多肽體外抗氧化總還原力的測(cè)定

1、多肽體外抗氧化鐵氰化鉀還原法一實(shí)驗(yàn)原理： 樣品（蠅蛆多肽提取物）將鐵氰化鉀（K3Fe(CN)6）還原成亞鐵氰化鉀(K4Fe(CN)6)，亞鐵氰化鉀再與三氯化鐵反應(yīng)生成普魯士藍(lán)（亞鐵氰化鐵Fe4Fe(CN)63），在700nm測(cè)吸光度值，通過測(cè)定吸光度來判斷受試物還原力的強(qiáng)弱。 鐵氰化鉀溶液為黃色，猜測(cè)用三氯乙酸（CCL3COOH）與反應(yīng)剩余的鐵氰化鉀生成沉淀，離心除去，排除對(duì)吸光度數(shù)值的影響。二查閱文獻(xiàn)以確定多肽濃度1多肽濃度與吸光度完全成直線關(guān)系的2.多肽濃度與吸光度關(guān)系不是成直線的（有一點(diǎn)弧度的）此試驗(yàn)濃度太小，擔(dān)心結(jié)果出不來因 此實(shí)驗(yàn)濃度梯度太大，槲皮素出現(xiàn)了拋物線式圖形，建議在設(shè)置我們

2、的實(shí)驗(yàn)時(shí)濃度梯度大點(diǎn)，可能有助于得到結(jié)果此實(shí)驗(yàn)濃度小，且子實(shí)體多肽變化不明顯，即在0.3與0.2相同后有出現(xiàn)上升3.自認(rèn)為有點(diǎn)靠譜的綜上所述，自認(rèn)為多肽濃度暫時(shí)設(shè)置成0、1、2、4、8、20、40mg/ml但pH 值對(duì)多肽總還原力的影響，酶與底物比對(duì)多肽總還原力的影響，溫度對(duì)多肽總還原力的影響。以及參考文獻(xiàn)中多肽結(jié)構(gòu)含量等與蠅蛆多肽不一致等因素的影響，此濃度設(shè)置肯定存在不足。三.試劑的配置四.實(shí)驗(yàn)步驟2.5ml樣品+2.5ml1%鐵氰化鉀+2.5mlPH6.6磷酸鹽緩沖液（0.2mol/l）50水浴加熱20min2.5ml10%TCA4000r/min 10min上清液5ml+5ml水+1ml

3、0.1%三氯化鐵于700nm處測(cè)吸光度值，Vc作對(duì)照注意：配置不同濃度的樣品溶液梯度，依次加入一定量磷酸緩沖液（保證溶液反應(yīng)的PH環(huán)境，如2.5ml pH=6.6）、一定量濃度的鐵氰化鉀溶液（2.5ml 1%），混合均勻，將該體系置于一定溫度下（比如：50,不能過高，不然會(huì)使物質(zhì)失活，適當(dāng)加熱可以保證反應(yīng)程度和時(shí)間）恒溫水浴放置一定時(shí)間（如20min，以反應(yīng)充分為宜），取出加入三氯乙酸溶液混勻，置于離心機(jī)內(nèi)3000轉(zhuǎn)離心10min（離心機(jī)使用時(shí)一定保證對(duì)側(cè)樣品等重），取一定量上清液于另一試管中，加入蒸餾水和三氯化鐵溶液（3K4Fe(CN)6 + 4FeCl3 Fe4Fe(CN)63 + 12KCl ，黃色晶體亞鐵氰化鉀放進(jìn)三氯化鐵的溶液中，產(chǎn)生顏色很鮮艷的藍(lán)色沉淀，即普魯士藍(lán)，測(cè)定吸光度時(shí)要搖勻，