動物細(xì)胞工程(課件

1、動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、 動物細(xì)胞核移植技術(shù)、動物細(xì)胞核移植技術(shù)、動物細(xì)胞融合技術(shù)、動物細(xì)胞融合技術(shù)、 生產(chǎn)單克隆抗體技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體技術(shù)提問：提問：v植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)技術(shù)、植物組織培養(yǎng)技術(shù)、 植物體細(xì)胞雜交技術(shù)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合單克隆抗體制備單克隆抗體制備體細(xì)胞克隆體細(xì)胞克隆細(xì)胞核移植細(xì)

2、胞核移植動物動物細(xì)胞細(xì)胞工程工程技術(shù)技術(shù)動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)的基礎(chǔ)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng) 概念概念:就是從動物機(jī)體中取出相關(guān)的組織就是從動物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個細(xì)胞，然后將它分散成單個細(xì)胞，然后,放在適宜的放在適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長和增殖。讓這些細(xì)胞生長和增殖。植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) 在無菌和人工控制的條件下在無菌和人工控制的條件下, ,將離體的植將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工控制的培物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工控制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株

3、。愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。1、動物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是什么？、動物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是什么？2、從動物機(jī)體中要取出哪些相關(guān)組織？并、從動物機(jī)體中要取出哪些相關(guān)組織？并 解釋解釋原因。原因。3、組織分散成單個細(xì)胞的方法是什么？其理論依、組織分散成單個細(xì)胞的方法是什么？其理論依據(jù)是什么？據(jù)是什么？4、動物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿足哪些條件？、動物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿足哪些條件？ 動物胚胎或幼齡動物的組織、器官動物胚胎或幼齡動物的組織、器官 它們細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，分化它們細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)。程度低，容易培養(yǎng)。細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖閱讀課本閱讀課本P44，簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的基

4、，簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程本過程動物動物胚胎胚胎或或幼齡幼齡動動物的組織、器官物的組織、器官胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎單個細(xì)胞單個細(xì)胞加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液制成制成細(xì)胞細(xì)胞懸浮懸浮液液10代代細(xì)胞細(xì)胞部分細(xì)胞部分細(xì)胞“癌變癌變”，遺傳物質(zhì)改變，無遺傳物質(zhì)改變，無限傳代限傳代動物細(xì)胞培養(yǎng)不能動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動物體最終培養(yǎng)成動物體50代細(xì)胞代細(xì)胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁細(xì)胞貼壁剝離、分瓶剝離、分瓶細(xì)胞株細(xì)胞株細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞系細(xì)胞系動物細(xì)胞培養(yǎng)過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程動物細(xì)胞生長特性動物細(xì)胞生長特性細(xì)胞貼壁：細(xì)胞貼壁： 懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶

5、壁上，稱為細(xì)胞貼壁。稱為細(xì)胞貼壁。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。細(xì)胞的接觸抑制：細(xì)胞的接觸抑制： 當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞就會當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。細(xì)胞貼壁過程有關(guān)概念有關(guān)概念: 原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的第培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞稱為原代培養(yǎng)。代以內(nèi)的細(xì)胞稱為原代培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)

6、瓶中取出，配制成細(xì)胞將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。稱為傳代培養(yǎng)。 細(xì)胞株：細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長停滯，代左右細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到4050代，這代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。 細(xì)胞系：細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無

7、限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。 細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別： 細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。細(xì)胞細(xì)胞懸浮懸浮液液1010代代細(xì)胞細(xì)胞5050代代細(xì)胞細(xì)胞無限無限傳代傳代原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株細(xì)胞系細(xì)胞系如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細(xì)胞株和細(xì)如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細(xì)胞株和細(xì)胞系？胞系？多數(shù)組織細(xì)胞固定在表面生長和分裂多數(shù)組織細(xì)胞固定在表面生長和分裂。隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會停止分裂增殖隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會停

8、止分裂增殖遺傳物質(zhì)改變遺傳物質(zhì)改變思考討論思考討論1.動物細(xì)胞培養(yǎng)取材時，一般是取胚胎組織或幼齡動動物細(xì)胞培養(yǎng)取材時，一般是取胚胎組織或幼齡動物的組織或器官，請解釋原因。物的組織或器官，請解釋原因。細(xì)胞的衰老與動物機(jī)體的衰老有著密切的關(guān)系，細(xì)胞的增殖細(xì)胞的衰老與動物機(jī)體的衰老有著密切的關(guān)系，細(xì)胞的增殖能力與供體的年齡有關(guān)，幼齡動物細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，有絲分能力與供體的年齡有關(guān)，幼齡動物細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，有絲分裂旺盛，老齡動物則相反。所以，一般來說幼年動物的組織裂旺盛，老齡動物則相反。所以，一般來說幼年動物的組織細(xì)胞比老年動物的組織細(xì)胞易于培養(yǎng)。同樣，組織細(xì)胞的分細(xì)胞比老年動物的組織細(xì)胞易于培養(yǎng)。同樣

9、，組織細(xì)胞的分化程度越低，則增殖能力越強(qiáng)，所以更容易培養(yǎng)?；潭仍降?，則增殖能力越強(qiáng)，所以更容易培養(yǎng)。腫瘤組織或細(xì)胞腫瘤組織或細(xì)胞 正常組織或細(xì)胞正常組織或細(xì)胞 拓展拓展-動物組織或細(xì)胞培養(yǎng)的難易程度動物組織或細(xì)胞培養(yǎng)的難易程度幼體組織或細(xì)胞幼體組織或細(xì)胞 老齡組織或細(xì)胞老齡組織或細(xì)胞分化程度低的組織或細(xì)胞分化程度低的組織或細(xì)胞 分化程度高的組織或細(xì)胞分化程度高的組織或細(xì)胞2、人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？、人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？ 保存保存10代以內(nèi)的細(xì)胞，因為其生物學(xué)特性未發(fā)生大代以內(nèi)的細(xì)胞，因為其生物學(xué)特性未發(fā)生大的變化，最接近于體內(nèi)組織或細(xì)胞的生長特性，很適合的變化，

10、最接近于體內(nèi)組織或細(xì)胞的生長特性，很適合用于藥物測試、基因表達(dá)等實驗研究。用于藥物測試、基因表達(dá)等實驗研究。3、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，為什么要用胰蛋白酶對、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，為什么要用胰蛋白酶對取出的動物組織進(jìn)行處理？取出的動物組織進(jìn)行處理？ 胰蛋白酶處理動物組織，可以使動物組織細(xì)胞胰蛋白酶處理動物組織，可以使動物組織細(xì)胞間的膠原纖維和細(xì)胞外的其他成分酶解，獲得單間的膠原纖維和細(xì)胞外的其他成分酶解，獲得單個細(xì)胞個細(xì)胞; ;成塊的組織細(xì)胞靠在一起成塊的組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)彼此限制了細(xì)胞的生長和增殖胞的生長和增殖.植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個細(xì)胞的嗎？植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成

11、單個細(xì)胞的嗎？.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)是什胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？么成份？.細(xì)胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？細(xì)胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？.既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動物組織分散成單個既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動物組織分散成單個細(xì)胞要注意什么問題呢？能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？細(xì)胞要注意什么問題呢？能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？為什么？進(jìn)一步思考：進(jìn)一步思考：否否 胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)和磷脂蛋白質(zhì)和磷脂能能注意時間的控制注意時間的控制 不能，因

12、為兩者的最適不能，因為兩者的最適PH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適胰蛋白酶的最適PH較接近較接近 多細(xì)胞動物和人體的細(xì)胞多細(xì)胞動物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的知識，認(rèn)為體外培養(yǎng)細(xì)胞學(xué)的知識，認(rèn)為體外培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)該模擬內(nèi)環(huán)境的哪些內(nèi)容呢？應(yīng)該模擬內(nèi)環(huán)境的哪些內(nèi)容呢？動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境、無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、必須的營養(yǎng)物質(zhì)、必須的營養(yǎng)物質(zhì)（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、核酸、（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽

13、、維生素、核酸、嘌呤、嘧啶、激素、生長因子、動物血清等。嘌呤、嘧啶、激素、生長因子、動物血清等。）保證細(xì)胞順利的保證細(xì)胞順利的生長增殖生長增殖3、適宜的溫度、適宜的溫度 36.5+（-）0.5度4、充足的氧氣和適宜的酸堿度、充足的氧氣和適宜的酸堿度 O2和和CO2（95%空氣和空氣和5% CO2 ）問題：問題：1、培養(yǎng)基的類型、培養(yǎng)基的類型（1）天然培養(yǎng)基：營養(yǎng)價值高，成分復(fù)雜）天然培養(yǎng)基：營養(yǎng)價值高，成分復(fù)雜（2）合成培養(yǎng)基：成分明確，便于控制試驗條件）合成培養(yǎng)基：成分明確，便于控制試驗條件2、動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？、動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組織培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？較

14、植物組織培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清等。素和動物血清等。獨(dú)特之處有：獨(dú)特之處有：1、液體培養(yǎng)基（、液體培養(yǎng)基（動物體細(xì)胞動物體細(xì)胞大都生活在大都生活在液體液體的環(huán)境的環(huán)境） 2、成分中有動、成分中有動物血清等物血清等獲得細(xì)胞獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體植物體培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞產(chǎn)物或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株等無病毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的葡萄糖、動葡萄糖、動物血清物血清蔗糖、植物蔗糖、植物激素激素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固

15、體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖原理原理動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目比較項目植物組織和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較植物組織和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較動物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用動物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用 大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）單克隆抗體） 獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮 培養(yǎng)的動物細(xì)胞可以用于檢測有毒物質(zhì)，判斷培養(yǎng)的動物細(xì)胞可以用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性某種物質(zhì)的毒性 為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)小結(jié)小結(jié) 動物細(xì)胞和組織培養(yǎng)（原

16、理、材料動物細(xì)胞和組織培養(yǎng)（原理、材料選擇及原因、一般過程、培養(yǎng)條件、選擇及原因、一般過程、培養(yǎng)條件、主要應(yīng)用）主要應(yīng)用）注意：注意：概念理解：原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、細(xì)胞株概念理解：原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、細(xì)胞株 、細(xì)胞系細(xì)胞系胰蛋白酶處理的原因、目的和注意事項胰蛋白酶處理的原因、目的和注意事項動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的區(qū)別動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的區(qū)別思考與探究思考與探究：如何用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，為燒傷病如何用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，為燒傷病人植皮？人植皮？ 取該患者的皮膚進(jìn)行取該患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng),獲得足量的細(xì)獲得足量的細(xì)胞后再移植胞后再移植1 1、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是

17、、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是 （ ）A A細(xì)胞系細(xì)胞系 B B細(xì)胞株細(xì)胞株 C C原代細(xì)胞原代細(xì)胞 D D傳代細(xì)胞傳代細(xì)胞2 2、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是 （ ）A.A.動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合 B.B.單克隆抗體單克隆抗體C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.動物動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)3 3、用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚、用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞這樣的組織細(xì)胞 （ ）A.A.容易產(chǎn)生各種變異容易產(chǎn)生各種變異 B B具有更強(qiáng)

18、的全能性具有更強(qiáng)的全能性C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力強(qiáng)分裂增殖的能力強(qiáng)4 4、下列屬于動物細(xì)胞工程中的工具是（、下列屬于動物細(xì)胞工程中的工具是（ ）A A限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶 B BDNADNA連接酶連接酶C C胰蛋白酶胰蛋白酶 D D果膠酶果膠酶ADDC5 5、在動物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中，正確的是（、在動物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中，正確的是（ ）A A動物細(xì)胞培養(yǎng)的目的就是為了獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白動物細(xì)胞培養(yǎng)的目的就是為了獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白B B動物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶處理使細(xì)胞分散動物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶處理使細(xì)胞分散C C細(xì)胞遺傳物質(zhì)的改變發(fā)生于原代培

19、養(yǎng)過程中細(xì)胞遺傳物質(zhì)的改變發(fā)生于原代培養(yǎng)過程中D D培養(yǎng)至培養(yǎng)至5050代后繼續(xù)傳代的細(xì)胞是細(xì)胞株代后繼續(xù)傳代的細(xì)胞是細(xì)胞株6 6、在動物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代、在動物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱之為（下去，這種傳代細(xì)胞稱之為（ ）A A原代培養(yǎng)原代培養(yǎng) B B傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng) C C細(xì)胞株細(xì)胞株 D D細(xì)胞系細(xì)胞系7 7、動物細(xì)胞培養(yǎng)的正確過程是（、動物細(xì)胞培養(yǎng)的正確過程是（ ）A.A.原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株細(xì)胞系細(xì)胞系 B. B. 原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞系細(xì)胞系細(xì)胞株細(xì)胞株C.C.傳代培養(yǎng)

20、傳代培養(yǎng)細(xì)胞系細(xì)胞系原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株 D. D. 原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)細(xì)胞系細(xì)胞系傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株8 8、下列與動物細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的表述中，不正確的是（、下列與動物細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的表述中，不正確的是（ ）A A培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清B B原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至1010代左右便會出現(xiàn)生長停滯代左右便會出現(xiàn)生長停滯C C動物細(xì)胞培養(yǎng)一般能夠傳到動物細(xì)胞培養(yǎng)一般能夠傳到40405050代，但其遺傳物質(zhì)發(fā)生了改代，但其遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變變D D動物細(xì)胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質(zhì)和獲得

21、大量自身健康細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質(zhì)和獲得大量自身健康細(xì)胞BDAC下圖是動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據(jù)此下圖是動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據(jù)此圖回答圖回答(1)(1)容器容器A A中放置的是動物器官或組織。它一般取自中放置的是動物器官或組織。它一般取自_ 。(2)(2)容器容器A A中的動物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是中的動物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是_，然后用，然后用 酶處理，這是為了使細(xì)胞分酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開來。這樣做的目的是散開來。這樣做的目的是_ _._ _. (3) (3)培養(yǎng)首先在培養(yǎng)首先在B B瓶中進(jìn)行。瓶中的培養(yǎng)基成分有瓶中進(jìn)行。瓶中的培養(yǎng)基成分有

22、_ _ 等等。在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，一般傳到第。在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，一般傳到第 代代，有許多細(xì)胞衰老死亡，到這時的培養(yǎng)稱為，有許多細(xì)胞衰老死亡，到這時的培養(yǎng)稱為_._.(4)(4)為了把為了把B B瓶中的細(xì)胞分裝到瓶中的細(xì)胞分裝到C C瓶中，用瓶中，用_ _ _處理，然后配置成處理，然后配置成_，再分裝。，再分裝。(5)(5)在在C C瓶中正常培養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部瓶中正常培養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部死亡。原因是死亡。原因是_。幼齡動物的器官或組織、動物胚胎幼齡動物的器官或組織、動物胚胎剪碎剪碎 胰蛋白胰蛋白 使每個細(xì)胞能與培養(yǎng)液接觸使每個細(xì)胞能與培養(yǎng)液接觸 葡萄糖、氨基酸、無

23、機(jī)鹽、維生素和動物血清葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清 10原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)胰蛋白酶胰蛋白酶 細(xì)胞懸浮液細(xì)胞懸浮液細(xì)胞沒有發(fā)生瘤變細(xì)胞沒有發(fā)生瘤變 概念：將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一概念：將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。發(fā)育成動物個體。 用核移植的方法得到的動物用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物稱為克隆動物核移植核移植（難度高）（難度高）受體細(xì)胞：受體細(xì)胞：M期的期的卵母細(xì)胞卵母細(xì)胞二、動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動

24、物二、動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物胚胎細(xì)胞核移植：胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易恢復(fù)全能性容易卵母卵母細(xì)胞細(xì)胞去核去核體細(xì)體細(xì)胞取胞取核核電刺激電刺激使兩細(xì)使兩細(xì)胞融合胞融合重組細(xì)胞重組細(xì)胞重組胚胎重組胚胎新個體新個體卵細(xì)胞卵細(xì)胞母綿羊母綿羊母綿羊母綿羊乳腺細(xì)胞乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母綿羊子宮母綿羊子宮胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育過程多莉羊的培育過程融合后的卵細(xì)胞融合后的卵細(xì)胞克克隆隆羊羊培培育育過過程程黑面綿羊去黑面綿羊去核卵細(xì)胞核卵細(xì)胞白面綿羊乳

25、白面綿羊乳腺細(xì)胞核腺細(xì)胞核細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植重組細(xì)胞重組細(xì)胞電脈沖刺激電脈沖刺激早期胚胎早期胚胎胚胎移植胚胎移植另一頭綿羊的子宮另一頭綿羊的子宮妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利、在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之、在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？為使核移植動物的遺傳物質(zhì)全部來自有利用為使核移植動物的遺傳物質(zhì)全部來自有利用價值的動物提供的細(xì)胞。價值的動物提供的細(xì)胞。、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代1010代以內(nèi)的細(xì)胞，為什么？代以內(nèi)的細(xì)胞，為什么？1010代以內(nèi)的細(xì)

26、胞一般保持正常二倍體的核型，代以內(nèi)的細(xì)胞一般保持正常二倍體的核型，未發(fā)生突變未發(fā)生突變思考題思考題3 3、體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物是對體細(xì)、體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物是對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了胞供體動物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？的復(fù)制嗎？為什么？不是，克隆動物絕大部分不是，克隆動物絕大部分DNADNA來自供體細(xì)胞核，來自供體細(xì)胞核，但核外還有少部分但核外還有少部分DNADNA（如線粒體（如線粒體DNADNA）來自）來自受體卵母細(xì)胞受體卵母細(xì)胞4.動物克隆實例很多，為何多莉就舉世聞名呢？動物克隆實例很多，為何多莉就舉世聞名呢？在在19971997年年2 2月英國羅斯林研究所維爾穆特

27、博士科研組月英國羅斯林研究所維爾穆特博士科研組公布體細(xì)胞克隆羊公布體細(xì)胞克隆羊“多莉多莉”培育成功之前，胚胎細(xì)胞核培育成功之前，胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)已經(jīng)有了很大的發(fā)展。實際上，移植技術(shù)已經(jīng)有了很大的發(fā)展。實際上，“多莉多莉”的克的克隆在核移植技術(shù)上沿襲了胚胎細(xì)胞核移植的全部過程，隆在核移植技術(shù)上沿襲了胚胎細(xì)胞核移植的全部過程，但這并不能減低但這并不能減低“多莉多莉”的重大意義，因為它是世界上的重大意義，因為它是世界上第一例第一例經(jīng)體細(xì)胞核移植出生的動物，是克隆技術(shù)領(lǐng)域研經(jīng)體細(xì)胞核移植出生的動物，是克隆技術(shù)領(lǐng)域研究的巨大突破。這一巨大進(jìn)展意味著：究的巨大突破。這一巨大進(jìn)展意味著：在理論上證明了，在

28、理論上證明了，同植物細(xì)胞一樣，分化了的動物同植物細(xì)胞一樣，分化了的動物細(xì)胞核細(xì)胞核也具有全能性也具有全能性 體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景 1、加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育、加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育2、保護(hù)瀕危物種，增加存活數(shù)量、保護(hù)瀕危物種，增加存活數(shù)量3、克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白、克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白4、可以作為異種移植的供體，可以用于組織、可以作為異種移植的供體，可以用于組織器官的移植器官的移植體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷

29、，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。器缺陷，免疫失調(diào)等。在研究方面，克隆動物基因組重新編程的機(jī)在研究方面，克隆動物基因組重新編程的機(jī)制尚不清楚，克隆技術(shù)效率低，克隆動物畸制尚不清楚，克隆技術(shù)效率低，克隆動物畸形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問題。這形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問題。這些問題尚在研究中。些問題尚在研究中。在應(yīng)用上，生產(chǎn)克隆動物費(fèi)用昂貴，距大規(guī)在應(yīng)用上，生產(chǎn)克隆動物費(fèi)用昂貴，距大規(guī)模應(yīng)用還有一定距離。模應(yīng)用還有一定距離。 “番茄番茄馬鈴薯馬鈴薯”理想圖理想圖 通過長期的實驗，科通過長期的實驗，科學(xué)家們采用體細(xì)胞雜交學(xué)家們采用體細(xì)

30、胞雜交技術(shù)獲得了技術(shù)獲得了“番茄番茄馬馬鈴薯鈴薯”植株。植株。雜雜種種植植株株篩選融篩選融合合AB的原生的原生質(zhì)體質(zhì)體再再生生出出細(xì)細(xì)胞胞壁壁脫脫分分化化愈愈傷傷組組織織再再分分化化植物細(xì)胞的融合植物細(xì)胞的融合植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞植物細(xì)胞A原生質(zhì)體原生質(zhì)體B原生質(zhì)體原生質(zhì)體A雜種雜種細(xì)胞細(xì)胞AB去去 壁壁去去 壁壁人人工工誘誘導(dǎo)導(dǎo)方法？方法？促進(jìn)融合促進(jìn)融合的方法？的方法？融合融合完成完成的的標(biāo)志標(biāo)志植物細(xì)胞植物細(xì)胞B植物體細(xì)胞雜交技術(shù)過程植物體細(xì)胞雜交技術(shù)過程原理？原理？原理？原理？成果和未解決的問題成果和未解決的問題 成果：克服不同生物遠(yuǎn)緣雜交的障礙，出成果：克服不同生物遠(yuǎn)緣雜

31、交的障礙，出 現(xiàn)自然界沒有的新品種現(xiàn)自然界沒有的新品種。未解決的問題：未能讓雜種植物按照人們未解決的問題：未能讓雜種植物按照人們 的需要表現(xiàn)出親代的優(yōu)良。的需要表現(xiàn)出親代的優(yōu)良。如果將牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到如果將牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽就可以擠出牛奶啦！就可以擠出牛奶啦！動物細(xì)胞也能融合嗎？動物細(xì)胞也能融合嗎？一、動物細(xì)胞融合一、動物細(xì)胞融合1、動物融合的過程、動物融合的過程請同學(xué)們閱讀課本請同學(xué)們閱讀課本P52動物細(xì)胞融合內(nèi)容動物細(xì)胞融合內(nèi)容問題：問題：什么是什么是動物細(xì)胞融合？它相當(dāng)動物細(xì)胞融合？它相當(dāng)于植物體細(xì)

32、胞雜交過程的哪一步？于植物體細(xì)胞雜交過程的哪一步？它它們的們的過程、基本原理、誘導(dǎo)融合方法過程、基本原理、誘導(dǎo)融合方法和意義是否相同？和意義是否相同？ 不同不同DNADNA的兩個細(xì)胞的兩個細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合后的細(xì)胞進(jìn)行有融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂絲分裂1 1、動物細(xì)胞融合過程、動物細(xì)胞融合過程滅活喪失感染性滅活喪失感染性保留融合活性保留融合活性動物細(xì)胞融合過程、原理與誘導(dǎo)方法動物細(xì)胞融合過程、原理與誘導(dǎo)方法思考題思考題? ?1、植物體細(xì)胞雜交時首先應(yīng)用什么方法去掉細(xì)胞壁？、植物體細(xì)胞雜交時首先應(yīng)用什么方法去掉細(xì)胞壁？酶解法，如纖維素酶或果膠酶酶解法，如纖維素酶或果膠

33、酶2 2、動物細(xì)胞融合時需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？、動物細(xì)胞融合時需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？無需，因為動物細(xì)胞無細(xì)胞壁無需，因為動物細(xì)胞無細(xì)胞壁3 3、植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？、植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；離心、電激等物理方法；PEG等化學(xué)方法等化學(xué)方法4 4、動物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法、動物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？嗎？能能 還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)5 5、植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織、植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培

34、養(yǎng)形成完整的雜種個體，動物細(xì)胞融合后能形成雜種動培養(yǎng)形成完整的雜種個體，動物細(xì)胞融合后能形成雜種動物個體嗎？物個體嗎？不能不能6 6、你能歸納出什么叫做動物細(xì)胞融合嗎？、你能歸納出什么叫做動物細(xì)胞融合嗎？2、動物細(xì)胞融合的概念、動物細(xì)胞融合的概念 動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指在一定條件下將兩交，是指在一定條件下將兩個或多個動物細(xì)胞形成一個個或多個動物細(xì)胞形成一個細(xì)胞的過程細(xì)胞的過程.主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株用途用途物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振動、電刺激）動、電刺激

35、）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性原理原理動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交比較項目比較項目植物、動物細(xì)胞融合的比植物、動物細(xì)胞融合的比較較7、你推測一下動物細(xì)胞融合有哪些方面的應(yīng)用嗎？、你推測一下動物細(xì)胞融合有哪些方面的應(yīng)用嗎？思考題思考題 利用動物細(xì)胞融合技術(shù)誘導(dǎo)形成雜交瘤細(xì)胞利用動物細(xì)胞融合技術(shù)誘導(dǎo)形成雜交瘤細(xì)胞8、在生產(chǎn)實際中雜交瘤細(xì)胞

36、有怎樣的應(yīng)用？、在生產(chǎn)實際中雜交瘤細(xì)胞有怎樣的應(yīng)用？ 生產(chǎn)單克隆抗體生產(chǎn)單克隆抗體提提問問？1.抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？、一個淋巴細(xì)胞、一個淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞漿細(xì)胞)能分泌多種能分泌多種抗體嗎？抗體嗎？、一種抗原侵入機(jī)體之后，引起機(jī)體免、一種抗原侵入機(jī)體之后，引起機(jī)體免疫反應(yīng)產(chǎn)生的抗體只有一種嗎？疫反應(yīng)產(chǎn)生的抗體只有一種嗎？. 簡述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？簡述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？、這種方法獲得的抗體有什么缺陷？、這種方法獲得的抗體有什么缺陷？二、單克隆抗體二、單克隆抗體問題：問題：抗體由什么抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生？其化學(xué)細(xì)胞產(chǎn)生？其化學(xué)本質(zhì)是什么？與抗本質(zhì)是什么？與抗原作用的特點(diǎn)

37、？主原作用的特點(diǎn)？主要分布在哪里？要分布在哪里？1抗體抗體 一個天然抗原物質(zhì)可有多種和多個決定簇一個天然抗原物質(zhì)可有多種和多個決定簇。教。教材中所說的抗原分子刺激淋巴細(xì)胞，說的也就是材中所說的抗原分子刺激淋巴細(xì)胞，說的也就是抗抗原決定簇原決定簇刺激刺激B B淋巴細(xì)胞，使其分裂分化出淋巴細(xì)胞，使其分裂分化出特異性特異性的效應(yīng)的效應(yīng)B B細(xì)胞細(xì)胞，分泌分泌特異性抗體。特異性抗體?？贵w的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從從血血清清中中分分離離抗抗體體該法制備抗體的特點(diǎn)：該法制備抗體的特點(diǎn)： 產(chǎn)量低、純度低，且抗產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。體的特異性差、靈敏度低。多多種種效效應(yīng)應(yīng)B細(xì)細(xì)胞胞動動物物體體內(nèi)內(nèi)多多種種抗抗體體抗抗原原 抗原抗原 動物體動物體刺激刺激漿細(xì)胞漿細(xì)胞 抗體抗體抗體不純抗體不純特異性差、純度低；特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏傳統(tǒng)血清抗體的制備傳統(tǒng)血清抗體的制備抗原不純抗原不純 每個淋巴細(xì)胞只能分泌一種抗體，由一個淋巴細(xì)每個淋巴細(xì)胞只能分泌一種抗體，由一個淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生的細(xì)胞群分泌的抗體化學(xué)成份是單一的。胞增殖產(chǎn)生的細(xì)胞群分泌的抗體化學(xué)成份是單一的。如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無限增殖嗎體