還原糖滴定法

1、     銅還原直接滴定法15.2.2.2     姆松華爾格法(高錳酸鉀容量法)     常量法氰化鹽碘量法     夏費(fèi)索姆吉法半微量法.1  銅還原直接滴定法(Lane-Eynons method)1，2Top.1.1  方法原理樣品中的水溶性糖可以用80溫水浸提，但對含淀粉和菊糖高的樣品則須用800mL·L-1-850mL·L-1酒精浸提，其中還原糖可使費(fèi)林(Fehling)試劑還原生成Cu2O沉淀，而本身被

2、氧化和降解成糖酸。費(fèi)林試劑是由CuSO4溶液、NaOH和KNaC4H4O6溶液組成。在堿性溶液中，酒石酸鹽可與銅鹽形成配離子而不致生成氫氧化銅沉淀。其反應(yīng)如下：Cu2+ 2OH- + 2(C4H4O6)2-Cu(C4H3O6)24-+2H2O在煮沸條件下，用還原糖待測液滴定一定量的費(fèi)林試劑時，銅的酒石酸配離子被還原糖還原，產(chǎn)生紅色Cu2O沉淀，還原糖則被氧化和降解，其反應(yīng)示意式如下： 上述反應(yīng)是銅還原法測糖的基本原理。滴定時是以亞甲基藍(lán)為氧化還原指示劑，稍過量的還原糖可使藍(lán)色的氧化型亞甲基藍(lán)還原為無色的還原型亞甲基藍(lán)，即達(dá)滴定終點(diǎn)。還原糖與費(fèi)林試劑反應(yīng)的完全程度與滴定時條件(如加熱強(qiáng)

3、度、溫度、時間等)很有關(guān)系，故必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程測定。指示劑也消耗一定量還原糖，所以每次滴定時須按規(guī)定加入相同數(shù)量的亞甲基藍(lán)。本法適宜于含糖量高的樣品(1550mL糖液中含糖50mg)。.1.2  主要儀器高速組織搗碎機(jī)；電熱恒溫水浴鍋；玻塞滴定管(附彎形尖管，見圖15-1) 圖15-1  彎形尖管規(guī)格及安裝圖1.玻塞滴定管  2.橡皮圈  3.橡皮管  4.彎形尖管(管徑為5mm).1.3  試劑(1) Soxhlet修正的費(fèi)林(Fehling)溶液：應(yīng)用前立刻配制，通過下列費(fèi)林試劑A和B溶液等體積混合而制得。 

4、;    費(fèi)林試劑A：溶解CuSO4·5H2O 34.639g于水中，移入500mL容量瓶中，用水定容。     費(fèi)林試劑B：溶解酒石酸鉀鈉(KNaC4H4O6·4H2O)173g和NaOH 50g于少量水中，洗入500mL容量瓶中，用水定容。(2) 100g·L-1中性醋酸鉛溶液：稱100g醋酸鉛Pb(CH3COO)2·3H2O(化學(xué)純)溶于水中，過濾后稀釋至1L。(3) Ba(OH)2飽和溶液：在100mL無CO2水中，加入固體Ba(OH)2·8H2O(化學(xué)純)約6g，用

5、玻棒攪拌，將燒杯蓋好過夜，次日濾去未溶物，溶液裝在細(xì)口瓶中備用。為了防止與空氣中CO2接觸，應(yīng)裝設(shè)堿石灰管及虹吸管。(4) Na2SO4飽和溶液：稱Na2SO4·10H2O(化學(xué)純)165g，溶于1L水中。(5) 50g·L-1硫酸鋅溶液：稱取ZnSO4·7H2O(化學(xué)純)50g，加水溶解，并用水稀釋至1L。(6) 850mL·L-1及800mL·L-1乙醇(C2H5OH)溶液：取950mL·L-1乙醇(分析純)85mL，加水稀釋至95mL，即為850mL·L-1乙醇溶液。取950mL·L-1乙醇80mL，加水稀釋

6、至95mL，即為800mL·L-1乙醇溶液。(7) 固體草酸鈉(Na2C2O4)試劑(分析純)。(8) 10g·L-1亞甲基藍(lán)水溶液：稱亞甲基藍(lán)1.00g溶于水中，加水稀釋至100mL。(9) 2mg·mL-1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取干燥的葡萄糖(優(yōu)級純)0.2000g用少量水溶解后，洗入100mL容量瓶中用水定容。.1.4  操作步驟(1) 待測液制備水提取法：清除新鮮水果、蔬菜樣品外來污染的雜質(zhì)，盡可能快地磨細(xì)或切碎，混勻，稱取樣品25.00g50.00g(含糖約2.5g)，置高速組織搗碎機(jī)中，加適量水后搗碎(或置研缽中加少量純石英砂共同研磨)，然后小心

7、移入250mL容量瓶中，加水至約150mL；或風(fēng)干已磨細(xì)的樣品則可稱取0.5005.00g，洗入250mL容量瓶中，亦加水至約150mL。然后加入粉狀CaCO3 0.51.5g中和樣品中的酸度(防止浸提過程中蔗糖水解)，搖動1min，置于80水浴中保溫浸提0.5h，其間搖動數(shù)次以利糖分浸提完全。冷卻，滴加100g·L-1中性醋酸鉛溶液至產(chǎn)生白色絮狀沉淀，充分搖動混合，靜置15min，再滴加幾滴中性醋酸鉛溶液于上部清液中檢查是否沉淀完全。如果還有沉淀形成，再搖動，靜置，直至不產(chǎn)生白色絮狀沉淀為止(約25mL)，用水稀釋定容。用干濾紙過濾。加入足量草酸鈉固體到濾液中，使鉛沉淀完全，再用干

8、濾紙過濾，再用固體草酸鈉少許加到濾液中，檢查鉛是否沉淀完全。無鉛的濾液待用。乙醇提取法：稱取剪碎、混勻的新鮮植株樣品(含大量淀粉或菊糖的樣品)25.00g或是干樣稱0.5005.00g，放入400mL燒杯中，加入850mL·L-1乙醇150mL浸泡過夜(另測樣品水分)。倒入高速組織搗碎機(jī)的杯中搗碎，再倒回原燒杯中，用800mL·L-1乙醇將杯壁上的樣品洗凈，一同倒入燒杯中，過濾入250mL容量瓶中，再用800mL·L-1乙醇少量多次洗滌殘?jiān)?，直至濾液無糖反應(yīng)為止(注1)。最后以800mL·L-1乙醇定容。吸取乙醇浸出液25.0050.00mL(吸取量視含

9、糖量與方法而定)，放入瓷蒸發(fā)皿中，如溶液呈酸性，用固體CaCO3中和，在6080水浴上蒸干乙醇，后加入少量無CO2水，用橡皮頭玻棒將干物質(zhì)洗下，邊攪邊加入Ba(OH)2飽和溶液210mL，至溶液呈淡黃色(堿性)，此時絮狀蛋白質(zhì)沉淀物浮在液面。加入酚酞指示劑1滴，在不斷攪動下加入50g·L-1ZnSO4溶液以沉淀過量的Ba2+，直到溶液呈微紅色時為止。過濾入50mL容量瓶中，用少量水洗滌沉淀后定容，待測。(2)還原糖測定。試液呈中性或接近于中性，其滴定步驟如下： 約測：準(zhǔn)確吸取未混的費(fèi)林試劑A和B各5mL或12.5mL(或吸取混合費(fèi)林試劑10mL或25mL)，放入250mL三角瓶中，由

10、滴定管加入待測糖液約15mL，置在石棉網(wǎng)上加熱煮沸，趁沸繼續(xù)滴加糖液(注2)，滴加速度約為1015s之內(nèi)加入1mL，直至溶液藍(lán)色即將消失，加入10g·L-1亞甲基藍(lán)指示劑3滴，繼續(xù)滴加糖液，直至藍(lán)色褪盡為止(注3)，記下待測糖液的用量(mL)。精密滴定：準(zhǔn)確吸取未混的費(fèi)林試劑A和B各5mL或12.5mL(或吸取混合費(fèi)林試劑10mL或25mL)，放入250mL三角瓶中，加入待測糖液，其用量比上述滴定量約少0.51.0mL，置在石棉網(wǎng)上加熱，使之2min內(nèi)沸騰，維持沸騰2min后，加入亞甲基藍(lán)指示劑3滴，再逐滴地加入待測糖液，直至藍(lán)色褪盡。前后總沸時間為3min。準(zhǔn)確記下待測糖液的消耗量

11、(V1)，須在1550mL范圍內(nèi)(含糖量近50mg)，否則應(yīng)增減稱樣量，重新制備待測液。(3)費(fèi)林試劑的標(biāo)定同上.1.4(2),操作條件，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液也分“約測”及“準(zhǔn)確測定”二步進(jìn)行。準(zhǔn)確記下消耗標(biāo)準(zhǔn)糖液用量為V0(測定三次取平均值)。.1.5  結(jié)果計(jì)算還原糖，%=標(biāo)準(zhǔn)糖溶液濃度(2mg·mL-1)×V0×V/(m×V1)×100式中： V0滴定10mL費(fèi)林試劑所消耗標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液的量(mL)；     V1滴定10mL費(fèi)林試劑所消耗待測糖液的量(mL)；    V待測糖

12、液的總體積(mL)；    m樣品質(zhì)量(mg)；.1.6  注釋1.檢驗(yàn)糖方法：于白色點(diǎn)滴板的孔穴中加1%-萘酚乙醇溶液2滴和濃H2SO4 10滴，混勻，加入待檢的淋洗液1滴，1min后如無紅圈出現(xiàn)，證明糖已洗凈。2.還原糖與堿性酒石酸銅試劑反應(yīng)速度較慢，必須在加熱至沸的情況下進(jìn)行滴定。為了防止燒傷及便于滴定操作，可于滴定管尖部加接一彎形尖管，彎形尖管規(guī)格及安裝如圖151所示。并戴上隔熱手套操作。3.無色的還原型亞甲基藍(lán)極易被大氣中的O2所氧化，恢復(fù)原來的藍(lán)色，故整個滴定過程中三角瓶不能離開電爐，使瓶中的溶液始終保持沸騰狀態(tài)，液面覆蓋水蒸汽，不與空氣接觸

13、。.2  姆松華爾格法(Munson-Walker法)2(高錳酸鉀容量法)Top.2.1  方法原理將樣品試液與過量的費(fèi)林氏試劑反應(yīng)，過濾取得生成物Cu2O后，用直接稱量法測知Cu2O的質(zhì)量；或用容量法測知生成物中銅的質(zhì)量。然后從表15-2(哈蒙德，Hammond)表查得與銅量相當(dāng)?shù)奶橇浚儆?jì)算樣品的含糖量。由于這種方法所得結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，但花費(fèi)時間較多。美國AOAC分析方法1985年版介紹此法測定糖和糖漿中的轉(zhuǎn)化糖。高錳酸鉀容量法，其反應(yīng)為：Cu2O+Fe2(SO4)3+H2SO42CuSO4+2FeSO4+H2O10FeSO4+2KMnO4+8H2SO45Fe2(S

14、O4)3+2MnSO4+K2SO4+8H2O由反應(yīng)式可知，10摩爾銅相當(dāng)于2摩爾的高錳酸鉀，則每mL1/5 mol·L-1KMnO4溶液相當(dāng)Cu量。x為    15863.57×5=158/5x，    x=63.6mg。所以，已知高錳酸鉀滴定量，就可計(jì)算成銅的質(zhì)量，由表15-2計(jì)算樣品的含糖量。.2.2  試劑(1)    高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液(約為0.03152mol·L-1)，稱取KMnO44.98g溶于水中，煮沸過濾，放冷，稀釋至1L，此液1mL相當(dāng)于10mgC

15、u。(2)    硫酸高鐵溶液：溶解硫酸高鐵(無水)Fe2(SO4)355g或硫酸鐵銨FeNH4(SO4)2·12H2O 135g于水中，稀釋1000mL。(3)    Soxhle修正的費(fèi)林溶液：(同)(4)    鄰菲啉亞鐵指示劑：溶解鄰菲啉水合物0.7425g于0.25mol L-1FeSO4溶液(FeSO4·7H2O 6.95g·L-1)25mL中。.2.3  操作步驟試液應(yīng)呈中性或弱堿性，應(yīng)除去還原性干擾成分，并脫去鉛。吸取費(fèi)林溶液A，B各25mL，置于4

16、00mL玻璃燒杯中，加入樣品試液50mL，若樣品試液容積較少，則可加水將溶液總?cè)莘e調(diào)整到100mL。將燒杯置于電爐石棉網(wǎng)上加熱，蓋上表面玻璃，使在4min內(nèi)沸騰，并繼續(xù)保持混騰2min(此操作必須嚴(yán)格遵守)。立即趁熱利用抽濾法通過事先已做好石棉墊的古氏坩堝或玻璃濾器(3、4號)過濾，用60熱水沏底洗滌Cu2O沉淀和燒杯，直至不呈堿性為止。并將坩堝或玻璃濾器外壁洗凈，然后把古氏坩堝或玻璃濾器移入原燒杯中，加入Fe2(SO4)3溶液50mL，劇烈攪拌至Cu2O完全溶解。加2mol·L-1H2SO4 20mL，用玻棒不斷攪拌坩堝，用標(biāo)準(zhǔn)KMnO4溶液滴定，當(dāng)近終點(diǎn)時，加鄰菲羅啉亞鐵指示劑1

17、滴，達(dá)到終點(diǎn)時由棕色溶液變?yōu)榫G色。由高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定量換算成銅，再查表15-2，計(jì)算相當(dāng)?shù)倪€原糖質(zhì)量(mg)。.2.4  結(jié)果計(jì)算還原糖    (%)=查表得還原糖mg數(shù)×分取倍數(shù)/樣品質(zhì)量(mg)×100式中：分取倍數(shù)=樣品試液的總體積/測定時吸取試液的體積注：這里還原糖是指葡萄糖或果糖。表15-2  哈蒙德(Hammond)表計(jì)算單一的及與蔗糖共存的葡萄糖、果糖、轉(zhuǎn)化糖和乳糖*(麥芽糖值系引自姆松華爾格表)*    單位：mg  銅*  葡 萄糖&

18、#160;果 糖 轉(zhuǎn)化糖轉(zhuǎn)化糖和蔗糖水合乳糖C11H22O11·H2O水合乳糖C11H22O11·H2O與蔗糖共存氧化亞 銅*水合麥芽糖C11H22O11·H2O總 糖0.3克總 糖0.4克總 糖2.0克1分乳糖4分蔗糖1分乳糖12分蔗糖104.65.15.23.22.9-7.77.76.6106.2209.410.410.28.37.91.915.415.213.62014.63014.315.815.313.413.07.023.622.620.73022.94019.221.120.418.618.212.130.630.127.84031.350

19、24.126.525.523.823.317.338.337.635.05039.66029.031.930.628.928.522.546.045.142.16048.07034.037.435.834.233.727.753.652.549.37056.38039.042.841.039.438.932.961.360.056.58064.69044.048.346.244.744.238.269.067.663.79073.010049.053.851.550.049.543.576.775.170.910081.311054.159.356.755.354.848.884.482.67

20、8.111089.712059.264.962.060.660.154.192.190.285.412098.013064.370.467.466.065.559.599.897.792.7130106.414069.576.072.771.470.964.9107.5105.3100.0140114.715074.781.678.176.876.370.4115.2112.8107.3150123.016079.987.383.582.281.775.9122.9120.4114.6160131.417085.292.988.987.787.281.4130.7128.0122.017013

21、9.718090.498.694.493.292.786.9138.4135.6129.4180148.019095.7104.399.998.798.292.4146.2143.3136.8190156.4200101.1110.0105.4104.3103.898.0153.9150.9144.2200164.7210106.5115.7110.9109.9109.4103.7161.7158.5151.6210173.0220111.9121.5116.5115.5115.0109.3169.5166.259.1220181.4230117.3127.3122.1121.1120.711

22、5.0177.3173.8166.5230189.7240122.7133.1127.8126.8126.3120.7185.1181.5174.0240198.0250128.2138.9133.4132.5132.0126.5192.9189.2181.6250206.3260133.8144.8139.1138.2137.8132.3200.7196.9189.1260214.7270139.3150.6144.8144.0143.5138.1208.5204.6196.7270223.0280144.9156.5150.6149.7149.3143.9216.3212.3204.228

23、0231.3290150.5162.5156.4155.5155.2149.8224.1220.0211.8290239.6300156.2168.4162.2161.4161.0155.7232.0227.7219.5300247.9310161.9174.4168.0167.2166.9161.7239.8235.5227.1310256.3320167.6180.4173.9173.1172.8167.7247.7243.2234.8320264.6330173.4186.4179.8179.1178.8173.7255.5251.0242.4330272.9340179.2192.51

24、85.8185.0184.8179.8263.4258.8250.2340281.2350185.0198.5191.8191.0190.8185.9271.3266.6257.9350289.5360190.9204.7197.8197.1196.9192.0278.2274.4265.7360297.8370196.8210.8203.8203.1203.0198.2287.1282.2273.5370306.1380202.7217.0209.9209.2209.1204.4295.0290.1281.3380314.5390208.7223.2216.0215.4215.3210.63

25、03.0298.0289.2390322.8400214.7229.4222.2221.5221.5217.0311.0305.9297.1400331.1410220.8235.8228.5227.8227.8223.3319.1313.9305.1410339.4420227.0242.2234.8234.2334.2229.8327.4322.0313.4420347.7430233.3249.2241.5240.9241.0236.5336.3330.6322.3430356.6*本表摘自official Methods of Analysis of the Association o

26、f official Analytical chemists,12ed.(1975):P1015-1023.*43.012,official Methods of Analysis,10ed.(Cu2O=Cu×1.1259)。*應(yīng)用于除麥芽糖外的所有糖類。*僅適用于麥芽糖。.3  常量法氰化鹽碘量法 Top.3.1  方法原理還原糖與已知過量的鐵氰化鉀堿性溶液作用，生成亞鐵氰化鉀和糖酸：而過量的鐵氰化鉀在HOAc存在下與KI作用，生成游離的I2：2Fe(CN)63-+2I-HOAcI2+2Fe(CN)64-為方便此反應(yīng)完全，加入ZnSO4溶液以沉淀除去反應(yīng)產(chǎn)物6F

27、e(CN)64-：2Zn2+Fe(CN)64-Zn2Fe(CN)6                       白色沉淀最后用標(biāo)準(zhǔn)Na2S2O3溶液滴定生成的I2，以淀粉為指示劑：I2+2S2O32-=S4O63-+2I-根據(jù)空白滴定和樣品滴定所消耗鐵氰化鉀結(jié)果的差值，進(jìn)一步換算成樣品消耗的準(zhǔn)確的0.0500mol·L-1K3Fe(CN)6的mL數(shù)，再從后面

28、表(15-3)查出相應(yīng)的萄萄糖mg數(shù)。由于所查的表是由實(shí)驗(yàn)得來的，所以測定皆須按照操作規(guī)程進(jìn)行，否則測得結(jié)果會產(chǎn)生較大偏差。.3.2  試劑(1)    0.0500mol·L-1鐵氰化鉀：準(zhǔn)確稱取105烘干K3Fe(CN)6(優(yōu)級純)15.4700g和無水Na2CO3(分析純)70g溶于水后洗入1L容量瓶中，定容，保存于棕色瓶中。(2)    0.05mol·L-1硫代硫酸鈉：稱取Na2S2O3·5H2O(優(yōu)級純)12.5g溶于剛煮沸冷卻的水中，加入Na2CO3約0.1g，稀釋至1L，保存于棕

29、色瓶中，一天后進(jìn)行標(biāo)定。準(zhǔn)確稱取重鉻酸鉀(優(yōu)級純)0.1×××g于250mL三角瓶中，加水30mL使溶解，加入KI 1.5g和6mol·L-1HCl 5mL，在暗處放置5min后，再加入50mL，用Na2S2O3溶液滴定，當(dāng)溶液由棕紅色變淺黃色時，加入淀粉指示劑1mL，繼續(xù)滴定至溶液由藍(lán)色突變?yōu)榱辆G色(Cr3+的顏色)為終點(diǎn)。按下式計(jì)算出cNa2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(mol·L-1)。 cNa2S2O3=K2Cr2O7(g)/(294.19/6000×VNa2S2O3)(3)    10g&#

30、183;L-1淀粉指示劑：可溶性淀粉1g和碘化汞(HgI2，作防腐用)5mg，用少量水調(diào)勻后，緩緩傾入100mL沸水中，繼續(xù)煮沸至溶液變透明止。(4)    ZnSO4-KI混合液：稱取ZnSO4·7H2O 31.25g溶于水，稀釋至500mL，稱取KI 12.5g溶于水，稀釋至100mL，貯于暗處。臨用前按4體積的ZnSO4與1體積KI比例混合，當(dāng)天使用。(5)    90g·L-1醋酸：量取37%HOAc 260mL稀釋至1L。(6)    飽和Na2CO3溶液。(7) 

31、   100g·L-1中性醋酸鉛溶液。(8)    飽和硫酸鈉溶液。.3.3  操作步驟將果蔬樣品擦洗干凈切成小塊，均勻混合后稱取5.00-10.00g，置搗碎機(jī)或研缽中搗碎，糊狀物洗入廣口250mL容量瓶中，使體積約為150mL，加粉狀CaCO30.5-1.5g以中和酸度，振蕩后，滴加100g·L-1中性醋酸鉛溶液至不產(chǎn)生白色絮狀沉淀為止，然后放入80水浴中保溫30min，間歇搖動幾次。冷卻，過量的醋酸鉛可加飽和Na2SO4除去。用水定容后過濾備用。吸取上清濾液5-20mL于125mL三角瓶中，加水至20mL，準(zhǔn)

32、確加入0.05mol·L-1K3Fe(CN)6溶液10mL。另取一個125mL三角瓶加水20mL,K3Fe(CN)6溶液10mL，兩個三角瓶蓋以小漏斗，同時置于沸水浴中20min，立即冷即，加ZnSO4-KI混合液10mL，加90g·L-1HOAc10mL，放置5min后用Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)液滴定至呈淡黃色時(注)，加淀粉指示劑10滴，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失為終點(diǎn)。記錄樣本及空白滴定消耗Na2S2O3mL數(shù)(V1，V0)。本法測定的糖液濃度應(yīng)為1-15mg(5-20mL)即0.05-3mg·mL-1范圍內(nèi)。.3.4  結(jié)果計(jì)算(1)將與待測液中還原糖作用的N

33、a2S2O3mL數(shù)(V0-V1)，換算成0.0500mol·L-1K3Fe(CN)6mL數(shù)：與糖作用的0.0500mol·L-1K3Fe(CN)6mL數(shù)=c(Na2S2O3)×(V0-V1)/0.0500mol·L-1(2) 根據(jù)所得0.0500mol·L-1K3Fe(CN)6mL數(shù)查表15-3得相當(dāng)?shù)钠咸烟莔g數(shù)。表15-3  氰化鹽碘量法測定糖0.0500mol·L-1K3Fe(CN)6的mL數(shù)和其相當(dāng)?shù)钠咸烟堑膍g數(shù)mL1/10 mL數(shù)0.00.10.20.30.40.50.60.70.80.90-0.7250.871

34、.0151.181.3411.511.671.832.002.162.312.472.622.782.9423.103.263.423.583.743.904.064.224.384.5434.724.885.045.205.365.535.705.866.036.2046.376.546.716.887.057.227.397.557.727.8958.063.228.398.568.728.899.069.229.399.5569.729.8910.0610.2310.4110.5810.7510.9211.1011.28711.4611.6411.8212.0012.1812.3612.

35、5412.7312.9113.10813.2813.4613.6313.8013.9714.1414.3114.4914.6614.83914.99-.3.5  計(jì)算還原糖含量 還原糖    (%)=查得葡萄糖mg/樣品重(mg)×分取倍數(shù)×100        此式中分取倍數(shù) 250/520.3.6  注釋注:溶液滴定至極微量I2時，即淡黃色時才可加入淀粉指示劑。因過早加入將使吸附在淀粉分子上的I2不易釋放出來，藍(lán)色不易消褪，使滴定產(chǎn)生誤差。.

36、4  夏費(fèi)索姆吉法(Shaffer-Somogyis method)半微量法1，2 Top.4.1  方法原理夏費(fèi)索姆吉試劑(與費(fèi)林試劑相似)與還原糖作用生成Cu2O沉淀，其原理與銅還原法相同。用H2SO4酸化時，Cu2O即溶解成Cu+離子。試劑中的KIO3與KI在酸化同時發(fā)生如下反應(yīng)：KIO3+5KI+3H2SO4=3K2SO4+3H2O+3I2試劑中的KIO3是定量加入的，所以生成的I2也是一定量的。生成的I2與Cu+離子發(fā)生氧化還原反應(yīng)，消耗一部分I2。2Cu+I22Cu2+2I-溶液中剩余的I2以淀粉為指示劑，用Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。I2+2S2O2-3S4O

37、2-6+2I-在測定同時做空白標(biāo)定，以水代替糖試液。由空白標(biāo)定消耗的Na2S2O3mL數(shù)減去實(shí)測糖液消耗的Na2S2O3mL數(shù)，查表154即得所測糖液中還原糖的mg數(shù)。本方法適用于含糖少的植株樣品，如蔬菜、牧草等。.4.2  主要儀器  電熱水浴鍋.4.3  試劑（1）    1mol·L-1H2SO4溶液。（2）    CaCO3(化學(xué)純)。（3）   5g·L-1酚酞指示劑；稱取酚酞指示劑0.5g，溶于100mL的900mL·L-1乙醇溶液中。（4）&

38、#160; 夏費(fèi)索姆吉試劑：稱取無水Na2CO3(分析純)25.0g和酒石酸鉀鈉(KNaC4H4O6·4H2O，分析純)25.0g放入2L燒杯中，加水約500mL使其溶解。將一漏斗的頸端插入液面以下，在不斷攪拌下，通過漏斗加100g·L-1CuSO4·5H2O溶液75mL。再加入NaHCO3(分析純)20g，溶解后再加入KI(化學(xué)純)5g，轉(zhuǎn)入1L容量瓶中，加入0.0167mol·L-1KIO3溶液(KIO3，3.568g·L-1)250mL，用水定容。用砂芯坩鍋過濾，放置過夜備用。（5）    

39、;  KI草酸鹽溶液：稱取KI(化學(xué)純)2.5g和K2C2O4(化學(xué)純)2.5g溶于水中，并稀釋至100mL，每周現(xiàn)用現(xiàn)配。（6）0.005mol·L-1Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液：先配制0.1mol·L-1Na2S2O3溶液，稱取Na2S2O3·5H2O(分析純)25.0g溶于1L煮沸后已冷卻的水中，加入Na2CO30.1g，盛于棕色瓶中，貯放在低溫暗處。此為0.1mol·L-1 Na2S2O3貯備液，一天后進(jìn)行標(biāo)定。0.005mol·L-1 Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，須在使用當(dāng)天用煮沸的冷水準(zhǔn)確稀釋貯備液至恰為0.005mol&#

40、183;L-1。0.1mol·L-1 Na2S2O3溶液的標(biāo)定：稱取已在100烘干2h K2Cr2O7(分析純)0.20××g，放在250mL三角瓶中，溶于含有KI 2g的80mL水中，邊攪邊加入1mol·L-1 HCl 20mL，在暗處放置5min后，用0.1mol·L-1 Na2S2O3溶液滴定。當(dāng)溶液由橙紅色變?yōu)闇\黃綠色時，加入淀粉指示劑10滴，繼續(xù)滴定至溶液由藍(lán)色變?yōu)榱辆G色(Cr3+的顏色)為止。計(jì)算Na2S2O3貯備溶液的準(zhǔn)確濃度。（7）10g·L-1淀粉指示劑；稱取可溶性淀粉1.0g和HgI2(防腐劑)5mg，用少量水調(diào)研

41、，溶于100mL沸水，冷卻后使用。其它試劑用中4，5，6。.4.4  操作步驟:(1)糖溶液的提取水提取法見(1)a；或乙醇浸提法見(1)b。(2)還原糖的測定。吸取5mL約0.52.5mg還原糖的待測液放入25×200mm試管中，加索姆吉試劑5mL，搖動混勻。同時作空白試驗(yàn)。試管口蓋以玻璃球或漏斗，在沸水浴中加熱15min，小心將試管平穩(wěn)地置于流動冷水浴中4min；去蓋，沿管壁加入KIK2C2O4 2mL(溶液為堿性時不要搖動)及1mol·L-1 H2SO4 3mL，充分搖動混勻，使Cu2O完全溶解；再于冷水浴中放5min，并搖動2次。然后用0.005mol·L-1 Na2S2O3溶液滴定，至淺黃色時，加入淀粉為指示劑510滴，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失為終點(diǎn)。另取蒸餾水5mL(代替的待測液)按同樣的操作進(jìn)行空白標(biāo)定