核酸類藥物的生產(chǎn)

1、第二章第二章 天然生物材料的提取制藥天然生物材料的提取制藥p 生化藥物概述 p 氨基酸類藥物的生產(chǎn)p 多肽和蛋白質(zhì)類藥物的生產(chǎn) p 核酸類藥物的生產(chǎn)p 酶類藥物的生產(chǎn)p 糖類藥物的生產(chǎn)p 脂類藥物的生產(chǎn)p 維生素和輔酶類藥物的生產(chǎn)核酸類藥物的生產(chǎn) 核酸知識復(fù)習 核酸藥物的分類 核酸類藥物的生產(chǎn)方法 核酸類藥物的生產(chǎn)實例 核酸類藥物的檢測 思考題核酸知識復(fù)習核酸藥物的分類一、具有天然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì)如：DNA、RNA、肌苷、ATP、輔酶A、脫氧核苷酸、肌苷酸等。獲得：微生物發(fā)酵或從生物資源中提取生產(chǎn)。藥理功能：有助于改善機體的物質(zhì)代謝和能量代謝平衡，加速受損組織的修復(fù)，促使機體恢復(fù)正常生理功能。

2、著名企業(yè)：珍奧集團、GENTA公司核酸藥物的分類二、天然堿基、核苷、核苷酸的類似物或聚合物如：三氟代胸苷、疊氮胸苷、拉米夫定（嘧啶類）、阿德福韋（嘌呤類）、恩替卡韋（第三代核苷類抗乙肝病毒藥物）等。獲得：由自然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì)通過半合成生產(chǎn)。藥理功能：治療病毒病如乙肝、腫瘤、愛滋病的重要藥物，也是產(chǎn)生干擾素、免疫抑制劑的臨床藥物。核酸類藥物的生產(chǎn)方法核酸類藥物的生產(chǎn)方法。如需進一步的純化，常用純化方法如柱層析、凝膠電泳和密度梯度超離心。、人工合成獲取大分子核酸的另一方法是人工合成，即利用化學(xué)的方法按照設(shè)定的核苷酸順序逐一加入形成核酸?，F(xiàn)已有核酸合成儀，但合成長度還有一定限制，并且該儀器價格昂貴

3、。因此這種方法一般用于研究，不適合生產(chǎn)。核酸類藥物的生產(chǎn)方法（三）核苷酸、核苷及堿基類似物的生產(chǎn)方法酶解法、半合成法、發(fā)酵法1、酶解法生產(chǎn)酵母，從酵母中提取RNA，RNA經(jīng)青霉菌屬或鏈霉菌屬等微生物產(chǎn)生的酶進行酶解，制成各種核苷酸。2、半合成法微生物發(fā)酵與化學(xué)合成并用。3、直接發(fā)酵法采用營養(yǎng)缺陷型菌株或營養(yǎng)缺陷型兼結(jié)構(gòu)類似物抗性菌株來發(fā)酵大量生產(chǎn)目的核苷或核苷酸。核酸類藥物的生產(chǎn)實例核酸類藥物的生產(chǎn)實例工藝路線抽提 豬脾臟 預(yù)處理 冷凍，絞碎 組織漿液 預(yù)處理 0.1M NaCl-0.5M檸檬酸混合液，離心沉淀 1.71M NaCl 上清液（DNP）沉淀（DNP）溶解液0.14M NaCl沉淀

4、物白色纖維狀DNA 10% NaCl上清液（DNA）氯仿-異戊醇95%乙醇真空干燥核酸類藥物的生產(chǎn)實例（2）提取容易。核酸類藥物的生產(chǎn)實例、RNA的提取等電沉淀法酵母菌體 提取液抽提清液RNA粗品RNA精品 稀NaOH，提取中和，分離洗滌、干燥pH2.5核酸類藥物的生產(chǎn)實例腺嘌呤前體 腺苷AMPATP枯草桿菌160（Smr +Try+Pur）微生物或化學(xué)轉(zhuǎn)化微生物核酸類藥物的生產(chǎn)實例（四）輔酶A的生產(chǎn)TCA，除蛋白新鮮豬肝【絞碎】 肝漿 【水，提取】提取液 濾液GAM樹脂GAM-CoACoA濃集液LD-601-CoACoA粉HCl-NaClCoA酸化液HCl，酸化LD-601，再吸附酸化濃縮液

5、濃縮上清液沉淀物 丙酮沉淀脫水干燥核酸類藥物的檢測1、DNA含量測定DNA是磷酸和戊糖通過磷酸二酯鍵形成的長鏈，所以磷酸或戊糖的量正比例于DNA的量，可通過測定磷酸或戊糖的量來測定DNA的量，前者稱為定磷法，后者稱為定糖法。（1）定磷法磷酸與鉬酸反應(yīng)生成磷鉬酸，再轉(zhuǎn)變?yōu)殂f藍，吸收峰在660nm。（2）定糖法二苯胺法酸性條件下，DNA與二苯胺共熱，生成藍色化合物，吸收峰595nm。核酸類藥物的檢測思考題1.核酸類藥物的種類和藥理功能是什么？2.DNA、RNA、ATP及HS-CoA的生產(chǎn)方法。3.如何檢測核酸類藥物？核苷酸組分NNNHNNH2NNHNH2ONHNNHNONH2OHHOHHOHOHH

6、HOCH2HOCH2OHHOHHHOHHD-核糖D-2-脫氧核糖腺嘌呤腺嘌呤鳥嘌呤胞嘧啶NHNHOO尿嘧啶NHNHOO胸腺嘧啶珍奧核酸DNA藥物核苷類藥物恩替卡韋 胸腺ABI3948核酸合成純化儀可自動完成DNA的合成，切割，脫保護，OPC純化和定量等過程。在三個模塊中同時進行合成、切割脫保護和純化收集，24小時內(nèi)可完成48個寡核苷酸片段的合成和純化。密度梯度離心機核酸類藥物的生產(chǎn) 核酸知識復(fù)習 核酸藥物的分類 核酸類藥物的生產(chǎn)方法 核酸類藥物的生產(chǎn)實例 核酸類藥物的檢測 思考題核酸類藥物的生產(chǎn)方法核酸類藥物的生產(chǎn)方法（三）核苷酸、核苷及堿基類似物的生產(chǎn)方法酶解法、半合成法、發(fā)酵法1、酶解法生產(chǎn)酵母，從酵母中提取RNA，RNA經(jīng)青霉菌屬或鏈霉菌屬等微生物產(chǎn)生的酶進行酶解，制成各種核苷酸。2、半合成法微生物發(fā)酵與化學(xué)合成并用。3、直接發(fā)酵法采用營養(yǎng)缺陷型菌株或營養(yǎng)缺陷型兼結(jié)構(gòu)類似物抗