實(shí)驗(yàn)十植物組織的繼代培養(yǎng)與觀察

1、實(shí)驗(yàn)十 植物組織的繼代培養(yǎng)與觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?.1.學(xué)習(xí)植物愈傷組織的繼代培養(yǎng)方法學(xué)習(xí)植物愈傷組織的繼代培養(yǎng)方法。2.2.分析之前培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)材料出現(xiàn)污染的分析之前培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)材料出現(xiàn)污染的原因。原因。植物組織培養(yǎng)類型植物組織培養(yǎng)類型 （按外植體）：（按外植體）：1. 1. 器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)2. 2. 莖尖分生組織培養(yǎng)莖尖分生組織培養(yǎng) 3. 3. 愈傷組織培養(yǎng)愈傷組織培養(yǎng)4. 4. 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)5. 5. 原生質(zhì)體培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)胚狀體：胚狀體：指由體細(xì)胞誘導(dǎo)分化出的胚芽、胚根、指由體細(xì)胞誘導(dǎo)分化出的胚芽、胚根、 胚軸的胚狀結(jié)構(gòu)。胚軸的胚狀結(jié)構(gòu)。外植體培養(yǎng)發(fā)育方向：外植體培養(yǎng)發(fā)育方向：

2、v腋芽萌發(fā)（定芽）腋芽萌發(fā)（定芽）v脫分化后產(chǎn)生胚狀體（原球莖）脫分化后產(chǎn)生胚狀體（原球莖）v脫分化后直接產(chǎn)生不定器官脫分化后直接產(chǎn)生不定器官建立懸浮系或建立懸浮系或分化胚狀體及分化胚狀體及不定芽不定芽 脫分化后形成愈傷組織脫分化后形成愈傷組織間接離體繁殖間接離體繁殖直接直接離體離體繁殖繁殖n愈傷組織培養(yǎng)：愈傷組織培養(yǎng)： 將外植體（將外植體（explautexplaut）在無菌條件下接種到培養(yǎng)在無菌條件下接種到培養(yǎng)基上，進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)、生長和發(fā)育的一門技術(shù)。基上，進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)、生長和發(fā)育的一門技術(shù)。 原理：原理：n 細(xì)胞全能性（細(xì)胞全能性（cell totipetencycell tot

3、ipetency）：）：植物細(xì)胞具有全套植物細(xì)胞具有全套遺傳信息，在特定環(huán)境條件下能進(jìn)行表達(dá)，而產(chǎn)生一個(gè)遺傳信息，在特定環(huán)境條件下能進(jìn)行表達(dá)，而產(chǎn)生一個(gè)獨(dú)立完整的植株個(gè)體。獨(dú)立完整的植株個(gè)體。 脫分化：一個(gè)成熟細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)的過程?；謴?fù)細(xì)脫分化：一個(gè)成熟細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)的過程?；謴?fù)細(xì)胞的分裂活性。胞的分裂活性。 再分化：經(jīng)脫分化的組織或細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下轉(zhuǎn)再分化：經(jīng)脫分化的組織或細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N不同細(xì)胞類型的過程。變?yōu)楦鞣N不同細(xì)胞類型的過程。一一 愈傷組織形成的條件愈傷組織形成的條件n 1 1、脫離母體植株：擺脫了原來所受到的遺傳上的、脫離母體植株：擺脫了原來所受到的

4、遺傳上的控制和生理上的制約；控制和生理上的制約；n 2 2、一定的培養(yǎng)條件：主要為激素的種類和濃度最、一定的培養(yǎng)條件：主要為激素的種類和濃度最為重要；為重要； n 3 3、內(nèi)源激素水平：外植體的類型和外植物體原來、內(nèi)源激素水平：外植體的類型和外植物體原來在植株上所處的位置。在植株上所處的位置。n 大量研究表明，幾乎所有高等植物的各種器大量研究表明，幾乎所有高等植物的各種器官，如根、莖、葉和花等，以及各種組織，如皮官，如根、莖、葉和花等，以及各種組織，如皮層、莖髓和形成層等，離體后在適當(dāng)條件下，都層、莖髓和形成層等，離體后在適當(dāng)條件下，都能產(chǎn)生愈傷組織。能產(chǎn)生愈傷組織。二愈傷組織形成的過程二愈傷

5、組織形成的過程n 外植體中已分化的活細(xì)胞，在外源激素的誘導(dǎo)下外植體中已分化的活細(xì)胞，在外源激素的誘導(dǎo)下通過脫分化后形成愈傷組織，這一過程被大致劃通過脫分化后形成愈傷組織，這一過程被大致劃分為三個(gè)時(shí)期分為三個(gè)時(shí)期: :誘導(dǎo)期分裂期形成期n 分裂期：細(xì)胞從開始分裂到持續(xù)分裂的時(shí)期分裂期：細(xì)胞從開始分裂到持續(xù)分裂的時(shí)期n 分裂期主要特征如下：分裂期主要特征如下： 1. 1.細(xì)胞的數(shù)目迅速增加，但平均鮮重下降細(xì)胞的數(shù)目迅速增加，但平均鮮重下降。 2. 2.細(xì)胞體積小，無液泡細(xì)胞體積小，無液泡。如同根尖和莖尖的分生組。如同根尖和莖尖的分生組織細(xì)胞特性?？椉?xì)胞特性。 3. 3. 細(xì)胞的核和核仁增大到最大細(xì)

6、胞的核和核仁增大到最大。 4 4細(xì)胞中細(xì)胞中RNARNA含量減少，而含量減少，而DNADNA含量保持不變含量保持不變。 n 誘導(dǎo)期：細(xì)胞分裂的準(zhǔn)備期誘導(dǎo)期：細(xì)胞分裂的準(zhǔn)備期n 特點(diǎn)：特點(diǎn)：n 1 1、細(xì)胞大小沒有多大變化，外觀無明顯特征、細(xì)胞大小沒有多大變化，外觀無明顯特征；n 2 2、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)代謝旺盛，、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)代謝旺盛，RNARNA含量迅速增加，含量迅速增加，細(xì)胞核體積明顯增大。細(xì)胞核體積明顯增大。n 誘導(dǎo)期的長短，因植物種類和外植體的生理狀誘導(dǎo)期的長短，因植物種類和外植體的生理狀況和外部因素而異，如胡蘿卜的誘導(dǎo)期要好幾況和外部因素而異，如胡蘿卜的誘導(dǎo)期要好幾天，新鮮的菊芋塊莖則只要天

7、，新鮮的菊芋塊莖則只要2222h h，但菊芋塊莖但菊芋塊莖經(jīng)過經(jīng)過5 5個(gè)月的貯藏后，誘導(dǎo)期則須延長到個(gè)月的貯藏后，誘導(dǎo)期則須延長到4040h h以以上。上。n 形成期形成期( (分化期分化期) )：是指外植體經(jīng)過誘導(dǎo)期和分裂：是指外植體經(jīng)過誘導(dǎo)期和分裂期后形成了無序結(jié)構(gòu)的愈傷組織進(jìn)行分化并形成器期后形成了無序結(jié)構(gòu)的愈傷組織進(jìn)行分化并形成器官的時(shí)期。官的時(shí)期。 主要特征如下：主要特征如下：n 1 1、細(xì)胞的平均大小相對(duì)穩(wěn)定。、細(xì)胞的平均大小相對(duì)穩(wěn)定。n 2 2、細(xì)胞分裂由原來局限在組織外緣分裂轉(zhuǎn)為組織內(nèi)、細(xì)胞分裂由原來局限在組織外緣分裂轉(zhuǎn)為組織內(nèi)部較深層局部細(xì)胞的分裂。部較深層局部細(xì)胞的分裂。

8、n 3 3、形成分生組織結(jié)節(jié)。瘤狀或片狀的擬分生組織、形成分生組織結(jié)節(jié)。瘤狀或片狀的擬分生組織。分生組織結(jié)節(jié)可以成為愈傷組織的生長中心。分生組織結(jié)節(jié)可以成為愈傷組織的生長中心。n 4 4、形成維管組織結(jié)節(jié)。由分生組織結(jié)節(jié)外圍的細(xì)胞、形成維管組織結(jié)節(jié)。由分生組織結(jié)節(jié)外圍的細(xì)胞作平周分裂成為形成層狀細(xì)胞，并形成了部分維管作平周分裂成為形成層狀細(xì)胞，并形成了部分維管組織如管胞、纖維細(xì)胞等，但不形成維管系統(tǒng)。組織如管胞、纖維細(xì)胞等，但不形成維管系統(tǒng)。n 5 5、形成不同形態(tài)和功能的細(xì)胞。因此有人又將此期、形成不同形態(tài)和功能的細(xì)胞。因此有人又將此期稱為分化期。稱為分化期。 愈傷組織的繼代培養(yǎng)愈傷組織的繼

9、代培養(yǎng) 繼代：將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)的繼代：將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)的過程。過程。 目的：愈傷組織始終處于旺盛的分裂期目的：愈傷組織始終處于旺盛的分裂期n 脫分化細(xì)胞不斷進(jìn)行分裂，從而形成了愈傷組織脫分化細(xì)胞不斷進(jìn)行分裂，從而形成了愈傷組織，愈傷組織在培養(yǎng)基上生長一段時(shí)間以后，由于，愈傷組織在培養(yǎng)基上生長一段時(shí)間以后，由于營養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失，以及代謝產(chǎn)物的積累營養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失，以及代謝產(chǎn)物的積累，如果讓愈傷組織留在原培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)而不，如果讓愈傷組織留在原培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)而不繼代，它們則不可避免地發(fā)生分化，產(chǎn)生新的結(jié)繼代，它們則不可避免地發(fā)生分化，產(chǎn)生新的結(jié)構(gòu)

10、。通過繼代培養(yǎng)，可使愈傷組織無限期地保持構(gòu)。通過繼代培養(yǎng)，可使愈傷組織無限期地保持在不分化的增殖狀態(tài)。在不分化的增殖狀態(tài)。優(yōu)良的愈傷組織的優(yōu)良的愈傷組織的 特點(diǎn)特點(diǎn)n 1 1、高度的胚性或再分化能力、高度的胚性或再分化能力以便從這些愈傷以便從這些愈傷組織得到再生植物。組織得到再生植物。n 2 2、容易散碎、容易散碎以便用這些愈傷組織建立優(yōu)良的以便用這些愈傷組織建立優(yōu)良的懸浮系，并且在需要時(shí)能從中分離出全能性的原生懸浮系，并且在需要時(shí)能從中分離出全能性的原生質(zhì)體。質(zhì)體。n 3 3、旺盛的自我增殖能力、旺盛的自我增殖能力以便用這些愈傷組織以便用這些愈傷組織建立大規(guī)模的愈傷組織無性系。建立大規(guī)模的愈

11、傷組織無性系。n 4 4、經(jīng)過長期繼代保存而不喪失胚性、經(jīng)過長期繼代保存而不喪失胚性以便有可以便有可能對(duì)它們進(jìn)行各種遺傳操作。能對(duì)它們進(jìn)行各種遺傳操作。三三 愈傷組織的形態(tài)發(fā)生方式愈傷組織的形態(tài)發(fā)生方式 n 愈傷組織分生細(xì)胞團(tuán)可進(jìn)行再分化，即進(jìn)行形愈傷組織分生細(xì)胞團(tuán)可進(jìn)行再分化，即進(jìn)行形態(tài)建成，可再產(chǎn)生完整的植株。態(tài)建成，可再產(chǎn)生完整的植株。n 愈傷組織形態(tài)發(fā)生方式有兩種：愈傷組織形態(tài)發(fā)生方式有兩種： 1 1不定芽方式（不定芽方式（unfixed budunfixed bud） 2 2胚狀體方式（胚狀體方式（somatic embryosomatic embryo） 1 1不定芽方式（不定芽方

12、式（unfixed budunfixed bud）指愈傷組織培養(yǎng)物，通過形成不定芽再生成指愈傷組織培養(yǎng)物，通過形成不定芽再生成植株的器官發(fā)生方式。有三種方式：植株的器官發(fā)生方式。有三種方式：n （1 1）先形成芽，再在芽伸長后，在其莖的基部）先形成芽，再在芽伸長后，在其莖的基部長出根而形成小植株，多數(shù)植物屬這種情況長出根而形成小植株，多數(shù)植物屬這種情況n （2 2）先產(chǎn)生根，再從根的基部分化出芽而形成）先產(chǎn)生根，再從根的基部分化出芽而形成小植株。這種情況較難誘導(dǎo)芽的形成，尤其對(duì)小植株。這種情況較難誘導(dǎo)芽的形成，尤其對(duì)于單子葉植物；于單子葉植物；n （3 3）先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽

13、）先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根，然后兩者結(jié)合起來形成一株小植株。和根，然后兩者結(jié)合起來形成一株小植株。2 2胚狀體方式（胚狀體方式（somatic embryosomatic embryo） 指由愈傷組織培養(yǎng)物誘導(dǎo)分指由愈傷組織培養(yǎng)物誘導(dǎo)分化出的胚芽、胚根、胚軸的胚狀結(jié)化出的胚芽、胚根、胚軸的胚狀結(jié)構(gòu)，進(jìn)而長成完整植株的方式。構(gòu)，進(jìn)而長成完整植株的方式。 四愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控四愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控 愈傷組織的形態(tài)發(fā)生，主要受三大類因素愈傷組織的形態(tài)發(fā)生，主要受三大類因素的調(diào)控：的調(diào)控：n外植體本身外植體本身n培養(yǎng)基培養(yǎng)基n培養(yǎng)環(huán)境培養(yǎng)環(huán)境（一）材料本身（一）材料本身 n 1

14、1遺傳型遺傳型 不同植物種類的器官分化能力明顯不同不同植物種類的器官分化能力明顯不同，如煙草、胡蘿卜和矮牽年等植物容易誘導(dǎo)器官形，如煙草、胡蘿卜和矮牽年等植物容易誘導(dǎo)器官形成，而禾谷類、豆類、棉花等就比較困難。成，而禾谷類、豆類、棉花等就比較困難。n 2 2器官和部位器官和部位 通常同一種植物的不同器官或組通常同一種植物的不同器官或組織所形成的愈傷組織，無論在生理上或形態(tài)上，其織所形成的愈傷組織，無論在生理上或形態(tài)上，其差別均不大。但是對(duì)有些植物而言，確有明顯差異差別均不大。但是對(duì)有些植物而言，確有明顯差異。如油菜的花器官比葉、根易于分化成苗，水稻和。如油菜的花器官比葉、根易于分化成苗，水稻和

15、小麥幼穗的苗分化頻率也比其他器官為高。小麥幼穗的苗分化頻率也比其他器官為高。n 3 3生長年齡生長年齡 年齡較幼的外植體，不僅易于誘導(dǎo)年齡較幼的外植體，不僅易于誘導(dǎo)形成愈傷組織，而且也容易誘導(dǎo)分化成植株。如油形成愈傷組織，而且也容易誘導(dǎo)分化成植株。如油菜植株的自下而上的莖段的培養(yǎng)結(jié)果表明，下部的菜植株的自下而上的莖段的培養(yǎng)結(jié)果表明，下部的器官形成頻率低，愈往上部，苗的分化頻率越高。器官形成頻率低，愈往上部，苗的分化頻率越高。n（二）培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基 生長調(diào)節(jié)劑：生長調(diào)節(jié)劑： 細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素/ /生長素的比例是控制芽生長素的比例是控制芽和根形成的重要條件之一。和根形成的重要條件之一。n

16、激素控制理論：細(xì)胞分裂素激素控制理論：細(xì)胞分裂素/ /生長素比例高時(shí)有利于生長素比例高時(shí)有利于芽形成；而這一比例低時(shí)，有利于根的形成。這樣芽形成；而這一比例低時(shí)，有利于根的形成。這樣通過變換激素的種類和濃度，即可有效地調(diào)節(jié)培養(yǎng)通過變換激素的種類和濃度，即可有效地調(diào)節(jié)培養(yǎng)組織的器官分化。組織的器官分化。n 不同激素的效果是不同的不同激素的效果是不同的: :如如NAANAA對(duì)生根的作用比對(duì)生根的作用比IAAIAA和和IBAIBA的效果好，但用的效果好，但用IAAIAA和和IBAIBA處理，產(chǎn)生的根比較處理，產(chǎn)生的根比較健壯，而用健壯，而用NAANAA處理，產(chǎn)生的根則較纖細(xì)。處理，產(chǎn)生的根則較纖細(xì)。

17、2 2，4-4-D D往往往利于愈傷組織的誘導(dǎo)。往利于愈傷組織的誘導(dǎo)。愈傷分化愈傷分化n（二）培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基n 2 2無機(jī)營養(yǎng)元素?zé)o機(jī)營養(yǎng)元素 在植物組織培養(yǎng)，細(xì)胞的生長也要求滿足在植物組織培養(yǎng)，細(xì)胞的生長也要求滿足植物生長的必要元素。植物生長的必要元素。 - -其影響不如激素的影響明顯。其影響不如激素的影響明顯。 - -各種類型的植物所需要的每種元素的量，特別是大各種類型的植物所需要的每種元素的量，特別是大量元素是有區(qū)別的，如生根培養(yǎng)要求無機(jī)離子濃度小一些，量元素是有區(qū)別的，如生根培養(yǎng)要求無機(jī)離子濃度小一些，所以常用所以常用1/21/2MSMS或或WhiteWhite。n 愈傷組織所表現(xiàn)

18、出來的缺素癥狀如下：愈傷組織所表現(xiàn)出來的缺素癥狀如下：n 氮氮某些組織（如五葉地錦）表現(xiàn)出一種很引入注目的花某些組織（如五葉地錦）表現(xiàn)出一種很引入注目的花色素苷的顏色；不能形成導(dǎo)管。色素苷的顏色；不能形成導(dǎo)管。n 氮、鉀和磷氮、鉀和磷細(xì)胞過度生長，形成層組織減退；細(xì)胞過度生長，形成層組織減退；n 硫硫非常明顯地褪綠。非常明顯地褪綠。n 鐵鐵細(xì)胞分裂停止。細(xì)胞分裂停止。n 硼硼細(xì)胞分裂停滯，細(xì)胞伸長。細(xì)胞分裂停滯，細(xì)胞伸長。n 錳或鉬錳或鉬影響細(xì)胞伸長。影響細(xì)胞伸長。n（二）培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基n3 3有機(jī)成分有機(jī)成分 糖、糖、B B族維生素、肌醇和甘氯酸等族維生素、肌醇和甘氯酸等滿足愈滿足愈傷組

19、織的生長和分化的要求。傷組織的生長和分化的要求。氯基酸和嘌氯基酸和嘌 呤、嘧啶類物質(zhì)呤、嘧啶類物質(zhì)促進(jìn)器官分促進(jìn)器官分化。如：水解酪蛋白中含有多種氨基酸，化。如：水解酪蛋白中含有多種氨基酸，在進(jìn)行器官分化培養(yǎng)時(shí)，加入一定量是有在進(jìn)行器官分化培養(yǎng)時(shí)，加入一定量是有益的。益的。n（二）培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基4 4 物理性質(zhì)：固體或液體狀態(tài)、滲透壓等。物理性質(zhì)：固體或液體狀態(tài)、滲透壓等。 對(duì)形態(tài)發(fā)生有明顯的影響。對(duì)形態(tài)發(fā)生有明顯的影響。培養(yǎng)基狀態(tài)：培養(yǎng)基狀態(tài)：第一階段誘導(dǎo)形成愈傷組織第一階段誘導(dǎo)形成愈傷組織固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基第二階段細(xì)胞和胚狀體的增殖第二階段細(xì)胞和胚狀體的增殖液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基第三階

20、段胚狀體發(fā)育成可移植植株第三階段胚狀體發(fā)育成可移植植株固體培養(yǎng)固體培養(yǎng)基基培養(yǎng)基滲透壓：培養(yǎng)基滲透壓： 對(duì)細(xì)胞增殖和胚狀體的形成都有十分明顯的對(duì)細(xì)胞增殖和胚狀體的形成都有十分明顯的影響。如油菜花藥培養(yǎng)宜先在高糖（影響。如油菜花藥培養(yǎng)宜先在高糖（9-10%9-10%）培養(yǎng)基中培養(yǎng)，有利于細(xì)胞增殖和胚狀體的形培養(yǎng)基中培養(yǎng)，有利于細(xì)胞增殖和胚狀體的形成。成。n（三）培養(yǎng)環(huán)境條件（三）培養(yǎng)環(huán)境條件1.光周期的影響光周期的影響 ：根據(jù)植物種類、培養(yǎng)目的來決：根據(jù)植物種類、培養(yǎng)目的來決定定在愈傷組織誘導(dǎo)階段：一般采用三種做法：全在愈傷組織誘導(dǎo)階段：一般采用三種做法：全暗、周期性光照、散射性光照。暗、周期性

21、光照、散射性光照。 對(duì)一些植物三種培養(yǎng)方法結(jié)果差異較大。如對(duì)一些植物三種培養(yǎng)方法結(jié)果差異較大。如：石刁柏全暗：石刁柏全暗誘導(dǎo)愈傷組織，要比周期性誘導(dǎo)愈傷組織，要比周期性光照下好得多；大豆散射性光照光照下好得多；大豆散射性光照愈傷組織愈傷組織誘導(dǎo)比較好。誘導(dǎo)比較好。器官發(fā)生階段：一般給予周期性光照比較好。器官發(fā)生階段：一般給予周期性光照比較好。 光周期長短因植物種類而異，多數(shù)植物光周期長短因植物種類而異，多數(shù)植物8-10小小時(shí)黑暗為宜。也有例外，有些植物如石刁柏需時(shí)黑暗為宜。也有例外，有些植物如石刁柏需要要16小時(shí)光照，小時(shí)光照，12小時(shí)黑暗。小時(shí)黑暗。n（三）培養(yǎng)環(huán)境條件（三）培養(yǎng)環(huán)境條件2

22、2、溫度、溫度 一般為一般為22-2522-25的恒溫進(jìn)行培養(yǎng)。的恒溫進(jìn)行培養(yǎng)。喜溫性植物：喜溫性植物： 26-28 26-28 茄科、葫蘆科、蘭科茄科、葫蘆科、蘭科、禾本科等。、禾本科等。冷涼性植物：冷涼性植物： 25 25以下以下 百合科、十字花科、百合科、十字花科、菊科等。菊科等。培養(yǎng)周期中的晝夜溫差影響：國內(nèi)有關(guān)小麥、水培養(yǎng)周期中的晝夜溫差影響：國內(nèi)有關(guān)小麥、水稻花藥培養(yǎng)溫度試驗(yàn)的報(bào)道認(rèn)為：稻花藥培養(yǎng)溫度試驗(yàn)的報(bào)道認(rèn)為：n 誘導(dǎo)花形成愈傷組織誘導(dǎo)花形成愈傷組織晝夜恒溫較好；晝夜恒溫較好；n 器官分化器官分化晝夜具有一定溫差比較好，分化出晝夜具有一定溫差比較好，分化出的小植株比較健壯。的

23、小植株比較健壯。 （三）實(shí)驗(yàn)材料和用具（三）實(shí)驗(yàn)材料和用具 實(shí)驗(yàn)材料：蘭花的不定芽實(shí)驗(yàn)材料：蘭花的不定芽實(shí)驗(yàn)藥品：實(shí)驗(yàn)藥品：n MSMS、 1mg/ml NAA 1mg/ml NAA 、 1mg/ml 6-BA 1mg/ml 6-BA、 1mol/L 1mol/L HClHCl、1mol/L NaOH1mol/L NaOH、蒸餾水、燈用酒精、蒸餾水、燈用酒精、7070酒酒精。精。滅菌培養(yǎng)基：滅菌培養(yǎng)基：nMS4MS4、 MS7MS7和和MS8MS8實(shí)驗(yàn)用具：實(shí)驗(yàn)用具：n 天平、燒杯、玻璃棒、量筒、移液槍、三角瓶、天平、燒杯、玻璃棒、量筒、移液槍、三角瓶、pHpH試紙、電爐、高壓滅菌鍋。試紙、電

24、爐、高壓滅菌鍋。n 無菌室、無菌濾紙、無菌培養(yǎng)皿、鑷子、剪刀、無菌室、無菌濾紙、無菌培養(yǎng)皿、鑷子、剪刀、酒精燈、酒精棉花、滴管、記號(hào)筆、廢液罐、火酒精燈、酒精棉花、滴管、記號(hào)筆、廢液罐、火柴、光照培養(yǎng)箱。柴、光照培養(yǎng)箱。（四）實(shí)驗(yàn)步驟（四）實(shí)驗(yàn)步驟 1.1. 配制以下培養(yǎng)基各配制以下培養(yǎng)基各100ml 100ml ：n MS8MS8：MS+2.0mg/L NAAMS+2.0mg/L NAAn MS9MS9：MS+3.0mg/L 2,4-D+3.0mg/L KTMS+3.0mg/L 2,4-D+3.0mg/L KT 取取200ml200ml燒杯燒杯2 2只，標(biāo)記，各加入只，標(biāo)記，各加入4g MS4g MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基和和100ml100ml蒸餾水，加熱直至完全溶解。蒸餾水，加熱直至完全溶解。 MS8MS8加入加入 1mg/ml NAA 200l 1mg/ml NAA 200l ，并不斷攪拌。