精減分子生物學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介碩

1、第九章第九章 分子生物學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介分子生物學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介核酸純化技術(shù)與電泳技術(shù)核酸純化技術(shù)與電泳技術(shù)PCR技術(shù)技術(shù)分子雜交與印跡技術(shù)分子雜交與印跡技術(shù)基因靶向技術(shù)基因靶向技術(shù)Contents一、核酸純化技術(shù)一、核酸純化技術(shù)-DNA純化純化 1. 1. 核酸混合物成分核酸混合物成分: : 結(jié)構(gòu)類(lèi)結(jié)構(gòu)類(lèi)- -細(xì)胞碎片，細(xì)胞器，其他細(xì)胞碎片，細(xì)胞器，其他 大分子大分子- -DNA，RNA，Protein，糖類(lèi)，脂類(lèi)等糖類(lèi)，脂類(lèi)等 小分子小分子- -氨基酸，小分子糖類(lèi)和脂類(lèi)，水，無(wú)機(jī)物等氨基酸，小分子糖類(lèi)和脂類(lèi)，水，無(wú)機(jī)物等 2. 2. 關(guān)鍵關(guān)鍵: : DNA，RNAProtein 3. 3. 方案：方案：

2、 Protein變性變性 苯酚：強(qiáng)變性苯酚：強(qiáng)變性 2525 氯仿：弱變性氯仿：弱變性 2424 異戊醇：消泡異戊醇：消泡 1 1酚氯仿抽提法酚氯仿抽提法4. 苯酚的處理：重蒸苯酚的處理：重蒸- -飽和飽和-pH 重蒸：去除醌類(lèi)氧化物重蒸：去除醌類(lèi)氧化物 飽和：防止核酸損耗飽和：防止核酸損耗 pH： pH7.0-8.0-核酸最適合核酸最適合 方法：蒸餾方法：蒸餾（183）- -收集（棕色瓶）收集（棕色瓶）- -飽和與調(diào)飽和與調(diào)pH（Tris-HCl pH8.0）-0.1% 8-羥基喹啉羥基喹啉- 4 或或-20 保存保存一、核酸純化技術(shù)一、核酸純化技術(shù)-DNA純化純化方法方法樣品樣品+ +等體

3、積飽和苯酚等體積飽和苯酚10kb以上輕柔混勻；以上輕柔混勻；10kb以下振蕩以下振蕩離心離心（12000*g）取上清取上清核酸相核酸相ProteinProtein變性相變性相有機(jī)相有機(jī)相電泳影響因素電泳影響因素1. DNA物理性質(zhì)物理性質(zhì) 質(zhì)粒： CCL OC 線形：長(zhǎng)度與泳動(dòng)速度成負(fù)相關(guān)2. 介質(zhì)性質(zhì)介質(zhì)性質(zhì) 分離范圍：agrose：100bp-60kb PAGE：5-500bp3. 電壓：電壓：5v/cm4. 緩沖液：緩沖液：TAE，TBE，TPETris堿堿三羥甲基氨基甲烷三羥甲基氨基甲烷 不同二級(jí)結(jié)構(gòu)形態(tài)及其電泳速度不同二級(jí)結(jié)構(gòu)形態(tài)及其電泳速度Linear DNA. LOpen Cir

4、cle DNA OC relexed formSupercoiled circleCovalent Closed Circle CCC點(diǎn)樣孔點(diǎn)樣孔核酸定量的原理核酸定量的原理核酸的紫外吸收核酸的紫外吸收 嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵，使堿基、核苷、核苷酸和核酸在嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵，使堿基、核苷、核苷酸和核酸在240-290nm240-290nm的紫的紫外波段有一強(qiáng)烈吸收峰，最大吸收值在外波段有一強(qiáng)烈吸收峰，最大吸收值在260nm260nm附近。附近。 純核酸能用此法定量測(cè)定含量，但不純樣品不能用此法作定量檢測(cè)。純核酸能用此法定量測(cè)定含量，但不純樣品不能用此法作定量檢測(cè)。 瓊脂糖凝膠電泳分

5、離出區(qū)帶，用瓊脂糖凝膠電泳分離出區(qū)帶，用EBEB染色后在紫外燈下粗略估計(jì)含量。染色后在紫外燈下粗略估計(jì)含量。核酸定量的原理核酸定量的原理雙螺旋雙螺旋DNA：1OD260=50ug/ml單鏈單鏈DNA/RNA：1OD260=40ug/mloligonucleotide ：1OD260= 20 g/ml純度：純度：OD260/OD280=1.8-2.0小于小于1.8，表明有蛋白質(zhì)污染，表明有蛋白質(zhì)污染大于大于2.0，表明有，表明有RNA污染。污染。配配10M的引物貯液的引物貯液加多少加多少L ddH2ODouble-distilled核酸純化技術(shù)與電泳技術(shù)核酸純化技術(shù)與電泳技術(shù)PCR技術(shù)技術(shù)分子雜

6、交與印跡技術(shù)分子雜交與印跡技術(shù)基因靶向技術(shù)基因靶向技術(shù)Contents二、二、PCR技術(shù)技術(shù) PCR(polymerase chain reaction)即聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)，即聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)，是指利用耐熱是指利用耐熱DNA聚聚合酶的反復(fù)作用，通過(guò)變性合酶的反復(fù)作用，通過(guò)變性- -延伸延伸- -復(fù)性的循環(huán)操作，在體外迅速將復(fù)性的循環(huán)操作，在體外迅速將DNA模板擴(kuò)增數(shù)模板擴(kuò)增數(shù)百萬(wàn)倍的一種操作技術(shù)。百萬(wàn)倍的一種操作技術(shù)。理論上可在理論上可在2小時(shí)內(nèi)將一個(gè)小時(shí)內(nèi)將一個(gè)DNA分子擴(kuò)增到分子擴(kuò)增到106-109倍，倍，從而大大提高了對(duì)其進(jìn)行從而大大提高了對(duì)其進(jìn)行分析研究的速度。分析研究的速度。 PCR

7、技術(shù)與技術(shù)與Nobel Prize Kary B. MullisMichael SmithPolymerase Chain Reaction-a copying machine for DNA molecules DNA molecules can be mass-produced from incredibly small amounts of material with PCR. Mullis discovery allows the chemist to mimic the cells own natural DNA replication process in a test tube.

8、 It has now become much easier to characterise and compare the genetic material from different individuals and organisms.From a drop of bloodExtracted DNAAbout 95,the ds are separated About 55,the primers bind to the strands at the correct positionsAbout 72,the DNA polymerase which is added builds u

9、p two new complete copies of the DNA strands By cycling through the three temperatures the strands are separated and built up again. PCR反應(yīng)系統(tǒng)的組成反應(yīng)系統(tǒng)的組成 PCR反應(yīng)系統(tǒng)應(yīng)包括：反應(yīng)系統(tǒng)應(yīng)包括：1 1耐熱耐熱DNA聚合酶（聚合酶（Taq酶）酶）：這是由耐熱細(xì)菌體內(nèi)提取的一種：這是由耐熱細(xì)菌體內(nèi)提取的一種DNA聚合酶，可聚合酶，可保證在保證在95，30分鐘以上不會(huì)變性失活。分鐘以上不會(huì)變性失活。2 2模板模板DNA(template)：即待分析的目的即

10、待分析的目的DNA。3 3兩種引物兩種引物( (primers)：為了保證為了保證DNA聚合酶能夠?qū)蓷l互補(bǔ)鏈均能進(jìn)行延伸，需聚合酶能夠?qū)蓷l互補(bǔ)鏈均能進(jìn)行延伸，需要兩種引物，分別位于兩條互補(bǔ)模板要兩種引物，分別位于兩條互補(bǔ)模板DNA鏈的鏈的3-3-端。端。 4 4四種脫氧核糖核苷酸四種脫氧核糖核苷酸( (dNTP) )：用作底物的用作底物的dNTPS。5 5緩沖溶液（緩沖溶液（buffer）：）：保證保證DNA聚合酶催化時(shí)所需的適當(dāng)?shù)娜芤壕酆厦复呋瘯r(shí)所需的適當(dāng)?shù)娜芤簆H值。值。 PCR的反應(yīng)原理的反應(yīng)原理 PCR反應(yīng)時(shí)，一般采用反應(yīng)時(shí)，一般采用變性變性- -復(fù)性復(fù)性- -延伸延伸三步循環(huán)，也

11、可采用三步循環(huán)，也可采用變性變性- -延伸延伸兩步循環(huán)。兩步循環(huán)。1 1變性：變性：通常采用加熱變性，即將模板通常采用加熱變性，即將模板DNA或延伸后的雙鏈或延伸后的雙鏈DNA加熱到加熱到950C，使雙螺旋使雙螺旋DNA解開(kāi)成為單解開(kāi)成為單鏈。鏈。 2 2復(fù)性：復(fù)性：通過(guò)降低反應(yīng)溫度至通過(guò)降低反應(yīng)溫度至550C，使兩種引物能與兩條解開(kāi)的使兩種引物能與兩條解開(kāi)的DNA互補(bǔ)互補(bǔ)鏈的鏈的3端粘合，以提供端粘合，以提供DNA聚合酶催化聚合所需的聚合酶催化聚合所需的3-OH。3 3延伸：延伸：將反應(yīng)溫度提高到約將反應(yīng)溫度提高到約700C，在耐熱在耐熱DNA聚合酶的催化下，根據(jù)模聚合酶的催化下，根據(jù)模板板

12、DNA提供的堿基順序，合成兩條互補(bǔ)鏈，從而使模板提供的堿基順序，合成兩條互補(bǔ)鏈，從而使模板DNA擴(kuò)增一倍。擴(kuò)增一倍。按照上述步驟重復(fù)操作約按照上述步驟重復(fù)操作約30次，即可將模板次，即可將模板DNA擴(kuò)增數(shù)百萬(wàn)倍。擴(kuò)增數(shù)百萬(wàn)倍。 Cycle#1Cycle#2Cycle#3flashfilmPCR的主要用途的主要用途 （一）目的基因的克?。海ㄒ唬┠康幕虻目寺。?利用特異性引物以利用特異性引物以cDNA或基因組或基因組DNA為模板，獲得已知的目的基因；為模板，獲得已知的目的基因； 利用簡(jiǎn)并引物從利用簡(jiǎn)并引物從cDNA文庫(kù)或基因組文庫(kù)中獲得具有同源性的文庫(kù)或基因組文庫(kù)中獲得具有同源性的DNA片段；片

13、段； 利用隨機(jī)引物從利用隨機(jī)引物從cDNA文庫(kù)或基因組文庫(kù)中隨機(jī)獲得目的基因。文庫(kù)或基因組文庫(kù)中隨機(jī)獲得目的基因。 （二）基因的體外突變：（二）基因的體外突變： 采用隨意設(shè)計(jì)的引物，在體外對(duì)基因進(jìn)行嵌合、缺失、點(diǎn)突變等改造。采用隨意設(shè)計(jì)的引物，在體外對(duì)基因進(jìn)行嵌合、缺失、點(diǎn)突變等改造。（三）（三）DNA的微量分析：的微量分析： 由于由于PCR技術(shù)具有高度敏感性，故可用于微量技術(shù)具有高度敏感性，故可用于微量DNA的分析檢測(cè)。的分析檢測(cè)。 核酸純化技術(shù)與電泳技術(shù)核酸純化技術(shù)與電泳技術(shù)PCR技術(shù)技術(shù)分子雜交與印跡技術(shù)分子雜交與印跡技術(shù)基因靶向技術(shù)基因靶向技術(shù)Contents（一）分子雜交：（一）分子

14、雜交：不同來(lái)源的單鏈核酸（不同來(lái)源的單鏈核酸（DNA或或RNA），），只只要它們具有要它們具有大致相同的堿基序列大致相同的堿基序列，經(jīng)過(guò)退火，經(jīng)過(guò)退火處理，就能重新形成雜種雙螺旋，這一現(xiàn)象處理，就能重新形成雜種雙螺旋，這一現(xiàn)象稱(chēng) 為稱(chēng) 為 分 子 雜 交分 子 雜 交 （ m o l e c u l a r hybridization）。利用這一原理，就可以使用已知序列的單鏈利用這一原理，就可以使用已知序列的單鏈核酸片段作為探針，去查找各種不同來(lái)源的核酸片段作為探針，去查找各種不同來(lái)源的基因組基因組DNA分子中的同源基因或同源序列分子中的同源基因或同源序列。 三、分子雜交與印漬技術(shù)三、分子雜交

15、與印漬技術(shù)（二）印跡技術(shù)：（二）印跡技術(shù)：首先由首先由Edwen Southern在在1975年提出年提出。其基本操作過(guò)程是：將其基本操作過(guò)程是：將DNA片段在瓊脂糖凝膠片段在瓊脂糖凝膠中中電泳分離電泳分離后，置后，置NaOH液中浸泡，從而將凝液中浸泡，從而將凝膠中的膠中的DNA變性變性為單鏈；然后將一張硝酸纖維為單鏈；然后將一張硝酸纖維素膜鋪在凝膠上，上面放上大量吸水紙巾，利素膜鋪在凝膠上，上面放上大量吸水紙巾，利用吸水紙巾的毛細(xì)作用，將單鏈用吸水紙巾的毛細(xì)作用，將單鏈DNA從凝膠中從凝膠中轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，再將膜置到硝酸纖維素膜上，再將膜置80烘干并烘干并使單鏈?zhǔn)箚捂淒NA分子分子

16、固定固定在膜上，再用于分子在膜上，再用于分子雜交雜交分析。分析。用 于用 于 D N A 印 漬 的 技 術(shù) 又 稱(chēng) 為印 漬 的 技 術(shù) 又 稱(chēng) 為 S o u t h e r n Blotting或或Southern 雜交。雜交。 Southern Blotting酶標(biāo)記的探針雜交酶標(biāo)記的探針雜交顯色顯色不同內(nèi)切酶切基因組不同內(nèi)切酶切基因組DNA變性、轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上變性、轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上酶切后的基因組酶切后的基因組DNA電泳電泳（三）探針技術(shù)：（三）探針技術(shù)： 將已知序列的核酸片段用放射性同位素、生物素、酶或熒光染料進(jìn)行標(biāo)記，然后將已知序列的核酸片段用放射性同位素、生物素、酶或熒

17、光染料進(jìn)行標(biāo)記，然后用于分子雜交，雜交后通過(guò)放射自顯影、熒光檢測(cè)或顯色技術(shù)，使雜交區(qū)帶顯現(xiàn)用于分子雜交，雜交后通過(guò)放射自顯影、熒光檢測(cè)或顯色技術(shù)，使雜交區(qū)帶顯現(xiàn)出來(lái)。出來(lái)。 印跡技術(shù)的類(lèi)別及應(yīng)用印跡技術(shù)的類(lèi)別及應(yīng)用 （一）（一）DNA印跡技術(shù)：印跡技術(shù)： 又稱(chēng)又稱(chēng)Southern雜交，即雜交，即DNA-DNA雜交分析雜交分析。（二）二）RNA印跡技術(shù)：印跡技術(shù)： 又稱(chēng)又稱(chēng)Northern雜交，即雜交，即RNA-DNA雜交分析雜交分析。（三）蛋白質(zhì)印跡技術(shù)：（三）蛋白質(zhì)印跡技術(shù)： 又稱(chēng)又稱(chēng)Western雜交，或免疫印跡技術(shù)，即利用抗雜交，或免疫印跡技術(shù)，即利用抗原原-抗體反應(yīng)，檢測(cè)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維

18、素膜上的特異性抗體反應(yīng)，檢測(cè)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上的特異性蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)。（四）（四） Eastern雜交雜交， 通過(guò)通過(guò)電轉(zhuǎn)移法電轉(zhuǎn)移法將將等電聚焦分離等電聚焦分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，利用抗原纖維素膜上，利用抗原-抗體反應(yīng)，檢測(cè)轉(zhuǎn)移到膜上抗體反應(yīng)，檢測(cè)轉(zhuǎn)移到膜上特異性蛋白質(zhì)。特異性蛋白質(zhì)。核酸純化技術(shù)與電泳技術(shù)核酸純化技術(shù)與電泳技術(shù)PCR技術(shù)技術(shù)分子雜交與印跡技術(shù)分子雜交與印跡技術(shù)基因靶向技術(shù)基因靶向技術(shù)Contents四、基因靶向技術(shù)四、基因靶向技術(shù)“基因靶向基因靶向”技術(shù)是指利用細(xì)胞脫氧核糖核酸技術(shù)是指利用細(xì)胞脫氧核糖核酸( (DNA) )可與外源性可與外源性D

19、NA同源序列發(fā)生同源序列發(fā)生同源重組的性質(zhì)，定向改造生物某一基因的技術(shù)。同源重組的性質(zhì)，定向改造生物某一基因的技術(shù)。CapecchiEvansSmithies2007 Nobel Prize for physiology or medicine四、基因靶向技術(shù)四、基因靶向技術(shù)Gene targeting is a genetic technique that uses homologous recombination to change an endogenous gene. The method can be used to delete a gene, remove exons, and

20、introduce point mutations. Gene targeting can be permanent or conditional. Conditions can be a specific time during development / life of the organism or limitation to a specific tissue, for example. Gene targeting requires the creation of a specific vector for each gene of interest. However, it can

21、 be used for any gene, regardless of transcriptional activity or gene size. 關(guān)于諾貝爾獎(jiǎng)關(guān)于諾貝爾獎(jiǎng) 兩次獲得兩次獲得NP的科學(xué)家的科學(xué)家波蘭裔法國(guó)女物理學(xué)家、化學(xué)家居里夫人波蘭裔法國(guó)女物理學(xué)家、化學(xué)家居里夫人 發(fā)現(xiàn)放射性物質(zhì)榮獲發(fā)現(xiàn)放射性物質(zhì)榮獲1903年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng) 發(fā)現(xiàn)并提煉出鐳和釙發(fā)現(xiàn)并提煉出鐳和釙1911年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)美國(guó)物理學(xué)家巴丁因美國(guó)物理學(xué)家巴丁因 發(fā)明世界上第一支晶體管獲發(fā)明世界上第一支晶體管獲1956年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng) 提出超導(dǎo)微觀理論獲提出超導(dǎo)微觀理論

22、獲1972年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)美國(guó)化學(xué)家鮑林美國(guó)化學(xué)家鮑林 將量子力學(xué)應(yīng)用于化學(xué)領(lǐng)域并闡明了化學(xué)鍵的本質(zhì)獲將量子力學(xué)應(yīng)用于化學(xué)領(lǐng)域并闡明了化學(xué)鍵的本質(zhì)獲1954年年化學(xué)獎(jiǎng)化學(xué)獎(jiǎng) 致力于核武器國(guó)際控制并發(fā)起反對(duì)核實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)榮獲致力于核武器國(guó)際控制并發(fā)起反對(duì)核實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)榮獲1962年和年和平獎(jiǎng)平獎(jiǎng) 英國(guó)生物化學(xué)家桑格英國(guó)生物化學(xué)家桑格 發(fā)現(xiàn)胰島素分子結(jié)構(gòu)獲發(fā)現(xiàn)胰島素分子結(jié)構(gòu)獲1958年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng) 確定核酸的堿基排列順序及結(jié)構(gòu)獲確定核酸的堿基排列順序及結(jié)構(gòu)獲1980年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。 獲諾貝爾獎(jiǎng)的夫婦獲諾貝爾獎(jiǎng)的夫婦獲獲1903年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)的法國(guó)科學(xué)家皮埃爾

23、居里和瑪麗居里夫婦。年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)的法國(guó)科學(xué)家皮埃爾居里和瑪麗居里夫婦。 獲獲1935年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)的法國(guó)科學(xué)家約里奧居里夫婦。年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)的法國(guó)科學(xué)家約里奧居里夫婦。 獲獲1947年諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)的科里夫婦。年諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)的科里夫婦。 獲諾貝爾獎(jiǎng)的父子獲諾貝爾獎(jiǎng)的父子共同榮獲共同榮獲1915年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)的布拉格父子年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)的布拉格父子分別榮獲分別榮獲1906年和年和1937年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)的湯姆遜年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)的湯姆遜父子。父子。 分別榮獲分別榮獲1929年年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)和和1970年諾貝爾生理年諾貝爾生理學(xué)學(xué)/ /醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)的奧伊勒父子醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)的奧伊勒

24、父子分別榮獲分別榮獲1922年和年和1975年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)的玻爾父年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)的玻爾父子子分別榮獲分別榮獲1924年和年和1981年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)的西格巴年諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)的西格巴恩父子恩父子分別榮獲分別榮獲1959年諾貝爾生理年諾貝爾生理/醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)和2006年諾貝年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)的科恩伯格父子爾化學(xué)獎(jiǎng)的科恩伯格父子復(fù)習(xí)題復(fù)習(xí)題 Southern blotting Northern blotting Western blotting Gene targeting Gene knock-out4. 苯酚的處理：重蒸苯酚的處理：重蒸- -飽和飽和-pH 重蒸：去除醌類(lèi)氧化物重蒸：去除醌類(lèi)氧

25、化物 飽和：防止核酸損耗飽和：防止核酸損耗 pH： pH7.0-8.0-核酸最適合核酸最適合 方法：蒸餾方法：蒸餾（183）- -收集（棕色瓶）收集（棕色瓶）- -飽和與調(diào)飽和與調(diào)pH（Tris-HCl pH8.0）-0.1% 8-羥基喹啉羥基喹啉- 4 或或-20 保存保存一、核酸純化技術(shù)一、核酸純化技術(shù)-DNA純化純化 不同二級(jí)結(jié)構(gòu)形態(tài)及其電泳速度不同二級(jí)結(jié)構(gòu)形態(tài)及其電泳速度Linear DNA. LOpen Circle DNA OC relexed formSupercoiled circleCovalent Closed Circle CCC點(diǎn)樣孔點(diǎn)樣孔核酸定量的原理核酸定量的原理核

26、酸的紫外吸收核酸的紫外吸收 嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵，使堿基、核苷、核苷酸和核酸在嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵，使堿基、核苷、核苷酸和核酸在240-290nm240-290nm的紫的紫外波段有一強(qiáng)烈吸收峰，最大吸收值在外波段有一強(qiáng)烈吸收峰，最大吸收值在260nm260nm附近。附近。 純核酸能用此法定量測(cè)定含量，但不純樣品不能用此法作定量檢測(cè)。純核酸能用此法定量測(cè)定含量，但不純樣品不能用此法作定量檢測(cè)。 瓊脂糖凝膠電泳分離出區(qū)帶，用瓊脂糖凝膠電泳分離出區(qū)帶，用EBEB染色后在紫外燈下粗略估計(jì)含量。染色后在紫外燈下粗略估計(jì)含量。核酸純化技術(shù)與電泳技術(shù)核酸純化技術(shù)與電泳技術(shù)PCR技術(shù)技術(shù)分子雜交與印跡技術(shù)分子雜交與印跡技術(shù)基因靶向技術(shù)基因靶向技術(shù)ContentsPCR技術(shù)與技術(shù)與Nobel Prize Kary B. MullisMichael Smith（一）分子雜交：（一）分子雜交：不同來(lái)源的單鏈核酸（不同來(lái)源的單鏈核酸（DNA或或RNA），），只只要它們具有要它們具有大致相同的堿基序列大致相同的堿基序列，經(jīng)過(guò)退火，經(jīng)過(guò)退火處理，就能重新形成雜種雙螺旋，這一現(xiàn)象處理，就能重新形成雜種雙螺旋，這一現(xiàn)象稱(chēng) 為稱(chēng) 為 分 子 雜 交分 子 雜 交 （ m o l e c u l a r hybridization）。利用這一原理，就可以使用已知序列的單鏈利用這