異性鑒定，選與不規(guī)則抗體相對(duì)應(yīng)抗原陰查和特異性鑒定，選與不規(guī)則抗體相對(duì)應(yīng)抗原陰性的紅細(xì)胞做交叉配血試驗(yàn)的主側(cè)試驗(yàn)。性的紅細(xì)胞做交叉配血試驗(yàn)的主側(cè)試驗(yàn)。（3 3）患者紅細(xì)胞做放散試驗(yàn)用放散掉自身抗體的紅）患者紅細(xì)胞做放散試驗(yàn)用放散掉自身抗體的紅細(xì)胞做交叉配血的次側(cè)試驗(yàn)。細(xì)胞做交叉配血的次側(cè)試驗(yàn)。77 交叉配血主側(cè)陰性交叉配血主側(cè)陰性, ,次側(cè)陽性次側(cè)陽性 這種情這種情況下患者往往是紅細(xì)胞被自身抗體吸附?jīng)r下患者往

52、往是紅細(xì)胞被自身抗體吸附或致敏而血清中無同種不規(guī)則抗體的存或致敏而血清中無同種不規(guī)則抗體的存在，可先用患者紅細(xì)胞做放散試驗(yàn)，用在，可先用患者紅細(xì)胞做放散試驗(yàn)，用放散掉自身抗體的紅細(xì)胞做交叉配血的放散掉自身抗體的紅細(xì)胞做交叉配血的次側(cè)試驗(yàn)。次側(cè)試驗(yàn)。78 所有輸血前患者作所有輸血前患者作常規(guī)常規(guī)DATDAT檢測(cè)檢測(cè)。 DATDAT陽陽性一般建議輸注主側(cè)配合的洗滌紅細(xì)胞，性一般建議輸注主側(cè)配合的洗滌紅細(xì)胞，并且盡量避免血漿、血小板等血液成分并且盡量避免血漿、血小板等血液成分的輸注。的輸注。79五五. .血小板輸注前的抗體檢測(cè)及血小板輸注前的抗體檢測(cè)及 配合試驗(yàn)配合試驗(yàn) 隨著成分輸血的廣泛開展和應(yīng)用

53、，以及血隨著成分輸血的廣泛開展和應(yīng)用，以及血液成分保存技術(shù)的提高，單采血小板的輸液成分保存技術(shù)的提高，單采血小板的輸注量逐年上升。隨之而來的因血小板輸注注量逐年上升。隨之而來的因血小板輸注而引起的輸注無效已成為臨床上極為突出而引起的輸注無效已成為臨床上極為突出的問題。因此，做好的問題。因此，做好血小板輸注前的抗體血小板輸注前的抗體檢測(cè)及配合試驗(yàn)將是目前行之有效的辦法。檢測(cè)及配合試驗(yàn)將是目前行之有效的辦法。80血小板血型系統(tǒng)血小板血型系統(tǒng)血小板血型：血小板血型：19591959年，年，Van LoghemVan Loghem發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)血小板血型抗原主要有二大類血小板血型抗原主要有二大類 ：血小板非特異性抗原（血小板相關(guān)抗血小板非特異性抗原（血小板相關(guān)抗原）原）血小板特異性抗原血小板特異性抗原 （HPA)HPA)81 血小板非特異性抗原血小板非特異性抗原 血小板表面存在的與其他細(xì)胞或組織共血小板表面存在的與其他細(xì)胞或組織共有的抗原稱血小板非特異性抗原。有的抗原稱血小板非特異性抗原