OK3細胞工程實驗技術(shù)資料

1、華僑大學生物工程系 劉建福1實驗室設(shè)置實驗室設(shè)置基本技術(shù)基本技術(shù)培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制第三章第三章 細胞工程實驗技術(shù)細胞工程實驗技術(shù)華僑大學生物工程系 劉建福2第一節(jié)第一節(jié) 實實 驗驗 室室 設(shè)設(shè) 置置實驗室組成實驗室組成基本設(shè)備配置基本設(shè)備配置培養(yǎng)容器與用具培養(yǎng)容器與用具華僑大學生物工程系 劉建福3細胞工程實驗室的基本要求細胞工程實驗室的基本要求實驗準備實驗準備包括培養(yǎng)基配制，包括培養(yǎng)基配制， 洗滌與滅菌等洗滌與滅菌等無菌操作無菌操作控制培養(yǎng)控制培養(yǎng)Culture roomPreparation roomSterilizing roomSterile operationCytology

2、 roomTransition area實驗室布局示意圖華僑大學生物工程系 劉建福4實驗室作用基本要求設(shè)備化學實驗室化學藥品和培養(yǎng)基的配制，各種實驗藥品的貯存適宜基本實驗有條不紊地進行平面實驗臺,柜廚,精密天平,冰箱, 電爐,鋁鍋,滅菌鍋等無菌操作室接種外植體,分離單細胞,培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移等無菌；墻壁光滑平整，地面平坦無縫，適宜滅菌處理超凈工作臺，紫外燈，并設(shè)有準備室（紫外燈）培養(yǎng)室培養(yǎng)材料的生活場所能夠控制溫度、濕度和光照，無菌培養(yǎng)箱，培養(yǎng)架，空調(diào)，暗培養(yǎng)設(shè)置，加濕器細胞學實驗室進行實驗材料的顯微觀察和照相等干燥，整潔，明亮，光學儀器不受潮濕各種顯微鏡、解剖鏡，描繪和照相設(shè)備，切片染色設(shè)備攝影室對

3、實驗材料進行攝影記錄或直接拍攝外植體同上帶有照相設(shè)備的顯微鏡、電子顯微鏡，暗室設(shè)備（沖洗、印相、放大）華僑大學生物工程系 劉建福5基基 本本 實實 驗驗 室室 準備室 準備室的功能就是進行一切與實驗有關(guān)的準備工作。 要求寬敞明亮，通風條件好。 接種室 接種室的功能是進行無菌操作。要求封閉性好，干燥 清潔，能較長時間保持無菌。為了保持清潔，接種室 應(yīng)防止空氣對流。 培養(yǎng)室 培養(yǎng)室的功能是對離體材料進行控制培養(yǎng)。其首要 要求是要能控制光照和溫度， 其次為防止微生物感染，培養(yǎng)室應(yīng)保持干燥和清潔。華僑大學生物工程系 劉建福6輔 助 實 驗 室細胞學實驗室細胞學實驗室 其功能是對培養(yǎng)材料進行細胞學鑒定和

4、研究。其功能是對培養(yǎng)材料進行細胞學鑒定和研究。 要求清潔、明亮、干燥，使各種光學儀器不受要求清潔、明亮、干燥，使各種光學儀器不受 潮濕和灰塵污染。潮濕和灰塵污染。 攝影室及暗室攝影室及暗室 其功能是進行培養(yǎng)材料的攝影記錄和膠片沖其功能是進行培養(yǎng)材料的攝影記錄和膠片沖 印。在有條件的情況下可建立此實驗室。印。在有條件的情況下可建立此實驗室。 生化分析室生化分析室 在以培養(yǎng)細胞產(chǎn)物為主要目的的實驗室中，應(yīng)在以培養(yǎng)細胞產(chǎn)物為主要目的的實驗室中，應(yīng) 建立相應(yīng)的分析化驗實驗室，以便于對培養(yǎng)物的有建立相應(yīng)的分析化驗實驗室，以便于對培養(yǎng)物的有 效成分隨時進行取樣檢查。效成分隨時進行取樣檢查。 華僑大學生物工

5、程系 劉建福7基本設(shè)備配置基本設(shè)備基本設(shè)備滅菌設(shè)備滅菌設(shè)備光照培養(yǎng)室與設(shè)備光照培養(yǎng)室與設(shè)備無菌操作設(shè)備無菌操作設(shè)備細胞學鑒定設(shè)備細胞學鑒定設(shè)備華僑大學生物工程系 劉建福8天平天平 ，冰箱，冰箱 ，酸，酸度計度計 ，純水器，純水器 華僑大學生物工程系 劉建福9活性成分過活性成分過濾滅菌濾滅菌接種工具隨接種工具隨時消毒時消毒培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)基滅菌玻璃器皿滅菌玻璃器皿滅菌華僑大學生物工程系 劉建福10防止空防止空氣對流氣對流定期消毒定期消毒華僑大學生物工程系 劉建福11保持干燥,控制光照和溫度精確 培養(yǎng) 使用 特殊 設(shè)備華僑大學生物工程系 劉建福12華僑大學生物工程系 劉建福13華僑大學生物工程系 劉

6、建福14華僑大學生物工程系 劉建福15華僑大學生物工程系 劉建福16培養(yǎng)容器與用具玻璃容器 塑料容器 金屬用具 塑料用具華僑大學生物工程系 劉建福17倒置顯微鏡研究顯微鏡激光共聚焦顯微操作儀華僑大學生物工程系 劉建福18第二節(jié) 基本技術(shù)洗滌技術(shù)洗滌技術(shù)滅菌技術(shù)滅菌技術(shù)華僑大學生物工程系 劉建福19合成洗滌劑合成洗滌劑鉻酸洗滌液鉻酸洗滌液 洗 滌 劑華僑大學生物工程系 劉建福20 常用的鉻酸洗滌液配方常用的鉻酸洗滌液配方 成 分 強酸溶液 中酸溶液 弱酸溶液 重鉻酸鉀 (g) 63 120 100 硫 酸(ml) 1000 200 100 蒸 餾 水(ml) 200 200 1000 注意事項

7、在蒸餾水中緩慢加入濃硫酸，加熱的同時分次加入磨碎的重鉻酸鉀至其完全溶解。 重鉻酸鉀加蒸餾水后加熱溶化，冷卻后再緩慢加入濃硫酸。 華僑大學生物工程系 劉建福21玻璃器皿洗滌 新的玻璃器皿，已使用過的試管、燒杯、 三角瓶、吸管、滴管等內(nèi)徑狹小的玻璃制品 堿洗法（溫熱洗衣粉）和酸洗法（稀鹽酸粘有蛋白質(zhì)類物質(zhì)或其它有機物） 塑料用品洗滌 一般用合成洗滌劑洗滌，因其附著力較 強，因此沖洗時必須反復多次，最后用 蒸餾水沖洗。 金屬用品洗滌 金屬用品一般不宜用各種洗滌液洗滌， 需要清洗時，一般用酒精擦洗，然后火 焰干燥。 洗滌方法洗滌方法華僑大學生物工程系 劉建福22培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基：濕熱滅菌，即高壓高溫蒸

8、汽滅菌濕熱滅菌，即高壓高溫蒸汽滅菌. . 玻璃器皿玻璃器皿：濕熱滅菌或干熱滅菌，即在烘箱中加熱濕熱滅菌或干熱滅菌，即在烘箱中加熱 至至15040分鐘，或分鐘，或1202小時小時. 金屬器皿金屬器皿：干熱滅菌干熱滅菌. . 接接 種種 室室：接種室常采用定期熏蒸，熏蒸劑常用甲醛加接種室常采用定期熏蒸，熏蒸劑常用甲醛加 高錳酸鉀，一般每高錳酸鉀，一般每100100mlml甲醛加甲醛加5 5g g高錳酸鉀高錳酸鉀 滅菌技術(shù)華僑大學生物工程系 劉建福23 消毒滅菌方法 培養(yǎng)材料的消毒滅菌 培養(yǎng)基的消毒滅菌 玻璃器皿、塑料器皿和器械的消毒滅菌 無菌操作室的消毒滅菌二、消毒滅菌華僑大學生物工程系 劉建福2

9、4 1、干熱消毒滅菌法：烘箱、玻璃器皿和金屬器皿，150/40min、120/120 min、160/90-120min2、濕熱消毒滅菌法：高壓蒸汽鍋3、過濾除菌法：過濾器皿（0.22-0.45um）、生長調(diào)節(jié)類物質(zhì)、酶液、血清4、射線消毒滅菌法：紫外燈，實驗室空氣、操作臺 面，15-20min5、酒精燈消毒滅菌法：接種器皿6、消毒劑消毒法：乙醇、過氧乙酸、來蘇水、新潔爾滅，實驗器皿、操作表面、皮膚等 7、抗生素抑菌法：青霉素、鏈霉素、新霉素消毒滅菌方法華僑大學生物工程系 劉建福25外植體外植體清洗整理清洗整理殺菌劑滅菌殺菌劑滅菌無菌水清洗無菌水清洗不同外植體不同外植體 在滅菌劑濃度、在滅菌劑

10、濃度、 時間、程序上時間、程序上 應(yīng)有所區(qū)別應(yīng)有所區(qū)別培養(yǎng)材料的消毒滅菌華僑大學生物工程系 劉建福26消 毒 劑使用濃度(%)消毒時間(min.)效果殘液去除難易次氯酸鈣/納10530好易新潔爾滅1020530好易氯化汞0.11210最好最難過氧化氫1012515較好最易抗菌素450mgl-13060較好較難表1、幾種常用消毒劑的效果比較華僑大學生物工程系 劉建福27培養(yǎng)基的消毒滅菌：濕熱滅菌，即高壓高溫蒸汽滅菌. 玻璃器皿的消毒滅菌：濕熱滅菌或干熱滅菌，即在烘箱中加熱至15040分鐘，或1202小時. 金屬器皿的消毒滅菌：干熱滅菌. 塑料器皿的消毒滅菌：高壓蒸汽消毒滅菌無菌操作室的消毒滅菌：接種室常采用定期熏蒸，熏蒸劑常用甲醛加高錳酸鉀，一般每100ml甲醛加5g高錳酸鉀，超凈工作臺用紫外燈20min、70-75%酒精，空氣用紫外燈20min。華僑大學生物工程系 劉建福28表2、培養(yǎng)基體積與滅菌時間的關(guān)系培養(yǎng)基體積（培養(yǎng)基體積（ml）滅菌溫度（滅菌溫度（） 滅菌時間（滅菌時間（min